抗肿瘤冻干粉针剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了抗肿瘤冻干粉针剂及其制备方法，该方法包括：合成琥珀酰化葡聚糖；合成胺基化叶酸类似物；合成叶酸-葡聚糖缀合物；将药物化合物混合入叶酸-葡聚糖缀合物中；加入药学上可接受的辅料和进行干燥。本发明还公开了该抗肿瘤冻干粉针剂的抗肿瘤应用等。
【专利说明】抗肿瘤冻干粉针剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明是中国专利申请第201210543504.9号分案的发明，享有2012年12月14
日的申请日。
[0002]本发明属于药物制剂领域，具体而言，本发明涉及冻干粉针剂，除了其药物理化性质得到提升外，其中辅料与药物化合物(如，紫杉醇)可以协同起效，并能提高药物的耐受性。另外，本发明还涉及该抗肿瘤冻干粉针剂的制备方法及其抗肿瘤应用等。
【背景技术】
[0003]目前临床使用的大多数抗癌药物，如紫杉醇，Docetaxel(多西他赛)，阿霉素等在生理盐水中的溶解度比较差，无法在临床上直接使用，需要一些辅料配合。例如，Taml?用聚氧乙烯蓖麻油和乙醇的混合物来配制紫杉醇，Taxotere? (泰索帝)用聚山梨酯和乙醇来配制，但是都会引起强烈的副作用，如过敏反应、肾脏毒性、神经和心脏毒性等；最近的Abraxane?使用血清白蛋白为载体来配制紫杉醇,毒副作用也明显降低,然而血清白蛋白无论是提取还是DNA重组获得，纯化难度大，造成成本居高不下，一个剂量就需US$5，100，而一个疗程需要至少3剂，无法在我国推广。
[0004]日本专利JP2010126533A披露了，把紫杉醇与葡聚糖等共价缀合在一起，然后再通过非共价吸附在药物颗粒表面固定叶酸，以达到靶向抗肿瘤的目的，然而本发明人发现，紫杉醇作为药效活性化合物，与葡聚糖缀合，尤其是与葡聚糖上大量基团的副反应，由于化学结构的改变，会显著降低紫杉醇的药效，如果要消除结构相近的副产物，需要复杂的纯化过程(如层析过柱)，成本降不下来，而且叶酸吸附在表面，容易洗脱。中国专利20121002970.5公开了共价结合的叶酸-葡聚糖-氧化铁纳米颗粒，其具有体外靶向作用，其没有报道这种颗粒本身的抗肿瘤效果(实际基本没有)，而且本发明人发现其是先合成葡聚糖-氧化铁纳米颗粒，然后再进行叶酸缀合，合成效率低，且辅料对药物的适应性丧失。
[0005]为此，本发明人经过艰苦的研究，并结合一些运气，偶然发现通过一些连接基团将叶酸直接共价结合到葡聚糖上，虽然一定程度上丧失了叶酸对肿瘤的靶向性，目前其经测试体外没有抗肿瘤细胞的毒性(活性)，但是却能够很稳定地非共价地包裹住诸如紫杉醇等药物，复溶性和稳定性俱佳，且不必改变紫杉醇的化学结构，还无需使用复杂的纯化工艺(如，柱层析)。更令人意想不到的是，该辅料本身虽然没有体外抗肿瘤细胞的毒性，但是能够协同紫杉醇起效，提高体内的抗肿瘤的效果，并且能提高受试动物的药物耐受性，使得在临床使用中可以更大剂量地给药，从而进一步提高抗肿瘤效果。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供新的冻干粉针剂，其具备良好的药物适应性，复溶性和稳定性俱佳，其制备无需复杂的纯化工艺，甚至其中的辅料能与紫杉醇等药物化合物协同起效，提高疗效以及药物耐受性，包裹形成的药物组合物。另外，本发明还提供了该抗肿瘤冻干粉针剂的制备方法及其抗肿瘤应用等。
[0007]具体而言，在第I方面，本发明提供了冻干粉针剂，其是通过如下方法制备的，该方法包括，
[0008](1)按流程式I合成琥珀酰化葡聚糖
[0009]
【权利要求】
1.冻干粉针剂，其是通过如下方法制备的，该方法包括， (1)按流程式I合成琥珀酰化葡聚糖
2.权利要求1所述的冻干粉针剂，其中所述方法不包括层析步骤。
3.权利要求1所述的冻干粉针剂，其中药物化合物是脂溶性药物化合物，优选是紫杉醇。
4.权利要求1所述的冻干粉针剂，其中步骤(4)中的纳米级颗粒是粒径小于200nm(优选是小于180nm)的颗粒。
5.权利要求1所述的冻干粉针剂，其中步骤(4)中的药物化合物和叶酸-葡聚糖缀合物的重量比为0.5~2: I~10，优选为0.8~1.2: 3~6，如1: 4。
6.权利要求1所述的冻干粉针剂，其中步骤(1)中的葡聚糖的平均分子量为5~30KDa，优选为 10 ~20KDa，如 10KDa、15KDa 或 20KDa。
7.权利要求1所述的冻干粉针剂，其中所述方法包括， (1)取平均分子量20KDa、Mw/ Mn=L 3的葡聚糖10.0g溶于无水DMF中，搅拌20分钟形成澄清的溶液，然后加入1670mg琥珀酸酐和200.0mg4_ 二甲基氨基吡啶(DMAP)，快速搅拌至所有的固体溶解；置于室温下使得整个反应液反应24小时，之后将反应液放入截留分子量3，500的Spectra / Por3透析袋中，置于水中透析2天；然后将透析袋中的溶液冷冻干燥，得到白色的琥珀酰化葡聚糖； (2)取3g叶酸溶于120mLDMSO中，向其中加入930mg DCC和770mgNHS，反应液在室温暗室处放置12小时，然后副产物DCU沉淀被过滤去除，再向反应液加入1000mLV: V=30: 70的丙酮/乙醚混合液并进行搅拌，收集黄色沉淀并用V: V=30: 70的丙酮/乙醚混合液洗涤后晾干；取2.78g晾干的黄色沉淀再溶于20mLDMS0中，取6.0lg乙二胺快速加入到该溶液中，将两者混合后在室温暗室处放置12小时，加入50mLV: V=30: 70的丙酮/乙醚混合液并进行搅拌，收集黄色沉淀并在DMSO溶液中重结晶提纯，获得胺基化叶酸类似物； (3)取步骤⑴制备的琥珀酰化葡聚糖2000mg溶于40ml无水DMF中，加入50mgDMAP和579.7mg DCC,在室温下放置12小时后，再加入2mL含300mg步骤(2)制备的胺基化叶酸类似物的EDC溶液，反应液在室温下搅拌12小时后，将反应液放入截留分子量3，500的Spectra / Por3透析袋中，置于水中透析2天；然后将透析袋中的溶液冷冻干燥，得到黄色的叶酸-葡聚糖缀合物； (4)取1000mg步骤(3)制备的叶酸-葡聚糖缀合物，溶于100mll5mM的磷酸缓冲液(pH=7.4)中，溶解后，置于磁力搅拌器上以400rpm搅拌；在搅拌过程中，将250mg紫杉醇溶于5mL乙醇中，逐滴加入到搅拌的溶液中，加完后置于FS-1型高速匀浆机中，以最大功率匀浆6次，每次I分钟，停2分钟，之后将匀浆液放入截留分子量3，500的Spectra / Por3透析袋中，置于15mM pH=7.4的磷酸缓冲液中透析12小时以除去乙醇，然后加入2500mg甘露醇调节渗透压，并经过0.2 μ m滤膜除菌，即得叶酸-葡聚糖缀合物包裹的紫杉醇颗粒溶液； (5)将步骤(4)制备的颗粒溶液置于VirtisAdvantage Plus冷冻干燥机中冷冻干燥，其中冷冻干燥步骤为:先冷冻至_40°C 120min，再升温到_22°C 90min，然后降温到_40°C保持6小时，整个过程持续9.5小时；然后升温至-11°C，持续抽气干燥48.6小时；最后在3小时内升至25°C，持续抽气干燥7小时，由此获得了冻干粉针剂。
8.权利要求1~7之任一所述的冻干粉针剂在制备抗肿瘤的药物中的应用。
9.权利要求8所述的应用，其中肿瘤是非小叶肺癌。
10.权利要求1~7之任一所述的冻干粉针剂的制备方法，其包括权利要求1~7之任一中所述的制备步骤。
【文档编号】A61P35/00GK103908433SQ201410070224
【公开日】2014年7月9日 申请日期:2012年12月14日 优先权日:2012年12月14日
【发明者】李军, 游绍进, 陈琼 申请人:苏州友林生物科技有限公司