一种远志糖酯有效部位的制备方法
【专利摘要】本发明提供一种远志糖酯有效部位的制备方法，利用乙醇回流法对远志药材进行提取，采用DM130大孔吸附树脂进行初步纯化，采用乙酸乙酯萃取技术进一步纯化，以获得远志糖酯有效部位。本发明所制备的有效部位中可准确定量的糖酯类成分含量高于50%，工艺简便，条件温和，产品质量稳定，所用有机溶剂容易回收再使用，成本低，易于工业化生产。本发明制备的远志糖脂有效部位可用于中药五类新药研究开发，有较大的应用价值。
【专利说明】一种远志糖酯有效部位的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于中药领域，涉及一种中药有效部位的制备方法，尤其涉及一种远志糖酯有效部位的制备方法。
【背景技术】
[0002]远志是远志科植物远志Polygala tenuifolia ffilld.或卵叶远志Polygalasibirica L.的干燥根，具有安神益智、交通心肾、祛痰消肿的功效，临床用于治疗心肾不交引起的失眠多梦、健忘惊悸、神智恍惚、咳痰不爽、疮疡肿毒、乳房肿痛。化学成分研究表明，远志所含化学成分主要为皂苷、糖酯、_酮、生物碱和脂肪油等。现代药理学研究表明，远志皂苷具有祛痰止咳的作用，也是远志的主要毒性成分(具有明显的胃刺激作用和溶血作用)；远志Bi酮具有抗真菌和止痛的作用；远志糖酯被认为与远志改善认知和脑保护作用有关。Ikeya 等(B1l.Pharm.Bull., 2004, 27(7)，1081-1085.)研究发现,远志糖酯能显著缩短KCN致脑缺血小鼠昏迷时间，其中以3，6’ -二芥子酰基蔗糖酯(DISS)和Tenuifoliside B的活性最好，进一步研究还发现这两个化合物还具有较好的改善认知活性(东莨菪碱致小鼠痴呆模型)。
[0003]已有学者对远志活性部位的制备工艺进行了研究。姜勇等(中国专利，CN 1640425A)公开了一种远志有效部位的制备方法，具体方法如下:将远志的根或根皮粉碎后，先使用水或/和醇作进行提取，然后上大孔树脂柱，使用水、甲醇、乙醇、丙酮、或50~95 %的乙醇或丙酮的水溶液进行洗脱，收集洗脱液，干燥，即得含量达50%以上的远志总苷有效部位。该总苷有效部位以DISS为对照品，采用紫外分光光度法测定总苷含量，总苷含她酮苷、糖酯和阜苷。然而，该总苷 的三类成分最大紫外吸收波长差别大，分子量差别大(all酮苷分子量范围:200-600 ;糖酯分为蔗糖单酯、蔗糖双酯、寡糖多酯，其分子量范围为:500-1500 ;皂苷分子量范围:1000-2000)，因此，简单地以DISS为对照品，采用紫外分光光度法测定远志总苷含量，其专属性和准确度还有待进一步验证。其次，由于总苷含有的_酮苷、糖酯和皂苷三类成分的药理作用不同，这种混合的有效部位影响其在新药研发中的应用。王磊等(中国专利，CN 102526215 A ；CN 102451442 A)公开了一种去除远志毒性成分保留有效组分的提取工艺。该学者采用AB-8大孔吸附树脂对远志提取物进行了纯化，去除所含的胃刺激成分皂苷，保留了糖酯和_酮等成分，但该方法未对所得提取物进行质量控制，提取物中可控成分含量不明，不符合我国药品注册法规对有效部位(即中药五类)新药的要求，只能作为一般粗提取物应用。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种远志糖酯的制备方法，通过以下步骤实行:
(I)提取:以远志药材为原料，采用乙醇溶液回流法进行提取，具体为:以远志药材质量6~12倍量的50-80 %乙醇溶液为提取溶剂，回流提取2~3次，每次1_2 h，合并提取液，60°C减压浓缩至无醇味，得到远志提取物。[0005](2)大孔树脂纯化:采用D130大孔树脂对步骤(1)所得的远志提取物进行纯化。上样液的浓度为含生药0.25 g/ml，上样速度为2~3 Bv/h，上样量为2~4 Bv ;在洗脱过程中先用4~6 Bv的水进行冲洗，水洗速度为4 Bv/h，接着用4~6 Bv的浓度为20 %的乙醇溶液进行洗脱，洗脱速度为2 Bv/h，然后用4~6Bv的浓度为35 %的乙醇溶液进行洗脱，洗脱速度为1~3 Bv/h。35 %乙醇溶液洗脱液，减压浓缩至无醇味(60 °C)，得到糖酯富集部位。
[0006](3)乙酸乙酯萃取:采用液液萃取的方法对步骤(2)所得的糖酯富集部位进行纯化，糖酯富集部位加水分散得到样液，浓度为含糖酯1.36~13.61 mg/ml，萃取溶剂为乙酸乙酯，萃取次数:3~5次，每次萃取溶剂用量为3倍样液量。合并乙酸乙酯层，减压浓缩至干(60°C)，即得远志糖酯有效部位。
[0007]进一步地，步骤(1)提取溶剂的用量为远志药材质量的8倍，乙醇溶液的浓度为70%，回流提取2次，每次1.5 h。
[0008]进一步地，步骤(2)中上样速度为2 Bv/h，上样量为4 Bv0较优的洗脱过程为:先用5 Bv的水进行冲洗，水洗速度为4 Bv/h,接着用5 Bv的浓度为20 %的乙醇溶液进行洗脱，然后用6 Bv的浓度为35 %的乙醇溶液进行洗脱，洗脱速度为2 Bv/h。
[0009]进一步地,步骤(3)中样液的浓度为含糖酯6.81 mg/ml,萃取次数为4次。
[0010]本发明的另一个目的是所述的方法在制备远志糖酯有效部位中的应用。
[0011]本发明通过乙醇溶液回流提取，大孔吸附树脂富集除杂，结合乙酸乙酯萃取纯化，除去毒性成分远志皂苷及其他与药效无关的成分，获得高纯度远志糖酯有效部位，并以DISS、Tenuifoliside A、Tenuifoliside B、Tenuifoliside C 为对照品，米用高效液相色谱法测定远志糖酯有效部位的含量，结果显示，远志糖酯有效部位部位中上述4种远志糖酯的含量达到50 %以上，符合有效部位(中药五类)新药的要求。
[0012]本发明一种远志糖酯有效部位的制备方法的有益效果在于:制备方法设计合理，操作简单；所得有效部位可控成分含量大于50%(采用高效液相色谱法测定，方法专属性强、准确度高、重复性好)；大孔吸附树脂可再生利用，洗脱溶剂乙醇溶液对环境污染小，价格低廉，可回收利用；本制备方法具有良好的稳定性和重现性，为远志糖酯的工业化生产提供了科学依据。本发明方法条件温和，产品质量稳定，所用有机溶剂容易回收再使用，成本低，易于工业化生产。本发明制备的远志糖脂有效部位可用于中药五类新药研究开发，有较大的应用价值。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1为典型远志糖酯有效部位样品的高效液相色谱图:其中A为混合对照品，B为供试品即远志糖酯有效部位，I为Tenuifoliside B，2为DISS，3为Tenuifoliside A，4为Tenuifoliside C。
【具体实施方式】
[0014]本发明结合实施例作进一步的说明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
[0015] 本发明实施例中4种远志糖酯的含量测定采用高效液相色谱法，具体方法如下: 高效液相色谱条件:色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 X 250 mm, 5 μ m)；
流动相:以乙腈为流动相A，以0.05 %三氟乙酸溶液为流动相B，按下表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为320 nm ;柱温为30 V ;进样量为10 μ I。
[0016]在此液相条件下，4种远志糖酯的分离效果较好(分离度> 1.5)，见图1。
【权利要求】
1.一种远志糖酯有效部位的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现: (1)提取:以远志药材为原料，采用乙醇溶液回流法提取，具体为:以远志药材质量6^12倍量的50-80 %乙醇溶液为提取溶剂，回流提取2~3次，每次1_2 h，合并提取液，60 V减压浓缩至无醇味，得到远志提取物； (2)大孔树脂纯化:采用D130大孔树脂对步骤(1)所得的远志提取物进行纯化，上样液的浓度为含生药0.25 g/ml，上样速度为2~3 Bv/h，上样量为2~4 Bv ;洗脱过程:先用4飞Bv的水进行冲洗，水洗速度为4 Bv/h,接着用4飞Bv的浓度为20 %的乙醇溶液进行洗脱，洗脱速度为2 Bv/h,然后用4飞Bv的浓度为35 %的乙醇溶液进行洗脱，洗脱速度为f 3 Bv/h, 35%乙醇溶液洗脱液，60 °C减压浓缩至无醇味，得到糖酯类富集部位； (3)乙酸乙酯萃取:采用液液萃取的方法对步骤(2)所得的糖酯类富集部位进行纯化，糖酯富集部位加水分散得到样液，浓度为含糖酯1.36^13.61 mg/ml，萃取溶剂为乙酸乙酯，萃取次数3飞次，每次萃取溶剂用量为3倍样液量，合并乙酸乙酯层，60 1:减压浓缩至干，即得远志糖酯有效部位。
2.根据权利要求1所述的一种远志糖酯有效部位的制备方法，其特征在于，步骤(1)选择提取溶剂的用量为远志药材质量的8倍，乙醇溶液的浓度为70 %，回流提取2次，每次1.5h0
3.根据权利要求1所述的一种远志糖酯有效部位的制备方法，其特征在于，步骤(2)中选择上样速度为2 Bv/h，上样量为4 Bv，选择洗脱过程为:先用5 Bv的水进行冲洗，水洗速度为4 Bv/h，接着用5 Bv的20 %乙醇溶液进行洗脱，然后用6 Bv的35 %乙醇溶液进行洗脱，洗脱速度为2 B v/h。
4.根据权利要求1所述的一种远志糖酯有效部位的制备方法，其特征在于，步骤(3)中选择样液的浓度为含糖酯6.81 mg/ml,萃取次数为4次。
5.根据权利要求1-4任一所述的方法在制备远志糖酯有效部位中的应用。
【文档编号】A61K36/69GK104027403SQ201410215399
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年5月21日 优先权日:2014年5月21日
【发明者】栾连军, 张晓玲, 吴永江, 刘雪松, 施琦渊, 陈勇, 王龙虎 申请人:浙江大学