一种猪博卡病毒卵黄抗体口服液及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种猪博卡病卵黄抗体口服液及其制备方法。其配方在于，包括以下按照体积比计算的原料：含卵黄抗体的全蛋水溶液95-105、辛酸0.2-0.3、甲醛0.2-0.3、硫柳汞0.01-0.02；还包括800-1000单位/毫升口服液的青链霉素。这种方法制备的卵黄抗体口服液不仅使生产过程中损失少、免疫活性物质强多、生物活性高、无临床副作用，同时，含有蛋清中大量的各种蛋白质，可以减少口服时对抗体的不良影响。
【专利说明】一种猪博卡病毒卵黄抗体口服液及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于猪用生物制品【技术领域】，涉及一种猪博卡病卵黄抗体口服液及其制备 方法。
【背景技术】
[0002] 猪博卡病毒（Bocavirus)隶属于细小病毒科细小病毒亚科的博卡病毒属，这种 DNA病毒是我国最近两年发现的，具有局部高发性、高死率、高传染性等临床流行特征，主要 是针对于仔猪，在仔猪断奶后易引发多系统衰竭综合征、传染性胃肠炎、流行性腹泻等病混 合感染,造成高死亡率。
[0003] 卵黄抗体IgY是的一种免疫球蛋白Ig，IgY在功能上相当于哺乳动物IgG，但结构 上有所不同，具有典型的的免疫球蛋白的空间构象。卵黄抗体具有很多优越性。（1)由于鸟 类与哺乳类动物种系发生学的差距，鸟类更适于生产抗哺乳动物抗原的特异性抗体。卵黄 抗体不会激发补体系统，不与抗哺乳动物抗原的抗体发生反应，不与哺乳动物和细菌的Fc 受体结合，这在免疫诊断中具有重要意义。（2)卵黄抗体作为一种具有生物活性的免疫球蛋 白，在贮存、生产、加工、摄食及消化过程中保证其稳定性是非常关键的。多项试验表明，IgY 具有较好的稳定性，耐酸、耐碱、耐热。卵黄抗体较易保存，4°C条件下存放5年或室温条件 下存放6个月对抗体活性无明显影响。
【发明内容】
[0004] 本发明提供一种猪博卡病毒卵黄抗体口服液及其制备方法，解决注射用的猪博卡 病毒卵黄抗体使用不方便的问题。
[0005] 本发明的目的是通过以下形式实现的： 一种猪博卡病卵黄抗体口服液，包括以下按照体积比计算的原料：含卵黄抗体的全蛋 水溶液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02 ;还包括800-1000单位/毫 升口服液的青链霉素。
[0006] 制备步骤是： 1) 采用猪博卡病毒灭活疫苗对鸡只进行强化免疫：采用三次免疫程序，每次间隔10 天，每只鸡每次疫苗用量为2ml，当抗体效价达到1:(128-256)时，进行高免蛋收集； 2) 使用0. 1-0. 2%新洁尔灭对高免蛋进行消毒； 3) 将2)中高免蛋的全蛋液进行乳化，乳化时间7-10min，然后加入pH为4. 2-4. 3的、 温度为4-6°C的盐酸酸化水,盐酸酸化水的加入量为全蛋液体积的5. 5-6. 5倍,混匀后，降 温至3-5°C，静置18-24小时； 4) 取3)中的上层清液，升温到25-32°C，加入辛酸，搅拌l_2h，静置10-12h，过滤；其中 辛酸体积量：上层清液体积量为（〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青链霉素，使卵黄抗体的全蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞的体积 比为（95-105) : (0· 2-0. 3) : (0· 2-0. 3) : (0· 01-0. 02)，青链霉素的含量为 800-1000 单位 / 晕升口服液； 6)分装，保存。
[0007] 步骤4)过滤时依次通过I. 0mm、0. 45mm、0. 22mm的滤膜进行过滤。
[0008] 本发明通过对高免蛋全蛋提取、低温酸化处理、辛酸处理后得到澄清卵黄抗体口 服液。本发明将全蛋使用到卵黄抗体的提取中，可以直接在临床上进行口服使用，蛋清中含 有大量的各类蛋白质，可充分利用高免蛋的价值，提高动物机体的免疫力和应激能力，生物 利用度高，具有生物活性不受影响的优点。
【具体实施方式】[0009]实施例1 : 一种猪博卡病毒卵黄抗体口服液的配方包括以下原料：含卵黄抗体的全蛋水溶液105L、辛酸0. 2L、甲醛0. 3L、硫柳汞0. 02L，以及1000单位/毫升口服液的青链霉素。
[0010] 其制备方法包括以下步骤： 1)采用市售的猪博卡病毒灭活疫苗进行强化免疫，每只鸡每次疫苗用量为2ml，每次间 隔10天，进行三次免疫程序，当抗体效价达到I:256时，开始收集高免蛋。
[0011] 2)将收集高免蛋整理，0. 2%新洁尔灭消毒，备用。
[0012] 3)水稀释法酸化处理：将2)步高免蛋全蛋打入巴氏罐体内进行充分乳化，乳化时 间7min，然后将乳化后的全蛋液加入pH为4. 2、温度为4°C的盐酸酸化水，盐酸酸化水加入 量为全蛋液体积的6倍,混匀,放置4°C环境中18小时静置沉淀,取上清液；盐酸酸化水是 在水中加入盐酸使其PH值达到4. 2。
[0013] 4)辛酸处理；将步骤3)的上清液，即含卵黄抗体的全蛋水溶液进行称量，升温到 25°C，加入辛酸，充分混匀lh，然后静置IOh;其中，按体积比，上层清液：辛酸=105 :0. 2 ; 5) 对步骤4)所得澄清液依次用I. 0_、0. 45mm、0. 22mm的滤膜过滤，留取滤液； 6) 向步骤5)所得滤液加入甲醛、硫柳汞、青链霉素；按体积比，含卵黄抗体的全蛋全 蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞=105 :0. 2 :0. 3 :0. 02 ;青链霉素在该口服液中的含量为1000 单位/毫升； 7) 分装，保存。
[0014] 为确定卵黄抗体口服液在常温下的放置有效期，做了以下试验：将本品保存在 37°C培养箱中，保存24个月，分别1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月 后，用琼脂扩散(AGP)法，测定每个时间点取样品的卵黄抗体效价变化，结果见表1。
[0015] 表1.常温放置口服液不同时间段效价的变化
【权利要求】
1. 一种猪博卡病卵黄抗体口服液，其特征在于：包括以下按照体积比计算的原料：含 卵黄抗体的全蛋水溶液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02 ;还包括 800-1000单位/晕升口服液的青链霉素。
2. -种如权利要求1所述猪博卡病卵黄抗体口服液的制备方法，其特征在于具体步骤 是： 1) 采用猪博卡病毒灭活疫苗对鸡只进行强化免疫：采用三次免疫程序，每次间隔10 天，每只鸡每次疫苗用量为2ml，当抗体效价达到1 :(128-256)时，进行高免蛋收集； 2) 使用0. 1-0. 2%新洁尔灭对高免蛋进行消毒； 3) 将2)中高免蛋的全蛋液进行乳化，乳化时间7-10min，然后加入pH为4. 2-4. 3的、 温度为4-6°C的盐酸酸化水，盐酸酸化水的加入量为全蛋液体积的5. 5-6. 5倍,混匀后，降 温至3-5°C，静置18-24小时； 4) 取3)中的上层清液，升温到25-32°C，加入辛酸，搅拌l_2h，静置10-12h，过滤；其中 辛酸体积量：上层清液体积量为（〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青链霉素，使卵黄抗体的全蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞的体积 比为（95-105) : (0? 2-0. 3) : (0? 2-0. 3) : (0? 01-0. 02)，青链霉素的含量为 800-1000 单位 / 晕升口服液； 6) 分装，保存。
3. 根据权利要求2所述的猪博卡病卵黄抗体口服液的制备方法，其特征在于：步骤 4)过滤时依次通过1. 0mm、0. 45mm、0. 22mm的滤膜进行过滤。
【文档编号】A61P31/20GK104399080SQ201410762710
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年12月14日 优先权日:2014年12月14日
【发明者】徐进, 郭俊清 申请人:郑州后羿制药有限公司