一种异喹啉生物碱的预防或治疗糖尿病肾病的用途的制作方法

本发明涉及天然药物领域，涉及一种异喹啉生物碱的预防或治疗糖尿病肾病的用途，具体涉及黄柏碱的预防或治疗糖尿病肾病的用途。

背景技术：

糖尿病是一种由于胰岛素分泌缺陷及(或)其生物学作用障碍引起的以高血糖为特征的代谢疾病，是在遗传基础上，有环境因素参与的遗传易感性疾病，是一种慢性全身性代谢疾病，严重危害人类健康，积极开展糖尿病的防治工作已成为主要的社会公共卫生问题。

I型糖尿病的发病原因主要是由于胰岛素分泌绝对缺少，II型糖尿病是从胰岛素抵抗为主伴胰岛素相对不足到胰岛素分泌不足为主伴胰岛素抵抗的病理过程。目前公认II型糖尿病是一种在环境因素、生活方式的改变的作用下由多个基因分别或相互作用所导致的复杂遗传病，但是II型糖尿病的病因尚未完全阐明。

西医目前常采用饮食、运动疗法磺酰脲类、双胍类、噻唑烷二酮类、α-葡萄糖苷酶抑制剂、瑞格列奈、胰岛素等来治疗II型糖尿病，仅噻唑烷二酮类可改善胰岛素抵抗。病人在用西药治疗的同时，又不断地出现动脉硬化、冠心病和高血压等并发症，II型糖尿病的复杂机制及其导致的全身病变是西药治疗的薄弱环节。不论是磺脉类的促泌剂还是噻唑烷二酮类的增敏剂在实验和临床研究中都不具备明显的减肥功效，而肥胖是2型糖尿病乃至代谢综合征的重要病理基础。

II型糖尿病不仅是糖代谢紊乱疾病，还是脂肪代谢紊乱疾病。肥胖引起的II型糖尿病患者通常都有高糖和高脂饮食，并常伴有高脂血症。有研究表明提示血糖“正常”的肥胖患者已有β细胞分泌功能的异常。但是，大部分的肥胖者并不发展为糖尿病，说明机体的自身状况起重要作用。在同样的毒性作用下，易感人群很容易发展成II型糖尿病，而不敏感人群可能终身不发病，或者延迟发病。现代医学并不能够改变机体的易感性，但可以通过改变生活方式，减肥等手段来尽可能地减少早期的诱因，尽量的延长代偿期，从而延迟II型糖尿病 的发生，甚至避免发病。

现代II型糖尿病的治疗观点已从已往的单纯控制血糖转为降糖、降脂、降压、改善胰岛素抵抗等多环节治疗。但是，对于II型糖尿病患者，药量需逐渐增加，投药种类也常由单一用药逐渐变为联合用药，这不可避免地要考虑药物代谢对肝肾的副作用。故从传统中药中寻找低毒、疗效肯定的天然药物来治疗是目前研糖尿病究热点之一。

卫生部制定颁布的《中药新药治疗消渴病(糖尿病)的临床研究指导原则》中所制定的分类标准是目前采用最广泛的分类方法，即阴虚热盛证、气阴两虚证、阴阳两虚证和血疲气滞证四型。

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病最重要的并发症之一，我国的发病率亦呈上升趋势，目前已成为终末期肾病的第二位，仅次于肾小球肾炎，由于存在复杂的代谢紊乱，糖尿病发生肾脏损害，特别是一旦进入临床蛋白尿期，病情一般不可逆转，往往呈进行性发展直至终末期肾病，往往比其他肾脏疾病的治疗更加困难，是引起糖尿病患者死亡的主要原因之一，DN的发病机制和治疗药物的研制受到了医学界极大的重视。现代医学上多从饮食控制、血糖控制、降压、调整脂代谢等方面着手，或是采用透析、肾移植等治疗手段，尚无疗效确切的西药能阻止DN肾功能损害的进程。临床其主要诊断的特征为白蛋白排泄率，和白蛋白肌酐比值。

糖尿病肾病是现代医学病名，在古医籍中未有与之对应的确切病名，但文献记载的消渴病日久失治、误治后所出现尿独、水肿、肾消、关格等与糖尿病肾病的临床表现十分相似。如《圣济总录》曰：“消渴病久，肾气受伤，肾主水，肾气虚衰，气化失常，开阖不利，发为水肿。”，《杂病源流犀烛.三消源流》记载：“有消渴后身肿者，有消渴面目足膝肿小便少者。”，因而本病当属中医学中的“消渴”、“水肿”、“虚劳“等范畴。

对糖尿病肾病病机的认识，中医各家认识较为一致，多立足本虚标实、虚实夹杂，涉及肝脾肺肾诸脏，糖尿病肾病的病机特点是：以肾、脾、肝及气血阴阳之虚为本；标实以瘀血、水湿、痰浊最多。中医药在防治糖尿病肾病方面显示出独特的优势，从中药中发现改善临床症状、减轻蛋白尿、降低血糖、保护肾功能的天然产物是国内外研究的热点。

黄柏为我国常用的传统中药，始载于《神农本草经》，原名“檗木”，列为上品，其性味苦、寒，主归肾、膀胱经，具有清热燥湿，湾火除蒸，解毒疗疫之功效，用于湿热污痢，黄疸尿赤，带下阴痒，热淋淫痛，脚气痿蹵，骨蒸劳热，盗汗，遗精，肿毒，湿疹。现代药理研究表明，黄柏具有抗菌、抗真菌、抗炎、抗肝炎、抗肾炎、抗溃病、抗氧化、抗痛风、降血压、降血糖、抗肿瘤、抗心力衰竭、抑制细胞免疫等作用。目前黄柏制剂在临床上已经广泛运用，如治疗鼻窦炎、急慢性脓耳、急慢性骨髓炎、慢性结肠炎、皮肤糜烂、脓拖性皮损、湿疫皮炎、溃窃性口腔炎、外痔肿痛、肛痛以及术后外洗、治疗软组织挫伤、消肿等病症。(《黄柏中黄柏碱的提取纯化工艺研究》，《西南交通大学硕士研究生学位论文》，罗鸿，2012年)。

黄柏碱(Phellodendrine)是从芸香科植物黄柏(Phelhdendron chinensis Schneid.)、威氏黄柏的茎皮中提取分离出来的一种异喹啉生物碱，其具有降血压、抗肾炎、抑制细胞免疫反应、中枢神经抑制等作用。

黄柏碱的药理作用主要有：降压作用，主要表现为静注于猫和鼠和犬均可引起降压，并能增强肾上腺素和去甲肾上腺素的升压反应，抑制人工窒息及刺激迷走神经向中端的升压反应，抑制刺激节前纤维而起的猫瞬膜收缩。随剂量增大，降压作用强度及持续时间也增加；植物神经阻断作用，表现为黄柏碱对中枢神经有抑制作用，能抑制小鼠的自发活动和各种反射；肌肉松驰作用；对细胞免疫应答期的诱导期有抑制作用。

《黄柏中几种生物碱的分离、鉴定及促胰岛素分泌活性筛选》(《中国医药指南》，2011年3月，第9卷，第7期，第54-55页，周明伟、范明松、季宇斌、唐意红)记载了：从黄柏的生物碱部分分离得到3个化合物，分别为小檗碱、药根碱、黄柏碱。研究发现，在葡萄糖浓度为5.6mmol/L时，黄柏总碱中的3种生物碱对胰岛素的分泌均无明显的促进作用；而当葡萄糖浓度为16.7mmol/L时，小檗碱能够明显的促进细胞的胰岛素分泌。阳性药格列美脲在低糖浓度和高糖浓度时，都能够促进胰岛素分泌。

至今未见有关黄柏碱糖尿病肾病治疗作用的报道。

技术实现要素：

本发明公开一种异喹啉生物碱的预防或治疗糖尿病肾病的用途；具体是黄柏碱治疗糖尿病肾病的作用新用途，

本发明公开异喹啉生物碱用于制备治疗或预防糖尿病肾病的组合物。

本发明公开的组合物，异喹啉生物碱为黄柏碱。

本发明公开的组合物，为市售或按已知方法制备的黄柏碱或其药用盐、水合物或无水物。

本发明公开的组合物，其中黄柏碱药用盐包括：无机酸盐例如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐和磷酸盐；有机酸盐例如乙酸盐，苯甲酸盐，马来酸盐，富马酸盐，苹果酸盐，柠檬酸盐，草酸盐，乳酸盐，琥珀酸盐，酒石酸盐，烷基磺酸盐或芳基磺酸盐，半胱氨酸盐或其它氨基酸盐。还包括碱式盐如钠盐、钾盐和钙盐。

水合物包括含n个结晶水，n＝1-12。

本发明公开的组合物，为：药物、保健品、或功能性食品，赋形剂或载体为制药或食品领域中常用的赋形剂或载体，如稀释剂，崩解剂，润滑剂等。

本发明中所述黄柏碱的有效量可是目前黄柏碱应用领域中的常用量或剂量。

本发明的黄柏碱可通过口服或注射形式使用。

本发明的异喹啉生物碱用于预防或治疗I型糖尿病。

本发明的异喹啉生物碱用于预防或治疗II型糖尿病。

本发明的异喹啉生物碱用于制备保护糖尿病肾病人的肾脏组织、或、修复糖尿病肾病人的受损的肾脏组织的组合物。

本发明所述的黄柏碱(Phellodendrine)，CAS号为6873-13-18，其分子式是C₂₀H₂₄NO₄，相对分子质量342，具有式如下的结构：

发明人在黄柏碱的药理活性研究中，意外地发现黄柏碱具有显著的治疗糖尿病肾病作用。

本发明通过(1)STZ造模的糖尿病小鼠，经过14周，发展成为糖尿病肾病，灌胃给药12周，结果表明治疗作用效果明显，具有显著的统计学差异

为了便于理解，下面通过附图和具体实施例对本发明的黄柏碱在治疗糖尿病肾病的用途进行详细的描述。需要特别指出的是，具体实施例和附图仅是为了说明，显然本领域的技术人员可以根据本文说明，对本发明进行各种修正或改变，这些修正和改变也将纳入本发明范围之内。

附图说明

图1：肾脏HE染色

图2：肾脏PAS染色

图1的详细说明

图1通过上中下三个部分展示肾脏HE染色；

图1的上部展示正常组小鼠肾脏组织；

图1的中部展示STZ组小鼠肾脏组织；

图1的下部展示STZ+黄柏碱组小鼠肾脏组织。

图2的详细说明

图2通过上中下三个部分展示肾脏PAS染色；

图2的上部展示正常组小鼠肾脏组织；

图2的中部展示STZ组小鼠肾脏组织；

图2的下部展示STZ+黄柏碱组小鼠肾脏组织。

本发明涉及如下表

表1.黄柏碱对STZ造模的糖尿病肾病的血糖的影响

表2.黄柏碱对STZ造模的糖尿病肾病的尿量的影响

表3.黄柏碱对STZ造模的糖尿病肾病的UAE(24h尿白蛋白排泄率)的影响.

表4.黄柏碱对STZ造模的糖尿病肾病的UACR(ug尿白蛋白/mg肌酐比值)的影响.

具体实施方式

实施例1

为了研究黄柏碱对糖尿病肾病血糖影响，使用C57BL小鼠随机分为3组，正常对照组(10只)，STZ组(20只)。STZ组连续腹腔注射STZ(50mg/Kg)5天，两周后测定禁食血糖，血糖大于等于13.8mM为糖尿病造模成功。然后将STZ组随机分为STZ组和黄柏碱治疗组，STZ组仅正常饲养，黄柏碱治疗组采用口服灌胃(15mg/kg)，12周后，将小鼠放入小鼠代谢笼中，自由饮食饮水，将尿液用于分析，所测指标均为临床上糖尿病肾病的检测的经典指标，如表2、3、4所示STZ组相比空白对照组，显著升高均在10倍以上，说明糖尿病小鼠肾功能出现严重损伤，如图1、2所示STZ组相比正常组器官损伤明显。综合以上表图可以得出糖尿病肾病造模成功。

表1.结果表明黄柏碱能够有效的降低STZ造成的血糖升高，逆转由糖尿病肾病引起的尿量增加(表2)，有效的降低糖尿病肾病引起的24h蛋白排泄率升高(表3)。临床上常用尿液中白蛋白和肌酐的比值评估肾功能，黄柏碱的有效的降低糖尿肾病引起的白蛋白和肌酐的比值升高(表4)。尿量、24h蛋白排泄率白蛋白和肌酐的比值的结果表明黄柏碱治疗很好的改善了肾功能。

为了更进一步的评估肾脏器官性损伤的改变，本发明对肾脏进行PAS染色和HE染色。图1，2显示：黄柏碱能够有效的修复糖尿病肾病的器官性损伤逆转，如图所示STZ组肾小球系膜区增宽，基质增加，肾小球基膜增厚，肾小管基膜增厚及分裂，呈现出极为典型的糖尿病肾病特征，显示造模良好，而黄柏碱在一定程度上修复，系膜区相对缩小，改善了基质增生以及肾小管基膜增厚，说明治疗作用明显效果显著。

表1.黄柏碱对STZ造模的糖尿病肾病的血糖的影响(单位：mM).

注：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，与STZ组相比。

表2.黄柏碱对STZ造模的糖尿病肾病的尿量的影响(单位：g).

表3.黄柏碱对STZ造模的糖尿病肾病的UAE(24h尿白蛋白排泄率，单位：μg)的影响.

表4.黄柏碱对STZ造模的糖尿病肾病的UACR(μg尿白蛋白/mg肌酐比值)的影响.

注：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，与STZ组相比。

实施例2

黄柏碱的制剂

黄柏碱片剂

黄柏碱10mg，淀粉88g，硬脂酸镁3g

制备工艺：取黄柏碱过100目筛，加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，压片，即得。

黄柏碱胶囊

黄柏碱10mg，淀粉88g，硬脂酸镁3g

制备工艺：取黄柏碱过100目筛，加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，装胶囊，即得。

黄柏碱注射液

黄柏碱47mg，注射用氯化钠7mg

制备工艺：取黄柏碱过100目筛，加1.9mL注射用水溶解，加入注射用氯化钠至等渗，调节pH值至7～7.1，滤过，冷藏24小时，加注射用水至规定量，滤过，灌封，灭菌，即得。

实施例3

黄柏碱的食品制剂

干酵母5g、温水90ml、水少许、面粉150g、黄柏碱5mg，植物油10g、低钠盐少许

饼干做法：把酵母撒在温水里搅拌倒溶化，加入黄柏碱。加入面粉搅拌，再加入植物油，揉成光滑的面团；面团制成0.2cm厚的薄片；压出造型，刺洞，表面撒上水，撒上一点低钠盐，室温发酵10分钟；烤箱预热120度，放在上层，烤约10分钟，得到含黄柏碱的食品。

实施例4

黄柏碱单体(纯度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL 0.1M HCL氯仿溶液，析出沉淀，过滤干燥，得到盐酸黄柏碱单体，用1ml乙醇溶解，置冰箱4℃条件下放置24h，析晶，过滤干燥，得到盐酸黄柏 碱单体，纯度达到98％以上。

黄柏碱单体(纯度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M H₂SO₄氯仿溶液，析出沉淀，过滤干燥，得到硫酸黄柏碱单体，用1ml乙醇溶解，过滤，滤液置冰箱4℃条件下放置24h，析晶，过滤干燥，得到硫酸黄柏碱单体，纯度达到98％以上。

黄柏碱单体(纯度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL 0.1M磷酸氯仿溶液，析出沉淀，过滤干燥，得到磷酸黄柏碱单体，用1ml乙醇溶解，过滤，滤液置冰箱4℃条件下放置24h，析晶，过滤干燥，得到磷酸黄柏碱单体，纯度达到98％以上。

黄柏碱单体(纯度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL 0.1M果酸氯仿溶液，析出沉淀，过滤干燥，得到果酸黄柏碱单体，用1ml乙醇溶解，过滤，滤液置冰箱4℃条件下放置24h，析晶，过滤干燥，得到果酸黄柏碱单体，纯度达到98％以上。

黄柏碱单体(纯度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL 0.1M草酸氯仿溶液，析出沉淀，过滤干燥，得到草酸黄柏碱单体，用1ml乙醇溶解，过滤，滤液置冰箱4℃条件下放置24h，析晶，过滤干燥，得到草酸黄柏碱单体，纯度达到98％以上。

黄柏碱单体(纯度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL 0.1M琥珀酸氯仿溶液，析出沉淀，过滤干燥，得到琥珀酸黄柏碱单体，用1ml乙醇溶解，过滤，滤液置冰箱4℃条件下放置24h，析晶，过滤干燥，得到琥珀酸黄柏碱单体，纯度达到98％以上。

黄柏碱单体(纯度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL 0.1M醋酸氯仿溶液，析出沉淀，过滤干燥，得到醋酸黄柏碱单体，用1ml乙醇溶解，过滤，滤液置冰箱4℃条件下放置24h，析晶，过滤干燥，得到醋酸黄柏碱单体，纯度达到98％以上。

黄柏碱单体(纯度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL 0.1M丙酸氯仿溶液，析出沉淀，过滤干燥，得到丙酸黄柏碱单体，用1ml乙醇溶解，过滤，滤液置冰箱4℃条件下放置24h，析晶，过滤干燥，得到丙酸黄柏碱单体，纯度达到98％以上。