本发明属于兽用生物制品领域，具体涉及一种含有佐剂的活疫苗组合物及其制备方法，以及用于制备预防和/或治疗相关疾病的药物组合物的应用。
背景技术：
：免疫是改善动物健康的主要手段，尽管已有抗许多常见疾病的多种成功的疫苗，但感染性疾病仍然是动物健康问题和死亡的首要原因。常用的免疫手段是通过活疫苗或灭活疫苗进行免疫来实现的，活疫苗免疫作为预防和控制疾病的一种重要手段，不仅免疫量较灭活疫苗低，而且免疫反应快，能较早引起免疫应答，对机体起到保护作用。然而，活疫苗在通过粘膜系统免疫时，其引起免疫应答的能力大大降低，且免疫量大幅度提高，严重制约了活疫苗的应用和推广。佐剂是疫苗提高免疫应答强度的一种重要手段，目前研究较多的佐剂例如铝胶、油佐剂等均是针对灭活疫苗皮下免疫来使用的，还未见到有针对活疫苗通过粘膜途径免疫的佐剂。为此，本发明成功开发了一种含有佐剂的活疫苗组合物，不仅常规皮下注射途径免疫效果大大提升，而且通过粘膜途径免疫的效果显著提升，大大降低了免疫成本。技术实现要素：本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种含有佐剂的活疫苗组合物，该疫苗组合物含有免疫量的抗原和佐剂。本发明所述的佐剂包含卡波姆和壳聚糖。优选地，本发明所述的佐剂为溶液，其中，分散相为水，包括纯化水或注射用水。优选地，本发明所述的佐剂，其中，卡波姆的含量为0.01％～2％重量比；更优选地，卡波姆的含量为0.1％～0.5％重量比。卡波姆又称carbomer，是聚烷基蔗糖或聚烷基季戊四醇与丙烯酸交联聚合物的共聚物，根据聚合时使用的材料不同和聚合度的不同，有卡波姆934P、卡波姆940、卡波姆941P、卡波姆980、卡波姆1342、卡波姆934，本发明优选卡波姆934P和卡波姆941P。优选地，本发明所述的佐剂，其中，壳聚糖的含量为0.1％～5％重量比；更优选地，壳聚糖的含量为0.5％～1％重量比。壳聚糖又称为脱乙酰甲壳素，是由几丁质经过脱乙酰作用得到的，化学名称为聚葡萄糖胺(1-4)-2-氨基-B-D葡萄糖。本发明所述壳聚糖还可以使用与其功能相同或相近的衍生物来替代，包括羧甲基壳聚糖、羧丁基壳聚糖、N-羟乙基壳聚糖、N-乙酰化壳聚糖、O-羧甲基壳聚糖、N-羧甲基壳聚糖、磺酸壳聚糖、苯甲磺酰壳聚糖、N-三甲基氯化壳聚糖、N-羟丙基壳聚糖乙酸酯、氰乙基壳聚糖、苯基氰乙基壳聚糖、N-丙酰化壳聚糖、N-丁酰化壳聚糖、N-己酰化壳聚糖、N-甲基磺酰壳聚糖、N-甲基苯磺酰壳聚糖、N-邻苯二甲酰壳聚糖、N-丁基壳聚糖、N-辛基壳聚糖、N-十六烷基壳聚糖、N-羧基丁基壳聚糖、N-硫酸壳聚糖、6-O-羟乙基壳聚糖、乙二醇壳聚糖、甘油壳聚糖、3-氯丙烷-1，2-二醇壳聚糖、B-D半乳糖苷支化壳聚糖、6-脱氧壳聚糖、6-O-单硫酸壳聚糖、3，6-O-二硫酸壳聚糖、对羟基苯甲酸壳聚糖酯、十二烷基磺酸钠壳聚糖及其盐酸盐、乳酸盐、醋酸盐或谷氨酸盐。本发明所述的壳聚糖或壳聚糖衍生物的脱乙酰度为75％～100％，优选85％～95％。优选地，本发明所述的佐剂进一步包含普罗尼克L121。优选地，本发明所述的佐剂，其中，普罗尼克L121的含量为0.5％～5％重量比；更优选地，普罗尼克L121的含量为1％～4％重量比。普罗尼克L121，英文名称为PluronicL121,又译为普流尼克L121或普郎尼克L121，主要成分为泊洛沙姆(poloxamer)。优选地，本发明所述的佐剂，其中，分散质粒径大小为0.01μm～5μm。更优选地，本发明所述的佐剂，其中，分散质粒径大小为0.1μm～2μm。本发明所述抗原为猪肺炎支原体、猪鼻支原体、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、猪繁殖与呼吸综合征病毒、轮状病毒、传染性胃肠炎病毒、伪狂犬病毒、猪瘟病毒。本发明所用术语“疫苗组合物”指含有抗原的药物组合物，该药物组合物可诱导、刺激或增强动物机体针对相应病原的免疫反应。本发明所用术语“活疫苗”指以毒力已经减弱但仍可在宿主体内或细胞上复制的病毒制备的疫苗。本发明所用的术语“减毒”用于指以使病原丧失致病性、但保持免疫原性的方式对基因进行突变来人工降低病原体毒性。通常，通过UV辐射、化学处理或体外连续高阶继代培养实现减毒。人工的基因改变，例如将已知序列中的特定核苷酸缺失以使毒力减弱。本发明的组合物的成分或组分的量优选地是治疗有效量。所述治疗有效量是指在组合物施用的宿主中发挥它们的免疫学作用而不导致过度副作用所必需量。所用的成分和待施用的组合物的精确的量将根据因素如治疗的疾病的类型，待治疗的动物的类型和年龄，施用的方式，以及组合物中的其它成分而变化。作为本发明的一种实施方式，本发明提供的含有佐剂的活疫苗组合物，其抗原部分和佐剂部分是分别独立保存的，使用时，将佐剂和抗原混合均匀即可。优选地，抗原部分进一步包含稳定剂，可用于本发明的稳定剂包括SPGA、糖类(例如，山梨醇、甘露醇、淀粉、蔗糖、葡萄糖、葡聚糖)、蛋白质，如白蛋白或者酪蛋白、含有蛋白质的物质，如牛血清或者脱脂乳和缓冲液(例如，磷酸盐缓冲液)。特别当将这种稳定剂加入抗原部分时，非常适于冷冻干燥。因此，在该实施方案的更优选的形式中，本发明抗原部分是冷冻干燥的形式。作为本发明的一种实施方式，本发明提供的含有佐剂的活疫苗组合物，其抗原部分包含猪伪狂犬病病毒减毒抗原。优选地，所述猪伪狂犬病病毒包括猪伪狂犬病病毒JS-2012株、猪伪狂犬HeN1株、NVDC-PRV-BJ株、NVDC-PRV-HEB株和NVDC-PRV-SD株、PRVTJ株、猪伪狂犬病毒变异株PRV-ZJ01、猪伪狂犬病毒变异株HN1201株、猪伪狂犬病毒变异株HN1202株、猪伪狂犬病病毒Fa株、猪伪狂犬病毒BarthaK-61株、猪伪狂犬病毒Bucharest株、猪伪狂犬病毒HB-98株、猪伪狂犬病毒SA215株。猪伪狂犬病病毒株JS-2012株公开于免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定[J].童武，张青占，郑浩等，中国动物传染病学报2013,21(3):1-7)；猪伪狂犬HeN1株，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为CGMCCNO.6656，公开于专利申请CN102994458A；NVDC-PRV-BJ株、NVDCPRV-HEB株和NVDC-PRV-SD株公开于PathogenicPseudorabiesVirus,XiulingYu,ZhiZhou,DongmeiHu,etal.China,2012EmergingInfectiousDiseases，www.cdc.gov/eidol.20,No.1,January2014；PRVTJstrain(PRVTJ)株，公开于ChinaChun-HuaWangJinYuan1,Hua-YangQin1，etal，AnovelgE-deletedpseudorabiesvirus(PRV)providesrapidandcompleteprotectionfromlethalchallengewiththePRVvariantemerginginBartha-K61-vaccinatedswinepopulationinChinaVaccine32(2014)3379–3385中；猪伪狂犬病毒变异株PRV-ZJ01，其保藏号为CGMCCNo.8170公开于CN103627678A；猪伪狂犬病毒HN1201株(Pseudorabiesvirus,strainHN1201)保藏号为CCTCCNO.V201311；保藏于中国典型培养物保藏中心；保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2013年5月20日；猪伪狂犬病毒HN1202株(Pseudorabiesvirus,strainHN1202)保藏号为CCTCCNO.V201335；保藏于中国典型培养物保藏中心；保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2013年8月26日；猪伪狂犬病病毒Fa株公开于伪狂犬病毒Fa株gB_gC_gD基因的克隆与序列分析[J].陈振海等，福建农业学报2007，22(2)：120-125；猪伪狂犬病毒BarthaK-61株公开于西班牙海博莱生物大药厂生产商品化疫苗；猪伪狂犬病毒Bucharest株公开于硕腾公司生产商品化疫苗；猪伪狂犬病毒HB-98株公开于武汉科前生产商品化疫苗；猪伪狂犬病毒SA215株公开于新型伪狂犬病病毒基因缺失株的构建及生物学特性研究(初报)[J].郭万柱等，四川农业大学学报2000，18(1)1-3。作为本发明的一种实施方式，本发明提供的含有佐剂的活疫苗组合物，其抗原部分包含猪传染性胃肠炎病毒减毒抗原。优选地，所述猪传染性胃肠炎病毒包括猪传染性胃肠炎病毒HN-2012、猪传染性胃肠炎病毒HB08株、猪传染性胃肠炎病毒华毒株、猪传染性胃肠炎病毒SD/L株。猪传染性胃肠炎病毒HN-2012，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO.V201216，公开于中国专利申请CN103045543A；猪传染性胃肠炎病毒HB08株，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏号为CGMCCNO.7807，公开于中国专利申请CN103740653A；猪传染性胃肠炎病毒华毒株，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO.V200609，公开于中国专利申请CN101235363A；猪传染性胃肠炎病毒SD/L株，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏号为CGMCCNO.6001，公开于中国专利申请CN103041385A。作为本发明的一种实施方式，本发明提供的含有佐剂的活疫苗组合物，其抗原部分包含猪轮状病毒减毒抗原。优选地，所述猪轮状病毒包括猪轮状病毒CVCCAV58、猪轮状病毒包括猪轮状病毒CVCCAV56，所述猪轮状病毒CVCCAV58、猪轮状病毒包括猪轮状病毒CVCCAV56可通过商业途径购自中国兽医药品监察所中国兽医微生物菌种保藏管理中心。作为本发明的一种实施方法，本发明提供的含有佐剂的活疫苗组合物，其抗原部分包含猪瘟病毒减毒抗原。优选地，所述猪瘟病毒包括猪瘟病毒兔化弱毒株，所述猪瘟病毒兔化弱毒株可通过商业途径购自中国兽医药品监察所中国兽医微生物菌种保藏管理中心。本发明的另一个方面在于提供所述含有佐剂的活疫苗组合物的制备方法，包括：(1)制备抗原部分的步骤；(2)制备佐剂部分的步骤；(3)将抗原部分和佐剂部分混合均匀即可。优选地，步骤(1)抗原部分还包括稳定剂，优选以冷冻干燥形式存在。本发明的另一个方面在于提供所述含有佐剂的活疫苗组合物在制备预防和/治疗相关疾病的药物中的应用。本发明提供的所述含有佐剂的活疫苗组合物可针对使用的特定疫苗所规定的任何方式，优选滴鼻、点眼、口服、直肠给药。发明优点本发明提供的含有佐剂的活疫苗组合物，具有极好的诱导抗体产生能力，能够有效地提供了粘膜免疫刺激，特别是鼻粘膜的免疫刺激性，首次通过将活疫苗以添加佐剂的形式解决了滴鼻免疫效果较差的问题，方便、实用，具有广阔的市场前景。而且，添加佐剂后的活疫苗，抗原含量大大降低，显示出了本发明佐剂的增效作用。具体实施方式下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。实施例1佐剂的制备将卡波姆934P(青岛天力源生物科技有限公司)、壳聚糖(上海其胜生物制品有限公司)、普罗尼克L121(美国CaissonLabs)分散到纯化水，制备成贮备溶液，12℃30min高压灭菌，4℃保存。具体配方见表1。表1佐剂配方成分Z1Z2Z3Z4Z5Z6Z7Z8卡波姆wt％0.010.10.520.010.10.52壳聚糖wt％0.10.5150.10.515普罗尼克L121wt％0.51450000将佐剂Z1、Z5制备成粒径为0.01μm的溶液Z11、Z51，将Z2、Z6制备成粒径为0.1μm的溶液Z21、Z61，将Z3、Z7制备成粒径为2μm的溶液Z31、Z71，将Z4、Z8分别制备成粒径为5μm、6μm、10μm的溶液Z41、Z42、Z43和Z81、Z82、Z83。实施例2猪伪狂犬病病毒BarthaK-61株弱毒活疫苗组合物的制备将实施例1中制备的佐剂分别与猪伪狂犬病病毒活疫苗BarthaK-61株(西班牙海博莱生物大药厂生产，批次77BN)的冻干抗原搭配而成含有佐剂的活疫苗组合物，使用时，将佐剂与抗原混合均匀即可，具体搭配方式见表2。表2猪伪狂犬病病毒BarthaK-61株弱毒活疫苗组合物的配比实施例3猪伪狂犬病病毒BarthaK-61株弱毒活疫苗组合物免疫原性试验一将9日龄的PRV抗原抗体阴性仔猪65头随机分成13组，5头/组，免疫实施例2制备的猪伪狂犬病病毒BarthaK-61株弱毒活疫苗。第一组滴鼻免疫疫苗1，第二组肌肉注射免疫疫苗1，第三组滴鼻免疫疫苗2，第四组肌肉注射免疫疫苗2，第五组滴鼻免疫疫苗3，第六组肌肉注射免疫疫苗3，第七组滴鼻免疫疫苗4，第八组肌肉注射免疫疫苗4，第九组滴鼻免疫疫苗5，第十组肌肉注射免疫疫苗5，第十一组滴鼻免疫疫苗6，第十二组肌肉注射免疫疫苗6，第十三组为对照组。免疫21日后攻毒，攻毒剂量为猪伪狂犬病病毒Bartha株107.0TCID50/头，攻毒后每日测定仔猪体温，观察临床症状和死亡情况。具体结果见表3。表3BarthaK-61株弱毒活疫苗组合物免疫原性试验结果一结果显示，采用实施例2制备的猪伪狂犬病病毒BarthaK-61株弱毒活疫苗组合物免疫仔猪后，肌肉注射途径各组疫苗全部获得保护(5/5)，滴鼻途径疫苗1、疫苗2、疫苗3、疫苗4全部获得保护(5/5)，而疫苗5和疫苗6获得不同程度的保护，对照组攻毒后5日全部死亡。证明了含有佐剂的猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物通过滴鼻途径免疫也具有很好的免疫原性，显示出很好的保护力，同时也证明了佐剂的粒径对经滴鼻途径进行免疫有一定的影响。实施例4猪伪狂犬病病毒BarthaK-61株弱毒活疫苗组合物免疫原性试验二将9日龄的PRV抗原抗体阴性仔猪65头随机分成13组，5头/组，免疫实施例2制备的猪伪狂犬病病毒BarthaK-61株弱毒活疫苗。第一组滴鼻免疫疫苗7，第二组肌肉注射免疫疫苗7，第三组滴鼻免疫疫苗8，第四组肌肉注射免疫疫苗8，第五组滴鼻免疫疫苗9，第六组肌肉注射免疫疫苗9，第七组滴鼻免疫疫苗10，第八组肌肉注射免疫疫苗10，第九组滴鼻免疫疫苗11，第十组肌肉注射免疫疫苗11，第十一组滴鼻免疫疫苗12，第十二组肌肉注射免疫疫苗12，第十三组为对照组。免疫21日后攻毒，攻毒剂量为猪伪狂犬病病毒Bartha株107.0TCID50/头，攻毒后每日测定仔猪体温，观察临床症状和死亡情况。具体结果见表4。表4BarthaK-61株弱毒活疫苗组合物免疫原性试验结果二结果显示，采用实施例2制备的猪伪狂犬病病毒BarthaK-61株弱毒活疫苗组合物免疫仔猪后，肌肉注射途径各组疫苗全部获得保护(5/5)，滴鼻途径疫苗7、疫苗8、疫苗9、疫苗10全部获得保护(5/5)，而疫苗11和疫苗12获得不同程度的保护，对照组攻毒后5日全部死亡。证明了含有佐剂的猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物通过滴鼻途径免疫也具有很好的免疫原性，显示出很好的保护力，同时也进一步证明了佐剂的粒径对经滴鼻途径进行免疫有一定的影响。实施例5猪伪狂犬病病毒BarthaK-61株弱毒活疫苗组合物免疫原性试验三将9日龄的PRV抗原抗体阴性仔猪40头随机分成8组，5头/组，免疫实施例3制备的猪伪狂犬病病毒BarthaK-61株弱毒活疫苗。第一组滴鼻免疫1/2头份疫苗1，第二组肌肉注射免疫1/2头份疫苗1，第三组滴鼻免疫1/2头份疫苗7，第四组肌肉注射免疫1/2头份疫苗7，第五组肌肉注射免疫1头份疫苗13，第六组肌肉注射免疫1/2头份疫苗13，第七组滴鼻免疫1头份疫苗13，第八组为对照组。免疫21日后攻毒，攻毒剂量为猪伪狂犬病病毒Bartha株107.0TCID50/头，攻毒后每日测定仔猪体温，观察临床症状和死亡情况。具体结果见表5。表5BarthaK-61株弱毒活疫苗组合物免疫原性试验结果三结果显示，采用实施例2制备的猪伪狂犬病病毒BarthaK-61株弱毒活疫苗组合物免疫仔猪后，含有佐剂的疫苗无论是通过肌肉注射途径还是滴鼻途径，以1/2头份进行免疫，均可阻断病毒感染，能为仔猪提供100％(5/5)保护；而不含佐剂的疫苗通过肌肉途径以1头份进行免疫，可阻断病毒感染，能为仔猪提供100％(5/5)保护；不含佐剂的疫苗通过肌肉途径以1/2头份免疫不能有效阻断病毒感染，仅对仔猪提供60％(3/5)有限的保护；不含佐剂的疫苗通过滴鼻途径以1头份进行免疫同样不能有效阻断病毒感染，仅对仔猪提供40％(2/5)有限保护；对照组攻毒后5日全部死亡。证明了含有佐剂的伪狂犬病病毒BarthaK-61株弱毒活疫苗组合物滴鼻免疫时具有很好的保护力，显示出很好的免疫保护作用，同时，也证明了本发明的佐剂在滴鼻免疫时显示了其重要的作用，能有效增强抗原在通过滴鼻免疫时的免疫原性，而且，也证明了添加佐剂后的活疫苗组合物，抗原含量大大降低，能以较低的抗原含量阻断病毒的感染，显示出了本发明佐剂的增效作用。为了进一步分析两种佐剂对抗体产生情况的影响，采集第一组和第三组免疫前及免疫后1天、3天、5天、6天、7天以及14天的实验猪血清，并分离血清。用IDEXX伪狂犬病毒gB抗体检测试剂盒进行检测。结果见表6。表6BarthaK-61株弱毒活疫苗组合物免疫后gB抗体水平变化表6中，数值＜0.6为抗体阳性，0.6＜数值＜0.7为抗体可疑，数值＞0.7抗体为阴性结果显示，采用实施例2制备的猪伪狂犬病病毒BarthaK-61株弱毒活疫苗组合物免疫仔猪后，含有三种成分的佐剂疫苗通过滴鼻途径免疫，其抗体产生水平较含有两种成分的佐剂疫苗早，含有三种成分的佐剂疫苗以1/2头份通过滴鼻途径免疫，第6天全部猪只gB抗体阳性，而含有两种成分的佐剂疫苗以1/2头份通过滴鼻途径免疫，到第7天全部猪只gB抗体才转阳性。证明了含有三种成分的佐剂疫苗，其免疫效果要优于含有两种成分的佐剂疫苗，抗体产生快、产生水平高。实施例6活疫苗组合物中佐剂的进一步验证试验为了进一步验证活疫苗组合物中佐剂所起的作用，将实施例1中制备的佐剂Z11、Z41、Z43、Z51、Z81、Z83分别免疫9日龄的PRV抗原抗体阴性仔猪，65头仔猪随机分成13组，5头/组，第一组滴鼻免疫佐剂Z11，第二组肌肉注射免疫佐剂Z11，第三组滴鼻免疫佐剂Z41，第四组肌肉注射免疫佐剂Z41，第五组滴鼻免疫Z43，第六组肌肉注射免疫Z43，第七组滴鼻免疫Z51，第八组肌肉注射免疫Z51，第九组滴鼻免疫Z81，第十组肌肉注射免疫Z81，第十一组滴鼻免疫Z83，第十二组肌肉注射免疫Z83，第十三组为对照组。免疫后21日后攻毒，攻毒剂量为猪伪狂犬病病毒Bartha株107.0TCID50/头，攻毒后每日测定仔猪体温，观察临床症状和死亡情况。具体结果见表7。表7佐剂免疫后攻毒结果结果显示，采用实施例1制备的佐剂免疫仔猪后，无论是滴鼻免疫还是肌肉注射免疫，粒径大小不同的多组佐剂均不能对病毒的攻击产生任何保护作用，不能减轻疾病的症状，也不能推迟疾病的发病时间，均与对照组无差异。证明了活疫苗组合物中的佐剂单独使用，对疾病的发生没有预防或治疗作用，只有与相关抗原共同作用，才能产生协同作用，大大增强抗原的免疫反应，尤其是通过滴鼻途径的免疫反应。实施例7猪瘟病毒抗原的制备将猪瘟病毒兔化弱毒株(购自中国兽医药品监察所，保藏号AV1412)用病毒稀释液(无血清的DMEM培养基)作适当稀释，按感染复数(M.O.I)为0.1接种于ST细胞单层(购自CCTCC，编号GDC0060)培养，37℃吸附30min，加入含3％(v/v)犊牛血清的DMEM细胞维持液，37℃培养3～5日，冻融2～3次，收获病毒，置低温保存。每100ml去离子水中加蔗糖40g，明胶8g，充分融化后，置高压蒸气灭菌(121℃30min)制备稳定剂，与上述制备并保存的病毒液按1:1(体积比)混合，冻干得到病毒含量为106.7TCID50/头份的猪瘟病毒兔化弱毒株冻干抗原(K3)。实施例8猪瘟病毒兔化弱毒株弱毒活疫苗组合物的制备将实施例1中制备的佐剂分别与实施例7制备的冻干抗原搭配而成含有佐剂的活疫苗组合物，使用时，将佐剂与抗原混合均匀即可，具体搭配方式见表8。表8猪瘟病毒兔化弱毒株活疫苗组合物的配比疫苗14疫苗15疫苗16抗原部分K3K3K3佐剂部分Z11Z51—实施例9猪瘟病毒兔化弱毒株弱毒活疫苗组合物免疫原性试验选用8周龄猪瘟病毒抗体阴性(血清中和抗体≤1:4)断奶易感染仔猪21头，随机分为7组，3头/组，免疫实施例8制备的猪瘟病毒兔化弱毒株或疫苗组合物。第一组滴鼻免疫疫苗14，第二组肌肉注射免疫疫苗14，第三组滴鼻免疫疫苗15，第四组肌肉注射免疫疫苗15，第五组滴鼻免疫疫苗16，第六组肌肉注射免疫疫苗16，第七组为对照组。免疫后每周采血分离血清测定中和抗体效价，免疫两周每头猪以105最小致死量的猪瘟石门系强毒株病毒进行攻毒试验，连续观察两周，测定并观察仔猪临床表现。具体结果见表9。表9猪瘟病毒兔化弱毒株活疫苗组合物免疫原性试验结果“－”：攻毒后未出现发烧等症状“+”：攻毒后出现发烧等症状“＊”：攻毒后出现高烧症状并死亡“NA”：全数死亡，无法测定结果显示，疫苗14、疫苗15免疫后，无论是滴鼻免疫还是肌肉注射免疫，抗体水平均较高，攻毒保护100％保护；滴鼻途径较肌肉注射途径引起抗体更高、速度更快；疫苗16无论肌肉注射途径还是滴鼻途径与疫苗14和疫苗15抗体水平相比均较低，滴鼻途径免疫抗体水平更低。证明了含有佐剂的猪瘟病毒活疫苗组合物通过滴鼻途径免疫具有很好的免疫原性，显示出很好保护力，能更快的引起免疫反应，能产生更高的抗体水平，同时进一步证明了佐剂对滴鼻途径进行免疫有着重要的影响，也说明了本发明含有佐剂的活疫苗组合物通过滴鼻途径进行免疫时能提高抗原的免疫效力，具有普遍的意义。以上所述仅是本发明的优选实施例而已，并非对本发明做任何形式上的限制，虽然本发明已以优选实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案的范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。当前第1页1 2 3