齐墩果酸作为α36雌激素受体激活剂的用途的制作方法

本发明涉及一种新型的α36雌激素受体激活剂，并提出该α36雌激素受体激活剂在制备各种形式的预防和治疗雌激素降低引起的骨质疏松症、卵巢早衰、更年期综合症、月经不调、不孕症、阴道炎、尿道炎、骨关节炎性、椎间盘退变性疾病与免疫性疾病、心血管疾病、老年性痴呆、肿瘤骨转移等疾病的药物或保健食品中的应用。

背景技术：

雌激素降低会引起一系列疾病，包括骨质疏松症、卵巢早衰、更年期综合症、月经不调、不孕症、阴道炎、尿道炎、炎性骨病、椎间盘退变性疾病与免疫性疾病、心血管疾病、老年性痴呆、肿瘤骨转移等一系列疾病，临床上有雌激素替代疗法，但副作用显著。因此需要开发能与雌激素受体结合，发挥生物学效应，且结合力持久及温和的药物或保健食品。

技术实现要素：

针对现有技术的上述不足，根据本发明的实施例，希望提供一种能与雌激素受体结合，发挥生物学效应，且结合力持久及温和的α36雌激素受体激活剂，并提出其医药用途。

根据实施例，本发明技术方案的提出的一种α36雌激素受体激活剂，其有效成分为齐墩果酸，浓度为0.01μM-10μM。齐墩果酸是从中药女贞子和墨旱莲提取的有效组分，它可以竞争性与雌激素受体亚型α36结合，从而发挥广泛的生物学效应，作用温和、持久，且可以避免雌激素替代治疗的诸多副作用。

根据实施例，本发明技术方案的提出是基于齐墩果酸作为α36雌激素受体激活剂，对雌激素受体具有竞争性激活作用。

根据一个实施例，本发明技术方案的提出是基于发现齐墩果酸作为α36雌激素受体激活剂，其在患处体液中的有效作用浓度为0.01μM-10μM。

根据一个实施例，本发明技术方案中，齐墩果酸与药物学上可接受的药物辅料混合形成散剂、膏剂、粉剂、针剂、水剂或注射剂。

根据实施例，齐墩果酸作为α36雌激素受体激活剂，为主要有效成分制备的各种形式的药物或保健食品，可以用于预防和治疗上述骨质疏松症、卵巢早衰、更年期综合症、月经不调、不孕症、阴道炎、尿道炎、骨关节炎症性疾病、椎间盘退变性疾病与免疫性疾病、心血管疾病、老年性痴呆、肿瘤骨转移等一系列疾病。在使用时可以采取皮下、静脉注射或肛肠给药；注射液的使用可以任意选用生理盐水、葡萄糖、稳定剂、防腐剂、悬浮剂或乳化剂等。

相对于现有技术，齐墩果酸是从滋肾阴中药女贞子、墨旱莲中提取的天然产物，是一种新型的α36雌激素受体激活剂，它可以竞争性与雌激素受体亚型α36结合，从而发挥生物学效应，并且作用温和，可以避免雌激素治疗带来的诸多副作用。因此，以齐墩果酸为主要有效成分制备的各种形式的药物或保健食品，可以用于预防和治疗上述雌激素减少性疾病。

附图说明

图1A为齐墩果酸的结构简式。

图1B为不同浓度的齐墩果酸对细胞进行干预，细胞裂解后，α36雌激素受体被同位素标记配体结合率变化柱状图。

图2为α36雌激素受体的表达细胞种类示意图。

图3为齐墩果酸通过激活α36雌激素受体，抑制破骨细胞形成的柱状图。

图4为齐墩果酸通过激活α36雌激素受体，抑制破骨细胞骨吸收功能的 柱状图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例应理解为仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修改同样落入本发明权利要求所限定的范围。

本发明以下实施例中，齐墩果酸(图1A)采用市售品或按照中药领域常用提取方法从滋肾阴中药女贞子、墨旱莲中提取。M为摩尔浓度，即mol/L；μM为微摩尔每升。

本发明以下实施例中，未特别标示的实验方法，譬如同位素标记配体受体结合实验、Western Blot、破骨细胞分化系统、骨吸收实验，均采用本领域通用的实验方法。

实施例1

齐墩果酸是一种新型的α36雌激素受体激活剂，对雌激素受体具有竞争性激活作用：蛇床子素(图1A)是从滋肾阴中药女贞子、墨旱莲中提取的天然产物,分子量456.71。实验研究中，首先使用人子宫内膜癌细胞系(Ishikawa细胞株)，敲除雌激素受体β后，该细胞仅表达α36雌激素受体。用不同浓度的齐墩果酸对细胞进行干预，细胞裂解后，通过对同位素标记配体与受体的结合进行检测。发现齐墩果酸可以剂量依赖性的竞争性结合α36雌激素受体，表现为同位素标记的配体与α36雌激素受体结合率随着齐墩果酸浓度增大而逐渐降低。研究发现0.01μM齐墩果酸干预细胞时，有接近80％的α36雌激素受体仍被同位素标记配体结合，0.1μM齐墩果酸干预细胞时，大约到50％的α36雌激素受体仍被同位素标记配体结合，1μM齐墩果酸时,大约10％的α36雌激素受体仍被同位素标记配体结合。5μM齐墩果酸时,仅有极少量(2％)α36雌激素受体仍被同位素标记配体结合。而在10μM齐墩果酸干预细 胞时，完全无同位素标记配体结合，即10μM齐墩果酸可以完全竞争性地结合α36雌激素受体(图1B)。因此，齐墩果酸100％抑制率的浓度范围在0.01μM-10μM之间，作用效果较为持久和温和。

实施例2

首先通过Western Blot证明，破骨细胞中主要高表达α36雌激素受体(图2)。在体外采用了原代外骨髓单核/巨噬细胞培养法，分别加入M-CSF(44ng/ml)和RANKL(100ng/ml)进行干预后。同时采用骨骼系统内的成骨细胞和骨髓间充质干细胞进行对照。实验结束后，分别检测α36雌激素受体表达情况，实验结果验证了α36雌激素受体在M-CSF和RANKL诱导的破骨细胞的表达(图2：破骨1和破骨2)显著高于成骨细胞和间充质干细胞。本实验证实α36雌激素受体主要影响破骨细胞的生物学效应。

实施例3

在体外采用了原代骨髓单核/巨噬细胞系分化培养法，验证了齐墩果酸竞争性结合α36雌激素受体后的生物学效应。通过加入M-CSF(44ng/ml)和RANKL(100ng/ml)诱导破骨细胞形成，并给予适当梯度齐墩果酸干预原代造血干细胞-破骨细胞前体细胞，发现0.01μM齐墩果酸即可显著抑制(P<0.01)破骨细胞形成，抑制作用随着浓度增大而增强，10μM齐墩果酸可以完全抑制破骨细胞的形成。因此证明齐墩果酸与结合α36雌激素受体竞争性结合后，的确可以发挥生物学效应，抑制破骨细胞形成，从而可以用于雌激素降低引起的骨质疏松症的预防和治疗(图3)。

因此，齐墩果酸可以通过激活α36雌激素受体，预防和治疗雌激素降低引起的骨质疏松症、卵巢早衰、更年期综合症、月经不调、不孕症、阴道炎、尿道炎、骨关节炎症性疾病、椎间盘退变性疾病与免疫性疾病、心血管疾病、老年性痴呆、肿瘤骨转移，可以用于制成防治上述疾病的药物或保健食品中。

实施例4

应用体外原代骨髓单核/巨噬细胞系分化培养法，验证了齐墩果酸竞争性结合α36雌激素受体后对破骨细胞功能的生物学效应。通过采用M-CSF(44ng/ml)和RANKL(100ng/ml)诱导破骨细胞生成，在骨片检测及破骨细胞的骨吸收功能，并给予不同浓度齐墩果酸干预破骨细胞的骨吸收功能，发现0.01μM齐墩果酸即可显著抑制(P<0.01)破骨细胞骨吸收功能，抑制作用随着浓度增大而增强，10μM齐墩果酸可以完全抑制生成的破骨细胞骨吸收功能(图4)。

因此证明齐墩果酸与结合α36雌激素受体竞争性结合后，可以发挥抑制破骨细胞主导的骨吸收功能，影响人体的骨骼系统的功能，从而可以用于雌激素降低引起的骨质疏松症的预防和治疗。