本发明公开了一种医用胶黏剂的制备方法，属于胶黏剂制备技术领域。
背景技术：
目前，医用胶黏剂在临床中有着十分重要的作用。在外科手术中，医用胶黏剂用于某些器官和组织的局部粘合和修补；在骨科手术中骨骼、关节的结合与定位，以及齿科手术中用于牙齿的修补。从医用胶黏剂的使用对象和性能要求可分成齿科用胶黏剂和外壳用胶黏剂。而上述胶黏剂一般应满足安全、无毒、无致癌、致畸、致突变；此外还要具有良好的粘合强度，且常温常压下能与组织快速胶接，本身无菌且还具有良好的抑菌性。医用胶黏剂的应用细分的话有软组织胶黏剂、α-氰基丙烯酸酯胶黏剂、血纤蛋白胶黏剂、硬组织胶黏剂、骨科用叫粘结剂、医用压敏胶等。
现有的医用胶黏剂不仅要求胶黏剂具有良好的粘结性，还要安全无毒。而目前现有的医用胶黏剂其生物相容性差，在低温条件下或有过多水存在时其粘结性会大幅度下降，影响使用效果的缺陷。
贻贝属软体动物门、瓣鳃纲、翼形亚纲、贻贝目、贻贝科，是一种常见的海洋双壳贝类，可通过其足腺细胞分泌的足丝与礁石、船体等固体表面形成牢固连接，并可经受海浪的反复冲刷而不脱落。贻贝足丝蛋白是贻贝科所特有一种在水环境中也能表现出强黏附功能的蛋白，也是目前开发新型生物黏附剂的主要候选分子。贻贝的足丝黏附蛋白的粘合力及防水性能极强且无毒性，是现有任何粘合剂均无法比拟的，因此在医药、造船、涂料等行业具有广泛的应用前景。
技术实现要素：
本发明主要解决的技术问题：针对目前现有的医用胶粘剂其生物相容性差，在低温条件下或有过多水存在时其粘结性会大幅度下降，影响使用效果的缺陷，提供一种医用胶黏剂的制备方法，该方法用碱溶酸沉提取贻贝粘蛋白，再用果木熏蒸含无花果果实的猪肉，得到含果糖的油脂并用其对黄原胶在微生物的作用下改性，增加黄原胶中的疏水性酯基基团，将改性后的黄原胶和贻贝粘蛋白共混浓缩后最终制得医用胶黏剂，本发明制得的医用胶黏剂以具有极佳生物相容性的贻贝粘蛋白和多糖类黄原胶为原料，利用蛋白与多糖之间的协同增效作用，能够快速粘合肌体骨骼且产生较大的粘附强度，同时疏水改性后的黄原胶在过多水存在的情况下依然可以正常起到胶黏作用，解决了传统医用胶黏剂生物相容性差、在低温条件下或有过多水存在时其粘结性降低，影响使用效果的问题，具有极佳的使用效果。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
（1）人工切取2～3kg紫贻贝足部倒入搪瓷锅中，向锅中加入去离子水直至将贻贝足部完全浸没，再向锅中加入去离子水总质量2～4%的氢氧化钠，搅拌均匀后加热至80～90℃，煮制3～5min，煮制结束后过滤去除滤液，得到脱脂贻贝；
（2）将上述脱脂贻贝和去离子水按质量比为1:20进行混合后放入高压均质机中，在3～5MPa的压力下以7000～8000r/min转速均质处理15～20min，用浓度为0.5mol/L氢氧化钠溶液调节均质物pH至10～11并静置反应3～5h，再将静置后的均质物用离心机以7000～8000r/min转速离心分离得到上清液；
（3）用浓度为0.5mol/L盐酸调节上述上清液pH至5～6并将其放入冰箱中，在2～4℃下静置沉淀12～14h ，用布氏漏斗抽滤分离得到滤渣，冷冻干燥后即得紫贻贝粘蛋白，备用；
（4）取一块5～6kg的猪肉，用打孔器在猪肉上均匀打出10～15个直径2～3cm的孔洞，将无花果去皮后得到果肉并放入研钵中研磨15～20min得到无花果浆状物，再将浆状物注入猪肉孔洞中，压实后将猪肉悬挂在熏烤炉中，在熏烤炉底部点燃荔枝枝条，用枝条燃烧产生的烟雾对猪肉进行熏制，并收集猪肉熏制过程中滴落的油脂；
（5）按质量比为1:3将上述油脂和黄原胶混合后装入发酵罐中作为发酵底物，再向发酵罐中加入底物等质量的蒸馏水和底物总质量1/2的葡萄皮，将陶瓷罐放在35～40℃的温室中发酵反应7～9天，反应结束后过滤去除滤渣，得到滤液；
（6）按重量份数计，称取50～70份备用的紫贻贝粘蛋白、10～15份上述滤液和60～80份pH为7.2～7.4、浓度为0.01～0.02mol/L的PBS缓冲溶液依次倒入带有搅拌器和温度计的三口烧瓶中，加热升温至50～70℃保温搅拌反应30～40min，得到混合液，再将混合液移入真空浓缩罐中，降低罐内压力至800～900Pa，减压浓缩至混合液原体积的1/5，得到浓缩液即为医用胶黏剂。
本发明的应用方法是：将本发明制得的医用胶黏剂涂布在消毒过的创口上，涂布量为5～10mg/cm2，随后让创口在常温下静置固化5～8s即可。经检测，本发明的医用胶黏剂生物相容性好，耐低温性能优良，在-25～-30℃环境下，未出现开裂、脱落现象，仍具有良好的粘结性，且本发明制得的医用胶黏剂防水性能优异，在水中浸泡4～6h，与基体粘合牢固，未出现边缘起皮、渗水现象。
本发明的有益效果是：
（1）本发明制备的医用胶黏剂具有良好的胶黏性和优异的防水性能，且制备方法简便，适合大规模推广使用；
（2）本发明制备的医用胶黏剂还具有良好的耐低温性能，在低温环境下仍具有良好的粘结性。
具体实施方式
首先人工切取2～3kg紫贻贝足部倒入搪瓷锅中，向锅中加入去离子水直至将贻贝足部完全浸没，再向锅中加入去离子水总质量2～4%的氢氧化钠，搅拌均匀后加热至80～90℃，煮制3～5min，煮制结束后过滤去除滤液，得到脱脂贻贝；将上述脱脂贻贝和去离子水按质量比为1:20进行混合后放入高压均质机中，在3～5MPa的压力下以7000～8000r/min转速均质处理15～20min，用浓度为0.5mol/L氢氧化钠溶液调节均质物pH至10～11并静置反应3～5h，再将静置后的均质物用离心机以7000～8000r/min转速离心分离得到上清液；随后用浓度为0.5mol/L盐酸调节上述上清液pH至5～6并将其放入冰箱中，在2～4℃下静置沉淀12～14h ，用布氏漏斗抽滤分离得到滤渣，冷冻干燥后即得紫贻贝粘蛋白，备用；随后取一块5～6kg的猪肉，用打孔器在猪肉上均匀打出10～15个直径2～3cm的孔洞，将无花果去皮后得到果肉并放入研钵中研磨15～20min得到无花果浆状物，再将浆状物注入猪肉孔洞中，压实后将猪肉悬挂在熏烤炉中，在熏烤炉底部点燃荔枝枝条，用枝条燃烧产生的烟雾对猪肉进行熏制，并收集猪肉熏制过程中滴落的油脂；再按质量比为1:3将上述油脂和黄原胶混合后装入发酵罐中作为发酵底物，再向发酵罐中加入底物等质量的蒸馏水和底物总质量1/2的葡萄皮，将陶瓷罐放在35～40℃的温室中发酵反应7～9天，反应结束后过滤去除滤渣，得到滤液；最后按重量份数计，称取50～70份备用的紫贻贝粘蛋白、10～15份上述滤液和60～80份pH为7.2～7.4、浓度为0.01～0.02mol/L的PBS缓冲溶液依次倒入带有搅拌器和温度计的三口烧瓶中，加热升温至50～70℃保温搅拌反应30～40min，得到混合液，再将混合液移入真空浓缩罐中，降低罐内压力至800～900Pa，减压浓缩至混合液原体积的1/5，得到浓缩液即为医用胶黏剂。
实例1
首先人工切取2kg紫贻贝足部倒入搪瓷锅中，向锅中加入去离子水直至将贻贝足部完全浸没，再向锅中加入去离子水总质量2%的氢氧化钠，搅拌均匀后加热至80℃，煮制3min，煮制结束后过滤去除滤液，得到脱脂贻贝；将上述脱脂贻贝和去离子水按质量比为1:20进行混合后放入高压均质机中，在3MPa的压力下以7000r/min转速均质处理15min，用浓度为0.5mol/L氢氧化钠溶液调节均质物pH至10并静置反应3h，再将静置后的均质物用离心机以7000r/min转速离心分离得到上清液；随后用浓度为0.5mol/L盐酸调节上述上清液pH至5并将其放入冰箱中，在2℃下静置沉淀12h ，用布氏漏斗抽滤分离得到滤渣，冷冻干燥后即得紫贻贝粘蛋白，备用；随后取一块5kg的猪肉，用打孔器在猪肉上均匀打出10个直径2cm的孔洞，将无花果去皮后得到果肉并放入研钵中研磨15min得到无花果浆状物，再将浆状物注入猪肉孔洞中，压实后将猪肉悬挂在熏烤炉中，在熏烤炉底部点燃荔枝枝条，用枝条燃烧产生的烟雾对猪肉进行熏制，并收集猪肉熏制过程中滴落的油脂；再按质量比为1:3将上述油脂和黄原胶混合后装入发酵罐中作为发酵底物，再向发酵罐中加入底物等质量的蒸馏水和底物总质量1/2的葡萄皮，将陶瓷罐放在35℃的温室中发酵反应7天，反应结束后过滤去除滤渣，得到滤液；最后按重量份数计，称取50份备用的紫贻贝粘蛋白、10份上述滤液和60份pH为7.2、浓度为0.01mol/L的PBS缓冲溶液依次倒入带有搅拌器和温度计的三口烧瓶中，加热升温至50℃保温搅拌反应30min，得到混合液，再将混合液移入真空浓缩罐中，降低罐内压力至800Pa，减压浓缩至混合液原体积的1/5，得到浓缩液即为医用胶黏剂。
本实例操作简便，使用时，将本发明制得的医用胶黏剂涂布在消毒过的创口上，涂布量为5mg/cm2，随后让创口在常温下静置固化5s即可。经检测，本发明的医用胶黏剂生物相容性好，耐低温性能优良，在-25℃环境下，未出现开裂、脱落现象，仍具有良好的粘结性，且本发明制得的医用胶黏剂防水性能优异，在水中浸泡4h，与基体粘合牢固，未出现边缘起皮、渗水现象。
实例2
首先人工切取2.5kg紫贻贝足部倒入搪瓷锅中，向锅中加入去离子水直至将贻贝足部完全浸没，再向锅中加入去离子水总质量3%的氢氧化钠，搅拌均匀后加热至85℃，煮制4min，煮制结束后过滤去除滤液，得到脱脂贻贝；将上述脱脂贻贝和去离子水按质量比为1:20进行混合后放入高压均质机中，在4MPa的压力下以7500r/min转速均质处理18min，用浓度为0.5mol/L氢氧化钠溶液调节均质物pH至10.5并静置反应4h，再将静置后的均质物用离心机以7500r/min转速离心分离得到上清液；随后用浓度为0.5mol/L盐酸调节上述上清液pH至5.5并将其放入冰箱中，在3℃下静置沉淀13h ，用布氏漏斗抽滤分离得到滤渣，冷冻干燥后即得紫贻贝粘蛋白，备用；随后取一块5.5kg的猪肉，用打孔器在猪肉上均匀打出13个直径2.5cm的孔洞，将无花果去皮后得到果肉并放入研钵中研磨18min得到无花果浆状物，再将浆状物注入猪肉孔洞中，压实后将猪肉悬挂在熏烤炉中，在熏烤炉底部点燃荔枝枝条，用枝条燃烧产生的烟雾对猪肉进行熏制，并收集猪肉熏制过程中滴落的油脂；再按质量比为1:3将上述油脂和黄原胶混合后装入发酵罐中作为发酵底物，再向发酵罐中加入底物等质量的蒸馏水和底物总质量1/2的葡萄皮，将陶瓷罐放在38℃的温室中发酵反应8天，反应结束后过滤去除滤渣，得到滤液；最后按重量份数计，称取60份备用的紫贻贝粘蛋白、13份上述滤液和70份pH为7.3、浓度为0.015mol/L的PBS缓冲溶液依次倒入带有搅拌器和温度计的三口烧瓶中，加热升温至60℃保温搅拌反应35min，得到混合液，再将混合液移入真空浓缩罐中，降低罐内压力至850Pa，减压浓缩至混合液原体积的1/5，得到浓缩液即为医用胶黏剂。
本实例操作简便，使用时，将本发明制得的医用胶黏剂涂布在消毒过的创口上，涂布量为8mg/cm2，随后让创口在常温下静置固化7s即可。经检测，本发明的医用胶黏剂生物相容性好，耐低温性能优良，在-28℃环境下，未出现开裂、脱落现象，仍具有良好的粘结性，且本发明制得的医用胶黏剂防水性能优异，在水中浸泡5h，与基体粘合牢固，未出现边缘起皮、渗水现象。
实例3
首先人工切取3kg紫贻贝足部倒入搪瓷锅中，向锅中加入去离子水直至将贻贝足部完全浸没，再向锅中加入去离子水总质量4%的氢氧化钠，搅拌均匀后加热至90℃，煮制5min，煮制结束后过滤去除滤液，得到脱脂贻贝；将上述脱脂贻贝和去离子水按质量比为1:20进行混合后放入高压均质机中，在5MPa的压力下以8000r/min转速均质处理20min，用浓度为0.5mol/L氢氧化钠溶液调节均质物pH至11并静置反应5h，再将静置后的均质物用离心机以8000r/min转速离心分离得到上清液；随后用浓度为0.5mol/L盐酸调节上述上清液pH至6并将其放入冰箱中，在4℃下静置沉淀14h ，用布氏漏斗抽滤分离得到滤渣，冷冻干燥后即得紫贻贝粘蛋白，备用；随后取一块6kg的猪肉，用打孔器在猪肉上均匀打出15个直3cm的孔洞，将无花果去皮后得到果肉并放入研钵中研磨20min得到无花果浆状物，再将浆状物注入猪肉孔洞中，压实后将猪肉悬挂在熏烤炉中，在熏烤炉底部点燃荔枝枝条，用枝条燃烧产生的烟雾对猪肉进行熏制，并收集猪肉熏制过程中滴落的油脂；再按质量比为1:3将上述油脂和黄原胶混合后装入发酵罐中作为发酵底物，再向发酵罐中加入底物等质量的蒸馏水和底物总质量1/2的葡萄皮，将陶瓷罐放在40℃的温室中发酵反应9天，反应结束后过滤去除滤渣，得到滤液；最后按重量份数计，称取70份备用的紫贻贝粘蛋白、15份上述滤液和80份pH为7.4、浓度为0.02mol/L的PBS缓冲溶液依次倒入带有搅拌器和温度计的三口烧瓶中，加热升温至70℃保温搅拌反应40min，得到混合液，再将混合液移入真空浓缩罐中，降低罐内压力至900Pa，减压浓缩至混合液原体积的1/5，得到浓缩液即为医用胶黏剂。
本实例操作简便，使用时，将本发明制得的医用胶黏剂涂布在消毒过的创口上，涂布量为10mg/cm2，随后让创口在常温下静置固化8s即可。经检测，本发明的医用胶黏剂生物相容性好，耐低温性能优良，在-30℃环境下，未出现开裂、脱落现象，仍具有良好的粘结性，且本发明制得的医用胶黏剂防水性能优异，在水中浸泡6h，与基体粘合牢固，未出现边缘起皮、渗水现象。