本发明涉及中医药和保健食品
技术领域：
，特别涉及青钱柳叶或其提取物的新用途和中药组合物。
背景技术：
：中医体质是基于中医药理论，对机体形态结构、生理功能和心理特点，及疾病倾向性和反应性等固有的、相对稳定特性的科学概括。中华中医药学会2009年发布的《中医体质分类与判定》标准为“治未病”提供了体质辨识的方法、工具与评估体系，使调理中医体质、提高国民健康素质成为中医养生保健和基层公共卫生体系的重要组成部分。改善体质是中医治未病的重要方法与途径。基于科学、规范的技术标准，研究开发体质干预和体质改善的药食同源、安全有效的产品代表着中医药科技创新的新方向和新趋势。《素问·调经论》：“阴虚则内热”，最早提出阴虚体质的人容易出现内热；所谓内热，指手足心热，口干咽燥，心烦，易饥等表现。元代朱震亨《格致余论》：“瘦人火多。”指出，体质瘦削之人容易出现阴虚内热的情况。现代研究发现，阴虚体质具有以下显著体质特征：体形瘦长、视物花、手足心热、失眠心烦、五心烦热、耳鸣耳聋、喜冷饮而不解渴、大便干燥、舌红少苔、脉象细弦而数。国内学者运用中医体质分类方法和判定标准做了大量体质与疾病相关性的流行病学调查，研究发现，阴虚体质人群存在以下发病倾向：季节性过敏性鼻炎、小儿呼吸道感染、慢性阻塞性肺病、高血压、缺血性脑卒中、血管性痴呆、绝经后骨质疏松症、围绝经期综合征、糖调节受损、女性不孕症、少弱精症、帕金森病、腰椎间盘突出、慢性肾功能不全、慢性葡萄膜炎等。阴虚体质的调体原则是滋补肾阴、壮水制火、养阴清热、养血护津；代表方剂是六味地黄丸、知柏地黄丸、大补阴丸。青钱柳，Cyclocaryapaliurus(Batal.)ljinskaja，又名青钱李、摇钱树、甜茶树等，系胡桃科青钱柳属植物特有单种属，为我国所特有，属濒危树种。青钱柳是一种高大速生阔叶乔木，因其树形似柳，果实圆形似铜钱，色青而下垂，故名“青钱柳”。据《中国中药资源志要》记载，其树皮、叶具有清热消肿、止痛的功能，可用于治疗顽癣。长期以来，民间用其叶片做茶，因其味甜且具有清热解暑、降血糖、降血压和延年益寿的作用。青钱柳为我国特有的降糖药用植物资源，近年来的青钱柳研究也多集中在降糖药理、药效物质基础等方面。研究发现，青钱柳叶含多种活性成分，如具有降糖和增加糖耐量的多糖，具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤作用的黄酮类、酚酸类和三萜类化合物。此外，中国专利CN201210271132.9公开了“一种祛痰止咳组合物及其制备方法”，CN201310462576.5公开了“一种青钱柳提取物在制备预防和治疗白血病药物中的应用”，拓宽了青钱柳的医药应用范围。然而，作为传统中医药的药食同源资源，有关青钱柳的中药药性、主治功效的研究相对缺如，对于其在体质调节的“治未病”领域的研究未见报道。技术实现要素：有鉴于此，本发明提供了青钱柳叶或其提取物的新用途和中药组合物。本研究发现青钱柳叶及其提取物可用于调理阴虚体质人群的体质及治疗未病。为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：本发明提供了青钱柳叶及其提取物在制备调理阴虚体质的保健食品或治疗未病的药物中的应用。目前缺少青钱柳相关体质改善的研究和专利，而体质改善不同于治疗疾病和证候，需要相对长期的服用，因此对于食品安全性提出更高的要求。本发明从一般毒理学研究提供了青钱柳水提物的安全性证据，并进行了中医实验与临床研究，显示其具有清热养阴功效，证明它对阴虚体质具有明显的改善、调节作用。而且青钱柳水提物的这种新特性为阴虚体质人群的体质调理提供了新的产品选择。在本发明中，阴虚体质的体质特征为体形瘦长、视物花、手足心热、失眠心烦、五心烦热、耳鸣耳聋、喜冷饮而不解渴、大便干燥、舌红少苔或脉象细弦而数中的一种或几种。作为优选，青钱柳叶提取物为青钱柳叶水提物。作为优选，青钱柳叶水提物的制备方法为：取青钱柳叶，加入10～20倍重量的水，煎煮1～3h，过滤；取滤渣，加入10～20倍重量的水，煎煮1～3h，过滤，合并滤液；经浓缩、干燥，得到青钱柳叶水提物。在本发明提供的实施例中，青钱柳叶水提物的制备方法为：取青钱柳叶，加入20倍重量的水，煎煮2h，过滤；取滤渣，加入20倍重量的水，煎煮2h，过滤，合并滤液；经浓缩、干燥，得到青钱柳叶水提物。本发明制得的青钱柳叶水提物中多糖含量为0.34％～1％，总黄酮含量为2.23％～3％，总三萜及皂苷含量为1.37％～2％。作为优选，浓缩为浓缩至每100mL浓缩液含有50～150g青钱柳叶生药量。在本发明提供的实施例中，浓缩为浓缩至每100mL浓缩液含有100g青钱柳叶生药量。本发明还提供了一种中药组合物，以重量份计，由如下原料药制成：青钱柳叶2～3份，石斛1～2份，桑白皮1～2份，陈皮1～2份。在本发明提供的实施例中，以重量份计，该中药组合物由如下原料药制成：青钱柳叶3份，石斛2份，桑白皮2份，陈皮2份。本发明还提供了该中药组合物在制备调理阴虚体质人群的体质的保健食品或治疗未病的药物中的应用。本发明还提供了该中药组合物的制备方法，包括：取配方量的青钱柳叶、石斛、桑白皮和陈皮，混合，加入相当于原料药8～10倍重量的水，煎煮1～3h，过滤；取滤渣，加入8～10倍重量的水，煎煮1～3h，过滤，合并滤液；经浓缩，得到中药组合物。在本发明提供的实施例中，该中药组合物的制备方法包括：取配方量的青钱柳叶、石斛、桑白皮和陈皮，混合，加入相当于原料药20倍重量的水，煎煮2h，过滤；取滤渣，加入20倍重量的水，煎煮2h，过滤，合并滤液；经浓缩，得到中药组合物。作为优选，浓缩为浓缩至每500mL浓缩液含有50～150g青钱柳叶生药量。在本发明提供的实施例中，浓缩为浓缩至每500mL浓缩液含有100g青钱柳叶生药量。本发明还提供了一种中药制剂，包括本发明提供的中药组合物和药学上可接受的辅料。以重量份计，该中药组合物由如下原料药制成：青钱柳叶2～3份，石斛1～2份，桑白皮1～2份，陈皮1～2份。本发明还提供了一种保健食品，包括本发明提供的中药组合物和食品学上可接受的辅料。以重量份计，该中药组合物由如下原料药制成：青钱柳叶2～3份，石斛1～2份，桑白皮1～2份，陈皮1～2份。本发明提供了青钱柳叶或其提取物的新用途和中药组合物。本发明具有的技术效果为：本发明研究发现青钱柳叶及其提取物可用于调理阴虚体质或治疗未病。本发明从一般毒理学研究提供了青钱柳水提物的安全性证据，并进行了中医实验与临床研究，显示其具有清热养阴功效，证明它对阴虚体质具有明显的改善、调节作用。而且青钱柳水提物的这种新特性为阴虚体质人群的体质调理提供了新的产品选择。试验结果显示：青钱柳复方水提物(本发明中药组合物)和青钱柳叶水提物灌胃给予4周后，均可明显减少动物的摄食量、饮水量和尿量；青钱柳复方和青钱柳叶水提物能改善受试动物的阴虚表征评分，如背部温度上升、舌色鲜红、活动次数明显增加、爪色青紫及眼睛神采异常等项目均有明显的改善；青钱柳复方和青钱柳叶水提物降低空腹血糖(FBG)，改善糖耐量(OGTT)，升高肝糖原，降低胰岛素含量，升高胰岛素敏感指数(ISI)，降低胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)，改善胰岛素抵抗；与模型组相比，青钱柳复方和青钱柳叶水提物模型对大鼠脂代谢指标的影响无显著性差异；与模型组相比，青钱柳复方和青钱柳叶水提物能显著降低模型大鼠cAMP水平，作用与知柏地黄丸和二甲双胍相似；青钱柳复方和青钱柳叶水提物能够显著降低模型大鼠异常升高的CD4+/CD8+比例，提示青钱柳复方和青钱柳叶水提物有助于调节细胞免疫功能，使之趋向恢复至正常水平。试验结果显示，青钱柳复方和青钱柳叶水提物能改善阴虚内热型大鼠模型的阴虚评分，具有养阴清热的功效；能调节紊乱的细胞免疫功能，改善虚证状态；具有降糖、改善胰岛素抵抗状态的作用。具体实施方式本发明公开了青钱柳叶或其提取物的新用途和中药组合物，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本发明提供的青钱柳叶或其提取物的新用途和中药组合物中所用原料药或辅料均可由市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本发明：实施例1：青钱柳叶水提物的制备方法称取青钱柳叶适量，加入20倍水，煎煮2h，过滤，收集滤液，滤渣加入20倍水，再次煎煮1h，过滤，合并2次滤液；浓缩滤液至每100mL含有100g青钱柳生药量，冷冻干燥或者70℃烘干，粉碎即得青钱柳叶水提物。所得青钱柳叶水提物中，其粗多糖含量为0.34％，总黄酮含量为2.23％，总三萜及皂苷含量为1.37％。实施例2：青钱柳复方水煎液的制备方法按照重量份分别为30份、20份、20份、20份，分别称取适量青钱柳叶、石斛、桑白皮和陈皮，混合，加入10倍水，煎煮2h，过滤，收集滤液，滤渣加入10倍水，再次煎煮1h，过滤，合并2次滤液；浓缩滤液至每500mL青钱柳复方水煎液中含有100g青钱柳生药量，即得青钱柳复方水煎液。实施例3：青钱柳复方水煎液的制备方法按照重量份分别为20份、15份、20份、10份，分别称取适量青钱柳叶、石斛、桑白皮和陈皮，混合，加入10倍水，煎煮2h，过滤，收集滤液，滤渣加入10倍水，再次煎煮1h，过滤，合并2次滤液；浓缩滤液至每500mL青钱柳复方水煎液中含有100g青钱柳生药量，即得青钱柳复方水煎液。实施例4：青钱柳复方水煎液的制备方法按照重量份分别为25份、20份、10份、15份，分别称取适量青钱柳叶、石斛、桑白皮和陈皮，混合，加入10倍水，煎煮2h，过滤，收集滤液，滤渣加入10倍水，再次煎煮1h，过滤，合并2次滤液；浓缩滤液至每500mL青钱柳复方水煎液中含有100g青钱柳生药量，即得青钱柳复方水煎液。实施例5：青钱柳复方水煎液的制备方法按照重量份分别为30份、10份、15份、20份，分别称取适量青钱柳叶、石斛、桑白皮和陈皮，混合，加入10倍水，煎煮2h，过滤，收集滤液，滤渣加入10倍水，再次煎煮1h，过滤，合并2次滤液；浓缩滤液至每500mL青钱柳复方水煎液中含有100g青钱柳生药量，即得青钱柳复方水煎液。实施例6：青钱柳叶水提物及青钱柳复方水提物对阴虚内热大鼠模型的干预研究1.材料：1.1供试药物及剂量设置知柏地黄丸(0.3g/mL)，批号14030755，北京同仁堂；盐酸二甲双胍片(25mg/mL)，批号1501055，深圳市中联制药有限公司。青钱柳叶水提物(按实施例1方法制得，168，84，42mg/mL高中低剂量)，批号20151009；青钱柳复方水提物(按实施例2方法制得，进一步干燥粉碎成粉末，按照26.4，13.2，6.6mg/mL剂量配置成高中低剂量)，批号20151009。1.2主要试剂及仪器链脲佐菌素(STZ)，批号150101，TOKU-ECOMPANY；左旋甲状腺素(优甲乐)，批号191113，德国默克公司。血糖仪/活力型，ACCU-CHEKACTIVE，罗氏诊断(型号：GC1492692)；非接触式红外线体温计，深圳市宏旺达电子(型号：DM300)；电子分析天平，METTLERTOLEDO(型号：EL204)。1.3实验动物及饲料SD大鼠，雌雄各半，动物购于广州中医药大学，许可证号：SCXK(粤)2013-0034。正常组给予以普通饲料，其他动物予以高脂饲料。高脂饲料由猪油、蛋黄粉、糖、基础维持饲料等组成，由北京科澳协力有限公司提供，许可证号为：SCXK(京)2014-0010。2.方法2.1造模方法与分组采用高脂饲料+甲状腺素+STZ方法饲养SD大鼠，复制阴虚内热型大鼠模型。正常对照组给予普通饲料喂养，模型组给予高脂饲料喂养。第3周，除正常对照组外，每组动物均皮下注射甲状腺素(T4)0.2mg/kg/d，连续1周。第4周，1次性腹腔注射STZ溶液35mg/kg；正常对照组腹腔注射同等剂量0.1mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。注射STZ后第7天，动物禁食测空腹血糖(FBG)，根据阴虚表征评分评判阴虚内热型大鼠造模是否成功。将造模成功的动物随机分为模型对照组，阳性对照组(知柏地黄丸、二甲双胍)，青钱柳复方水提物高、中、低剂量、青钱柳叶水提物高、中、低剂量。2.2观察指标灌胃给予样品4周，观察指标有：(1)一般状况：体重、摄食量、饮水量、尿量；(2)中医阴虚证候评分：阴虚证候评分表包括观察大鼠活动次数，背部温度，舌色鲜红，爪甲青紫，大便干硬、眼睛神采等表征项目，其中表征比率为该表征占总数的比率；(3)血清糖代谢相关指标：空腹血糖(FBG)、口服糖耐量(OGTT)、糖化血红蛋白(GHb)、胰岛素、胰岛素敏感指数(ISI)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)；(4)血清脂代谢相关指标：胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、游离脂肪酸(FFA)；(5)甲状腺功能指标：T3、T4、cAMP、cGMP水平；(6)细胞免疫功能指标：淋巴细胞亚群CD3、CD4和CD8水平。2.3统计方法采用SPSS20.0统计软件，数据以表示，组间比较采用单因素方差检验和最小显著性差异法(LSD)，P<0.05为有显著统计学意义。阴虚内热证候评分表中，各表征比率为该表征占总数的比率，计数资料数据以率表示，釆用检验χ2检验，以P<0.05为有显著统计学意义。3.结果3.1阴虚内热模型大鼠的特征与正常组相比，模型组动物体重明显减轻，摄食量、饮水量和尿量均明显增加；血糖明显升高，糖耐量异常，肝糖原明显降低；胰岛素含量明显升高，胰岛素敏感指数(ISI)明显降低，胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)明显升高，表现为明显的胰岛素抵抗。模型组动物T3及cGMP水平明显升高；CD3+淋巴细胞亚群水平下降，CD4+/CD8+比例异常升高，提示细胞免疫功能紊乱。模型组动物出现明显的阴虚表征，包括背部温度上升、舌色鲜红、活动次数明显增加、爪色青紫及眼睛神采异常等。这些结果表明高脂饲料+甲状腺素+STZ方法成功复制阴虚内热型模型。3.2青钱柳复方和青钱柳叶水提物对阴虚内热模型大鼠的影响3.2.1对阴虚内热大鼠体重、摄食量、饮水量和尿量的影响受试样品青钱柳复方水提物(Q)和青钱柳叶水提物(LY)灌胃给药，剂量为10ml/Kg，每天给药一次，4周后，均可明显减少动物的摄食量、饮水量和尿量。参见表1～4。表1样品对阴虚内热大鼠体重的影响(n＝8)(g)注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01.与模型对照组比较，*P<0.05**P<0.01。表2样品对阴虚内热大鼠饮水量的影响(n＝8)(mL)注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01.与模型对照组比较，*P<0.05**P<0.01。表3样品对阴虚内热大鼠摄食的影响(n＝8)(g)注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01.与模型对照组比较，*P<0.05**P<0.01。表4样品对阴虚内热大鼠尿量的影响(n＝8)(mL)注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01.与模型对照组比较，*P<0.05**P<0.01。3.2.2青钱柳复方和青钱柳叶水提物对阴虚内热模型大鼠症状表征评分的影响青钱柳复方和青钱柳叶水提物能改善受试动物的阴虚表征评分，如背部温度上升、舌色鲜红、活动次数明显增加、爪色青紫及眼睛神采异常等项目均有明显的改善。参见表5。表5青钱柳复方和青钱柳叶水提物对模型大鼠阴虚内热症状表征评分注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01.与模型对照组比较，*P<0.05**P<0.01。3.2.3青钱柳复方和青钱柳叶水提物对阴虚内热大鼠糖代谢的影响青钱柳复方和青钱柳叶水提物降低空腹血糖(FBG)，改善糖耐量(OGTT)，升高肝糖原，降低胰岛素含量，升高胰岛素敏感指数(ISI)，降低胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)，改善胰岛素抵抗。参见表6～8。表6样品对阴虚内热大鼠血糖的影响(n＝8)(mmol/L)注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01.与模型对照组比较，*P<0.05**P<0.01。表7样品对阴虚内热大鼠糖化血红蛋白，肝糖原，胰岛素的影响(n＝8)注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01.与模型对照组比较，*P<0.05**P<0.01。表8样品对糖尿病大鼠胰岛素及其相关指标的影响(n＝8)注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01.与模型对照组比较，*P<0.05**P<0.01。3.2.4青钱柳复方和青钱柳叶水提物对阴虚内热大鼠脂代谢的影响与模型组相比，青钱柳复方和青钱柳叶水提物模型对大鼠脂代谢指标的影响无显著性差异。参见表9。表9样品对阴虚内热大鼠脂代谢的影响(n＝8)(mmol/L)注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01。与模型对照组比较，*P<0.05**P<0.01。3.2.5青钱柳复方和青钱柳叶水提物对阴虚内热大鼠微观指标的改善与模型组相比，青钱柳复方和青钱柳叶水提物能显著降低模型大鼠cAMP水平，作用与知柏地黄丸和二甲双胍相似。参见表10：表10样品对阴虚内热大鼠T3.T4.cAMP.cGMP的影响(n＝8)注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01.与模型对照组比较，*P<0.05**P<0.01。青钱柳复方和青钱柳叶水提物能够显著降低模型大鼠异常升高的CD4+/CD8+比例，提示青钱柳复方和青钱柳叶水提物有助于调节细胞免疫功能，使之趋向恢复至正常水平。参见表11：表11样品对阴虚内热大鼠免疫功能的影响(n＝8)注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01。与模型对照组比较，*P<0.05**P<0.01。4.结论：青钱柳复方和青钱柳叶水提物能改善阴虚内热型大鼠模型的阴虚评分，具有养阴清热的功效；能调节紊乱的细胞免疫功能，改善虚证状态；具有降糖、改善胰岛素抵抗状态的作用。实施例7：青钱柳复方的急性毒性试验1.目的：观察青钱柳复方可能引起毒性反应的性质、程度及可逆性；推测毒性靶器官或靶组织。2.材料：2.1供试药物与试剂：青钱柳复方水提物(按实施例2方法制得，进一步干燥粉碎成粉末，按照0.554g/mL浓度配置成供试药液)，由无限极(中国)有限公司提供。2.2实验动物：SD大鼠，SPF级，5-6周龄，雌雄各30只，来源：广东省医学实验动物中心，许可证号：SCXK(粤)2013-0002；饲养环境：香港理工大学深圳研究院(SZRI)SPF级动物房。2.3实验分组：预实验只设计给药组，预实验给药观察4天后再进行正式试验，6只动物。正式试验分正常对照组和青钱柳复方给药组，每组12只。3.方法：3.1剂量与给药：在预实验的基础上，实验设计为2组：正常对照组和青钱柳复方给药组。以干粉0.554g/mL的浓度按照最大给药体积20mL/kg经口灌胃给予青钱柳复方，24h内给药2次，两次间隔6h，即累计剂量为干粉22.15g/kg。正常对照组，经口灌胃给予相应体积的0.9％无菌生理盐水注射液。3.2观察指标：按GLP安全性评价规范，观察大鼠外观体征、一般行为活动、精神状态、呼吸状态、粪便性状、生殖器、死亡等情况及其它毒性表现。并定期测定体重和摄食量，以及血液学、生化指标(包括血分析、肝功能、肾功能、血糖、血脂、离子等)，尿液分析，组织病理学等项目。3.3统计分析方法：体重、摄食量、血液学、血生化、尿常规等定量指标采用均数±标准差描述。尿常规等级资料直接列出原始数据，该组数据不纳入统计分析。采用Student-ttests检验分别对两组SD大鼠定量指标进行统计比较分析，P≤0.05表示具有统计学意义。所有检验均为双侧检验α＝0.05。所有的统计分析，均在GraphpadPrism5.0软件下完成。4.结果：4.1一般状况：14天观察期内未见大鼠死亡，所有大鼠精神状态良好，毛发有光泽，行为、运动能力正常，呼吸均匀平稳，生殖器周围无分泌物出现，大便性状颜色均正常，未见其它毒性症状出现。4.2体重：给药后14天观察期内，除试验第2天雌性大鼠青钱柳复方给药组体重与正常组比较有统计学意义外(P<0.05)，其余各时间点体重与正常对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)；雄性大鼠青钱柳复方给药组体重于试验第2天至第7天较正常组降低，于第7天与正常组比较有统计学意义(P<0.05)；随后雄性大鼠青钱柳复方给药组体重上升，于第13天和15天与正常对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。具体结果见表12。表12经口灌胃给予青钱柳复方对SD大鼠体重的影响(g)备注:与正常对照组比较，#P<0.05。4.3摄食量：给药后14天观察期内，雌性及雄性青钱柳复方给药组摄食量于给药后第2天有所减少，其中雌性青钱柳复方给药组摄食量与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)外，青钱柳复方给药组大鼠其余各时间点摄食量与对照组相比未见显著差异。具体结果见表13。表13经口灌胃给予青钱柳复方对SD大鼠摄食量的影响(g/只/天)备注：与正常对照组比较，##P<0.01。4.4血液学检测：14天观察结束显示，青钱柳复方给药组大鼠白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白浓度(HB)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、血小板计数(PLT)、淋巴细胞比值(LY)、单核细胞比例(MONO)、中性粒细胞比例(NEUT)、淋巴细胞计数(LY)、单核细胞计数(MONO)、中性粒细胞计数(NEUT)与对照组相比均无统计学意义。具体结果见表14。表14经口灌胃给予青钱柳复方对SD大鼠血液学指标的影响备注:与正常对照组比较，*P<0.05。4.5血生化检测:14天观察结束，青钱柳复方给药组大鼠血清样品中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、血糖(GLU)、尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、总胆红素(TBIL)、总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、血钾、血钠、血总钙、血氯、磷(K+、Na+、Ca2+、Cl-、PO43-)及肌酸激酶(CK)与对照组相比，除尿素氮(Urea)、甘油三酯(TG)与正常组比较差异有统计学意义外(P<0.05)，其余指标均无统计学意义。参见表15：表15经口灌胃给予青钱柳复方对SD大鼠血液生化指标的影响备注:与正常对照组比较，*P<0.05。4.6尿常规检测:14天观察结束，青钱柳复方给药组大鼠尿比重(SG)与PH与对照组相比均未见异常改变，差异无统计学意义。其余指标如葡萄糖、尿蛋原、尿蛋白、白细胞、胆红素、酮体、比重、隐血、pH、亚硝酸盐检测结果均呈阴性。具体结果见表16。表16经口灌胃给予青钱柳复方对SD大鼠尿常规指标的影响4.7大体解剖观察:给药后14天观察期结束，各组大鼠大体解剖观察，心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、胃肠道、生殖系统等脏器或组织的颜色、形态、质地、大小正常，均未见异常改变。5.结论：SD大鼠24小时内累计灌胃给予干粉22.15g/kg的青钱柳复方，大鼠未见死亡，一般状况良好。14天观察期结束，大鼠血液学、血生化、尿常规及大体解剖均未见异常。SD大鼠经口灌胃给予青钱柳复方的最大耐受剂量(MTD)大于等于干粉22.15g/kg。实施例8：青钱柳复方改善阴虚体质的作用研究1.受试人群及试食品1.1受试人群：60名阴虚体质志愿者，签署知情同意书，通过人体功效试验，观测青钱柳复方对阴虚体质人群的疗效。1.2纳入和排除标准：纳入标准：年龄需在30岁以上及65岁以下；根据国家标准ZYYXH/T157-2009-中医体质分类与判定符合阴虚质判定标准的志愿者。排除标准：(1)年龄在30岁以下或65岁以上者；(2)妊娠其妇女或哺乳期妇女；(3)有严重其他脏器并发症者，或合并有其他严重的原发性疾病或精神疾患者；(4)近一月内有糖尿病酮症酸中毒等急性代谢紊乱病史或合并感染病史者。1.3试食品：青钱柳复方水煎液，由无限极(中国)有限公司提供。六味地黄丸(浓缩丸)，九芝堂股份有限公司出品。2.方法：2.1随机分组与试食方法阴虚体质志愿者按分层随机法分为2组，即青钱柳组和六味地黄丸组，每组各30人。青钱柳组：每天服用青钱柳复方水煎液(实施例2制得的水煎液)，饮服，一次1袋(50mL)，一日2次。六味地黄丸组：六味地黄丸(河南省宛西制药股份有限公司，批号:150309)，口服，一次8丸，一日3次。服用时间，均为连续8周。2.2观测指标及评价方法2.1症状积分根据国家标准ZYYXH/T157-2009-中医体质分类与判定，按判定标准积分，于试食前后统计临床症状积分值。临床症状积分表见表17：表17临床症状积分表2.2评价方法根据试食前后积分的变化进行判定，判定依据：由转化分≥40分改善到转化分30～39分，视为显效；由转化分≥40分改善到转化分＜30分视为有效。2.3统计学分析样本率的比较和构成比采用χ2检验，P<0.05为差异具有显著统计学意义。3.结果3.1一般资料：本研究纳入60例阴虚体质志愿者，其中男性26人，女性34人。中途退出3例，脱落4例，获得完整资料者53例，其中六味地黄丸组27人，青钱柳组26人。3.2临床症状积分的影响通过对比两组志愿者服用青钱柳复方水煎液和六味地黄丸前后的临床症状积分的变化，结果显示，六味地黄丸组积分改善的有效率、显效率分别为25.9％、55.6％，青钱柳组积分改善的有效率、显效率分别为30.8％、53.8％，经χ2检验，P>0.05,两组之间有效率、显效率、构成比均无显著性差异。参见表18：表18青钱柳复方水煎液对阴虚体质志愿者临床症状积分的影响注：经χ2检验，P>0.05,两组之间有效率等均无显著性差异。4.结论结果提示，青钱柳复方水煎液在改善阴虚体质志愿者临床症状积分方面具有一定效果，且与六味地黄丸组相比具有等效性。实施例9：青钱柳复方水提物对阴虚内热大鼠模型的干预研究1.材料：1.1供试药物及剂量设置青钱柳复方水提物按实施例2～5方法制得，进一步干燥粉碎成干粉，按照浓度为6.6mg/mL进行配置，制得青钱柳复方水提物水溶液。青钱柳水提物、石斛水提物、桑白皮水提物、陈皮水提物分别按照如下方法提取：分别称取上述药材适量，加入20倍水，煎煮2h，过滤，收集滤液，滤渣加入20倍水，再次煎煮1h，过滤，合并2次滤液；浓缩滤液至每100mL含有100g生药量，冷冻干燥或者70℃烘干，粉碎即得青钱柳水提物粉末、石斛水提物粉末、桑白皮水提物粉末、陈皮水提物粉末。将青钱柳水提物粉末、石斛水提物粉末、桑白皮水提物粉末、陈皮水提物粉末分别溶于水，制得6.6mg/mL的青钱柳水提物水溶液，石斛水提物水溶液、桑白皮水提物水溶液、陈皮水提物水溶液。1.2主要试剂及仪器同实施例6。1.3实验动物及饲料同实施例6。2.方法2.1造模方法与分组造模方法同实施例6。将造模成功的动物随机分为：实施例2青钱柳复方水提物组、实施例3青钱柳复方水提物组、实施例4青钱柳复方水提物组、实施例5青钱柳复方水提物组、青钱柳叶水提物组、石斛水提物组、桑白皮水提物组、陈皮水提物组。给药方式同实施例6。2.2观察指标同实施例6。2.3统计方法同实施例6。3.结果3.1青钱柳复方对阴虚内热模型大鼠的影响3.1.1对阴虚内热大鼠体重、摄食量、饮水量和尿量的影响受试样品实施例2-5青钱柳复方水提物灌胃给予4周后，均可明显减少动物的摄食量、饮水量和尿量，效果显著好于各单剂组。参见表19～22。表19样品对阴虚内热大鼠体重的影响(n＝8)(g)注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01.与模型对照组比较，*P<0.05**P<0.01。表20样品对阴虚内热大鼠饮水量的影响(n＝8)(mL)组别给药前第一周第二周第三周第四周正常组28.5±11.831.4±16.841.5±14.740.2±12.935.1±11.9模型组99.6±42.7ΔΔ89.9±27.5ΔΔ92.4±41.5ΔΔ49.8±18.493.7±34.9ΔΔ实施例250.8±21.8**45.9±14.1**47.2±21.2**25.4±9.4*47.8±17.8**实施例358.9±25.3*53.2±16.3*54.7±24.5*29.5±10.9*55.4±20.6*实施例461.0±26.2*55.0±16.9*56.6±25.4*30.5±11.3*57.4±21.4*实施例552.8±22.7**47.7±14.6*49.0±22.0**26.4±9.8*49.7±18.5**青钱柳水提物66.0±28.3*59.6±18.3*61.3±27.5*33.0±12.2*62.1±23.1*石斛水提物64.0±27.5*57.8±17.7*59.4±26.6*32.0±11.8*60.2±22.4*桑白皮水提物71.1±30.564.2±19.766.0±29.635.6±13.266.9±24.9陈皮水提物73.2±31.466.0±20.267.9±30.536.6±13.568.8±25.6注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01.与模型对照组比较，*P<0.05**P<0.01。表21样品对阴虚内热大鼠摄食的影响(n＝8)(g)组别给药前第一周第二周第三周第四周正常组29.6±11.726.8±15.442.4±6.636.8±12.633.2±10.7模型组21.7±5.741.1±9.3Δ45.7±8.946.3±8.054.9±4.7ΔΔ实施例219.5±5.331.6±18.2*50.0±7.843.4±14.939.2±12.6*实施例319.5±5.330.8±17.7*48.8±7.642.3±14.538.2±12.3*实施例419.5±5.431.1±17.9*49.2±7.742.7±14.638.5±12.4*实施例519.5±5.429.2±16.8*46.2±7.240.1±13.736.2±11.7*青钱柳水提物20.6±5.434.8±20.055.1±8.647.8±16.443.2±13.9石斛水提物20.6±5.134.6±19.954.7±8.547.5±16.342.8±13.8桑白皮水提物20.6±5.136.2±20.857.2±8.949.7±17.044.8±14.4陈皮水提物20.6±5.137.5±21.659.4±9.251.5±17.646.5±15.0注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01.与模型对照组比较，*P<0.05**P<0.01。表22样品对阴虚内热大鼠尿量的影响(n＝8)(mL)组别给药前第一周第二周第三周第四周正常组10.9±3.610.6±4.910.3±4.39.6±5.29.8±4.3模型组105.6±29.2ΔΔ90.0±29.9ΔΔ95.7±35.3ΔΔ90.2±36.3ΔΔ99.0±38.1ΔΔ实施例252.8±14.6**45.0±14.9**47.9±17.6**45.1±18.1**49.5±19.1**实施例361.3±16.9*52.2±17.3*55.5±20.5*52.3±21.0*57.4±22.1*实施例463.4±17.5*54.0±17.9*57.4±21.2*54.1±21.8*59.4±22.9*实施例554.9±15.2**46.8±15.5**49.8±18.3**46.9±18.9**51.5±19.8**青钱柳水提物68.7±19.0*58.5±19.4*62.2±22.9*58.6±23.6*64.3±24.8*石斛水提物66.6±18.4*56.7±18.8*60.3±22.2*56.8±22.8*62.4±24.0*桑白皮水提物74.0±20.463.0±20.967.0±24.763.1±25.469.3±26.7陈皮水提物76.1±21.064.8±21.568.9±25.464.9±26.171.3±27.4注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01.与模型对照组比较，*P<0.05**P<0.01。3.1.2青钱柳复方对阴虚内热模型大鼠症状表征评分的影响实施例2-5青钱柳复方能不同程度地改善受试动物的阴虚表征评分，如背部温度上升、舌色鲜红、活动次数明显增加、爪色青紫及眼睛神采异常等项目均有明显的改善，效果好于各单剂组。参见表23。表23青钱柳复方对模型大鼠阴虚内热症状表征评分注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01.与模型对照组比较，*P<0.05**P<0.01。3.1.3青钱柳复方对阴虚内热大鼠微观指标的改善与模型组相比，实施例2-5青钱柳复方水提物均能显著降低模型大鼠T3、cGMP水平，并能显著升高cAMP/cGMP比例。并且，各实施例与单味药比较，实施例2-5青钱柳复方水提物在改善T3、cGMP水平以及cAMP/cGMP比例方面表现出优于各单味药的趋势。参见表24：表24样品对阴虚内热大鼠T3.T4.cAMP.cGMP的影响(n＝8)注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01.与模型对照组比较，*P<0.05**P<0.01。4.结论：实施例2-5青钱柳复方均能改善阴虚内热型大鼠模型的阴虚评分，具有养阴清热的功效，效果优于各单剂。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页1 2 3