本发明涉及生物技术及医药
技术领域：
，具体地，本发明涉及一种从天然植物果核中提取的多种抗菌成分的喷剂及其用途。
背景技术：
：脚气是足癣的俗名，足癣是指发生在趾掌面的霉菌性皮肤病，也是一种极常见的真菌感染性皮肤病。成人中70％-80％的人有脚气，只是轻重不同而已。足癣常在夏季加重，冬季减轻，也有人终年不愈。足癣发生时，真菌生长会产生一些气味，特别是被细菌感染后，分解蛋白，会产生一股令人作呕的臭气，中医称为“臭田螺”味。引起足癣的真菌叫皮肤癣菌,是一种喜欢生活在皮肤角质层中的真菌。它们有一些生活在土壤里，称为亲土性真菌；有一些生活在动物皮毛上，称为亲动物性真菌；另一些自然生活在人的皮毛中称为亲人性真菌。这三类真菌都可以感染人类，因为感染途径太多，我们的皮肤真菌感染才常常会复发。真菌具有难以杀灭的特点，在-6℃左右的环境里能长久地存活；在120℃的高温中，10分钟内不会死亡；在脱离活体的毛发、指(趾)甲、皮屑等上面，也可以保持毒性一年以上。针对于不同类型的脚气、脚癣、手癣、股癣、体癣病及霉菌性生殖疾病的药物主要采用的是化学抗生素类药物的治疗，主要有烯丙胺类、硫代氨甲酸酯类、唑类等，分别能够造成角鲨烯积聚及抑制麦角固醇合成。但化学抗生素类药物容易产生因抗生素滥用导致的耐药性、依赖性等问题，因此亟待找到其他的药物来治疗或者预防真菌类疾病。技术实现要素：本发明提供了一种植物提取物及其制备方法和用途，以至少解决相关技术中使用化学抗生素药物治疗真菌类疾病所导致的问题。根据本发明的一个方面，提供了一种植物提取物的制备方法，该制备方法包括如下步骤：取植物果核加入干馏釜，加热至160℃时，恒温1小时，然后温度升至240℃维持2小时，其中，植物果核包括以下至少之一：石榴皮、乌梅核、杏仁壳、山楂壳、葡萄籽、杨梅壳、椰子壳；收集各时段的干馏液，混合，静置3天，沉降分离，用虹吸法分离出透明层液体；在透明层液体中加入活性炭，收集过滤液置蒸馏釜中，115℃蒸馏2小时，收取蒸馏液；将蒸馏液用灭菌水稀释至pH值2.48，过滤并收集过滤液，即得产品。根据本发明的另一个方面，提供了一种植物提取物，所述植物提取物由上述的制备方法制备而来。根据本发明的另一个方面，提供了一种上述的植物提取物在制备治疗真菌类癣病的喷剂中的应用，将所述植物提取物与水按照1:4的体积比例混合，得到治疗真菌类癣病的喷剂。根据本发明的另一个方面，提供了一种上述的植物提取物在制备治疗或预防皮肤及阴部瘙痒和褥疮的喷剂中的应用，将所述植物提取物与水按照1:(5-10)的体积比例混合，得到治疗或预防皮肤及阴部瘙痒、褥疮的喷剂。根据本发明的另一个方面，提供了一种上述的植物提取物在制备治疗细菌性和真菌性痢疾病的制剂中的应用，将所述植物提取物与水按照1:(2-6)的体积比例混合，得到治疗细菌性和真菌性痢疾病的制剂。本发明的含植物提取物成分的喷剂或者制剂，配方中包含从植物果核中提取的多种抗菌成分的复合体，其成份含有酚类20-45％，有机酸5-45％，酮类5-20％，呋喃类5-15％，其他微量的有脂类、醇类和醛类等。制备该复合体的原料来源广泛，可以使用石榴皮、乌梅核、杏仁壳、葡萄籽、杨梅核、椰子壳、山楂壳等多种植物果核。本发明的植物提取物是植物抗生素混合液，是从天然植物果核中提取的多种抗菌成分的复合体原液成分组成。该植物抗生素易被皮肤吸收，抗真菌和细菌能力强。该植物抗生素属酸性物质，pH值可以浓缩或稀释至2.0-4.0，有效杀灭皮肤表面真菌。本发明的植物提取物通过不同倍数的稀释后，可应用于制备不同类型的脚气、脚癣、手癣、股癣、体癣病及霉菌性生殖疾病的药物，也用于制备阴部及皮肤的各种瘙痒及褥疮的药物，还可用于制备细菌性和真菌性痢疾病的药物。该植物提取物具有高效杀真菌、复发率更低、具有抗炎活性，抗真菌范围广、无激素，无过敏物质等优点，对人体安全，使用方便。本发明的植物提取物的制备方法工艺简单、易于量产；并且相对于相关技术中采用乙醇浸泡植物果核并低温蒸馏真空浓缩的制备方式而言，本发明的植物提取物的制备方法无需使用乙醇，原料更少，生产过程更为安全，成本也更为低廉。具体实施方式本发明实施例针对现有技术的不足，提供一种使用方便、安全的含植物提取物成分的植物喷剂。在一个实施例中，该植物提取物的制备方法采用常规的混匀方法，采用常规的溶解法溶解溶液。取石榴皮50份、乌梅核80份、杏仁壳30份加入干馏釜，加热至160℃时，恒温1小时，然后温度升至240℃维持2小时；收集各时段的干馏液，混合，静置3天，沉降分离，用虹吸法分离出透明层液体；在透明层液体中加入活性炭，收集过滤液置蒸馏釜中，115℃蒸馏2小时，收取蒸馏液；将蒸馏液用灭菌水稀释至pH值2.48，过滤并收集过滤液，即得产品。上述制备方法得到的植物提取物可用于制备以下疾病的预防及治疗的药物：1、真菌引起的脚气、脚癣、手癣、股癣、体癣病及霉菌性生殖疾病。制备方法为植物提取物原液与水按1：4的体积比例混合，pH值2-5；2、皮肤及阴部的各种瘙痒、褥疮等疾病的预防及治疗。在杀菌的同时，还能有效的预防和调节皮肤表面的微生态环境，预防皮肤及阴部的各种瘙痒、褥疮等疾病，增强自然防御功能。使用更方便、更安全，对人体有益无害。制备方法为植物提取物原液与水按1：(5-10)的体积比例混合，pH值2-4；3、用于细菌性和真菌性痢疾病的干预药物。制备方法为植物提取物原液与水按1：(2-6)的比例混合。本发明实施例根据2002年版《消毒技术规范》，针对植物提取物样品进行pH值、感观检测及其稳定性(生物法)检测，其证明结果如下：1、植物提取物样品中微生物污染鉴定1.1试验材料(1)受试样品：植物提取物。(2)仪器设备：电热恒温培养箱、霉菌培养箱。1.2试验方法(1)检测依据：《消毒技术规范》2002年版“GB15979-2002一次性使用卫生用品卫生标准”。(2)检验环境：温度23℃；相对湿度45％。1.3试验结果表1：植物提取物样品原液的微生物污染检测结果检测指标标准值实测值细菌菌落总数(cfu/ml)≤2000大肠菌群不得检出未检出绿脓杆菌不得检出未检出溶血性链球菌不得检出未检出金黄色葡萄球菌不得检出未检出真菌菌落总数(cfu/ml)≤10001.4结论所试植物提取物样品的细菌菌落总数(cfu/m1)、大肠菌群、绿脓杆菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、真菌菌落总数(cfu/m1)均符合《消毒技术规范》(2002年版)的规定。2、所试植物提取物样品的抑菌性能鉴定2.1试验材料(1)试验菌株：白色念珠菌(ATCC10231)培养至第6代，由山东省疾病预防控制中心提供。(2)受试样品：所试植物提取物样品。(3)培养基：沙氏琼脂培养基，压力蒸汽灭菌后备用。2.2试验方法(1)检测依据:《消毒技术规范》(2002年版)。(2)试验方法：将受试菌24小时斜面培养物洗下，磷酸盐缓冲液(PSB)洗下，制作菌片备用。取被检样液4管(每管5毫升，试验组)和PBS液4管(每管5毫升，对照组)。取上述各菌的悬液，分别在上述试验管和对照管中各滴加100微升，均匀混合，开始计时，作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟，每管吸取样液0.5毫升加入含4.5毫升PBS的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取适当稀释度，分别吸取1毫升，置于四个平皿，用凉至40℃-45℃的沙氏琼脂培养基15毫升作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35℃±2℃培养72小时，作活菌菌落计数。并计算抑菌率：X＝(Nc-Ns)/Nc×100％；其中，X：抑菌率％；Nc：对照样品平均菌落数；Ns：被试样品平均菌落数。(3)实验条件：19℃-21℃。2.3结果所试植物提取物样品对白色念珠菌作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟的平均抑菌率分别为98.49％、98.43％、98.48％、99.17％。具体结果见表2。表2：植物提取物样品的稳定性检测试验结果2.4结论所试植物提取物样品对白色念珠菌作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟的平均抑菌率分别为98.49％、98.43％、98.48％、99.17％。下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。实施例1在本发明的实施例1中采用的含植物提取物成分的妇用制剂喷剂含有多种抗菌成分，无激素、无创伤、无刺激、无毒副作用。该妇用制剂喷剂可用于以下疾病的预防及治疗：不同类型的脚气、脚癣、手癣、股癣、体癣病及霉菌性生殖疾病。该妇用制剂喷剂的制备方法为将植物提取物原液与水按1：4的体积比例混合，稀释至pH值2-5；本实施例根据2002年版《消毒技术规范》，针对妇用制剂喷剂样品的pH值及感观检测、多次完整皮肤刺激试验以及急性眼刺激试验进行检测，其证明结果如下：1、妇用制剂喷剂样品的pH值及感观检测1.1试验材料(1)受试样品：妇用制剂喷剂。(2)仪器设备：UB-7型酸度计。(3)校正用缓冲液：邻苯二甲酸氢钾缓冲液(pH值4.00，25℃)，磷酸盐缓冲液(pH值6.86，25℃)，来自上海雷磁·创益仪器仪表有限公司。1.2试验方法(1)检测依据:《消毒技术规范》2002年版“2.2.1.4消毒剂pH值测定”。(2)检验环境：温度23℃；相对湿度45％。(3)操作步骤：取送检样品目测感官指标，测定样品原液pH值。1.3试验结果表3：妇用制剂喷剂样品原液的pH值测定结果1.4结论(1)所试妇用制剂喷剂样品为淡黄色液体。(2)所试妇用制剂喷剂，其原液的pH值为3.71。2、所试妇用制剂喷剂样品的多次完整皮肤刺激试验2.1材料和动物(1)受试样品：妇用制剂喷剂。(2)动物：普通级新西兰兔3只，由济南西岭角养殖繁育中心提供，生产许可证号:SCXK(鲁)20150001。(3)环境条件：屏障环境动物室，使用许可证号：SYXK(鲁)20140010，温度20℃-25℃、相对湿度50-70％。兔饲料由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，生产许可证号：SCXK(京)20140008。2.2试验方法(1)检测依据：《消毒技术规范》(2002年版)。(2)样品配制：使用植物提取物原液进行试验。(3)试验步骤：试验前日，将实验兔背部脊柱两侧被毛剪掉，去毛范围左、右各约3厘米×3厘米。采用自身对照法进行试验，取0.5毫升受试样品，涂在右侧所暴露的皮肤上，左侧暴露皮肤作为对照。每只实验兔涂抹4小时后，用温水清洗涂抹部位的皮肤，除去残留物；连续涂抹14天。分别在每次涂抹后24h观察记录涂抹部位的皮肤反应，按2002年版《消毒技术规范》皮肤刺激反应评分标准进行皮肤反应积分和刺激强度评价。2.3试验结果去除受试物后，动物实验部位未出现红斑、水肿等异常变化，该样品每天每只动物积分均值均为0。表4：妇用制剂喷剂样品的多次皮肤刺激试验结果2.4试验结论:根据2002年版《消毒技术规范》皮肤刺激反应评分和剌激强度分级标准，植物喷剂样品原液用实验兔进行多次完整皮肤刺激试验对皮肤属无刺激性。3、所试妇用制剂喷剂的急性眼刺激试验3.1材料和动物(1)受试样品：妇用制剂喷剂。(2)受试动物：普通级新西兰兔3只，由济南西岭角养殖繁育中心提供，生产许可证号：SCXK(鲁)20150001。(3)环境条件：屏障环境动物室，使用许可证号：SYXK(鲁)20140010，温度2-25℃、相对湿度50-70％。兔饲料由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，生产许可证号：SCXK(京)20140008。3.2试验方法(1)检测依据：《消毒技术规范》2002年版“2.3.4急性眼剌激试验”。(2)样品配制：使用样品原液作为受试物进行试验。(3)试验步骤：吸取受试物0.1毫升，滴入实验兔一侧眼结膜囊内，另一侧眼以生理盐水作为正常对照。滴受试物后，将眼被动闭合4秒，30秒后用生理盐水冲洗，于滴眼后1小时、24小时、48小时、72小时肉眼观察实验兔眼结膜、虹膜合角膜的损伤和恢复情况，并对刺激反应进行评分，并分别计算每只动物在24小时、48小时、72小时的角膜损害、虹膜损害、结膜充血和结膜水肿四方面的平均评分，并按眼刺激分级标准判定受试物对眼睛的刺激强度。3.3试验结果3只实验兔在角膜损害、虹膜损害、结膜充血和结膜水肿四方面的平均评分分别为：角膜损害0分；虹膜损害0分；结膜充血1.67分；结膜水肿1.33分，并且在7天之内全部动物的眼刺激反应完全恢复。表5：妇用制剂喷剂样品对实验兔眼刺激反应评分注：平均评分系指24小时、48小时、72小时评分之和除以观察时间段数33.4结论根据2002年版《消毒技术规范》皮肤刺激反应评分和刺激强度分级标准，植物喷剂样品原液用实验兔进行急性眼刺激试验属无刺激性。实施例2在本发明的实施例2中采用的植物提取物以多种抗菌成分的复合物为主要成分，无激素、无创伤、无刺激、无毒副作用。该植物提取物可用于制备皮肤及阴部的各种瘙痒、褥疮等疾病的预防及治疗的药物。制备得到的药物在杀菌的同时，还能有效的预防和调节皮肤表面的微生态环境，预防皮肤及阴部的各种瘙痒、褥疮等疾病，增强自然防御功能；使用更方便、更安全，对人体有益无害。制备作为用于皮肤及阴部的各种瘙痒、褥疮等疾病的药物的方法：将植物提取物原液与水按1：(5-10)的体积比例混合，pH值2-4。在本实施例中根据2002年版《消毒技术规范》，针对用于皮肤及阴部的各种瘙痒、褥疮等疾病的植物喷剂的样品的pH值及感观检测、其抑菌性能、阴道粘膜刺激试验进行检测，其证明结果如下：1、植物喷剂样品的抑菌性能检测。1.1试验材料(1)试验菌株：白色念珠菌(ATCC10231)培养至第6代，由山东省疾病预防控制中心提供。(2)受试样品：用于皮肤及阴部的各种瘙痒、褥疮等疾病的植物喷剂。(3)收试载体：布片。(4)培养基：沙氏琼脂培养基，压力蒸汽灭菌后备用。1.2试验方法(1)检测依据：《消毒技术规范》(2002年版)。(2)操作步骤：(1)试验条件：19℃-21℃。(2)将受试菌24小时斜面培养物洗下，胰酪胨大豆肉汤培养基(TrypticaseSoyBroth，简称为TSB)配置悬菌液，制作菌片备用。分别取样品5g，加菌片1片，开始计时，作用至2分钟、5分钟、10分钟、20分钟，取出，加入5毫升，稀释液试管中，充分混匀，适当稀释作为试验组。取菌片1片直接加入5毫升稀释液试管中，充分混匀，适当稀释作为对照组。分别吸取1毫升，置于两个平皿，用凉至40℃-45℃的营养琼脂培养基15毫升作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35℃±2℃培养72小时，作活菌菌落计数。并计算抑菌率：X＝(Nc-Ns)/Nc×100％其中，X：抑菌率％；Nc：对照样品平均菌落数；Ns：被试样品平均菌落数。1.3试验结果所试植物喷剂样品对白色念珠菌作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟的平均抑菌率分别为90.32％、92.48％、97.74％、97.51％。具体结果见表6。表6：植物喷剂的抑菌性能测试结果1.4结论所试植物喷剂对白色念珠菌作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟的平均抑菌率分别为88.49％、94.70％、97.48％、99.17％。2、植物喷剂的样品抑菌性能鉴定2.1试验材料(1)试验菌株：金黄色葡萄球菌(ATCC6538)培养至第6代，大肠杆菌(8099)培养至第6代，由山东省疾病预防控制中心提供。(2)受试样品：用于皮肤及阴部的各种瘙痒、褥疮等疾病的植物喷剂。(3)培养基：营养琼脂培养基，压力蒸汽灭菌后备用。2.2试验方法(1)检测依据：《消毒技术规范》(2002年版)。(2)操作步骤：将受试菌24h斜面培养物用PBS洗下，制成适宜浓度的菌悬液备用。取被检样液4管(每管5m1，试验组)和PBS液4管(每管5ml，对照组)。取上述各菌的悬液，分别在上述试验管和对照管中各滴加100微升，均匀混合，开始计时，作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟，每管吸取样液0.5好似加入含4.5毫升PBS的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取适当稀释度，分别吸取1毫升，置于两个平皿，用凉至40℃-45℃4的营养琼脂培养基15毫升作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35℃±2℃培养48小时，作活菌菌落计数。并计算抑菌率：X＝(Nc-Ns)/Nc×100％其中，X：抑菌率％；Nc：对照样品平均菌落数；Ns：被试样品平均菌落数。(3)试验条件：19℃-21℃。2.3试验结果所试植物喷剂对金黄色葡萄球菌作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟的平均抑菌率分别为100％、100％、100％、100％；对大肠杆菌作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟的平均抑菌率分别为100％、100％、100％、100％。具体结果见表7和表8。表7：植物喷剂样品对金黄色葡萄球菌抑菌性能测试试验表8：植物喷剂样品对大肠杆菌的抑菌性能测试试验结果2.4结论所试植物喷剂对金黄色葡萄球菌作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟的平均抑菌率分别为100％、100％、100％、100％；对大肠杆菌作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟的平均抑菌率分别为100％、100％、100％、100％。3、所试植物喷剂的阴道粘膜刺激试验3.1材料和动物(1)受试样品：用于皮肤及阴部的各种瘙痒、褥疮等疾病的植物喷剂。(2)动物：普通级新西兰兔6只，由济南西岭角养殖繁育中心提供，生产许可证号：SCXK(鲁)20150001。(3)环境条件：屏障环境动物室，使用许可证号：SYXK(鲁)20140010，温度20℃-25℃、相对湿度50-70％。兔饲料由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，生产许可证号:SCXK(京)20140008。3.2试验方法(1)检测依据：《消毒技术规范》2002年版“2.3.5项阴道粘膜刺激试验”。(2)样品配制：使用样品原液进行试验。(3)试验步骤：将6只实验兔随机分为实验组和对照组，每组3只。实验前检查各动物阴道口有无分泌物、充血和其他损伤情况，将钝头软管(导管)与5mL的注射器相连。实验兔仰面固定，暴露会阴和阴道口，将导管用受试液湿润后轻柔地插入阴道4-5厘米，并用注射器缓慢注入2毫升受试液，轻柔地抽出导管。对照组用生理盐水做同样处理。24小时后采用气栓法处死动物，取出完整的阴道，并纵向切开，肉眼观察是否有出血、水肿等肉眼病变，选取阴道的两端和中间三个部位进行常规石蜡包埋和切片，苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosinstaining，简称为HE)染色后，进行组织病理学观察。根据病理检查结果，对阴道粘膜的刺激反应进行评分，计算阴道粘膜的刺激反应的平均积分，求得刺激指数，进行刺激强度分级。3.3试验结果实验组和对照组动物阴道均未见充血、水肿等明显肉眼病理变化，组织病理学检查见表9。试验组阴道粘膜刺激反应平均积分为1.89，对照组平均积分为1.0，阴道粘膜刺激指数为0.89。表9：植物喷剂的阴道粘膜刺激反应评分3.4试验结论根据2002年版《消毒技术规范》阴道粘膜剌激强度分级标准，植物喷剂样品原液对阴道粘膜属无刺激性。实施例3在本发明的实施例3中采用的植物提取物以多种抗菌成分的复合物为主要成分，无激素、无创伤、无刺激、无毒副作用。该植物提取物可用于制备细菌性和真菌性痢疾的药物。制备用于细菌性和真菌性痢疾的药物的方法：将植物提取物原液与水按1：(2-6)的体积比例混合。制备得到的植物制剂在杀菌的同时，还能有效的改善体内环境及微生态环境，增强自然防御功能。使用更方便、更安全，对人体有益无害。在本实施例中，根据2002年版《消毒技术规范》，针对其样品的pH值、感观检测以及样品微生物污染鉴定、其抑菌性能进行检测，其证明结果如下：1、植物制剂样品的pH值及感观检测1.1试验材料(1)受试样品：用于细菌性和真菌性痢疾的植物制剂。(2)仪器设备：UB-7型酸度计。(3)校正用缓冲液：邻苯二甲酸氢钾缓冲液(pH值4.00，25℃)，磷酸盐缓冲液(pH值6.86，25℃)，来自上海雷磁·创益仪器仪表有限公司。1.2试验方法(1)检测依：《消毒技术规范》2002年版“2.2.1.4消毒剂pH值测定”。(2)检验环境：温度23℃；相对湿度45％。(3)操作步骤：取送检样品目测感官指标，测定样品原液pH值。1.3试验结果表10：植物制剂样品原液的pH值测定结果1.4结论(1)所试植物制剂样品为淡黄色液体。(2)所试植物制剂样品原液的pH值为2.46。2、植物制剂样品微生物污染鉴定2.1试验材料(1)试验样品：植物制剂。(2)电热恒温培养箱。(3)霉菌培养箱。2.2试验方法(1)检测依据：《消毒技术规范》2002年版“GB15979-2002一次性使用卫生用品卫生标准”。2.3试验结果表11：植物制剂样品微生物污染检测结果检测指标标准值实测值细菌菌落总数(cfu/ml)不得检出未检出大肠菌群不得检出未检出绿脓杆菌不得检出未检出溶血性链球菌不得检出未检出金黄色葡萄球菌不得检出未检出真菌菌落总数(cfu/ml)≤10002.4结论所试植物制剂的细菌菌落总数(cfu/m1)、大肠菌群、绿脓杆菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、真菌菌落总数(cfu/m1)均符合《消毒技术规范》(2002年版)的规定。3、植物制剂样品抑菌性能鉴定3.1试验材料(1)试验菌株：金黄色葡萄球菌(ATCC6538)培养至第6代，大肠杆菌(8099)培养至第6代，由山东省疾病预防控制中心提供。(2)受试样品：植物制剂。(3)培养基：营养琼脂培养基，压力蒸汽灭菌后备用。3.2试验方法(1)检测依据：《消毒技术规范》(2002年版)。(2)操作步骤：将受试菌24h斜面培养物用PBS洗下，制成适宜浓度的菌悬液备用。取被检样液4管(每管5m1，试验组)和PBS液4管(每管5ml，对照组)。取上述各菌的悬液，分别在上述试验管和对照管中各滴加100微升，均匀混合，开始计时，作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟，每管吸取样液0.5好似加入含4.5毫升PBS的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取适当稀释度，分别吸取1毫升，置于两个平皿，用凉至40℃-45℃4的营养琼脂培养基15毫升作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35℃±2℃培养48小时，作活菌菌落计数。并计算抑菌率：X＝(Nc-Ns)/Nc×100％其中，X：抑菌率％；Nc：对照样品平均菌落数；Ns：被试样品平均菌落数。(3)试验条件：19℃-21℃。3.3试验结果所试植物制剂对金黄色葡萄球菌作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟的平均抑菌率分别为100％、100％、100％、100％；对大肠杆菌作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟的平均抑菌率分别为100％、100％、100％、100％。具体结果见表12和表13。表12：植物制剂样品对金黄色葡萄球菌抑菌性能测试结果表13：植物制剂样品对大肠杆菌的抑菌性能测试结果3.4结论所试植物制剂对金黄色葡萄球菌作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟的平均抑菌率分别为100％、100％、100％、100％；对大肠杆菌作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟的平均抑菌率分别为100％、100％、100％、100％。4、所试植物制剂的急性眼刺激试验4.1材料和动物(1)受试样品：植物制剂，淡黄色液体。(2)受试动物：普通级新西兰兔3只，由济南西岭角养殖繁育中心提供，生产许可证号：SCXK(鲁)20150001。(3)环境条件：屏障环境动物室，使用许可证号：SYXK(鲁)20140010，温度2-25℃、相对湿度50-70％。兔饲料由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，生产许可证号：SCXK(京)20140008。4.2试验方法(1)检测依据：《消毒技术规范》2002年版“2.3.4急性眼剌激试验”。(2)样品配制：使用样品原液作为受试物进行试验。(3)试验步骤：吸取受试物0.1毫升，滴入实验兔一侧眼结膜囊内，另一侧眼以生理盐水作为正常对照。滴受试物后，将眼被动闭合4秒，30秒后用生理盐水冲洗，于滴眼后1小时、24小时、48小时、72小时肉眼观察实验兔眼结膜、虹膜合角膜的损伤和恢复情况，并对刺激反应进行评分，并分别计算每只动物在24小时、48小时、72小时的角膜损害、虹膜损害、结膜充血和结膜水肿四方面的平均评分，并按眼剌激分级标准判定受试物对眼睛的刺激强度。4.3试验结果3只实验兔在角膜损害、虹膜损害、结膜充血和结膜水肿四方面的平均评分分别为：角膜损害0分；虹膜损害0分；结膜充血1.67分；结膜水肿1.33分，并且在7天之内全部动物的眼刺激反应完全恢复。表14：植物制剂对实验兔眼刺激反应评分注：平均评分系指24小时、48小时、72小时评分之和除以观察时间段数3。4.4结论根据2002年版《消毒技术规范》皮肤刺激反应评分和刺激强度分级标准，植物制剂原液用实验兔进行急性眼刺激试验属无刺激性。综上所述，本发明的植物提取物配方中包含从植物果核中提取的多种抗真菌成分的复合体，该植物提取物是酸性物质，pH值2.0-4.0，具有高效杀真菌、复发率更低、具有抗炎活性，抗真菌范围广、无激素，无过敏物质等优点，对人体安全，使用方便。该植物提取物可用于制备真菌引起的脚气、脚癣、手癣、股癣、体癣病及霉菌性生殖疾病的药物；也用于制备阴部及皮肤的各种瘙痒及褥疮的药物；还可用于制备细菌性和真菌性痢疾病的药物。本发明植物提取物制备方法成本低廉、使用安全方便，其推广和开发利用前景广阔。以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页1 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