款冬酮在制备抗衰老药物和保健食品中的应用的制作方法

本发明涉及中药活性成分，特别涉及一种款冬酮的新用途，具体是款冬酮在制备抗衰老药物和保健食品中的应用。

背景技术：

随着医疗条件的改善，人类平均寿命在不断地延长，同时人口老龄化问题也逐渐严重。截至2006年底，全国65岁以上人口10419万人，占全国总人口的7.9％。预计到2050年人口达到最高峰值时，老年人口总量将超过4亿，老龄化水平推进到30％以上，接近于1980年全世界老年人口之和。随着人口老龄化形势日趋严峻，衰老机制、延缓衰老药物研究已经成为生命科学的热点和重点问题。衰老的机制复杂、学说繁多，迄今为止，解释衰老机理的理论或学说多达200余种，其中包括：遗传控制说、细胞端粒说、自由基损伤说、体细胞突变说、免疫紊乱说、线粒体损伤学说等(FosselM.Cell Senescence in HmanAging and Disease.In：Harman D.(Ed.)：Increasing healthy lifespan，conventionalmeasures and slowing the innate aging process.ANN N Y ACAD SCI，2002，959：14～23)。

款冬酮(tussilagone)是从中药款冬花(Tussilagofarfara L.)中分离出的一种活性单体成分。研究表明款冬酮具有抗炎、抗过敏、抗癌等活性，但是否具有抗衰老作用未见任何报道。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种款冬酮的医药新用途，以充分发挥款冬酮的药用价值。

本发明提供一种以款冬酮为活性成分在制备抗衰老药物或保健品中的应用。

所述款冬酮的结构式如下：

所述款冬酮采用现有技术制备得到。

本发明以款冬酮为活性成分，采用线虫这一模式生物，观察款冬酮对线虫寿命的影响，发现20μM浓度的款冬酮能延长线虫23.6％的平均寿命，25％的中位寿命以及25.8％的最高寿命。款冬酮作为活性成分可在制备抗衰老药物或保健品中应用。

附图说明

图1为本发明实施例2的线虫生存曲线图。

图2为本发明实施例2中不同剂量款冬酮给药组存活时间和和最高寿命图(各剂量组与空白组相比：P＜0.05*P＜0.01**)。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细、完整的说明。

实施例1款冬酮的制备

取干燥的款冬花1kg粉碎，用石油醚超声提取3次，每次100min，提取液过滤，减压浓缩得粗提取物1.23g。

取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水(10:5:11:3)置于分液漏斗中，静置分层，上相为固定相，下相为流动相，用泵将固定相灌满分离柱，取粗提取物溶于固定相中上样，当主机转速达到800rpm，以2ml/min流速泵入流动相，当流动相流出时根据检测器图谱收集目标成分，浓缩、干燥得款冬酮粗品。以石油醚-乙酸乙酯(35:1)为洗脱剂，采用硅胶柱对款冬酮粗品进行分离，用石油醚-乙酸乙酯(10:3)对各馏分进行薄层检测，合并含款冬酮的流分，减压浓缩干燥得款冬酮纯品。经高效液相色谱检测其纯度为99.3％。

实施例2款冬酮抗衰老药效学实验

1材料

1.1模式生物

秀丽隐杆线虫(Caenorhabditiselegans，C.elegans)N2由山西大学应用生物学研究所马恩波课题组友情提供。

1.2药物和试剂

大肠杆菌Escherichia coli OP50(E.coil OP50)由山西大学应用生物学研究所马恩波课题组友情提供，5-氟-2′-脱氧尿苷(FUdR)购自sigma公司(美国)，琼脂粉购自Solarbio公司(北京)，蛋白胨购自北京奥博星生物科技有限责任公司，其他无机试剂均购自天津市风船化学试剂有限公司。标准线虫培养基NGM培养基：每升培养基含3g氯化钠、21g琼脂粉、2.5g蛋白胨、1mL胆固醇乙醇溶液(浓度为5mg/mL)、1mL CaCl₂溶液(1mol/L)、1mL MgSO₄溶液(1mol/L)和25mLKH₂PO₄-K₂HPO₄缓冲溶液(pH＝6，浓度为1mol/L)。碱裂解液由0.5mol/L NaOH和0.5％NaOCl配制而成。

1.3仪器

恒温培养箱(上海一恒科学仪器有限公司)，体视显微镜(重庆澳浦光电科技有限公司)，高压灭菌锅(上海申安医疗器械厂)。

2方法

2.1实验分组

分为对照组和三个给药组，款冬酮给药组在培养基中的浓度分别为20μM，40μM，60μM。

2.2线虫同步化

用碱裂解液对在20℃培养的处于混合发育时期的线虫进行处理，获得虫卵，置于标准线虫培养基(NGM)板上培养，从而获得同步发育的幼虫。

2.3线虫常规培养

选用L4期雌雄同体N2线虫，转移至预先接种了E.coil OP50的NGM平板，于20℃培养箱中恒温培养。

2.4受试培养基的制备

对照组培养基中含50μmol/LFUdR；药物组培养基中含50μmol/LFUdR及不同浓度的款冬酮(20μM，40μM，60μM)。

2.5寿命观察

挑取同步化的L4线虫到各组培养基中，每组90条，每个板中有30条。从转移时刻起开始计算线虫存活天数，转移当天记为寿命实验第0天(day 0)。每天对线虫进行观察，记录线虫的死亡数。线虫死亡标准：丧失运动能力，多次触碰无反应。对平均寿命、中位寿命(每组线虫的中间寿命)、最高寿命(每组线虫最后存活的10只线虫的平均寿命)进行统计学比较。

3结果分析

运用SPSS16.0软件对线虫存活状况进行分析。绘制生存曲线图，结果显示20μM浓度的款冬酮能使空白组线虫的生存曲线右移，即有明显效果；40μM浓度的款冬酮对空白组线虫的生存曲线无明改变，即无明显效果；60μM浓度的款冬酮则使空白组线虫的生存曲线左移，即有抑制作用(图1)。

用Kaplan-Meier(KM)法对其平均寿命、最高寿命和中位寿命进行统计分析，与对照组相比，浓度为20μM的款冬酮能显著延长线虫的平均寿命、中位寿命和最高寿命，结果见表1(分别延长23.6％，25％，25.8％)。

表1 款冬酮对线虫寿命的影响(n＝90)

与空白组相比，P＜0.05*P＜0.01**

运用T检验对每个剂量组线虫存活天数及最高寿命进行分析(图2)。结果显示，20μM，40μM浓度的款冬酮给药组能明显延长线虫的存活天数(P<0.01)；60μM浓度的款冬酮给药组能明显降低线虫存活天数(P<0.01)。20μM浓度的款冬酮组最高寿命与空白组之间存在明显差异(P<0.01)，能明显延长线虫的最高寿命；40μM浓度的款冬酮最高寿命与空白组之间无明显差异，即对线虫的最高寿命无明显影响；60μM浓度的款冬酮最高寿命与空白组之间存在明显差异(P<0.01)，能降低线虫的最高寿命。

运用卡方分析对20μM款冬酮组与空白组线虫的(根据生存曲线图1第4天差异开始)存活率进行统计分析。发现从第11天起20μM浓度的款冬酮能明显延长(p<0.05)空白组线虫的寿命(表2)。

表2 20μM款冬酮与空白组比较卡方检验结果表(P值)