一种用于治疗艾滋病的辅助用药的药物组合物及其制备方法与流程

本发明涉及药物组合物领域，具体涉及一种用于治疗艾滋病的辅助用药的药物组合物及其制备方法。

背景技术：

艾滋病是一种危害性极大的传染病，由感染艾滋病病毒(hiv病毒)引起。hiv是一种能攻击人体免疫系统的病毒。它把人体免疫系统中最重要的cd4t淋巴细胞作为主要攻击目标，大量破坏该细胞，使人体丧失免疫功能。因此，人体易于感染各种疾病，并可发生恶性肿瘤，病死率较高。目前的现有医药中，缺乏可维持、提高或重建艾滋病患者的免疫系统的药物。

技术实现要素：

为解决上述现有技术中存在的问题，本发明提供一种用于治疗艾滋病的辅助用药的药物组合物(以下，有时称作“本发明的药物组合物”)，本发明的药物组合物具有提高对hiv的免疫能力、重建机体免疫系统的功效。

本发明的用于治疗艾滋病的辅助用药的药物组合物，该药物组合物含有下述成分：

如上所述的药物组合物，优选含有下述重量份的各成分：

进一步优选含有下述重量份的各成分：

还优选含有下述重量份的各成分：

还优选含有下述重量份的各成分：

如上所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂或口服液体制剂。

如上所述的用于治疗艾滋病的辅助用药的药物组合物的制备方法，其特征在于，将各成分的中药材经水提或醇提后制成浸膏干粉，再加入药物可接受的辅料，制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂或口服液体制剂。

如上所述的制备方法，其特征在于，所述水提是将各成分的中药材用10-35倍量的水煎煮2-4次，每次1-6小时；所述醇提是将各成的中药材用5-15倍量的浓度为30～90wt％的乙醇煎煮2-4次，每次1-6小时。

如上所述的制备方法，其特征在于，所述药物可接受的辅料包括粘合剂、崩解剂、助流剂、增塑剂和/或稀释剂。

如上所述的用于治疗艾滋病的辅助用药的药物组合物的制备方法，其特征在于，

(1)将除灵芝以外的所述中药材浸泡30-120分钟备用；

(2)将除灵芝以外的所述已浸泡中药材经水提或醇提后制成提取液，30-90℃减压浓缩至相对密度为1.10-1.58的浸膏；

(3)将灵芝粉碎成细粉，所述细粉为全部能通过五号筛并且能够通过六号筛的粉末不少于95％；

(4)将步骤(3)得到的灵芝细粉加入到步骤(2)的浸膏中，再加入药物可接受的辅料，制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂或口服液体制剂。

如上所述的制备方法，其特征在于，所述水提是将各成分的中药材用10-35倍量的水煎煮2-4次，每次1-6小时；所述醇提是将各成的中药材用5-15倍量的浓度为30～90wt％的乙醇煎煮2-4次，每次1-6小时。

如上所述的制备方法，其特征在于，所述药物可接受的辅料包括粘合剂、崩解剂、助流剂、矫味剂、增塑剂和/或稀释剂。

本发明还提供一种用于治疗艾滋病的辅助用药的药物组合物的质量控制方法，其采用高效液相色谱法测定待测试样品中黄芩苷的含量。

如上所述的质量控制方法，高效液相色谱法测定待测试样品中黄芩苷的含量的色谱条件为：以体积比为30:70的乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相进行等度洗脱，检测波长为280nm。

如上所述的质量控制方法，其具体包括下述步骤：

(1)取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，制成黄芩苷对照品溶液；

(2)取待测的治疗艾滋病辅助用药的药物组合物适量，研细，取约0.5g，精密称定，置100ml的容量瓶中，加甲醇40ml，称定重量，超声提取30min，用甲醇补足减失的重量，滤过，制成供试品溶液；

(3)另取适量缺少黄芩的阴性对照药材，精密称定，置100ml的容量瓶中，加甲醇40ml，称定重量，超声提取30min，用甲醇补足减失的重量，滤过，制成缺黄芩的阴性对照溶液；

(4)以十八烷基键合硅胶为填充剂，以体积比为30:70的乙腈-0.05％的磷酸溶液为流动相，设定流速为0.8ml/min，检测波长为280nm，柱温为28℃，理论塔板数按黄芩苷峰计不低于2500；取黄芩苷对照品溶液及供试品溶液各10μl，在280nm波长下检测。

本发明的药物组合物，是在金元医家李东垣《脾胃论》中所载补中益气汤基础上，根据艾滋病的病因、病机和临床证候，结合现代中医药研究成果，按照中医理法方药的组方原则，筛选组合而成。本发明的药物组合物用黄芪补中益气，扶正培本，康艾强身，以为主药；辅以灵芝益精补血，强健筋骨，固本强身。配党参养阴生津，补气益血；佐以鱼腥草清热化毒，祛毒除邪。合天花粉滋阴生津，泻火排毒。伍黄芩清热燥湿，凉血解毒。配柴胡疏理肝气，透邪解郁；使以甘草益气补中，清热解毒，协调药性。全方诸药为伍，则气、血双补，毒、热俱解，正气得复，元气充盈，而艾邪必袪。组方中黄芪、党参、灵芝具有增强巨噬细胞吞噬能力，对机体各系统均具有正向调节和保护修复作用；鱼腥草、天花粉、黄芩、柴胡、甘草具有较佳的抗病毒和抗菌作用，并可增强机体对hiv的免疫能力。该组方多年来在兰州市肺科医院感染科使用，作为艾滋病的辅助用药，具有清热祛邪、扶正固本之效，能够在抑制hiv的同时，重建机体免疫体系。此外，颗粒剂具有吸收快，显效迅速；剂量小，口感好；生产设备简单易操作；服用、携带、贮藏和运输方便的特点，中药相对于西药在安全性、经济性等方面具有优势。

附图说明

图1是对照品溶液高效液相色谱图。

图2是供试品溶液高效液相色谱图。

图3是阴性对照溶液高效液相色谱图。

具体实施方式

以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。

一、用于治疗艾滋病的辅助用药的药物组合物的制备及质量控制

实施例1

称量下述重量的各成分：黄芪30g、灵芝15g、党参15g、鱼腥草12g、天花粉12g、黄芩12g、柴胡12g、甘草9g。

将上述灵芝药材粉碎，粉粹成可全部通过五号筛并且能够通过六号筛的粉末不少于95％的细粉；其余黄芪等药材加水浸泡1小时，分别以10倍、8倍、8倍水加热回流提取三次，第一次1小时，第二次1小时，第三次0.5小时，合并滤液，60℃减压浓缩成相对密度为1.20的浸膏，将其与灵芝细粉混匀，加入适量可溶性淀粉，制粒，干燥，整粒，制成颗粒剂。

实施例2

称量下述重量的各成分：黄芪15g、灵芝10g、党参10g、鱼腥草8g、天花粉8g、黄芩7g、柴胡6g、甘草5g。

将上述灵芝药材粉碎，粉粹成可全部通过五号筛并且能够通过六号筛的粉末不少于95％的细粉；其余黄芪等药材加水浸泡1小时，以15倍、10倍、10倍水加热回流提取三次，第一次1小时，第二次2小时，第三次3小时，合并滤液，60℃减压浓缩成相对密度为1.38的浸膏，将其与灵芝细粉混匀，加入适量可溶性淀粉，制粒，干燥，整粒，制成胶囊剂。

实施例3：

称量下述重量的各成分：黄芪45g、灵芝20g、党参20g、鱼腥草18g、天花粉16g、黄芩17g、柴胡18g、甘草14g。

将上述灵芝药材粉碎，粉粹成可全部通过五号筛并且能够通过六号筛的粉末不少于95％的细粉；其余黄芪等药材加水浸泡1小时，以3倍、5倍、5倍水加热回流提取三次，第一次1小时，第二次1小时，第三次1小时，合并滤液，60℃减压浓缩成相对密度为1.58的浸膏，将其与灵芝细粉混匀，干燥得到浸膏干粉，加入适量可溶性淀粉，硬脂酸镁0.8g、滑石粉5g，制成片剂。

实施例4：

称量下述重量的各成分：黄芪16g、灵芝16g、党参16g、鱼腥草13g、天花粉11g、黄芩13g、柴胡14g、甘草10g。

将上述八味中药材粉碎成粗粉，过筛，混匀，用5倍量的乙醇(浓度70wt％)，煎煮2次，每次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩干燥得到浸膏干粉。加入蔗糖30g、香精20g，加水制成1000ml并调节ph值至7，摇匀，静置12小时，过滤，灌装，灭菌，制成口服液。

实施例5：

称量下述重量的各成分：黄芪20g、灵芝15g、党参20g、鱼腥草15g、天花粉9g、黄芩9g、柴胡10g、甘草9g。

将上述八味中药材粉碎成粗粉，过筛，混匀，用15倍量的水，煎煮3次，每次3小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至适量，干燥得到浸膏干粉。浸膏干粉溶于纯化水中，加单糖浆至1000ml，制成糖浆。

实施例6：对上述实施例1-5中制备得到的用于治疗艾滋病的辅助用药药物组合物进行质量控制，该检测步骤如下：

(1)取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，制成黄芩苷对照品溶液。

(2)取待测治疗艾滋病的辅助用药的药物适量，研细，取约0.5g，精密称定，置100ml的容量瓶中，加甲醇40ml，称定重量，超声提取30min，用甲醇补足减失的重量，滤过，制成供试品溶液；

(3)另取适量缺少黄芩的阴性对照药材，精密称定，置100ml的容量瓶中，加甲醇40ml，称定重量，超声提取30min，用甲醇补足减失的重量，滤过，制成缺黄芩的阴性对照溶液；

(4)以十八烷基键合硅胶为填充剂，以体积比为30:70的乙腈-0.05％的磷酸溶液为流动相，设定流速为0.8ml/min，检测波长为280nm，柱温为28℃，理论塔板数按黄芩苷峰计不低于2500；取黄芩苷对照品溶液及供试品溶液各10μl，在280nm波长下检测。

具体请参见图1-图3，其中，图1是对照品溶液高效液相色谱图。图2是供试品(实施例1制得的药物组合物)溶液高效液相色谱图。图3是阴性对照溶液高效液相色谱图。

结果表明，阴性对照在与黄芩苷对照品保留时间相同位置上无色谱峰出现，表明其它药材对测定结果无影响，同时上述实施例1-5中制备得到的用于治疗艾滋病的辅助用药药物组合物中黄芩苷的含量测定结果的范围为5.31-5.82mg/g之间，该药物组合物具有质量可控性。

在上述测定过程中，对于系统适用性实验包括如下步骤：

(1)线性关系的考察

取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含1.06mg的溶液，摇匀，作为储备液。精密吸取上述储备溶液0.2ml、0.6ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml、1.6ml、2.0ml至10ml容量瓶中，用乙腈-0.05％磷酸水(30:70)稀释至刻度，微孔滤膜滤过，取续滤液，各进样10μl，测定峰面积，以对照品峰面积为纵坐标(y)，浓度为横坐标(x)进行线性回归，得回归方程y＝9e+07x–29273(r＝0.9996)，线性范围为0.212～2.12μg。

(2)精密度试验精密吸取同一对照品溶液10μl，连续进样6次，测定色谱峰的峰面积，黄芩苷的rsd为0.31％，结果表明，精密度良好。

(3)稳定性试验精密吸取同一对照品溶液10μl，分别于0、2、4、6、12小时进样，测定色谱峰的峰面积，得黄芩苷峰面积的rsd值为0.82％，结果表明在0～12小时内稳定性良好。

(4)重复性试验取同一批号待测治疗艾滋病的辅助用药药物组合物适量，研细，取约0.5g的5份样品，分别精密称定，按照样品制备方法进行样品处理，分别进样测定，得到黄芩苷的rsd为1.45％，结果表明该方法重现性较好。

(5)回收率试验取已知含量的同一批号待测治疗艾滋病的辅助用药药物组合物适量，研细，取约0.25g，精密称定，加入一定量的黄芩苷对照品，依法测定，根据色谱峰峰面积值，计算回收率，得到rsd为1.19％，见表5。结果表明，本法回收率良好。

表5回收率结果

(6)样品的测定

取实施例1-3待测治疗艾滋病的辅助用药药物组合物适量，研细，各取约0.5g，精密称定，置100ml的容量瓶中，加甲醇40ml，称定重量，超声提取30min，用甲醇补足减失的重量，滤过，制成供试品溶液，精密吸取续滤液10μl进样，按上述色谱条件测定黄芩苷的含量，结果见表6。

表6样品含量测定结果(n＝3)

二、药效实验

增强免疫力药效设计

(一)本发明药物组合物对抗运动性疲劳作用的实验研究

1实验动物

健康成年昆明种小鼠48只，体重18～22g，雌雄不限。

2方法与结果

2.1实验方法

2.1.1动物分组

将48只小鼠随机分为三组，实验组、阳性对照组、空白对照组，每组16只。实验组灌胃本发明药物组合物3.93g/(kg·d)，阳性对照组灌胃红景天口服液(北京红景天技术开发有限公司)1ml/d，空白对照组灌胃蒸馏水10ml/(kg·d)。每组连续给药28天。

2.1.2对小鼠负重游泳时间的影响：末次灌胃0.5h后，将分组后的小鼠尾根部负荷5％体重的铅块，按组别放入泳池中游泳(水深30cm,温度(25±1.0)℃，记录小鼠入水游泳至沉入水底不再浮起所需的时间。

2.1.3对小鼠常压缺氧能力的影响：按照上述分组要求，同样选取三组小鼠，末次灌胃0.5h后，将小鼠置于加有5％钠石灰的250ml的磨口瓶中，瓶口用凡士林涂封，记录小鼠自进瓶开始至死亡所经历的时间。

2.1.4对小鼠hb含量的影响：按照以上分组要求，选取三组小鼠，末次灌胃0.5h后，摘取小鼠眼球采血，应用全自动血细胞分析仪(迈瑞bc-5000，广东)测定每只小鼠hb含量。

2.1.5对运动后小鼠血乳酸含量的影响：选取三组小鼠，末次灌胃0.5h后，采血(在眼内眦静脉丛处)20μl，应用血乳酸分析仪(ysi1500sport，美国)测定血乳酸含量。然后在不负重的情况下，放入泳池中游泳[水温(30±1.0)℃]，10min后取出，立即采血测定血乳酸含量，休息20min后再次采血测定血乳酸含量。对比三组实验小鼠运动前、运动后即刻和运动结束20min后体内血乳酸含量的变化。

2.1.6对小鼠血bun的影响：选取三组小鼠，末次灌胃0.5h后，放入泳池中游泳[水温(30±1.0)℃]，90min后取出，立即摘取小鼠眼球采血，离心血清，测定bun含量。

2.2统计学分析

所有数据用均数±标准差表示，组间均数比较用t检验。采用spss16.0统计软件进行数据处理。进行单因素方差分析，方差具有齐性时用lsd检验，方差不齐用dunnett，st3检验进行各组间比较。p<0.05表示差异有显著性。

2.3结果

2.3.1对小鼠负重游泳时间及常压缺氧耐力的影响：经本药物组合物灌胃后的小鼠与空白对照组相比，负重游泳时间延长118.9％(p<0.01)，与灌胃红景天口服液的阳性对照组比较也有明显延长(p<0.01)；实验组小鼠的缺氧耐力也有显著提高40.2％(p<0.01)，但与阳性对照组比较差异无显著性(p>0.05，n＝16)(见表1)。

表1本发明药物组合物对小鼠负重游泳时间及常压缺氧耐力的影响(min，)

注：与阳性对照组比较，*p<0.05，**p<0.01；

与空白对照组比较，#p<0.05，##p<0.01

2.3.2对小鼠hb含量和运动后血bun的影响：结果显示，服用本药物28天后，小鼠hb含量升高34％(p<0.01)，与阳性对照组比较差异无显著性(p>0.05，n＝16)，服用本药物小鼠运动后血清bun含量下降25％(p<0.01)，与阳性对照组相比减少12％(p<0.01，n＝16)(见表2)。

表2本发明药物对小鼠hb和bun的影响

注：与阳性对照组比较，*p<0.05，**p<0.01；

与空白对照组比较，#p<0.05，##p<0.01

2.3.3对小鼠血乳酸值的影响：实验结果表明，各组小鼠运动前血乳酸值差异均无统计学意义(p>0.05)。游泳后即刻，各组小鼠血乳酸值均有明显增高(p<0.05)；与空白对照组比较，实验组和阳性对照组均有明显差异(p<0.01)，即服用红景天口服液和服用该药物的小鼠血乳酸值升高水平均明显低于空白对照组，而阳性组和实验组之间无明显差异(p<0.05)。休息20分钟后，各组血乳酸值均有明显降低(p<0.05)；实验组和阳性对照组血乳酸值均低于空白对照组(p<0.01)，而实验组与阳性对照组之间也存在差异(p<0.01，n＝16)(见表3)。

表3本发明药物组合物对小鼠乳酸值的影响(mmol/l，)

注：与阳性组比较，*p<0.05，**p<0.01

实验结果表明：本药物能够明显延长小鼠负重游泳运动时间，说明其具有较强的延缓疲劳的作用，能够有效地提高运动耐力；能有效增强机体对缺氧环境的耐受能力；能够显著提高hb含量；能够减少运动后bun的含量，其减少幅度较红景天更明显；能明显减少小鼠运动后体内血乳酸的堆积。这表明无氧糖酵解受到抑制，细胞有氧利用率得到提高，从而增强了机体的有氧代谢和能量供应；休息20min后，血乳酸值大大减少，疲劳得到明显缓解。

(二)本发明药物组合物增强机体增强非特异性免疫功能的实验研究

环磷酰胺(cyclophosphamide，ctx)作为一种细胞毒化疗药物，同时也属于烷化剂类免疫抑制剂，其作用主要是破坏dna的结构，从而阻断其复制，导致细胞死亡。而在免疫毒理学中，环磷酰胺是制备免疫抑制模型的常用药物。

1材料

试剂、器械及药物

环磷酰胺(sigma公司)，按60mg/kg体重(周剂量)，用蒸馏水配制，每日经口给予；电子便携式天平(型号：jm5102，余姚市纪铭称重校验设备有限公司，精密度0.1g)；注射器(规格：1ml)；注射针头；灌胃针头；干湿温度计；棕色试剂瓶；阳性对照组：阳性对照药:鲨肝醇，不做任何处理，仅用饲料喂养；受试组：本发明药物组。

1.2实验动物

balb/c小鼠72只，雌性，6～8周龄，体重18～22g。

2方法与结果

2.1对环磷酰胺模型小鼠的升高白细胞作用

取小鼠36只，随机分为3组，空白对照组每日灌胃蒸馏水10ml/kg·d，其余组每日灌胃60mg/kg环磷酰胺，周期为30天。实验组灌胃本发明药物组合物1.0g/(kg·d)，阳性对照组灌胃鲨肝醇10ml/kg.d，每组连续给药28天。末次给药1小时后，小鼠眼眶取血测白细胞数。结果显示：环磷酰胺可使小鼠血白细胞数明显下降(p<0.01)，本发明药物可对抗环磷酰胺所致小鼠白细胞下降的作用，见表4。

表4本发明药物组合物对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少的影响

注：与阳性对照组比较，*p<0.05，**p<0.01

与空白对照组比较，△p<0.05，△△p<0.01

2.2对环磷酰胺模型小鼠免疫器官的影响

取小鼠36只，随机分为3组，实验方法同上。于末次给药1小时后，解剖取小鼠胸腺、脾脏，称重并计算脏器指数。结果显示：环磷酰胺可造成小鼠胸腺、脾脏萎缩，器官脏器指数显著减轻，而本发明药物组合物有对抗环磷酰胺抑制免疫器官的作用，对非特异性疫功能有一定促进作用，见表5。

表5本发明药物组合物对环磷酰胺所致小鼠的胸腺、脾脏重量减轻的影响

注：与阳性对照组比较，*p<0.05，**p<0.01

与空白对照组比较，△p<0.05，△△p<0.01。