专利名称:一种微生物抗氧化剂的生产方法
技术领域：
本发明涉及一种微生物抗氧化剂的生产方法，该微生物抗氧化剂可促使营养物质 的转化吸收、提高机体免疫力和抵抗力，有利于各种疾病的预防和康复，属于生物制品技术 领域。
背景技术：
现代医学证明，生物体许多疾病的发生大多是由机体内不饱和脂肪酸共价键上一 系列自由基的反应诱导所致。最新研究证明，氧自由基可使生物蛋白质聚合，核酸主键断 裂、碱基修饰和氢键破坏，从而使机体内大分子物质产生过氧化变性、交联或断裂，引起细 胞结构和功能的破坏，导致机体组织损害和器官退行性变化。
在机体内的超量自由基攻击机体细胞膜富含的脂质和蛋白质，产生脂质过氧化反 应，导致脂质过氧化物积累；超量自由基还攻击生物膜及DNA键，破坏其结构，使其功能丧 失；超量自由基又攻击酶邻近特定氨基酸残基，使酶失活，并使机体抗氧化功能减弱，最终 引起机体免疫力下降。
公开号为CN1471847的专利公开了一种苷肽组合物及其制备方法和应用，将微生 物菌种经液体培养后作发酵培养，发酵物用碱抽提后进行核酸酶水解制成核苷酸；将动物 脏腑破碎、勻浆后用蛋白酶水解，热处理，上清液经过滤、透析后冷冻浓缩，制成细胞活性多 肽；二者按一定比例混合。这种苷肽组合物仅仅是两种普通方法制备产物的简单混合，在工 艺上无突出新颖之处。
发明内容
本发明的目的是一种微生物抗氧化剂的生产方法，所述微生物抗氧化剂由多种活 性成分组成，在进入人或动物体内后，其所含的抗自由基物质能拮抗体内过量的自由基，避 免组织的氧化损伤，还可起到营养和修复细胞、促进细胞代谢的作用，形成人或动物机体内 的良性生态环境，促使营养物质的转化吸收、提高机体免疫力，有利于各种疾病的预防和康
Μ. ο
为了达到上述目的，本发明提供了一种微生物抗氧化剂的生产方法，其特征在于， 具体步骤为
第一步将沼泽红假单胞菌、啤酒酵母菌和植物乳杆菌在同一培养基中在25-35°C 培养18-48h ；所述培养基由下述重量百分比的原料组成灵芝孢子粉0. 01-1%、绞股蓝 0. 1-2%、刺梨0. 1-2%、野生蜂蜜1-4%、海带0. 5-3. 5%、米糠2_5%和无菌水83-96. 2% ；
第二步将第一步得到的三种菌种同时接种到肉汤培养基中，在25-35°C下培养22-26 小时，取培养液进行划线分离，将分离到的菌种单独挑出在肉汤培养基中在25-35°C进行纯 种培养18-48h，保存作为生产菌种；
第三步分别将第二步得到的生产菌种分别划线转接到装有营养琼脂培养基的茄子瓶 中，在25-35°C温度下培养45-50小时，然后放入2_6°C的冰箱中进行保存；第四步将第三步得到的沼泽红假单胞菌35-50wt%、啤酒酵母菌25-50wt%和植物乳杆 菌l-40wt%的混合物按1 :25-100的重量比例接种到肉汤培养基中，放入搅拌机中搅拌，在 温度35°C -40°C、搅拌机转速为180r/min-220r/min条件下培养12-17小时，进行菌种扩 培；
第五步将经过扩培的菌种按照2-4%的重量比例接种于培养基中搅拌混合均勻后，在 培养温度35-40°C下密闭发酵7-14天；所述的培养基由下述重量百分比的原料组成灵芝 孢子粉0. 01-1%、绞股蓝0. 1-2%、刺梨0. 1-2%、野生蜂蜜1-4%、海带0. 5-3. 5%、米糠2-5% 和无菌水83-96. 2%，培养基pH值为6.0，经过121°C蒸汽灭菌30min ；
第六步发酵结束后，将发酵液通过螺旋沉降离心机后再进入碟式离心机，将离心后得 到的液体在115第七步在灭菌后的液体中通入无菌空气进行曝气，通气量为1 :0. 2，曝气10-14天； 第八步将曝气后的液体灌装入经消毒的瓶中，即得到微生物抗氧化剂。
本发明采用由筛选出的菌种与多种有机营养物质混合，通过微生物发酵和后处理 工艺制成，在培养物中含有丰富的胡萝卜素、维生素Bi、B2及B12、还原型维生素C、维生素 P的槲皮酮-3-0吡喃葡萄糖(栎素)、槲皮酮(类黄酮)、肌醇、L-天门冬氨酸、L氨基丙酸及 多种微量元素的金属衍生物。
微生物抗氧化剂所含丰富的生物抗氧化物质能够直接清除自由基，并具有通过 SOD传递电子而增强其清除自由基的特殊功效，消除自由基对机体组织器官正常功能的负 面影响，增强组织细胞尤其是代谢强度极高的乳腺细胞的机能，从而提高机体的代谢水平， 促进免疫器官的发育，提高增强机体细胞免疫和体液免疫水平，提高血浆中cAMP水平及 cAMP/cCMP的比值，同时显著提高血浆GH和T3、T4浓度。
本发明的优点是
1、有效清除体内产生的活性氧自由基，保护细胞膜的正常结构，保证体内活性分子的 正常功能；
2、促进机体免疫器官的发育，提高机体免疫力和综合抗病力；
3、保护细胞的活力，可使NK细胞、B细胞、T细胞等免疫系统的细胞还有巨噬细胞等等 的活性明显升高；
4、可改善所有疾病且转向安稳，免疫力、自然治愈力的提升；
5、加速手术后、疾病后的体力回复，改善自律神经失调症；
6、防止老化，回复肌肤的润泽、白发变黑发；
7、活化脑部机能，改善并可预防老人痴呆症的发生。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。本发明使用的各菌种皆从(中国农 业微生物菌种保藏管理中心)购买，菌种相关信息如下
菌种菌种号拉丁名称沼泽红假单胞菌ACCC10649Rhodopseudomonas pal us tris啤酒酵母菌ACCC20065Saccharomyces cere visiae植物乳杆菌ACCCl1118Lactobacil1 us plantarum
实施例1第一步将沼泽红假单胞菌、啤酒酵母菌和植物乳杆菌在同一培养基中在25°C培养 30h;所述培养基由下述重量百分比的原料组成灵芝孢子粉0. 04%、绞股蓝0. 1%、刺梨 0. 3%、野生蜂蜜1%、海带2. 5%、米糠豆饼粉4%、无菌水92. 06% ；
第二步将第一步得到的三种菌种同时接种到肉汤培养基中，在35°C下培养22小时， 取培养液进行划线分离，将分离到的菌种单独挑出在肉汤培养基中在25°C进行纯种培养 30h，保存作为生产菌种；
第三步分别将第二步得到的生产菌种分别划线转接到装有营养琼脂培养基的茄子瓶 中，在35°C温度下培养45小时，然后放入2°C的冰箱中进行保存；
第四步将第三步得到的沼泽红假单胞菌35wt%、啤酒酵母菌25wt%和植物乳杆菌 40衬％的混合物1 :50接种到肉汤培养基中，放入搅拌机中搅拌，在温度35°C、搅拌机转速为 180r/min条件下培养12小时，进行菌种扩培；
第五步将经过扩培的菌种按照2%的重量比例接种于培养基中搅拌混合均勻后，在 培养温度35°C下密闭发酵7天；所述的培养基由下述重量百分比的原料组成灵芝孢子粉 0. 04%、绞股蓝0. 1%、刺梨0. 3%、野生蜂蜜1%、海带2. 5%、米糠豆饼粉4%、无菌水92. 06%,培 养基PH值为6. 0，经过121°C蒸汽灭菌30min ；
第六步发酵结束后，将发酵液通过螺旋沉降离心机后再进入碟式离心机，将离心后得 到的液体在115°C温度下灭菌消毒30min ；
第七步在灭菌后的液体中通入无菌空气进行曝气，通气量为1 :0. 2，曝气10天； 第八步将曝气后的液体灌装入经消毒的瓶中，即得到微生物抗氧化剂。 实施例2
第一步将沼泽红假单胞菌、啤酒酵母菌和植物乳杆菌在同一培养基中在30°C培养 28h;所述培养基由下述重量百分比的原料组成灵芝孢子粉0. 02%、绞股蓝0. 12%、刺梨 0. 4%、野生蜂蜜1. 3%、海带3. 5%、米糠豆饼粉3%、无菌水91. 66%，pH值调节至6. 0，温度为 121 °C，蒸汽灭菌30min ；
第二步将第一步得到的三种菌种同时接种到肉汤培养基中，在40°C下培养26小时， 取培养液进行划线分离，将分离到的菌种单独挑出在肉汤培养基中在30°C进行纯种培养 28h，保存作为生产菌种；
第三步分别将第二步得到的生产菌种分别划线转接到装有营养琼脂培养基的茄子瓶 中，在40°C温度下培养50小时，然后放入6°C的冰箱中进行保存；
第四步将第三步得到的沼泽红假单胞菌50wt%、啤酒酵母菌50wt%的混合物按1 :75 的重量比例接种到肉汤培养基中，放入搅拌机中搅拌，在温度40°C、搅拌机转速为220r/ min条件下培养17小时，进行菌种扩培；
第五步将经过扩培的菌种按照4%的重量比例接种于培养基中搅拌混合均勻后，在培 养温度40°C下密闭发酵14天；所述的培养基由下述重量百分比的原料组成灵芝孢子粉 0. 02%、绞股蓝0. 12%、刺梨0. 4%、野生蜂蜜1. 3%、海带3. 5%、米糠豆饼粉3%、无菌水91. 66%， PH值调节至6.0，温度为121 °C，蒸汽灭菌30min ；
第六步发酵结束后，将发酵液通过螺旋沉降离心机后再进入碟式离心机，将离心后得 到的液体在130°C温度下灭菌消毒60min ；
第七步在灭菌后的液体中通入无菌空气进行曝气，通气量为1 :0. 2，曝气14天；第八步将曝气后的液体灌装入经消毒的瓶中，即得到微生物抗氧化剂。
实验研究了微生物抗氧化剂对大鼠、母猪繁殖性能和自由基代谢的影响，结果表明微 生物抗氧化剂明显地提高了大鼠和母猪的繁育性能，并对其免疫系统、消化系统具有调整 和保护作用。动物的繁育过程是个高代谢过程，在这个过程中会产生超量的自由基，过多的 自由基如果不及时清除，必定会损伤机体组织，可能是微生物抗氧化剂清除了多余的自由 基，从而维护了繁殖器官的结构和功能的完整性。
同时还研究了微生物抗氧化剂对大鼠自由基和肝脏损伤的保护作用，微生物抗氧 化剂可以保护机体和肝细胞内的内源抗氧化系统，抑制LPS (3mg/Kg-WB)产生的自由基造 成的脂质过氧化，抑制过多的自由基和脂质过氧化物对肝细胞的破坏作用，从而达到保护 肝脏的作用。
得到微生物抗氧化剂中各个成分检测数据如下
权利要求
一种微生物抗氧化剂的生产方法，其特征在于，具体步骤为第一步将沼泽红假单胞菌、啤酒酵母菌和植物乳杆菌在同一培养基中在25 35℃培养18 48h；所述培养基由下述重量百分比的原料组成灵芝孢子粉 0.01 1%、绞股蓝 0.1 2%、刺梨0.1 2%、野生蜂蜜 1 4%、海带0.5 3.5%、米糠2 5%和无菌水83 96.2%；第二步将第一步得到的三种菌种同时接种到肉汤培养基中，在35 40℃下培养22 26小时，取培养液进行划线分离，将分离到的菌种单独挑出在肉汤培养基中在25 35℃进行纯种培养18 48h，保存作为生产菌种；第三步分别将第二步得到的生产菌种分别划线转接到装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在35 40℃温度下培养45 50小时，然后放入2 6℃的冰箱中进行保存；第四步将第三步得到的沼泽红假单胞菌35 50wt%、啤酒酵母菌25 50wt%和植物乳杆菌0 40wt%的混合物按125 100的重量比例接种到肉汤培养基中，放入搅拌机中搅拌，在温度35℃ 40℃、搅拌机转速为180r/min 220r/min条件下培养12 17小时，进行菌种扩培；第五步将经过扩培的菌种按照2 4%的重量比例接种于培养基中搅拌混合均匀后，在培养温度35 40℃下密闭发酵7 14天；所述的培养基由下述重量百分比的原料组成灵芝孢子粉 0.01 1%、绞股蓝 0.1 2%、刺梨0.1 2%、野生蜂蜜 1 4%、海带0.5 3.5%、米糠2 5%和无菌水83 96.2%，培养基pH值为6.0，经过121℃蒸汽灭菌30min；第六步发酵结束后，将发酵液通过螺旋沉降离心机后再进入碟式离心机，将离心后得到的液体在115－130℃温度下灭菌消毒30－60min；第七步在灭菌后的液体中通入无菌空气进行曝气，通气量为10.2，曝气10 14天；第八步将曝气后的液体灌装入经消毒的瓶中，即得到微生物抗氧化剂。
专利摘要
本发明提供了一种微生物抗氧化剂的生产方法，其特征在于，具体步骤为将沼泽红假单胞菌、啤酒酵母菌和植物乳杆菌在同一培养基中培养；将三种菌种同时接种到肉汤培养基中培养，取培养液进行划线分离，将分离到的菌种单独挑出进行纯种培养；将生产菌种转接到装有营养琼脂培养基的茄子瓶中培养；将沼泽红假单胞菌、啤酒酵母菌和植物乳杆的混合物接种到肉汤培养基中进行菌种扩培；将经过扩培的菌种接种于培养基中发酵即得到微生物抗氧化剂。本发明优点是能有效清除体内产生的活性氧自由基，保护细胞膜的正常结构，保证体内活性分子的正常功能。
文档编号C12N1/16GKCN101947295SQ201010506280
公开日2011年1月19日 申请日期2010年10月14日
发明者江瀚 申请人:上海创博食品技术发展有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan