专利名称：新的大环内酯类化合物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的康卡那霉素(concanamycin)类化合物及康卡那霉素类化合物在人体在动物体的预防和治疗处理中的应用。
在人体和动物体内，破骨细胞对老骨组织的连续吸收作用和成骨细胞的连续骨再生作用之间有一个动态平衡。在健康机体内，骨吸收和再生是密切联系的，从而使总骨量保持恒定。在促骨性疾病如骨缺乏症中，吸收作用超过再生作用，导致骨组织的净损失。破骨细胞位于骨骼表面的腔隙内，其吸收活性是通过质子分泌而使骨骼和破骨细胞膜之间的细胞外间隙酸化。所产生的低pH值使骨骼脱矿质，并激活溶酶体酶类从而使所释放出的胶原基质降解。
酸化机理的研究结果表明，位于破骨细胞膜内的一种酶，即ATP依赖性质子泵(或H+-ATP酶)，尤其是破骨细胞质子泵，在跨过该膜的pH梯度的形成和维持中起到决定性的作用。破骨细胞质子泵属于多体液泡类的H+-ATP酶，这类酶存在于多种细胞内液泡(如溶酶体、内涵素包被泡囊和嗜铬颗粒)的膜内。抑制破骨细胞质子泵，并因此而抑制酸化过程，是抑制骨质疏松和其他骨缺乏疾病中骨组织损失的一种方法。
本申请涉及的是提供破骨细胞质子泵抑制剂，因此涉及适于治疗以骨组织损失为特征的疾病的药物组合物。
康卡那霉素A、B和C是可由链霉菌制取的大环内酯类抗生素，已知这些抗生素是液泡H+-ATP酶的强烈抑制剂(S.Drose等，Biochemistry323902-3906，1993)。由于液泡H+-ATP酶对许多细胞内功能来说都是至关重要的，所以预计这类酶的抑制剂会有很高的细胞毒性。但出人意料的是，现已发现某些康卡那霉素类化合物是具有高活性的、极具特异性的破骨细胞质子泵抑制剂(OPPI)，也就是说，这些破骨细胞质子泵抑制剂没有任何可测出的毒性(相对说来不影响液泡H+-ATP酶)，因此具有广泛的医疗应用。已知的康卡那霉素A、B和C的特征是下列结构 康卡那霉素A∶Ra＝CH3;Rb＝O-C(＝O)-NH2康卡那霉素B∶Ra＝H;Rb＝O-C(＝O)-NH2康卡那霉素C∶Ra＝CH3;Rb＝OH.
本发明涉及式(Ⅰ)化合物在制备适于预防和治疗对破骨细胞质子泵的抑制有反应的疾病的药物中的应用 其中R1为羟基、2-羟基乙氧基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷酰氧基、卤素、氨基、叠氮基、酮基、对硝基苯磺酰基、或下式的吡喃氧基 其中X为下式基团 其中R3为羟基、C1-C4烷酰氧基或有机磺酰氧基;
R4为羟基、C1-C4烷酰氧基或氨基甲酰氧基;
R2为氢、氢过氧基、羟基、C1-C4烷氧基;优选氢、羟基或甲氧基;
Y为下式基团 其中R5为羟基或C1-C4烷酰氧基;
R6和R7彼此独立地为氢或优选为甲基。
C1-C4烷氧基的例子有乙氧基，特别是甲氧基。C1-C4烷酰氧基的例子有甲酰氧基、丙酰氧基，特别是乙酰氧基。有机磺酰氧基的例子有C1-C4烷磺酰氧基，例如甲磺酰氧基，或者未取代或被C1-C4烷基(如甲基)、卤素(如氯或溴)或硝基单取代的苯磺酰氧基，例如4-硝基苯磺酰氧基。
如甲R1是酮基，则C23与氧之间的键是双键。
术语卤素代表氟、氯、溴或磺，特别是氯或溴。
优选如下式(Ⅰ)化合物的应用，其中R1为羟基、甲氧基、NH3、氯、溴、酮基、对硝基苯磺酰基或下式的吡喃氧基 其中R4为羟基、乙酰氧基或氨基甲酰氧基;
X为下式基团 其中R3为羟基、乙酰氧基、或未取代或被C1-C4烷基、卤素或硝基单取代的苯磺酰氧基;
R2为氢或羟基;
Y为下式基团 其中R5为羟基或乙酰氧基;
R6为甲基。
特别优选的是如下式(Ⅰ)化合物的应用，其中R1为羟基、甲氧基、叠氮基、氯、酮基、对硝基苯磺酰基或下式的吡喃氧基 其中R4为羟基或氨基甲酰氧基;
X为下式基团 其中R3为羟基或乙酰氧基;
R2为氢或羟基;
Y为下式基团 R5为羟基或乙酰氧基。
本发明特别涉及以下化合物的应用康卡那霉素A、康卡那霉素C、康卡那环内酯A(concanolide A)、21-脱氧康卡那环内酯A、23-O-甲基康卡那环内酯A、3，9-二-O-乙酰基康卡那霉素A、16-脱甲基-21-脱氧康卡那环内酯A、21，23-二脱氧-23-表叠氮基康卡那环内酯A、23-O-对硝基苯磺酰基-21-脱氧康卡那环内酯A、21-脱氧康卡那环内酯A-23-酮、21-脱氧康卡那环内酯A-9，23-二酮、脱氧康卡那霉素A和/或21，23-二脱氧-23-表氯康卡那环内酯A。
已知的及新的式(Ⅰ)化合物具有有价值的药理性质，可用于预防和治疗对破骨细胞质子泵的抑制有反应的疾病。这些以骨组织损失增加为特征的疾病例如原发性骨质疏松(幼年性、特发性、先天性、绝经后(一型)和退化性(二型)骨质疏松)和继发性骨缺乏(与以下疾病有关或由这些疾病引起恶性肿瘤、肾机能不全、内分泌病、吸收障碍综合症、肝脏疾病、运动不能、关节病和医原性疾病)。
为了测定抑制活性，有牛脑的内涵素包被泡囊(含有液泡H+-ATP酶)作为酶的来源(见Xie等，Methods in Enzym.157634-646，1988)。利用小鼠3T3成纤维细胞的汇合培养物和XTT四唑染料来测定所研究的化合物的细胞毒性(Roehm等，J.Immunol.Methods142257-265，1991)。可以按照本发明使用的化合物是H+-ATP酶质子泵的强烈抑制剂，其IC50值在亚μM范围内(约0.5-1nM)，而细胞毒性(IC50)在μM范围内(约2-10μM)。把H+-ATP酶试验和细胞毒性试验中测得的抑制活性进行比较，发现这些化合物具有医疗用途。可以按照本发明使用的化合物的IC50(μM，细胞毒性试验)∶IC50(μM，H+-ATP酶试验)比值大于500，因此它们对液泡H+-ATP酶的抑制作用显著，但细胞毒性低。可以按照本发明使用的化合物还在小鼠颅盖试验中抑制骨吸收(见ReynoldsBall等，Organic Culture in Biomedical Research，Cambridge University Press，355-366，1976)。小鼠颅盖试验中的IC50值＜0.3μM。
用式(Ⅰ)化合物制备的药物优选为药物组合物的形式，这些组合物适于对人体或动物体进行预防和治疗处理，特别是在上述疾病的情况下。这些药物组合物含有有效量的、特别是有效预防或治疗上述疾病之一量的活性成分，以及可药用的载体，这些可药用的载体适于局部施用或胃肠内给药(如直肠或口服给药)或肠胃外给药(如经皮、皮下或静脉给药)，可以是无机的或有机的、固体的或液体的。优选口服剂型。在预防和治疗温血动物的对破骨细胞质子泵有反应的疾病时，给该温血动物施用具有有效预防或治疗作用的、破骨细胞质子泵抑制剂量的式(Ⅰ)化合物。有效成分的剂量和治疗的本质(给药方式连续、间歇、循环)主要取决于疾病的本质、所要治疗的动物的种属和体重、机体的防御状况和给药方式。例如，给体重约为70kg的温血动物施用的日剂量约为0.5mg至1500mg，特别是约5mg至500mg，优选约10mg至300mg式(Ⅰ)化合物。该总日剂量优选每天分1-3次服用。口服情况下剂量优选在所指出剂量的上限范围。
口服给药时，优选使用含有活性成分的片剂或明胶胶囊剂;其中还含有稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素和/或甘油;和/或润滑剂，例如硅石、滑石、硬脂酸或其盐(例如硬脂酸镁或硬脂酸钙)、和/或聚乙二醇。片剂还可含有粘合剂，例如硅酸铝镁、淀粉(如玉米淀粉、麦淀粉或米淀粉)、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮，如果需要，还可含有崩解剂，例如淀粉、琼脂、藻酸或其盐(如藻酸钠)，和/或泡腾混合物、或吸附剂、着色剂、调味剂和甜味剂。本发明的药物活性化合物还可以以可非肠道施用的组合物形式或输注液形式使用。这类输注液优选可以在使用前配制的等渗水溶液或悬浮液，例如含有活性成分及载体(如甘露糖醇)的冰冻干燥组合物。这些药物组合物可以是无菌的，而且/或者可以含有赋形剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂和/或乳化剂;增溶剂;调节渗透压的盐类和/或缓冲剂。有关的药物组合物在需要时可以含有其他有药理活性的物质(如抗生素)，这类药物组合物以本身已知的方式制备，例如借助常规的混合、造粒、成型、溶解或冰冻干燥方法，并含有约0.01%至90%活性成分，在冰冻干燥物的场合最高可达100%，优选约0.1%至50%，更为优选的是1%至30%，低于1%的活性成分浓度特别适于局部施用的组合物。
本发明还涉及式(Ⅰ)化合物及含有这些式(Ⅰ)化合物的药物组合物 其中R6和R7彼此独立地为氢，或优选为甲基，并且R1为卤素、氨基、叠氮基、酮基、对硝基苯磺酰基或羟基，R2为氢，Y为下式基团 或者R1为卤素、氨基、叠氮基、酮基、对硝基苯磺酰基或下式的吡喃氧基 其中R4为氨基甲酰氧基，X为下式基团 R2为羟基，Y为下式基团 或者R1为卤素、氨基、叠氮基、酮基、对硝基苯磺酰基、2-羟基乙氧基或下式的吡喃氧基 其中R4为羟基或氨基甲酰氧基，X为下式基团 其中R3为未取代或被C1-C4烷基、卤素或硝基单取代的苯磺酰氧基，R2为氢、氢过氧基或羟基，Y为下式基团
或者R1为卤素、氨基、叠氮基、酮基、对硝基苯磺酰基、C1-C4烷氧基或C1-C4烷酰氧基，R2为羟基或C1-C4烷氧基，优选羟基或甲氧基，Y为下式基团 R5为C1-C4烷酰氧基。
特别优选的是如下式(Ⅰ)化合物，其中R1为羟基、叠氮基、对硝基苯磺酰基、酮基或氯，R2为氢，Y为下式基团 或者R1为下式的吡喃氧基 其中R4为氨基甲酰氧基，X为下式基团
其中R3为被硝基单取代的苯磺酰氧基，R2为羟基，Y为下式基团 或者R1为乙酰氧基，R2为羟基，Y为下式基团 R5为乙酰氧基。
本发明特别涉及21-脱氧康卡那环内酯A、16-脱甲基-21-脱氧康卡那环内酯A、21，23-二脱氧-23-表叠氮基康卡那环内酯A、23-O-对硝基苯磺酰基-21-脱氧康卡那环内酯A、21-脱氧康卡那环内酯A-23-酮、21-脱氧康卡那环内酯A-9，23-二酮、脱氧康卡那霉素A和/或21，23-二脱氧-23-表氯康卡那环内酯A。
式(Ⅰ)化合物是已知的或者可以用本身已知的方法来制备。可以按照本发明使用的康卡那霉素A、B和C，在按照本发明制备新的式(Ⅰ)化合物时也需作为起始原料使用，它们可以按照Kinashi等人的方法(J.Antibiotics371333-1343，1984)，通过用淀粉酶产色链霉菌(Streptomyces diastatochromogenes)S-45(或链霉菌Go22/15，DSM8426)发酵并从菌丝体中分离而制得。
9位带有酮基官能团(Y为羰基)的式(Ⅰ)化合物可以通过3′，9-二酮来制备。后者可以由康卡那霉素A经温和氧化(因为对水解高度不稳定)制得，例如用四氧钌酸(Ⅶ)四正丙铵试剂(TPAP)进行氧化。在温和条件下，例如用硼氢化钠时，二酮中的3′-酮基可以被选择性还原。
9、23和/或3′位的羟基的酰化，同样以本身已知的方式，用C1-C4烷酸酐(例如，要引入乙酰基时用乙酐)在吡啶中进行。这样，康卡那霉素A或B与乙酐反应生成9，3′-二-O-乙酰基衍生物;用康卡那霉素C作原料时则形成9，3′，4′-三-O-乙酰基衍生物。在去糖基化康卡那环内酯A和B(R1为羟基)中，9，23-二-O-乙酰基衍生物可以以同样的方式制取。如果9位和23位的两个羟基中有一个被封闭，例如由醚官能团封闭，则游离羟基被酯化，形成单O-乙酰基衍生物。
康卡那霉素A和C中的3′-羟基可以通过与相应的磺酰氯反应而选择性地磺化。在后续的反应中，3′-磺酰氧基化合物可以通过与叠氮化物(如叠氮化钠)反应而转化为3′-表叠氮基化合物。
为制备康卡那霉素的21-C1-C4烷基衍生物，使康卡那霉素与相应的C1-C4烷醇在酸(优选路易斯酸，如FeCl3)存在下反应。这种康卡那霉素21-C1-C4烷基衍生物可以在酸性条件下(如在盐酸存在下)用氰基硼氢化钠转化为相应的21-脱氧衍生物。
为使康卡那霉素去糖基化(并制备R1为羟基的康卡那环内酯)，使康卡那霉素与有机磺酸(如对甲苯磺酸)反应，适当对在盐酸存在下在水性有机溶剂(如含水二甲亚砜或乙腈)中反应。
R1为C1-C4烷氧基或2-羟基乙氧基的式(Ⅰ)化合物可以如下制备例如，对康卡那霉素进行酸催化的烷醇分解，例如甲醇分解或乙二醇分解。最好用对甲苯磺酸作催化剂。在路易斯酸存在下，也可以以这种方式制取21，23-二烷氧基衍生物。
微生物的保藏链霉菌Go22/15株于1993年7月19日保藏在德国微生物和细胞培养物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen(DSM)，Brunswick，Germany)，保藏号为DSM8426。
下列实施例说明本发明，但决不限制本发明。
实验部分一般方法熔点熔点和分解点用赖克特热载台显微镜测定，未经校正。
质谱EI-MSVarian MAT731，70eV;Finnigan MAT311A，70eV，高分辨率，用全氟煤油作参比化合物;FAB-MSFinnigan MAT 95A(基质α-硝基苄醇)。DCI-MSFinnigan MAT95A(反应气NH3)。
红外光谱用Perkin-Elmer 298型光谱仪和Perkin-Elmer FT-IR 1600型光谱仪测定红外光谱;所有化合物均以KBr压片形式测定。
电子能谱Kontron Uvikon860。
比旋Perkin-Elmer 241型旋光仪;比旋以[10-1degcm2g-1]给出，c以[g100-1·ml-1]给出。
1H-NMR光谱Varian XL200(200MHz)、Varian VXR200(200MHz)、Varian VXR500(500MHz)、Bruker AMX300(300MHz)。化学位移以相对于四甲硅烷内标的δH值表示;偶合常数(J)以Hz表示。缩写s＝单峰，d＝双峰，t＝三峰，dd＝双双峰，m＝多峰，br＝宽峰。
13C-NMR光谱Varian XL200(50.3MHz)、VarianVXR200(50.3MHz)、Varian VXR500(125.7MHz)、Bruker AMX300(75.5MHz)。化学位移以相对于四甲硅烷内标的δc值表示。
柱色谱0.08mm以下的硅胶60(Macherey&Nagel);0.2-0.05mm硅胶60(Macherey&Nagel);0.04-0.063mm硅胶60(Macherey&Nagel);所有硅胶柱均在p＝0.4-0.8巴过压下操作(闪式色谱);Sephadex LH-20(Pharmacia)。
HPLC泵Kontron 414;检测器Kontron 420;混合室Kontron M800、Kontron Multiport;数据系统Kontron Data System 450;分析性20ml进料回路;前置柱Waters Guard Pak Precolumn Module 5×5mm，带有Resolve RP-18筒;柱Kontron 10C18。体系恒溶剂体系，CH3CN/水65∶35，流速4ml/分，245nm和285nm检测。
溶剂和化学试剂闪式色谱所用的溶剂预先蒸馏;HPLC只使用梯度级溶剂(Merck)和使用前经过膜过滤的双蒸水。各种反应一般使用梯度级试剂(Merck)，适当时用合适的干燥剂预先干燥。所用的标准化学试剂得自Fluka、Aldrich和Merck，原样使用。
色谱用的洗脱剂混合物体系ACHCl3/甲醇8∶2;体系BCHCl3/甲醇9∶1;体系CCHCl3/甲醇95∶5;体系D乙酸乙酯/正己烷4∶1;体系E乙酸乙酯/正己烷2∶1;体系F乙酸乙酯/正己烷1∶1;体系G乙酸乙酯/正己烷1∶2;体系H乙酸乙酯/正己烷1∶3;体系I乙酸乙酯/苯4∶1;体系K甲醇/H2O8∶2(在RP-8上)。
喷显剂Reagenzien Merck的薄层色谱和纸色谱染色剂。
营养培养基组成成分所有营养培养基组成成分都得自Difco。
带通气装置的摇动器和发酵罐Braun Certomat U、Braun Schuttelschrank(摇动室)BS4、Braun Biostat E(5升;5升/分)、Braun Biostat E(15升;10升/分)、Braun Biostat U(50升;2米3/小时)。
反应混合物的后处理常规后处理应理解为用指出的溶剂萃取三次，合并有机相，用Na2SO4干燥，随后用旋转蒸发器真空浓缩。
实施例1康卡那霉素A、B和C的分离和鉴定a)链霉菌(Go22/15)的培养和后处理将菌株保持在含M2琼脂的培养皿上(10g/l麦芽汁、4g/l酵母提取物、4g/l葡萄糖、25g/l琼脂)。该平板培养物用48小时振荡培养物或老平板培养物接种，并于28℃下培养约10天。形成典型的棕黄色斑点。该菌株的气生菌丝体呈白灰色。除非另外指出，在装有100mlM2营养培养基的250ml带挡板锥形瓶中，或者在装有150mlM2营养培养基的1000ml锥形瓶中进行振荡培养发酵。
为进行培养，用得自过度生长平板培养物的琼脂块(1cm2)进行接种，并将培养瓶在28℃下振荡72小时。将作为生物反应器发酵预培养物的振荡培养物振荡48小时，然在4℃下冷却24小时。
在5升或50升装有M2营养培养基(10g/l麦芽汁、4g/l葡萄糖、4g/l酵母提取物、0.15g/l Niax消泡剂)的发酵罐中进行生物反应器发酵。在5升发酵罐中，以220rpm和5升/分的通气速度进行发酵;在50升发酵罐中，以200rpm和2米3/小时的通气速度进行发酵。接种时，所有情况下都使用10%(体积)48小时冷却预培养物。发酵在5.8-7.4的pH范围内进行72小时，用2N柠檬酸和2NNaOH自动调节pH范围。发酵结束时，通常会观察到pH值为7.4，柠檬酸大量消耗。如果72小时后的pH值低于7.0，则把发酵延长24小时。收集时的pH值在6.8和7.4之间变化，用0.5N NaOH调至7.4。加入20%(体积)Celite后，可以分离出菌丝体。滤饼用丙酮吸收，在超声浴中或使用Ultraturrax(以50升规模发酵时)处理15分钟，使细胞消化。将该批物料再次过滤，真空蒸发掉有机溶剂。重复该过程，然后合并水性菌丝体萃取液，用乙酸乙酯萃取2-3次。只在个别情况下才用乙酸乙酯振荡2-3次萃取培养滤液。
b)从链霉菌Go 22/15中分离康卡那霉素以进行光谱鉴定和生物试验取8.06g由50升发酵得到的菌丝体萃取液，按下列方案分离康卡那霉素硅胶柱色谱(CHCl3/甲醇100∶0至9∶1梯度);
分离出康卡那霉素C，用SephadexLH20柱色谱法(甲醇)进一步纯化;
分离出康卡那霉素A和B，并在RP-18硅胶上用MPLC法(CH3CN/水65∶35)分离。
初始的硅胶色谱分离(梯度CHCl3/体系C/体系B，8×60cm)就得到在色谱学和光谱学上高度富集的康卡那霉素级分。为了对康卡那霉素进行光谱鉴定，取120mg康卡那霉素C进行Sephadex LH-20凝胶过滤(MeOH，3×80cm)，得到109mg白色无定形固体形式的康卡那霉素C。取含有113g同源康卡那霉素A和B的混合物，在RP-18硅胶柱上用中压色谱法(4×60cm，CH3CN-H2O 65∶35)分离出84mg康卡那霉素A和13mg康卡那霉素B。
康卡那霉素Am.p.163℃C46H75NO14(866.10)Rf0.19(RP-18，CH3CN-H2O 65∶35);0.31(体系B);0.25(体系I)Rt19.1 分(标准HPLC系统)FAB-MS(负离子)m/e＝865[M-]FT-IRν＝3430，2960，2880，1710，1690，1620w，1450，1380，1250，1110，1070，1030，970，920，770cm-1[α]D20＝-18(c＝0.5，MeOH)康卡那霉素Bm.p.156℃C45H73NO14(851.51)Rf0.25(RP-18，CH3CN-H2O 65∶35);0.31(体系B);0.25(体系I)Rt14.1 分(标准HPLC系统)FAB-MS(负离子)m/e＝851[M-]FAB-MS(正离子)m/e＝875[M++Na]DCI-MS(正离子)m/e＝852(100%，M+);861(75%);870(26%，M+NH4+)[α]D20＝-18(c＝0.5，MeOH)康卡那霉素Cm.p.153℃C45H74O13(823.07)Rf0.35(体系B);0.25(体系I)Rt16.8 分(标准HPLC系统)FAB-MS(负离子)m/e＝822[M-]FT-IRν＝3430，2960，2880，1690，1620w，1450，1380，1250，1110，1070，1030，970，920，760cm-1[α]D20＝-17(c＝0.5，MeOH).
实施例221-O-甲基康卡那霉素A在彻底加热过的50ml烧瓶中，将800mg(0.92mmol)康卡那霉素A溶解于19ml无水甲醇中。然后加入1ml甲醇中的15mg FeCl3(0.09mmol，0.1当量)，混合物于室温下搅拌15分钟。加入20ml磷酸盐缓冲液(pH＝7，Merck)后，将溶液转移到250ml烧瓶中，真空下小心地脱除有机溶剂。剩余的水性残余物用CHCl3萃取，经常规后处理后用硅胶过滤(体系D，4×10cm)，得到标题化合物，m.p.141℃。
C47H77NO14(880.13)Rf0.31(体系B);0.58(体系I).
FAB-MS(正离子)m/e＝904[M++Na](5%);665(100%)FAB-MS(r 负离子)m/e＝1034[M-+基质](40%);880[M-]UV(MeOH)λmax(ε)＝245(37000);283nm(17000)[α]D20＝+45.6(c＝0.4，MeOH)实施例39，3′-二-O-乙酰基康卡那霉素A在78mg康卡那霉素A在0.8ml吡啶中的溶液中，加入0.7ml乙酐，将该反应混合物于室温下搅拌3小时。当检测不到起始原料时(TLC监测)，将反应混合物滴加到10ml冰水中，并水解30分钟。所得混合物用CHCl3萃取，然后进行标准后处理，所得粗产物用甲苯吸收若干次，以共沸蒸馏出吡啶和乙酸。用硅胶柱色谱法(体系E，3×30cm)纯化产物，得到标题化合物。
C50H79NO16(950.17)Rf0.69(体系C);0.63(体系E).
FAB-MS(正离子)m/e＝972[M++Na]FAB-MS(负离子)m/e＝948[M-][α]D20＝-28(c＝0.5，CHCl3).
实施例43′-O-对硝基苄磺酰基康卡那霉素A在50mg(0.058mmol)康卡那霉素A在5ml CH2Cl2中的溶液中，依次加入35mgDMAP(0.29mmol，5当量)、0.5ml三乙胺和130mg对硝基苯-4-磺酰氯(0.58mmol，10当量)。将该反应混合物在室温下搅拌2小时。转化完全后，加冰停止反应，分开各相，水相用CH2Cl2萃取。经常规后处理和后续的硅胶柱色谱(体系G，3×40cm)，得到黄色油状的标题化合物，其中污染有约10%不稳定的3′，9-二-O-对硝基苄磺酰基康卡那霉素A。
C52H78N2O18S(1051.25)Rf0.72(体系B);0.93(体系E).
FAB-MS(负离子)m/e＝1051[M-]IRν＝3450，2980，1720，1690，1610，1530(-NO2)，1350(-SO2-O-)，1190(-SO2-O-)，1080cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(41000);284nm(17000)[α]D20＝-38(c＝0.3，CHCl3).
实施例53′-脱氧表叠氮基康卡那霉素A将96mg(0.092mmol)3′-O-对硝基苄磺酰基康卡那霉素A(实施例4)和120mg NaN3(1.84mmol，20当量)在10ml DMF中的混合物，于45℃下搅拌5小时。加入15ml磷酸盐缓冲液(pH＝7)后，溶液用CHCl3萃取。经常规后处理后，混合物用甲苯吸收若干次，以通过在旋转蒸发器中共沸蒸馏(25mmHg，50℃)除去残余的DMF。随后用硅胶柱色谱法纯化粗产物(体系E，3×30cm)，得到浅黄色无定形固体状的标题化合物，m.p.123℃。
C46H74N4O13(891.11)Rf0.74(体系B);0.74(体系F);0.18(体系G)FAB-MS(负离子)m/e＝1144[M-+基质];890[M-]IRν＝3450，2980，2110(-N3)，1720，1690，1620w，1250，1110，1090cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(37000);284nm(16500)[α]D20＝-17(c＝0.6，MeOH)13C-NMR(500MHz，CDCl3-CD3OD 2∶1，-20℃)d＝6.9(20-Me);9.3(-18-Me);11.7(10-Me);13.3(24-Me);14.2(4-Me);16.2(12-Me);16.9(6-Me);17.7，17.8(C-28和6-Me);21.8，22.7(8-Et);35.0(C-6);35.9(C-10);36.3(C-2);37.0(C-18);39.6(C-22);41.40，41.44(C-20和C-24);43.7(CD-8);45.4(C-11);55.8(16-OMe);59.2，59.3(16-OMe和C-3);68.0(C-5);70.2(C-19);73.5(C-7);75.1，75.5，75.6，75.9(C-17，C-23，C-25和C-4);79.7(C-9);81.7(C-16);94.2(C-1);99.7(C-21);123.0(C-13);126.7(C-15);128.3(C-27);131.0(C-26);131.5，132.0(C-3和C-4);134.1(C-14);141.1，141.7(C-2和C-5);143.0(C-12);156.3(OCONH2);166.9(C-1)ppm.
实施例623-O-甲基康卡那环内酯A在140mg(0.17mmol)康卡那霉素C在25ml甲醇(分析级)中的溶液中，加入20mg(0.10mmol，0.6当量)甲苯-4-磺酸单水合物(工业级，经过氯仿重结晶)，反应混合物于室温下搅拌3小时，直到反应完全(TLC监测)，原来混浊的溶液变为完全透明。然后将该混合物转移到装有5ml磷酸盐缓冲液(pH＝7)的250ml烧瓶中，在旋转蒸发器中于真空下小心地除去有机溶剂，水性残余物用CHCl3萃取。进行常规后处理，随后进行硅胶柱色谱(体系G，3×30cm)，得到标题化合物。
C40H66O10(706.96)Rf0.62(体系C);0.44(体系G)FAB-MS(负离子)m/e＝707[M-]IRν＝3460，2960，1690，1610w;1440，1350，1240，1100cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(40000);283nm(18000)[α]D20＝+16(c＝0.3，CHCl3).
实施例721，23-二-O-甲基康卡那环内酯A按照使康卡那霉素甲醇分解的一般方法(见实施例6)，但使用工业级的化学试剂，使140mg(0.17mmol)康卡那霉素C的溶液发生反应。进行完全类似的后处理，随后进行硅胶柱色谱(体系G，3×30cm)，得到白色无定形固体状的标题化合物，m.p.97℃。
C41H68O10(720.98)Rf0.53(体系C);0.50(体系G)FAB-MS(正离子)m/e＝745[M++Na]FAB-MS(负离子)m/e＝721[M-];773[M-+基质]IRν＝3480，2960，1690，1610w;1440，1350，1250，1100cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(42000);283nm(18000)[α]D20＝+9(c＝0.3，CHCl3)13C-NMR(125MHz，CH2Cl2-CD3OD 2∶1，-20℃)d＝7.5(20-Me);10.5(18-Me);12.1(8-Et);13.4(24-Me);14.3(4-Me);16.4(12-Me);17.1(6-Me);18.0(C-28);34.5，35.0，35.4，35.9(C-6，C-10，C-18，C-22);38.3，41.3(C-20和C-24);44.3(C-8);46.0(C-11);46.8(21-OMe);56.0(16-OMe);56.7(23-OMe);60.3(2-OMe);70.0(C-19);73.6(C-7);76.3，77.3，79.8，79.9(C-9，C-17，C-23，C-25);82.8(C-16);104.2(C-21);123.3(C-13);127.0(C-15);130.5，130.7，131.8，132.6(C-3，C-4，C-26，C-28);134.3(C-14);141.9，142.1(C-2和C-5);143.4(C-12);167.0(C-1)ppm.
实施例89-O-乙酰基-21，23-二-O-甲基康卡那环内酯A按照使康卡那霉素乙酰化的一般方法(见实施例3)，使37mg(0.051mmol)21，23-二-O-甲基康卡那环内酯A发生反应。经硅胶柱色谱(体系G，2×20cm)，得到标题化合物。
C43H70O11(763.02)Rf0.56(体系G)FAB-MS(正离子)m/e＝787[M++Na]FAB-MS(负离子)m/e＝763[M-]IRν＝3420，2960，1740，1690，1620w;1450，1370，1250，1100;1010cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(42000);283nm(21000)[α]D20＝+5(c＝0.5，CHCl3).
实施例923-O-(2-羟基乙基)康卡那环内酯A将700mg(0.81mmol)康卡那霉素A溶解于50ml 1，2-乙二醇、10ml THF和0.2ml 0.5N HCl的混合物中，反应混合物于室温下搅拌。18小时后加入10ml磷酸盐缓冲液(pH＝7)和190ml水中断反应，经常规后处理后用CHCl3进行萃取。经硅胶柱色谱(体系E，4×40cm)后得到标题化合物。
C41H68O11(736.98)Rf0.43(体系B);0.45(体系E)IRν＝3450，2930，1720sh，1690，1620w，1460，1250，1110cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(35000);283nm(16000)[α]D20＝-5(c＝0.3，CHCl3)实施例10康卡那环内酯A在118mg(0.143mmol)康卡那霉素C在15ml乙腈和3.5ml水中的溶液中，加入95mg(0.50mmol，3.5当量)甲苯-4-磺酸单水合物，反应混合物于室温下搅拌20小时。然后使该混合物在冰浴中冷却至0℃，加入30ml饱和NaHCO3溶液，反应混合物用CHCl3快速萃取。经常规后处理后，可以用硅胶柱色谱法(体系E，3×30cm)得到标题化合物。
C39H64O10(692.93)Rf0.29(体系C);0.79(体系E);0.17(体系F)FAB-MS(负离子)m/e＝693[M-]IRν＝3460，2960，1690，1620w，1250，1100，960cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(32000);283nm(17000)[α]D20＝+11(c＝0.3，CHCl3).
实施例119，21-二-O-乙酰基康卡那环内酯A按照制备乙酰化康卡那霉素的一般方法(见实施例3)，由48mg(0.070mmol)康卡那环内酯A制备标题化合物。用硅胶色谱法纯化粗产物后，得到纯化合物，m.p.125℃。
C43H68O12(777.01)Rf0.54(体系G)FAB-MS(正离子)m/e＝799[M++Na]FAB-MS(负离子)m/e＝776[M-]IRν＝3450，2980，1740，1690，1620w，1250，1110cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(35000);283nm(16000)[α]D20＝+7(c＝0.4，CH2Cl2).
实施例1221-脱氧康卡那霉素A在388mg(0.44mmol)21-O-甲基康卡那霉素A和193mg NaBH3CN(3.08mmol，7当量)在50ml乙醇中的溶液中，加入4ml 0.5N HCl，反应混合物在室温下搅拌，直到用TLC法检测不出起始原料。由于原料和产物的色谱行为相似，看来难以用TLC法监测反应过程，但产物斑点可以用茴香醛/H2SO4喷显剂染成黄棕色，而起始原料可以被染成蓝紫色。3小时后，加入60ml磷酸盐缓冲液(pH＝7)，真空除去乙醇，水溶液用CHCl3萃取。常规后处理后进行硅胶色谱(体系D，4×40cm)，m.p.140℃。
C46H75NO13(850.10)Rf＝0.31(体系B);0.54(体系D)FAB-MS(正离子)m/e＝872[M++Na]IRν＝3450，2980，1710，1690，1620w，1380，1250，1100cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(36500);283nm(16000)[α]D20＝-46(c＝1，MeOH)1H-NMR(300MHz，CDCl3)d＝1.58(d br，J＝6，3H，28-H3);1.80(s，3H，12-Me);1.94(s，3H，4-Me);2.18(ddd，J＝12，5，1.5，1H，22-Heq);2.70(m，1-H，6-H);3.22(m obs，1-H，9-H);3.22(s，3H，16-OMe);3.55(s，3H，2-OMe);3.74(ddd，J＝11，9，5，1H，3-H);3.83(dd，J＝9，9，1H，16-H);4.28(dd，J＝9，9，1H，3-H);4.56(dd，J＝10，2，1H，1-H);4.88(s，2H，NH2);5.18(d br，J＝10，1H，17-H);5.21(dd，J＝15，9，1H，15-H);5.31(ddq，J＝15，8，2，1H，26-H);5.54(dq，J＝15，6.5，1H，27-H);5.6-5.7(s br，1H，5-H);5.77(d br，J＝10，1H，13-H);6.35(s，1H，3-H);6.51(dd，J＝15，10，1H，14-H)ppm.
实施例1321-脱氧康卡那环内酯A在10mg21-脱氧康卡那霉素A(0.117mmol)在15ml甲醇中的溶液中，加入500mg(2.6mmol，22.5当量)甲苯-4-磺酸在3ml1NHCl中的溶液，反应混合物在室温下搅拌48小时。加入20ml磷酸盐缓冲液(pH＝7)后，真空脱除溶剂。经标准后处理后进行硅胶柱色谱(体系E，然后体系D)，得到标题化合物，m.p.104℃。
C39H64O9(676.93)Rf＝0.55(体系B);0.61(体系E);0.44(体系F)FAB-MS(正离子)m/e＝833[M++基质];699[M++Na]IRν＝3450，2960，1690，1650w，1620w，1450，1380，-1250，1110cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(39000);282nm(17000)[α]D20＝-23(c＝0.6，MeOH)1H-NMR(200MHz，CDCl3)d＝1.62(dd，J＝6，1，3H，28-H3);1.83(s br，3H，12-Me);1.98(s br，3H，4-Me);2.78(m，1H，6-H);3.24(s，3H，16-OMe);3.58(s，3H，2-OMe);3.31(dd，J＝10，8，1H，25-H);3.83(dd，J＝9，9，1H，H-16);5.23(dd，J＝9，1.5，1H，17-H);5.25(dd，J＝15，10，1H，15-H);5.33(ddq，J＝15，8，1，1H，27-H);5.57(dq，J＝15，6，1H，26-H);5.80(d，J＝10，1H，13-H);6.38(s，1H，3-H);6.52(dd，J＝15，10，1H，14-H)ppm.
实施例14康卡那霉素A-3′，9-二酮将400mg(0.462mmol)康卡那霉素A溶解在40ml无水二氯甲烷中，并加入250mg(4当量)4-甲基吗啉4-氧化物单水合物(Fluka)和40ml(0.1当量)过钌酸四丙铵盐(Fluka)。所得混合物在室温下搅拌，溶液起初的绿色逐渐变为黑色。反应完全后，但最多2小时后(催化剂活性变化很大)，不经进一步后处理即用硅胶柱色谱法(体系E，3×30cm)分离反应混合物，得到标题化合物，m.p.170℃。
C46H71NO14(862.07)Rf＝0.54(体系B);0.53(体系E)FAB-MS(负离子)m/e＝862[M-]IRν＝3450，2970，1740，1690，1620w，1450，1250，1100cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(34000);283nm(15000)[α]D20＝-52.0(c＝0.9，CH2Cl2).
实施例15康卡那霉素A-9-酮将126.5mg(0.146mmol)康卡那霉素A-3′，9-二酮在11ml乙醇中的溶液冷却到-78℃。加入38.5mg(7当量)NaBH4后，将反应混合物搅拌1小时，同时维持冷却。在仍然是冷的混合物中加入10ml磷酸盐缓冲液(pH＝7)停止反应，然后加热至室温并用乙酸乙酯萃取。经常规后处理后得到粗产物，用柱色谱法(乙酸乙酯∶正己烷3∶1)纯化，得到标题化合物，m.p.138℃。
C46H73NO14(864.08)Rf＝0.42(体系B);0.24(体系E)FAB-MS(负离子)m/e＝863[M-]IRν＝3450，2970，1740，1690，1620w，1450，1250，1100cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(34000);283nm(15000)[α]D20＝-43.0(c＝0.4，CH2Cl2).
实施例16药物组合物按常规方式以下列组成制备含有20mg活性成分(如上述实施例中所述式(Ⅰ)化合物中的一种)的片剂。
组成活性成分20mg麦淀粉60mg乳糖50mg胶态硅石5mg滑石9mg硬脂酸镁1mg145mg制备将活性成分与一部分麦淀粉、乳糖、胶态硅石混合，使该混合物强制过筛。另一部分麦淀粉加5倍水在水浴上制成糊状物。将粉末混合物与糊状物捏和，直到形成弱塑性体。
将该塑性体压过3mm网目筛并干燥，所得干燥颗粒再强制过筛。然后混入其余的麦淀粉、滑石和硬脂酸镁，将该混合物压制成重145mg并带有断裂槽的片剂。
实施例1721-脱氧康卡那霉素A
在500mg(0.57mmol)21-O-甲基康卡那霉素A和258mg NaBH3CN(4.11mmol，7当量)在65ml乙醇中的溶液中，加入5ml 0.5N HCl，然后将反应混合物在室温下搅拌4小时。用RP-8硅胶板(Merck)进行TLC监测(洗脱剂MeOH/H2O 9∶2)。为进行后处理，加入60ml磷酸盐缓冲液(pH＝7)，真空除去乙醇，水性残余物用CHCl3萃取。在RP-18硅胶上用MPLC法进行纯化(洗脱剂MeOH/H2O 8∶2)。得量为228mg(47%)，m.p.140℃。
Rf＝0.44(体系K)实施例18和1921-脱氧康卡那环内酯A和16-脱甲基-21-脱氧康卡那环内酯A在467mg 21-脱氧康卡那霉素A(0.55mmol)在55ml CH3CN/H2O(5∶1)中的溶液中，加入350mg(1.83mmol，3当量)甲苯磺酸单水合物(经过CHCl3重结晶)，反应混合物于38℃下搅拌12小时。为进行后处理，将反应混合物冷却至0℃，加入50ml饱和NaHCO3溶液，真空除去有机溶剂，水相用CHCl3萃取。硅胶TLC监测(洗脱剂∶乙酸乙酯/己烷1∶1)显示，除了起始斑点处的起始原料外，还有两个新的区域。硅胶柱色谱(乙酸乙酯/己烷1∶1乙酸乙酯梯度)得到63mg(22%转化率)16-脱甲基-21-脱氧康卡那环内酯A、122mg 21-脱氧康卡那环内酯A(42%转化率)和105mg起始原料。
21-脱氧康卡那环内酯AM.p.122℃C39H64O9(676.93)Rf＝0.40(体系F)FAB-MS(正离子)m/e＝699[M++Na]
IRν＝3450，2960，1690，1650w，1620w，1450，1380，1250，1110cm-1UV(MeOH)λmax(e)＝245(39000);282nm(17000)[α]D20＝-23(c＝0.6，MeOH)1H-NMR(500MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δH＝0.78-0.86(m，12H，20-Me，18-Me，8-乙基-CH3，24-Me);0.98(d，J＝7，3H，6-Me);1.02(d，J＝6.5，3H，10-Me);1.09-1.18(m，4H，22β-H，24H，8-乙基-CH2);1.42(ddt，J＝11，8，3，1H，8-H);1.60(dd，J＝6.5，1.5，3H，28-Me);1.88(s，3H，12-Me);1.94(s，3H，4-Me);1.97-2.07(m，4H，11-H2，22α-H，18-H);2.38(m，1H，10-H);2.67(m，1H，6-H);3.12(d，J＝10.5，1H，9-H);3.22(s，3H，16-OMe);3.26-2.33(m，2H，23-H，25-H);3.43(dt，J＝10，0.5，1H，21-H);3.51(s，3H，2-OMe);3.62(dd，J＝10，1，1H，19-H);3.67(dd，J＝10，2.5，1H，7-H);3.86(dd，J＝9，1H，16-H);5.11(dq，J＝9，0.5，1H，17-H);5.15(dd，J＝15，9，1H，15-H);5.28(ddq，J＝15，8，1，1H，26-H);5.56(dq，J＝15，6.6，1H，27-H);5.68(d，J＝9.5，1H，5-H);5.76(d，J＝11，1H，13-H);6.43(s，1H，3-H);6.61(dd，J＝15，11，1H，14-H)ppm.
16-脱甲基-21-脱氧康卡那环内酯AM.p.87℃C38H62O9(662.90)Rf＝0.60(体系F)FAB-MS(正离子)m/e＝684[M++Na]IRν＝3449，2962，2929，1711，1623，1454，1374，1244，1106，1016，970cm-1UV(MeOH)λmax(e)＝243(23200);278nm(13400)[α]D20＝-108.61(c＝0.86，MeOH)1H-NMR(500MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δH＝0.86(m，3H，8-乙基-CH3);0.90(d，J＝6.5，3H，24-Me);0.93(d，J＝6.5，3H，10-Me);0.99(d，J＝7，3H，20-Me);1.02(d，J＝6.5，3H，18-Me);1.08(d，J＝6.5，3H，6-Me);1.10(m，comp，8-乙基-CH2，β-H);1.15-1.24(m，3H，24-H，22β-H，8-乙基-CH2，α-H);1.36(m，1H，8-H);1.53(dd，J＝16，9，1H，11β-H);1.65(s，3H，12-Me);1.71(dd，J＝6.6，1.5，3H，28-Me);1.79(m，1H，20-H);1.86(d，J＝18，1H，11α-H);1.92(s，3H，4-Me);2.08(dd，J＝14，4，1H，22α-H);2.18(m，1H，18-H);2.24(m，1H，10-H);2.63(m，1H，6-H);3.12(dd，J＝10，0.5，1H，9-H);3.28(ddd，J＝12，12，5，1H，23-H);3.37(m，2H，21-H，25-H);3.56(s，3H，2-OMe);3.57(dd，J＝10，2，1H，7-H);3.90(dd，J＝9，1H，9-H);4.59(dd，J＝9，1H，16-H);5.03(dd，J＝9，1.5，1H，17-H);5.38(m，comp，1H，26-H);5.43(dd，J＝15，9，1H，15-H);5.69(dq，J＝15，6，1H，27-H);5.79(d，J＝11，1H，13-H);5.93(d，J＝10，1H，5-H);6.30(dd，J＝15，11，1H，14-H);6.43(s，1H，3-H)ppm.
13C-NMR(125MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δC＝8.7(20-Me);12.5(10-Me);13.5(24-Me);13.7(18-Me);14.6(4-Me);17.2(8-CH2-CH3)18.1(28-Me);18.3(6-Me);19.3(12-Me);25.2(8-CH2-CH3);35.4(C-10);36.0(C-6);39.1(C-22);39.3(C-20);39.8(C-18);42.8(C-11);44.0(C-24);45.7(C-8);60.2(2-OMe);73.6(C-21);77.1(C-9);77.3(C-23);79.1(C-7);79.3(C-16);81.8(C-19);82.5(C-17);83.2(C-25);121.9(C-13);128.4(C-15);129.1(C-16);129.6(C-27);130.9(C-26);131.9(C-3);132.7(C-4);138.7(C-12);141.6(C-5);142.5(C-2);165.7(C-1)ppm.
实施例2023-O-对硝基苯磺酰基-21-脱氧康卡那环内酯A在85.5mg 21-脱氧康卡那环内酯A(0.13mmol)在5mlCH2Cl2中的溶液中，依次加入179.5mg(1.5mmol，11.3当量)DMAP、1.6ml三乙胺和334mg对硝基苯磺酰氯(1.5mmol，11.3当量)。反应混合物于0℃下搅拌1小时，加冰停止反应。分开各相，水相用CHCl3萃取。真空除去有机溶剂，反应混合物用硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂∶乙酸乙酯/己烷2∶3)。得量96.6mg(85%)。
M.p.96℃C45H67O14NS(878.09)Rf＝0.56(体系F)FAB-MS(负离子)m/e＝859[M-H2O]IRν＝3485，2967，2875，1696，1534，1351，1248，1186，1102，915cm-1UV(MeOH)λmax(e)＝245(55700);278nm(28200)[α]D20＝-108.61(c＝0.62，MeOH)1H-NMR(500MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δH＝0.55(d，J＝6.5，3H，24-Me);0.73(d，J＝7，3H，20-Me);0.80(m，6H，18-Me，8-乙基-CH3);0.98(d，J＝7，3H，6-Me);1.02(d，J＝7，3H，10-Me);1.06(m，2H，8-乙基-CH2);1.40-1.49(m，3H，8-H，24-H，22β-H);1.57(dd，J＝6.6，1.5，3H，28-Me);1.68(m，1H，20-H);1.80(s，3H，12-Me);1.93(s，3H，4-Me);1.96-2.03(m，3H，18-H，11-CH2);2.16(m，1H，22α-H);2.40(m，1H，10-H);2.66(m，1H，6-H);3.12(dd，J＝10，0.5，1H，9-H);3.22(s，3H，16-OMe);3.36(dd，J＝10，8，1H，25-H);3.43(m，1H，21-H);3.50(s，3H，2-OMe);3.55(m，1H，17-H);3.68(dd，J＝10，2，1H，19-H);3.85(dd，J＝9，1H，16-H);4.42(m，1H，23-H);5.17(comp，17-H);5.24(m，2H，26-H，15-H);5.55(dq，J＝15，6.5，1H，27-H);5.67(d，J＝10，1H，5-H);5.75(d，J＝11，1H，13-H);6.41(s，1H，3-H);6.62(dd，J＝15，11，1H，14-H);8.18(d，J＝8.8，2H，3-H);8.46(d，J＝8.5，2H，2-H)ppm.
13C-NMR(125MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δC＝8.1(20-Me);9.7(18-Me);12.0(8-CH2-CH3)，13.6(24-Me);14.3(4-Me);16.5(12-Me);17.9(28-Me);22.0(10-Me);23.1(8-CH2-CH3);35.4(C-6);36.1(C-10);37.3(C-22);37.8(C-18);39.7(C-20);41.7(C-24);44.3(C-8);45.9(C-11);56.0(16-OMe);59.6(2-OMe);69.7(C-7);73.9(C-19);76.3(C-21);76.4(C-17);79.9(C-9);82.7(C-16);82.9(C-25);87.6(C-23);123.3(C-13);125.1(2xC-3);127.1(C-15);129.8(2xC-2);130.1(C-27);130.3(C-26);131.7(C-3);132.0(C-4);134.2(C-14);141.6(C-5);142.2(C-2);143.2(C-12，C-SO3);151.2(C-NO2);166.7(C-1)ppm.
实施例2121，23-二脱氧-23-表叠氮基康卡那环内酯A于40℃下，将119mg23-O-对硝基苯磺酰基-21-脱氧康卡环内酯A(0.13mmol)和163mg(2.5mmol)NaN3在16.5ml DMF中的混合物搅拌45分钟。加入15ml磷酸盐缓冲液(pH＝7，Merck)后，溶液用CHCl3萃取。经常规后处理后，反应混合物用甲苯吸收若干次，以在旋转蒸发器中通过共沸蒸馏(25mmHg，50℃)除去残余的DMF。随后进行柱色谱(乙酸乙酯/己烷1∶2)，有可能得到63mg(69%)产物和32mg起始原料。
M.p.97℃C39H63O8N3(701.90)Rf＝0.43(体系G)FAB-MS(正离子)m/e＝723[M++Na]IRν＝3448，2966，2930，2098，1695，1622，1454，1379，1249，1104，967cm-1UV(MeOH)λmax(e)＝244(33400);282nm(14000)[α]D20＝-108.61(c＝0.62，MeOH)1H-NMR(500MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δH＝0.81(m，12H，24-Me，8-乙基-CH3，18-Me，20-Me);0.98(d，J＝7，3H，6-Me);1.02(d，J＝6.5，3H，10-Me);1.10(m，2H，8-乙基-CH2);1.43(m，1H，8-H);1.54(m，3H，22β-H，24-H，20-H);1.60(dd，J＝6.5，1.5，3H，28-Me);1.88(s，3H，12-Me);1.94(s，3H，4-Me);1.98(m，2H，11-CH2);2.04(m，2H，22α-H，18-H);2.39(m，1H，10-H);2.67(m，1H，6-H);3.11(d，J＝10，5，1H，9-H);3.22(s，3H，16-OMe);3.54(s，3H，2-OMe);3.62(m，2H，19-H，25-H);3.68(m，2H，21-H，7-H);3.86(dd，J＝9，1H，16-H);3.91(m，1H，23-H);5.12(dd，J＝9，1，1H，17-H);5.15(dd，J＝15，9，1H，15-H);5.23(ddq，J＝15，8，1，1H，26-H);5.58(dq，J＝15，6.5，1H，27-H);5.68(d，J＝10，1H，5-H);5.76(d，J＝11，1H，13-H);6.42(s，1H，3-H);6.60(dd，J＝14，11，1H，14-H)ppm.
13C-NMR(125MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δC＝8.3(20-Me);9.9(18-Me);12.2(8-乙基-CH3);14.5(4-Me);14.9(24-Me);16.6(12-Me);17.3(6-Me);18.0(28-Me);22.0(10-Me);23.3(8-乙基-CH2);34.9(C-22);35.7(C-6);36.2(C-10);38.2(C-18);39.8(C-24，C-20);44.7(C-8);46.2(C-11);6.1(16-OMe);59.7(2-OMe);63.2(C-23);70.0(C-19);73.6(C-7);74.2(C-21);76.5(C-17);79.9(C-25);80.0(C-9);83.1(C-16);123.6(C-13);127.4(C-15);129.5(C-27);131.2(C-26);131.7(C-3);132.2(C-4);134.3(C-14);141.7(C-5);142.5(C-2);143.4(C-12);166.8(C-1)ppm.
实施例2221，23-二脱氧-23-表氯康卡那环内酯A于100℃下，将92.7mg(0.14mmol)21-脱氧康卡那环内酯A和61.4mg(0.23mmol，1.6当量)三苯膦在20ml CCl4中的混合物搅拌24小时。将反应混合物冷却至室温，然后用旋转蒸发器除去溶剂，残余物用柱色谱法分离(硅胶，洗脱剂∶乙酸乙酯/己烷1∶2)。得到22.1mg氯化物(43%转化率)和43.2mg起始原料。
M.p.100℃C39H63O8Cl(695.37)Rf＝0.47(体系G)FAB-MS(正离子)m/e＝694/696[M+]，716/718[M++Na]IRν＝3505，2966，2875，1695，1453，1358，1248，1104，1005，967，762cm-1UV(MeOH)λmax(e)＝244(35100);283nm(15600)[α]D20＝18.5(c＝0.59MeOH)1H-NMR(500MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δH＝0.82(m，12H，24-Me，18-Me，20-Me，8-乙基-CH3);0.99(d，J＝7，3H，6-Me);1.02(d，J＝7，10-Me);1.11(m，2H，8-乙基-CH2);1.43(ddt，J＝11，8，3，1H，8-H);1.60(dd，J＝6.5，1.5，3H，28-Me);1.62(m，comp，1H，20-H);1.68(ddq，J＝10，6.5，3，1H，24-H);1.76(m，1H，22β-H);1.88(s，3H，12-Me);1.93(m，comp，2H，11-CH2);1.94(s，3H，4-Me);2.04(m，1H，18-H);2.13(dd，J＝14，5，1H，22α-H);2.40(m，1H，10-H);2.67(m，1H，6-H);3.12(d，J＝10.5，1H，9-H);3.22(s，3H，16-OMe);3.52(s，3H，2-OMe);3.64(dd，J＝10.5，1.5，1H，19-H);3.68(dd，J＝10，2.5，1H，7-H);3.81(dd，J＝10，8，1H，25-H);3.86(dd，J＝9，1H，16-H);3.68(dd，J＝10，2.5，1H，7-H);3.81(dd，J＝10，8，1H，25-H);3.86(dd，J＝9，1H，16-H);3.91(dt，J＝10，1，1H，21-H);4.47(n，1H，23-H);5.14(dd，J＝9，0.5，1H，17-H);5.15(dd，J＝15，9，1H，15-H);5.26(ddq，J＝15，8，1，1H，26-H);5.60(dq，J＝15，6，1H，27-H);5.68(d，J＝10，1H，5-H);5.80(d，J＝11，1H，13-H);6.42(s，1H，3-H);6.62(dd，J＝15，11，1H，14-H)ppm.
13C-NMR(125MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δC＝8.3(20-Me);9.8(18-Me);12.0(8-CH2-CH3);14.3(4-Me);15.7(24-Me);16.5(12-Me);17.1(6-Me);18.0(28-Me);21.8(10-Me);23.1(8-CH2-CH3);35.4(C-6);36.3(C-10);38.0(C-18);38.9(C-22);39.4(C-20);40.5(C-24);44.4(C-8);45.8(C-11);56.0(16-OMe);59.7(2-OMe);65.0(C-23);69.9(C-19);73.0(C-21);74.2(C-7);76.4(C-17);78.8(C-25);79.8(C-9);82.9(C-16);123.4(C-13);127.2(C-15);129.5(C-27);130.8(C-26);131.5(C-3);132.1(C-4);134.0(C-14);141.3(C-5);142.3(C-2);143.0(C-12);166.6(C-1)ppm.
实施例2321-脱氧康卡那环内酯A氧化成21-脱氧康卡那环内酯A-23-酮将138mg21-脱氧康卡那环内酯A(0.20mmol)溶解于20ml无水CH2Cl2中，加入87.5mg(0.65mmol，3.25当量)4-甲基吗啉4-氧化物单水合物和6.2mg(0.02mmol，0.1当量)过钌酸四丙铵盐，反应混合物于室温下搅拌2小时。不经进一步的后处理，用硅胶色谱法分离反应混合物(洗脱剂乙酸乙酯/己烷1∶1)，得到45.2mg21-脱氧康卡那环内酯A-9，23-二酮(39%转化率)、20.9mg 21-脱氧康卡那环内酯A-23-酮(17%转化率)和16mg起始原料。
产物的种类可通过改变反应温度来控制。0℃时只以低收率(＜20%)得到21-脱氧康卡那环内酯A-23-酮，室温时还得到21-脱氧康卡那环内酯A-9，23-二酮，而21-脱氧康卡那环内酯A-23-酮的收率没有增加。
21-脱氧康卡那环内酯A-23-酮M.p.98℃C39H62O9(674.91)Rf＝0.57(体系F)FAB-MS(正离子)m/e＝696[M++Na]IRν＝3451，2969，2931，1709，1621，1455，1356，1248，1103，967cm-1UV(MeOH)λmax(e)＝245(26200);282nm(11500)[α]20D＝+3.7(c＝0.27MeOH)1H-NMR(500MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δH＝0.83(m，12H，20-Me，18-Me，20-Me，8-乙基-CH3);0.99(d，J＝7，3H，6-Me);1.02(d，J＝7，3H，10-Me);1.10(m，2H，8-乙基-CH2);1.42(m，1H，8-H);1.63(dd，J＝6.5，1.5，3H，28-Me);1.80(m，1H，20-H);1.89(s，3H，12-Me);1.94(s，3H，4-Me);2.00-2.09(m，3H，18-H，11-CH2);2.31(m，2H，24-H，22β-H);2.40(m，1H，10-H);2.52(dd，J＝9，2.5，1H，22α-H);2.68(m，1H，6-H);3.12(d，J＝10，1H，9-H);3.22(s，3H，16-OMe);3.53(s，3H，2-OMe);3.59(dd，J＝11，8，1H，25-H);3.67(m，3H，7-H，19-H，21-H);3.87(dd，J＝9，1H，16-H);5.12(dd，J＝9，1，1H，17-H);5.15(dd，15，9，1H，15-H);5.40(ddq，J＝10，6.5，2，1H，27-H);5.63(dq，J＝15，6.5，1H，26-H);5.69(d，J＝10，1H，13-H);5.76(d，J＝11，1H，5-H);6.42(s，1H，3-H);6.63(d，J＝15，11，1H，14-H)ppm.
13C-NMR(125MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δC＝7.8(20-Me);9.7(24-Me，18-Me);12.0(8-乙基-CH3);14.4(4-Me);16.4(12-Me);17.2(6-Me);18.0(28-Me);22.0(10-Me);23.0(8-乙基-CH2);35.4(C-6);36.0(C-10);37.7(C-18);40.6(C-20);44.3(C-8);46.0(C-11);46.7(C-22);50.4(C-24);56.0(16-OMe);59.6(2-OMe);69.7(C-19);73.8(C-21);76.3(C-17);78.7(C-7);79.8(C-9);82.6(C-16);84.6(C-25);123.3(C-13);127.0(C-15);130.1(C-26);130.6(C-27);131.7(C-3);132.0(C-4);134.6(C-14);141.6(C-5);142.1(C-12);143.3(C-2);166.8(C-1);210.7(C-23)ppm.
21-脱氧康卡那环内酯A-9，23-二酮M.p.100℃C39H60O9(672.90)Rf＝0.71(体系F)FAB-MS(正离子)m/e＝694[M++Na]IRν＝3454，2970，2932，1701，1623，1454，1357，1248，1104，968cm-1UV(MeOH)λmax(e)＝244(34400);278nm(15100)[α]20D＝-53.75(c＝0.4MeOH)1H-NMR(500MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δH＝0.71(t，J＝7，3H，8-乙基-CH3);0.81(d，J＝7，3H，18-Me);0.84(d，J＝7，3H，24-Me);0.85(d，J＝7，3H，20-Me);0.97(d，J＝7，3H，6-Me);1.09(d，J＝7，3H，10-Me);1.11(m，comp，1H，8-乙基-CH2，β-H);1.44(ddt，J＝13.5，11，7，1H，8-乙基-CH2，α-H);1.64(dd，J＝6.5，1.5，3H，28-Me);1.80(m，1H，20-H);1.94(s，3H，12-Me);1.97(s，3H，4-Me);2.05(m，1H，18-H);2.31(m，3H，24-H，22β-H，11β-H);2.42(dd，J＝16，8，1H，11α-H);2.52(dd，J＝14，2.5，1H，22α-H);2.61(ddd，J＝10，7，2.5，1H，6-H);2.78(dd，J＝10，2.5，1H，8-H);2.93(m，1H，10-H);3.24(s，3H，16-OMe);3.45(dd，J＝10，2.5，1H，19-H);3.55(s，3H，2-OMe);3.60(m，2H，21-H，25-H);3.67(m，1H，7-H);3.89(dd，J＝9，1H，16-H);5.19(dd，J＝9，1，1H，17-H);5.24(dd，J＝14.5，9，1H，25-H);5.41(ddq，J＝15，8，1.5，1H，26-H);5.63(dq，J＝15，6.5，1H，27-H);5.73(d，J＝9.5，1H，5-H);5.93(d，J＝10.5，1H，13H);6.50(s，1H，3-H);6.67(dd，J＝15，11，1H，14-H)ppm.
13C-NMR(125MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δC＝7.8(20-Me);9.7(24-Me);9.8(18-Me);12.2(8-乙基-CH3);14.4(4-Me);15.9(12-Me);16.5(6-Me);18.0(10-Me);20.8(8-乙基-CH2);35.4(C-6);37.8(C-18);40.5(C-20);42.0(C-11);46.0(C-10);46.7(C-22);50.4(C-24);54.2(C-8);56.0(16-OMe);59.7(2-OMe);69.6(C-7);75.9(C-19);76.2(C-17);78.7(C-21);82.7(C-16);84.5(C-25);124.7(C-13);127.8(C-15);130.0(C-27);130.5(C-26);131.6(C-3);133.0(C-4);133.9(C-14);140.0(C-5);141.5(C-2);142.3(C-12);166.5(C-1);210.6(C-23);218.1(C-9)ppm.
权利要求
1.式(Ⅰ)化合物在制备适于预防和治疗对破骨细胞质子泵的抑制有反应的疾病的药物中的应用 其中R1为羟基、2-羟基乙氧基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷酰氧基、卤素、氨基、叠氮基、酮基、对硝基苯磺酰基、或下式的吡喃氧基 其中X为下式基团 其中R3为羟基、C1-C4烷酰氧基或有机磺酰氧基；R4为羟基、C1-C4烷酰氧基或氨基甲酰氧基；R2为氢、氢过氧基、羟基或C1-C4烷氧基；Y为下式基团 其中R5为羟基或C1-C4烷酰氧基；R6和R7彼此独立地为氢或甲基。
2.根据权利要求1的式(Ⅰ)化合物的应用，其中R1为羟基、甲氧基、NH3、氯、溴、酮基、对硝基苯磺酰基或下式的吡喃氧基 其中R4为羟基、乙酰氧基或氨基甲酰氧基;X为下式基团 其中R3为羟基、乙酰氧基、或未取代或被C1-C4烷基、卤素或硝基单取代的苯磺酰氧基;R2为氢或羟基;Y为下式基团 其中R5为羟基或乙酰氧基;R6为甲基。
3.根据权利要求1的式(Ⅰ)化合物的应用，其中R1为羟基、甲氧基、NH3、氯、酮基、或下式的吡喃氧基 其中R4为羟基或氨基甲酰氧基;X为下式基团 其中R3为羟基或乙酰氧基;R2为氢或羟基;Y为下式基团 R5为羟基或乙酰氧基。
4.根据权利要求1的康卡那霉素A的应用。
5.根据权利要求1的康卡那环内酯A的应用。
6.根据权利要求1的康卡那霉素B的应用。
7.根据权利要求1的康卡那环内酯B的应用。
8.根据权利要求1的康卡那霉素C的应用。
9.根据权利要求1的21-脱氧康卡那环内酯A的应用。
10.根据权利要求1的21-脱氧康卡那环内酯B的应用。
11.根据权利要求1的23-O-甲基康卡那环内酯A的应用。
12.根据权利要求1的3′，9-二-O-乙酰基康卡那霉素A的应用。
13.根据权利要求1的下列化合物的应用16-脱甲基-21-脱氧康卡那环内酯A、21，23-二脱氧-23-表叠氮基康卡那环内酯A、23-O-对硝基苯磺酰基-21-脱氧康卡那环内酯A、21-脱氧康卡那环内酯A-23-酮、21-脱氧康卡那环内酯A-9，23-二酮和/或21，23-二脱氧-23-表氯康卡那环内酯A。
14.式(Ⅰ)化合物 其中R6和R7彼此独立地为氢或甲基，并且R1为羟基、卤素、氨基、叠氮基、对硝基苯磺酰基或酮基，R2为氢，Y为下式基团 或者R1为卤素、氨基、叠氮基、酮基、对硝基苯磺酰基或下式的吡喃氧基 其中R4为氨基甲酰氧基，X为下式基团 R2为羟基，Y为下式基团 或者R1为卤素、氨基、叠氮基、2-羟基乙氧基、酮基、对硝基苯磺酰基或下式的吡喃氧基 其中R4为羟基或氨基甲酰氧基，X为下式基团 其中R3为未取代或被C1-C4烷基、卤素或硝基单取代的苯磺酰氧基，R2为氢、氢过氧基或羟基，Y为下式基团 或者R1为卤素、氨基、叠氮基、酮基、对硝基苯磺酰基、C1-C4烷氧基或C1-C4烷酰氧基，R2为羟基或C1-C4烷氧基，Y为下式基团 R5为C1-C4烷酰氧基。
15.根据权利要求14的式(Ⅰ)化合物，其中R1为羟基、叠氮基或氯，R2为氢，Y为下式基团 或者R1为下式的吡喃氧基 其中R4为氨基甲酰氧基，X为下式基团 其中R3为被硝基单取代的苯磺酰氧基，R2为羟基，Y为下式基团 或者R1为乙酰氧基，R2为羟基，Y为下式基团 R5为乙酰氧基。
16.根据权利要求14的21-脱氧康卡那环内酯A。
17.根据权利要求14的16-脱甲基-21-脱氧康卡那环内酯A。
18.根据权利要求14的21，23-二脱氧-23-表叠氮基康卡那环内酯A。
19.根据权利要求14的21，23-二脱氧-23-表氯康卡那环内酯A。
20.根据权利要求14的23-O-对硝基苯磺酰基-21-脱氧康卡那环内酯A。
21.根据权利要求14的21-脱氧康卡那环内酯A-23-酮。
22.根据权利要求14的21-脱氧康卡那环内酯A-9，23-酮。
23.含有根据权利要求14的式(Ⅰ)化合物的药物组合物。
24.根据权利要求14的式(Ⅰ)化合物，该化合物用于对人体或动物体进行预防或治疗性处理的方法。
全文摘要
式(I)化合物适于制备用于治疗和预防对破骨细胞质子泵的抑制有反应的疾病的药物。其中各符号的含义如说明书所述。
文档编号A61K31/70GK1106401SQ94108569
公开日1995年8月9日 申请日期1994年8月15日 优先权日1993年8月16日
发明者A·齐克, K·U·宾塞尔, C·波迪恩 申请人:西巴-盖尔基股份公司