依赖细胞周期蛋白的激酶2和IKB－α的嘌呤抑制剂的制作方法

专利名称：依赖细胞周期蛋白的激酶2和IKB－α的嘌呤抑制剂的制作方法
背景技术：
本发明是1996年8月2日提交的未决的美国专利申请08/692,012的部分继续。
(1)发明领域本发明涉及2,6,9-三取代嘌呤，已发现它是细胞周期激酶(cell cyclekinase)的选择性抑制剂并且该化合物也是细胞增殖的抑制剂。例如，2,6,9-三取代嘌呤可用于治疗自身免疫性疾病，例如类风湿性关节炎、狼疮、Ⅰ型粮尿病、多发性硬化等；治疗癌症、心血管疾病如再狭窄、宿主-移植物疾病、痛风、多囊性肾病和其它发病机理涉及异常性细胞增殖的增殖性疾病。
本发明也涉及2,6,9-三取代嘌呤，已发现它是有效的和特异性IκB-α激酶抑制剂，它抑制体内和体外NF-κB激活和细胞因子(cytokines)合成。预期该抑制剂可抑制细胞因子和粘蛋白的合成，该合成在转录时受NF-κB的调节。促炎细胞因子(proinflammatory cytokines)如IL-1、IL-6、TNF和粘蛋白(例如ICAM、VCAM和选择蛋白)属于该类分子并且与炎性疾病的发病机理有关。因此，有效的IκB-α激酶抑制剂可用于临床治疗那些需要激活NF-κB来诱导的疾病。
(2)现有技术的描述在过去的几年中，分子和细胞生物学的发展已有助于我们理解细胞在有丝分裂进展过程中发生的细胞增殖和特定活动的机理。例如，“Progressin Cell Cycle Research”第1卷，L.Meijer,S.Guidet和H.Y.L.Tung编；PlenumPress,New York,1995。这些研究表明，通过称作依赖细胞周期蛋白激酶的一类丝氨酸/苏氨酸激酶来控制细胞周期的渐进。这些酶包含(a)催化蛋白，利用ATP作为底物的称作依赖细胞周期蛋白激酶(CDK)；和(b)调节蛋白，称为细胞周期蛋白(cyclin)。不同的cyclin-CDK的结合控制如生长、DNA复制和细胞分裂的发生。CDK类酶的一个重要成员是CDK2。已表明CDK2活性是哺乳动物细胞周期渐进在G1/S边界上所必须的。注射微量直接抗CDK2抗体能阻断人二倍体成纤维细胞进入细胞周期的S阶段。人的骨肉瘤细胞中CDK2显性失活突变的表达具有类似的作用。总之，这些研究表明抑制细胞CDK2活性将防止细胞通过有丝分裂周期的发展并诱导在S阶段前生长的停止。与这种观点相一致，用olomoucine(2-(羟基乙基氨基)-6-苄基氨基-9-甲基嘌呤)进行的体外研究表明它是CDK2的一种特异性抑制剂，其IC50大约为2.1μg/ml,J.Vesely等人，Eur.J.Biochem 224,771-786(1994),L.Meijer“Chemical Inhibitors of Cyclin-Dependent Kinases”,351-356页，在“Progress in Cell Cycle Reserch，第1卷，L.Meijer,S.Guidet和H.Y.L.Tung编；Plenum Press,New York,1995”中。在使用哺乳动物细胞培养物的体内研究中显示olomoucine在大约50μg/ml浓度时抑制细胞增殖。
在本发明中，我们开发了一些生物活性明显比olomoucine强的化合物。在使用哺乳动物细胞的体内研究中显示本发明公开的化合物以明显低于olomoucine的浓度抑制细胞增殖。
近来，在研究刺激人的脐静脉内皮细胞的细胞质中反映了IκB-α激酶的活性(Bennett等(1996),J.Biol.Chem 271,19680-19688)。确定本发明的某些化合物作为强的和特异的IκB-α激酶抑制剂防止体内和体外诱导NF-κB激活和细胞因子的合成。杂二聚体转录因子NF-κB的激活是一个复杂的过程。在未受刺激的细胞中，NF-κB(p50/p65)杂二聚体位于胞质溶胶中，在那里与抑制剂亚单位IκB-α复合，IκB-α与NF-κB结合，屏蔽其核定位信号并防止向核易位。细胞受各种信号(如脂多糖)刺激时，IκB-α通过蛋白酶体快速磷酰化、单一化(uniquitinated)和降解。降解的IκB-α允许NF-κB易位到核中，在那里它激活各种炎症反应基因转录。
这些观察结果表明IκB-α激酶是一种很吸引人的研究目标，用于鉴定一些抑制剂是否可用于治疗那些需要激活NF-κB来诱导的炎症疾病。
发明概要本发明的目的是提供能抑制依赖于细胞周期蛋白激酶2的2,6,9-三取代嘌呤化合物。
本发明的另一目的是提供用于抑制细胞增殖的2,6,9-三取代嘌呤化合物。
本发明也提供一种包含2,6,9-三取代嘌呤化合物和可药用载体的药物组合物。
本发明还提供一种抑制细胞增殖的方法，它包括给予需要该化合物的哺乳动物有效量2,6,9-三取代嘌呤化合物。
在一个实施方案中，本发明是具有下式结构的2,6,9-三取代嘌呤组合物
其中X为氨基、氧代、硫代、或砜部分；R1为卤素或R1′-X其中X为氨基、氧代、硫代、或砜部分。优选地X为氨基。
R1′为低级烷基、取代的低级烷基、环烷基、取代的环烷基、环杂烷基、取代的环杂烷基、芳基、取代的芳基、杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、杂烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、烷基环烷基、或烷基环杂烷基，每个取代基都具有1-20个碳原子；R2为氢、低级烷基、取代的低级烷基、环烷基、取代的环烷基、芳基、取代的芳基、杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、杂烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、烷基环烷基、或烷基环杂烷基；R3为卤素、羟基、硫代、烷氧基、烷基硫代、低级烷基、-NR4R5或具有下式结构的组成部分
其中m=1-3,n=1-3，并且o=1-3；Y=羰基、-NR4R5、羟基、硫羟、烷氧基、烷基硫代，并且其中R4和R5各(独立地)选自氢、代级烷基、取代的低级烷基、烷氧基、氨基、酰氨基、羧基、环烷基、取代的环烷基、杂环基、环杂烷基、取代的环杂烷基、酰基、芳基、取代的芳基、芳氧基、杂芳基、取代的杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、烷基环烷基、烷基环杂烷基或氰基；具有1-20个碳原子，并且优选2-6个碳原子。此外，当Y为羰基时，组合物中不存在R4′。R4″和R5″可以是单个氧原子并且R4和R5可以是单个氧原子。优选地，R4和R5是具有2-6个碳原子相同或不同的取代低级烷基并且优选CH2CH2OH、CH2HC(CH3)OH及其混合物。对于R1、R1′、R2、R3的范围有某些限制，其中R3为2-羟基乙氨基并且R2为甲基，R1′-X不能是氨基、3-甲基-2-丁烯基氨基、苄氨基或3-羟基苄氨基。当R3为2-羟基乙氨基并且R2为异丙基时，R1′-X不为苄氨基、3-羟基苄氨基或3-甲基丁氨基。当R3为2-羟基乙氨基并且R2为2-羟乙基时，R1′-X不能为苄氨基。当R3选自2-丙醇-2-甲氨基和2-二甲基氨基乙氨基并且R2为甲基时，R1′-X不能为苄氨基。
在另一实施方案中，本发明是一种抑制哺乳动物细胞增殖的方法，它包括给予哺乳动物治疗有效量的权利要求1组合物。该方法用于治疗细胞增殖快疾病如类风湿性关节炎、狼疮、Ⅰ型糖尿病、多发性硬化、癌症、再狭窄宿主移植疾病和痛风。
在另一实施方案中，本发明是药物组合物，它包含上述和一种或多种可药用赋形剂混合的组合物。
在另一实施方案中，本发明是用于治疗人类、动物和植物真菌感染的组合物。
附图的说明

图1是用盐水治疗和用实施例2制备的化合物3治疗的鼠颈动脉的平均新内膜面积图，其中，非阴影条形图代表未进行治疗的颈动脉截面而阴影条形图中代表经治疗的颈动脉截面。
本发明实施方案的说明本发明涉及具有下式结构的2,6,9-三取代嘌呤化合物；
其中R1为卤素或R1′-X其中X为氨基、氧代、硫代、或砜部分。优选地X为氨基。
R1′为低级烷基、取代的低级烷基、环烷基、取代的环烷基、环杂烷基、取代的环杂烷基、芳基、取代的芳基、杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、杂烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、烷基环烷基、或烷基环杂烷基，每个取代基都具有1-20个碳原子；R1′优选为CH2-芳基、CH2-取代的芳基、4-甲氧基苄基、4-氯苄基、4-硝基苄基、4-(2-吡啶基)苄基、芳基、取代的芳基、3-硫代甲氧基苯基或4-硫代甲氧基苯基。
R2可以为氢、低级烷基、取代的低级烷基、环烷基、取代的环烷基、芳基、取代的芳基、杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、取代的杂芳烷基、杂烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、烷基环烷基、或烷基环杂烷基，其中的碳氢化合物具有1-20个碳原子。R2优选为异丙基。
R3为氢、羟基、硫代、烷氧基、烷基硫代、低级烷基、-NR4R5或具有下式结构的组成部分
其中m=1-3,n=1-3，o=1-3；Y=羰基、-NR4R5、羟基、硫羟、烷氧基、烷基硫代，并且其中R4和R5各自选自氢、低级烷基、取代的低级烷基、烷氧基、氨基、酰氨基、羧基、环烷基、取代的环烷基、杂环基、环杂烷基、取代的环杂烷基、酰基、芳基、取代的芳基、芳氧基、杂芳基、取代的杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、烷基环烷基、烷基环杂烷基或氰基，它们具有1-20个碳原子，并且优选2-6个碳原子。此外，当Y为羰基时，组合物中不存在R′4。R4″和R5″可以是单个氧原子并且R4和R5可以是单个氧原子。优选地，R4和R5是具有2-6个碳原子的相同或不同的取代低级烷基，包括-CH2CH2OH和-CH2HC(CH3)OH。
对于R1、R1′、R2和R3的范围有某些限制。当R3为2-羟基乙氨基并且R2为甲基，R1′-X不能是氨基、3-甲基-2-丁烯基氨基、苄氨基或间-羟基苄氨基。当R3为2-羟基乙氨基并且R2为异丙基时，R1′-X不为苄氨基、间-羟基苄氨基、或3-甲基丁氨基。当R3为2-羟基乙氨基并且R2为2-羟乙基时，R1′-X不能为苄氨基。当R3为2-丙醇-2-甲氨基或2-二甲基氨基乙氨基并且R2为甲基时，R1′-X不能为苄氨基。
下面是本文所使用的某些术语的定义。
“卤素”是指氟、溴、氯和碘原子。
“羟基”是指-OH基。
“硫羟”或“巯基”是指-SH基。
“低级烷基”是指环状、直链或支链、1-10个碳原子的烷基。该术语可进一步解释为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基(或2-甲基丙基)、环丙基甲基、异戊基、正戊基、己基等。
“取代的低级烷基”是指刚刚描述的低级烷基，它包括一个或多个基团如羟基、硫羟基、烷基硫羟基、卤素、烷氧基、氨基、酰氨基、羧基、环烷基、取代的环烷基、杂环基、环杂烷基、取代的环杂烷基、酰基、羧基、芳基、取代的芳基、芳氧基、杂芳基、取代的杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、烷基环烷基、烷基环杂烷基、氰基。这些基团可以连接到低级烷基部分的任何碳原子上。
“烷基链烯基”是指-R-CR′=CRR，其中R为低级烷基或取代的低级烷基、R′、R,R可独立地为氢、卤素、低级烷基、取代的低级烷基、酰基、芳基、取代的芳基、杂芳基或在此所述的取代的杂芳基。
“烷基链炔基”是指-RC≡CR′其中R为低级烷基或取代的低级烷基，R′为氢、低级烷基、取代的低级烷基、酰基、芳基、取代的芳基、杂芳基、或取代的在此所述的杂芳基。
“烷氧基”代表-OR，其中R为低级烷基、取代的低级烷基、酰基、芳基、取代的芳基、芳烷基、取代的芳烷基、杂烷基、杂芳烷基、环烷基、取代的环烷基、环杂烷基、或取代的环杂烷基。
“烷基硫代”代表-SR,-S(O)n=1-2-R，其中R为低级烷基、取代的低级烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基。
“酰基”代表-C(O)R，其中R为氢、低级烷基、取代的低级烷基、芳基、取代的芳基等。
“芳氧基”代表-OAr，其中Ar为芳基、取代的芳基、杂芳基或在此所述的取代的杂芳基。
“氨基”代表NRR′，其中R和R′可独立地为氢、低级烷基、取代的低级烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基或酰基。
“酰氨基”代表-C(O)NRR′其中R和R′可独立地为氢、低级烷基、取代的低级烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的在此所述的杂芳基。
“羧基”代表-C(O)OR，其中，R为氢，低级烷基、取代的低级烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基和在此所述的取代的杂芳基。
“芳基”是指至少具有一个芳环(例如苯基或二苯基)或多个稠合环，其中至少一个环为芳环(例如1,2,3,4-四氢萘基，萘基，蒽基或菲基)的芳族碳环基。
“取代的芳基”是指未取代或由一个或多个功能基取代的芳基，所述取代基如卤素、低级烷基、低级烷氧基、烷基硫代、乙炔基、氨基、酰氨基、羧基、羟基、芳基、芳氧基、杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、硝基、氰基、硫羟基、磺酰氨基等。
“杂环基”是指饱和的、不饱和的或芳族碳环基，具有一个环(例如吗啉代、吡啶基或呋喃基)或多个稠合环(例如萘萘吡啶基、喹喔啉基、喹啉基、中氮茚基或苯并[b]噻吩基)并且在环内至少具有一个杂原子如N、O或S，它可以是未取代的或取代的，取代基团如卤素、低级烷基、代级烷氧基、烷基硫代、乙炔基、氨基、酰氨基、羧基、羟基、芳基、芳氧基、杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、硝基、氰基、硫羟基、磺酰氨基等。
“杂芳基”是指一个杂环，其中至少一个杂环是芳环。
“取代的杂芳基”是指由一个或多个功能基一取代或多取代的杂环，其中所述功能基如卤素、低级烷基、低级烷氧基、烷基硫代、乙炔基、氨基、酰氨基、羧基、羟基、芳基、芳氧基、杂环基、取代的杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、硝基、氰基、硫羟基、磺酰氨基等。
“芳烷基”是指-R-Ar，其中Ar为芳基并且R为低级烷基或取代的低级烷基。芳基可以是未取代的或由基团取代的，取代基团如卤素、低级烷基、低级烷氧基、烷基硫代、乙炔基、氨基、酰氨基、羧基、羟基、芳基、芳氧基、杂环基、取代的杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、硝基、氰基、硫羟基、磺酰氨基等。
“杂烷基”是指-R-Het，其中Het为杂环基并且R为低级烷基。杂烷基可以是未取代的或由基团取代的，取代基团如卤素、低级烷基、低级烷氧基、烷基硫代、乙炔基、氨基、酰氨基、羧基、芳基、芳氧基、杂环基、取代的杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、硝基、氰基、硫羟基、磺酰氨基等。
“杂芳烷基”是指-R-HetAr，其中HerAr为杂芳基并且R为低级烷基或取代的低级烷基。杂芳烷基可以是未取代的或由基团取代的，取代基团如卤素、低级烷基、取代的低级烷基、烷氧基、烷基硫代、乙炔基、芳基、芳氧基、杂环基、取代的杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、硝基、氰基、硫羟基、磺酰氨基等。
“环烷基”是指含3-15个碳原子的二价环或多环烷基。
“取代的环烷基”是指含一个或多个取代基的环烷基，所述取代基如卤素、低级烷基、取代的低级烷基、烷氧基、烷基硫代、乙炔基、芳基、芳氧基、杂环基、取代的杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、硝基、氰基、硫羟基、磺酰氨基等。
“环杂烷基”是指环烷基，其中一个或多个环上碳原子被杂原子(例如N、O、S或P)取代。
“取代的环杂烷基”是指含一个或多个取代基的环杂烷基，所述取代基如卤素、低级烷基、低级烷氧基、烷基硫代，乙炔基、氨基、酰氨基、羧基、羟基、芳基、芳氧基、杂环基、取代的杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、硝基、氰基、硫羟基、磺酰氨基等。
“烷基环烷基”代表-R-环烷基，其中环烷基为环烷基并且R为低级烷基或取代的低级烷基。环烷基可以是未取代的或由取代基取代的，所述取代基如卤素、代级烷基、低级烷氧基、烷基硫代、乙炔基、氨基、酰氨基、羧基、羟基、芳基、芳氧基、杂环基、取代的杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、硝基、氰基、硫羟基、磺酰氨基等。
“烷基环杂烷基”代表-R-环杂烷基，其中R为低级烷基或取代的低级烷基。环杂烷基可以是未取代的或由取代基取代的，所述取代基如卤素、低级烷基、低级烷氧基、烷基硫代、氨基、酰氨基、羧基、乙炔基、羟基、芳基、芳氧基、杂环基、取代的杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、硝基、氰基、硫羟基、磺酰氨基等。
如果本发明最终2,6,9-三取代嘌呤化合物含碱性基团，那么，可制备该组合物的酸加成盐。按照标准方法，在适宜的溶剂中，从母体化合物和过量的酸，如包括但不限制于盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、马来酸、琥珀酸或甲磺酸制备本发明化合物所酸加成盐。盐酸盐形式是特别有用的。
如果最终2,6,9-三取代嘌呤化合物含酸性基团，那么，可制备该组合物的阳离子盐。典型地，将酸性母体化合物用过量的碱性试剂处理，所述碱性试剂包括但不限制于含适宜的阳离子如包括但不限制于Na+,K+,Ca2+和NH4+的氢氧化物、碳酸盐或醇盐。某些化合物形成内盐或两性离子，它们也是适宜的。
本发明化合物用于抑制哺乳动物包括人的细胞增殖。例如，2,6,9-三取代嘌呤用于治疗自身免疫性疾病，例如类风湿性关节炎、狼疮、Ⅰ型糖尿病、多发性硬化等，治疗癌症、心血管疾病如再狭窄、宿主-移植物疾病、痛风、多囊性肾病和其它发病机理涉及异常性细胞增殖的增殖性疾病。
治疗方法包括通过非肠道或口服一种有效量的本发明所选择的化合物，优选分散在可药用载体中。本发明组合物的治疗有效量通常为大约0.01-大约100mg/kg，不过，本领域技术人员将依赖给药途径和病人的年龄和疾病状况很容易地确定。对于急性和慢性疾病来说，可以将本发明组合物的治疗有效量以每天1-10次或多次给予。当按照本发明服用本发明化合物时，没有不适宜的毒理学作用。
本发明化合物也用作抗炎剂和抗真菌剂。因此，本发明组合物用于治疗人、动物和植物的炎症和真菌感染。
包括本发明化合物，和/或其衍生物的药物组合物可配制成用于非肠道给药的溶液剂或冻干粉剂。粉剂可在使用前通过加入适宜的稀释剂或其它可药用载体再配制。如果以液体形式使用，优选将本发明组合物配制成缓冲、等渗的水溶液。适宜的稀释剂的实例为生理等渗盐水溶液，标准5％葡萄糖水溶液和缓冲钠或铵醋酸盐溶液。该液体真菌适用于非肠道给药，但也可以用于口服给药。
可将赋形剂如聚乙烯吡咯烷酮、明胶、羟基纤维素、阿拉伯胶、聚乙二醇、甘露糖醇、氯化钠、枸橼酸钠或其它任何本领域技术人员已知的赋形剂加到含有本发明化合物的药物组合物中。或者，可将药物组合物包在胶囊中、压片或制备成乳剂或糖浆剂用于口服给药。可加入可药用固体或液体载体来增强或稳定组合物，或者便于组合物的制备。液体载体包括但不限制于糖浆、花生油、橄榄油、甘油、盐水、醇和水。固体载体包括但不限制于淀粉、乳糖、硫酸钙二水合物、teffa alba、硬脂酸镁或硬脂酸、滑石粉、果胶、阿拉伯胶、琼脂或明胶。载体也可以包括缓释物质，如包括但不限制于单一的或与蜡混合的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。固体载体的量可改变，但优选每剂量单位大约20mg-大约1g。
用常规技术来确定药物剂量，如对于片剂形式来说，所述技术包括但不限制于磨碾、混合、制粒和压片(如果需要)；或者对于硬明胶胶囊形式来说，所述技术包括但不限制于磨碾、混合和填充。当使用液体载体时，制剂将为糖浆、酏剂、乳剂或含水或不含水的悬乳液形式。该液体制剂可以直接给予或填充到软明胶胶囊中。
下列实施例用于说明本发明。这些实施例不以任何形式限制本发明范围，而用于显示怎样制备和使用本发明化合物。在实施例中，所有的温度为摄氏度。RT代表室温。
实施例1通过常规有机化学方法制备本发明化合物。在下列合成图解中概括的反应顺序是用于合成本发明化合物的一般方法。将2,6-二氯嘌呤溶解在丁醇中并加入适宜的R1胺。加热几小时后，将反应混合物冷却，得到化合物1。向化合物1中加入氢化钠，然后加入R2，并且分离得到化合物2。向化合物2中加入R3和N-甲基吡咯烷酮的溶液。将该混合物加热适宜的时间，然后纯化得到所需要的化合物。
按照上述方法制备以下化合物制备2-氯-6-(4-甲氧基苄氨基)嘌呤(1)将2,6-二氯嘌呤(4.06g,21.5mmol)悬浮在正丁醇(150ml)中并加入4-甲氧基苄胺(3.4ml,26mmol)。该溶液变澄清，几分钟后浑浊。将该溶液在120℃下加入2小时，然后冷却。将正丁醇蒸发掉，然后将残渣悬浮在水和乙醚的混合物中。加入2N NaOH(1.3ml,26mmol)溶液并将该溶液在过滤前搅拌10分钟。将过滤出的沉淀用水和少量乙醚洗涤，然后真空干燥。将残渣液体放置过夜，第二天收集得到更多的结晶并用乙醚洗涤。产率=71/％。制备2-氯-6-(4-甲氧基苄氨基)-9-异丙基嘌呤(2)将2-氯-6-(4-甲氧基苄氨基)嘌呤悬浮在无水DMF(5ml)中并用氢化钠，60％悬浮液(82mg,2.06mmol)处理。将该悬浮液搅拌30分钟，在该过程中，溶液变成澄清的黄/绿色。用5分钟的时间加入2-吲哚丙烷(0.280ml,1.7当量)并将得到的溶液搅拌2天。加入水并将溶液用乙酸乙酯提取。将有机层蒸发得到产品异丙基嘌呤(产量=508mg,89％)。制备2-二乙醇氨基-6-(4-甲氧基苄氨基)-9-异丙基嘌呤(3)将嘌呤(1.65g,4.98mmol)溶解在DMSO(12ml)和二乙醇胺(4ml)中，然后在140℃下加热2-3天，然后在160℃下加热1天。将该溶液冷却并加入水饱和的丁醇(100ml)。然后在蒸发前，将该溶液用水(3×50ml)洗涤，得到棕色油状物。将残渣用硅胶色谱层析，用乙酸乙酰洗脱，然后用3％甲醇的乙酸乙酯液洗脱，得到产品(产量=730mg,37％)的淡黄色油状物。产率=37％。1H-NMR(δCDCl3):7.29(brs,1H),7.25(d,2H),6.94(brs.1H),6.83(d.2H),5.43(brs.＜2H),4.63(brs.2H),4.53(m 1H),3.86(t.4H),3.76(m,7H),1.47(d6H).
表1鉴定按照本实施例所阐述的合成方法制备的本发明化合物。
表1通过实施例1方法制备的化合物
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实施例2该实施例描述了制备本发明化合物的方法。该实施例中所公开的合成方法仅仅是将实施例1中所公开的合成方法略加修改。
按照上述方法制备下列化合物。制备2,6-二氯-9-异丙基嘌呤(4)在室温下,向0.67g 2,6-二氯嘌呤在5ml无水DMF的溶液中加入0.16g(1.1当量)50％氢化钠/油粉剂。当停止放出氢气时，将大量过量(2ml)的2-碘丙烷加到该阴离子溶液中。将该反应溶液在室温下搅拌3天。将反应用30ml水骤冷并用乙酸乙酯(3×50ml)提取。将合并有机提取液并再用3×50ml水和20ml盐水洗涤。将乙酸乙酯溶液用无水硫酸镁干燥并蒸发。将该化合物在硅胶上，用己烷/乙酸乙酯混合物进行各种梯度的闪式色谱层析并得到0.37g所需N-9产物(45)％和0.08gN-7异构体(10％)。制备2-氯-6-苯胺基-9-异丙基嘌呤(5)将2,6-二氯-9-异丙基嘌呤(0.019g,0.081mmol)溶解在丁醇(0.5ml)中并加入苯胺(0.044ml,0.244mmol)。将反应混合物加热到120℃10小时，冷却，用EtOAc稀释并用水洗涤3次。将该混合物用MgSO4干燥并浓缩至灰白色固体。制备2-二乙醇氨基-6-(4-苯基苯胺基)-9-异丙基嘌呤(6)将67mg 2,6-二氯-N-9-异丙基嘌呤和100mg 4-苯基苯胺在1ml正辛醇中的溶液加热至80℃24小时。真空除掉正辛醇并用1ml40％二乙醇胺的MDSO溶液代替。将该溶液在130℃下加热48小时。将反应物冷却至室温，然后用10ml水小时并接着用乙酸乙酯(3×30ml)提取。合并有机提取液并再用3×20ml水和10ml盐水洗涤。将该乙酸乙酯溶液用无水硫酸镁干燥并过滤，然后将溶剂蒸发。将65mg粗品从THF-乙醚溶液中结晶得到28mg纯品(23％)。
下表2鉴定按照本实施例所阐述的合成方法制备的本发明化合物。
表2通过实施例2方法制备的化合物
实施例3该实施例描述了制备本发明化合物的方法。该实施例中所公开的合成方法仅仅是将实施例1中所公开的合成方法略加修改。
按照上述方法制备下列化合物制备2,6-二氢-9-异丙基嘌呤(4)在室温下，将2,6-二氯嘌呤(5.00g,26.4mmol)悬浮在55ml无水DMF中并用氢化钠处理，分次加入60％的分散液(1.27g,31.75mmol)。搅拌1小时后，加入2-碘丙烷(4.5ml,44.98mmol)，将反应物搅拌2天。将反应物倾入乙醚中并用饱和碳酸氢钠洗涤1次，用水洗涤1次。将该混合物用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将该浓缩液在硅胶上色谱层析，用10％丙酮的二氯甲烷溶液洗脱，得到所需N-9烷基化产物的白色固体，产率=47％。制备2-氯-6-(4-甲基巯基)苯胺基-9-异丙基嘌呤(5A)将2,6-二氯-9-异丙基嘌呤(0.15g,0.649mmol)溶解在正丁醇(4ml)中并加入4-(甲基巯基)苯胺(0.089ml,0.714mmol)和三乙胺(0.20ml,1.43mmol)。将反应混合物在80℃下加热过夜。将冷却的反应物用乙酸乙酯稀释并在用无水硫酸钠干燥前用1×1M HCl,1×饱和碳酸氢钠，和1×盐水洗涤并真空浓缩。将残渣在硅胶上色谱层析并用2％甲醇的二氯甲烷液洗脱，得到所需产物的白色固体。产率=83％。制备2-二乙醇胺-6-(4-甲基巯基)苯胺-9-异丙基嘌呤(6A)将嘌呤(0.18g,539mmol)溶解在N-甲基吡咯烷酮(3ml)和二乙醇胺(1ml)中，然后在120℃下加热过夜。将冷却的反应物倾入乙醚中并在用无水硫酸钠干燥前用水洗涤3次并真空浓缩。将残渣在硅胶上色谱层析，用5％甲醇的二氯甲烷液洗脱，得到所需产物的灰白色固体。产率=82％。
1H-NMR(δ,CDCl3):8.08(s,1H),7.58(d,2H),7.47(s,1H),7.18(d,2H),4.95(brs,＜2H),4.52(m,1H),3.94(m,4H),3.83(m,4H),2.43(s,3H),1.47(d,6H).制备4-(2-噻吩基)苄腈在与2,6-二氯-9-异丙基嘌呤反应前，首先必须合成某些R1′基。可通过各种偶联方法和有机合成领域技术人员已知的其它合成方法来合成这些基团。
向耐压管中加入4-溴苄腈(0.2g,1.10mmol)，四(三苯基膦)钯(0)(0.127g,0.1当量)和2-苯硫基硼酸(0.211g,1.65mmol)。将反应物真空冲洗并用氮气冲洗3次。冲洗后，将乙二醇二甲醚(5.5ml)和碳酸钠水溶液(2.53ml,1M)加到该耐压管中。然后，将该耐压管密封并在80℃下加热过夜。将冷却的反应物用乙醚稀释并在用硫酸钠干燥前用水洗涤2次，然后真空浓缩。将残渣在硅胶上色谱层析，用10％乙酸乙酯/己烷洗脱得到所需产物的白色固体。产率=84％。制备4-(2-噻吩基)苄胺将4-(2-噻吩基)苄腈(0.086g,0.464mmol)溶解在无水四氢呋喃(1.6m)中，然后滴加氢化锂铝(0.46ml,0.464mmol,1M的THF液)。将反应物在室温下搅拌过夜。TCL(5％甲醇的二氯甲烷液)显示仍然存在起始物质。再加入1当量LAH。1小时后，通过Fieser和Fieser方法通过将水(17.46μl),氢氧化钠水溶液(17.46μl,15％的溶液)和水(52.37μl)按顺序相继加到反应物中，将反应物骤冷。然后将反应物用乙醚和水稀释并在用硫酸钠干燥前用乙醚提取2次，然后真空浓缩。含粗品的残渣不必进一步纯化。产率=89％。
下表3鉴定按照本实施例所阐述的合成方法制备的本发明化合物。
表3通过实施例3方法制备的化合物
实施例4该实施例描述了制备本发明化合物的方法。该实施例中所公开的合成方法仅仅是将实施例1中所公开的合成方法略加修改。
按照上述方法制备下列化合物。制备2-氢基-6-氯-9-甲基嘌呤(7)将2-氨基-6-氯嘌呤(1.08g,6.4mmol)悬浮在无水DMF(75ml)中并用氢化钠的60％悬浮液(0.28g,7mmol)处理。在加入碘甲烷(0.44ml,7.06mmol)前，将该悬浮液搅拌15分钟并将得到的黄色溶液搅拌1小时45分钟。将固体过滤并在加入水之前，将滤液蒸发10分钟。将得到的固体过滤并干燥过夜得到N-7和N-9烷基化产物的混合物。将残留的母液放置过夜并在第二天收集得到更多的结晶并干燥。产率=77％。制备6-氯-2-(2-甲氧基乙酰氨基)-9-甲基嘌呤(8)将上述异构体混合物溶解在二氯甲烷和吡啶(2当量)中，然后用甲氧基乙酰氯(4当量)处理。将反应物在室温下搅拌直至完全反应。将反应物蒸发并通过硅胶管过滤，用2％甲醇/二氯甲烷洗脱，然后用色谱纯化，用2％甲醇/二氯甲烷洗脱，分离得到所需产物。产率=31％。
表4鉴定按照本实施例所阐述的合成方法制备的本发明化合物。
表4通过实施例4方法制备的化合物<
实施例5
该实施例描述了制备本发明化合物的方法。该实施例中所公开的合成方法仅仅是将实施例1中所公开的合成方法略加修改。
按照上述方法制备下列化合物。制备2-氯-6-(4-苯基苄基氨基)嘌呤(9)将2.6-二氯嘌呤(5.0g,26.45mmol)悬浮在正丁醇(50ml)中加入4-苯基苄胺(6.61g,29.1mmol)和三乙胺(4.1ml,29.1mmol)。将该溶液在120℃下加热过夜然后冷却。用过量的正丁醇将产物滤出并用100ml 1M HCl和200ml水洗涤沉淀。将该固体在70℃下真空干燥过夜，得到所需产物的淡黄色固体。产率=99％。制备2-二乙醇氨基-6-(4-苯基苄基氨基)嘌呤(10)将2-氯-6-(4-苯基苄基氨基)嘌呤(2.0g,5.96mmol)和二乙醇胺(11.4ml,119.2mmol)和N-甲基吡咯烷酮(10ml)一起加入并在120℃下加热过夜。将冷却的反应物倾入二氯甲烷中并用水洗涤2次。将有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到所需产物的淡绿色固体，将其在70℃烘箱中进一步真空干燥2天。制备2-二乙醇氨基-6-(4-苯基苄基氨基)-9-(甲基嘌呤(11)将2-二乙醇氨基-6-(4-苯基苄基氨基)-9-甲基嘌呤(0.05g,0.124mmol)溶解在无水DMF中并用氢化钠的60％悬浮液(5.5g,0.136mmol)处理1小时。加入碘甲烷90.009ml,0.148mmol)并将得到的溶液在室温下搅拌过夜。将反应物倾入乙醚中并在用无水硫酸钠干燥前用饱和碳酸氢钠洗涤2次并真空浓缩。将残渣在硅胶上色谱层析，用5％甲醇的二氯甲烷液洗脱，得到产物的白色固体。产率=63％。
1H-NMR(δ,CDCl3):7.55(m,4H),7.41(m,4H),7.35(m,4H),6.4l(brs,＜1H),5.10(brs,＜2H),4.72(brs,2H),3.86(m,4H),3.74(m,4H),3.59(s,3H).
表5鉴定按照本实施例所阐述的合成方法制备的本发明化合物。
表5通过实施例5方法制备的混合物
实施例6在下列测试中评估本发明组合物。CDK2测定测定本发明组合物CKD2抑制活性。该测定系统(总体积50μl)包含50mMTris-Cl,pH 7.4,10mM MgCl2,5mM DTT,1μg组蛋白H1,30μMATP(1μCiγ32P标记的ATP),10μgBSA和1ng纯CDK2。在30℃下孵育30分钟后，通过加入10μl10％TCA将反应终止并将样品在硝基纤维素滤纸上吸干。将这些滤纸在10％TCA中彻底洗涤并测定放射性。空白不含酶。为了确定本发明各种化合物的效力，将化合物以100-0.02μg/ml的浓度加到上述测定中。孵育30分钟后，将测定管如上操作。在全部测定过程中，加入各种浓度的olomoucine并将其用作为一种标准的阳性对照。表6中所列出的IC50(酶)定义为50％抑制CDK2活性时所需要的化合物的浓度。细胞增殖测定将早期鼠主动脉平滑肌细胞(CV疗法细胞库)以每ml含5％加热灭活牛血清的DME中含20,000个细胞的密度加到48孔盘(Falcon,ml/孔)中。将细胞在标准组织培养孵化箱中孵化48小时。将培养基吸出并将各孔中再充满新鲜的培养基。将本发明化合物以100-0.37μl/ml的浓度加入。孵化48小时后，将培养基吸出并将培养物用0.2ml盐水和0.25μl含MTS(Cell Titer96含水的非放射活性的细胞增殖测定试剂盒，Catalog#G 5430,Promega,2800 Woods Hollow Road,Madison,WI 53711-5399)的phenozine甲磺酸盐溶液。表6中所列出的IC50定义为50％抑制细胞增殖时所需要的化合物的浓度。加入各种浓度的olomoucine并将其作为标准的阳性对照。
表6本发明选择性代表物的生物活性
<p>
实施例7利用Murine Leukemia Model来评估本发明化合物的效力。MurineLeukemia Model是评估抗肿瘤剂中所使用的标准模型。经CDF1鼠皮下注射L1210细胞(1×103个细胞/鼠)。24小时后，用各种剂量(ip)实施例1中化合物3的盐水溶液处理这些鼠。在该研究中所使用的剂量方案列于下表7中。将化合物3每天或每隔一天给予鼠一次。对照鼠给予盐水。7天后，停止给药并监测死亡率。
表7
<p>结果表明，给予化合物3的鼠比对照鼠存活时间长。
实施例8该实施例测定鼠颈动脉模型球囊血管成形术后，急性局部释放实施例1中化合物3来减少新内膜形成的作用。在该实施例中，利用Fogarty动脉栓子切除术导管，通过外科手术损伤成年雄性鼠(每个试验组中n=10)左颈总动脉。损伤后立即用血管夹将该颈总动脉一分为二，由此建立未处理部分和处理部分。然后，将输药导管插入颈总动脉的远半端。输药后，将导管撤出并通过除掉血管夹和在关闭动脉前重新产生的血流来洗提少量的药物。在采集颈总动脉前，让动物恢复14天。将采集到的组织切开并将新内膜区域数字化，用计算机求积系统测定。对于每个动物来说，未处理和处理部分各平均测定15次。
在图1中可见该实施例的结果。按照图1，将实施例1中化合物3用到受损的颈动脉中使得该颈动脉新内膜区域减少大约88％，相比之下，单独用盐水处理的颈动脉新内膜区域减少6％。
实施例9IκB-α激酶的测定测定本发明组合物IκB-α激酶的抑制活性。在这些试验中所使用的人脐静脉内皮细胞系(HUVEC)购于Clonetics(SanDiego,CA)并在37℃组织培养孵化器中的内皮细胞生长基质中保存，所述基质中补充了2％胎牛血清，10ng/ml人重组表皮生长因子，1μg/ml氢化可的松，50μg/ml庆大霉素，50ng/ml两性霉素B和12μg/ml牛脑提取物。所有生长基质和补充物购于Clonetics(San Diego,CA)。E.coli脂多糖(LPS)血清型0111:B4购于Sigma(Saint Louis,MI)。所有其它化学药品为试剂纯。细胞溶解产物的制备将单层(75cm2)HUVEC细胞用LPS(100ng/ml)处理5分钟，然后快速除掉基质并将该单层HUVEC细胞用冰冷PBS洗涤3次。将该细胞层刮到10mlPBS中并通过离心(3000rpm,5分钟，4℃)使细胞成团。通过在37℃涡流下，将细胞团在0.2ml溶解缓冲剂(20mM HEPES,PH7.3,50mM NaCl,10mM MgCl2,1mM EDTA,1mM EGTA,1mM原钒酸钠，10mMβ-甘油磷酸盐，1mM苯甲基磺酰氟，1mM二硫苏糖醇，0.5％NonidetP-40)中孵育15分钟来制备细胞溶解产物。通过微量离心(10,000×g,15分钟，4℃)从样品中除掉细胞碎片并通过在溶解缓冲剂中加入100ml琼脂糖4B的悬浮液，将上清液“预澄清”并在4℃下轻轻地混合1小时。通过微量离心将琼脂糖4B颗粒除掉并将上清液等分和在80℃下贮存。固相IκB-α激酶的测定室温下，在反应缓冲剂(20mM HEPES，PH7.3，10mM MgCl2,15mMβ-甘油磷酸盐，0.5mM原钒酸钠，0.5mM EGTA)中，将1μg GST-IκB-α(与人器官的全长IκB-α相对应(Santa CruzBiotechnology))和20μl50％谷胱甘肽S琼脂糖4B(Pharmacia)一起孵育30分钟。通过再悬浮和微量离心，将GST-IκB-颗粒配合物用0.5ml反应缓冲剂洗涤3次。然后将在100μl反应缓冲剂中的10μgHUVEC细胞溶解产物蛋白加到该GST-IκB-颗粒配合物中并将该混合物在4℃轻轻混合下孵育1小时。然后，将该颗粒配合物用含0.2MNaCl的反应缓冲剂洗涤3次和用单一的反应缓冲剂洗涤一次。最后，将该颗粒配合物悬浮在20μl含5μCi[y-32p]ATP(＞5000ci/mmol,New England Nuclear Corp.Boston,MA)的反应缓冲剂中并在室温下孵育15分钟。通过加入10μlSDS-PAGE样品缓冲剂并在用SDS-PAGE(10-20％梯度Readygel,BioRad)分离前煮沸3分钟。在电泳后，将凝胶固定(50％甲醇10％乙酸)15分钟，用蒸馏水洗涤3次，每次5分钟并在干燥成膜用于放射性自显影X-OMAT XAR-5 Kodak)之前，用5％甘油处理15分钟。在凝胶中的激酶测定利用改良的先前所公开的方法(11,19,20)测定IκB-α同功酶的活性。简而言之，按上文所述方法制备IκB-谷胱甘肽琼脂糖4B颗粒配合物的复制样品并通过在12％的15μg/mlGST-IκB-α存在下聚合的SDS-PAGE凝胶上电泳进行分离。电泳之后，用50mM Tris-HClpH8.0、5mMB-氢硫基乙醇；20％异丙醇将凝胶轻轻洗涤两次，每次30分钟，以便除去SDS。然后通过在100ml 50mM Tris-HCl pH8.0、5mMβ-氢硫基乙醇；0.04％吐温40中保温45分钟来使凝胶中的蛋白质变性。之后，将凝胶切成两半以获得两份相同的样品。一半在10ml反应缓冲液中培养而另一半在10ml含有10μg/ml的2-二乙醇氨基-6-(4-苯基苯氨基)-9-异丙基嘌呤(实施例2的化合物6)的10ml反应缓冲液中在室温下培养1小时，加入10μgCi[y-32P]ATP并且再在室温下培养1小时。分别用100ml5％的三氯乙酸(其中含有1％的焦磷酸钠)多次洗涤凝胶，每次15分钟，直到1ml的洗涤溶液与本底放射活性接近。然后将凝胶干燥并进行放射自显影。制备2-二乙醇氨基-6-(4-苯基苯氨基)-9-异丙基嘌呤环氧化物活化的琼脂糖6B亲和性材料选择冷冻干燥的环氧化物活化的琼脂糖6B(PharmaciaLKB Piscataway,NJ)进行偶合反应，是由于其在含有羟基的配体和琼脂糖上的环氧化物基团之间具有形成醚键的能力，按制造商的说明书，将凝胶溶胀，将100mg的实施例2的化合物6溶解在1ml偶合溶液(1.2∶1v/v二甲基甲酰胺0.1N氢氧化钠)中并在室温和轻轻搅拌下与0.5ml膨胀的凝胶在pH10-11下混合72小时。在50℃温度下，用1M乙醇胺将过量的反应基团阻滞4小时并将凝胶淤浆倾入1ml注射柱中。用三次交替的循环活化树脂，即，各自为20柱体积的pH4.0(0.1M乙酸盐、0.5M氯化钠)和pH8.0(0.1M Tris-HCl、0.5M氯化钠)缓冲液和20柱体积的反应缓冲液(20mM HEPES,PH7.3,10mM MgCl2,15mMβ-甘油磷酸盐，0.5mM原钒酸钠，1mM EDTA,0.5mM EGTA)。在4℃下与含有0.5％叠氮化钠的反应缓冲液中储存所得柱并在使用前按上文所述的低和高pH交替循环来再生。
活化的HUVEC细胞溶解产物(500μg蛋白质在1ml反应缓冲液中)连续5次通过CVT-1545琼脂糖材料并储存通过的液体(未结合的材料)。然后用1ml反应缓冲液将材料洗涤3次(洗涤液1-3)，再用含有0.5M氯化钠的反应缓冲液洗涤3次(洗脱液1-3)。测定各样品等分试样(20μl到1ml)在GST-IκB-琼脂糖颗粒配合物下的磷酰化的能力并通过SDS-PAGE按上文所述方法来分析。富含IκB-α激酶亲和性的测定由亲和性材料获得的大量0.5M氯化钠洗脱液用作进行IκB-α激酶滤过测定的酶原。每个反应物在20μl反应缓冲液中都含有富含IκB-α激酶(1μg蛋白质)、10ngGST-IκB-α激酶和0.5μCi[y-32p]ATP(＞5000Ci/mmol,New England Nuclear Corp,Boston,MA)的亲和性。反应物在室温下培养15分钟并通过加入20μl0.5M EDTA中止反应。将反应混合物点在磷酸纤维素盘(Gibco BRL Life Technologies,Gaithersburg,MD)并在轻轻振摇下用0.15M磷酸洗涤滤液三次15分钟(用300ml0.15M磷酸洗涤多达10个滤液)。洗涤3次之后，将滤液空气干燥，加到闪烁液中并通过液体闪烁光谱测定法测定。电泳流动性位移测定使用高盐缓冲液提取方法制备核提取物。通过在37℃下用T4多核苷酸激酶培养1小时，用5μCi[y-32P]ATP(＞5000Ci/mmol,New England Nuclear Corp,Boston,MA)标记10pmol双股NF-κB共有基序的寡核苷酸(5’-AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC-3’,Promega)。未结合的核苷酸通过使反应混合物经过1ml交联葡聚糖G-5-spin柱来除去。结合测定在室温下进行1小时，其组成为10μg核提取物、1μg鲑精子DNA、和5×104cpmd的在50倍未标记的寡核苷酸存在和不存在下32p标记的共有基序的寡低聚核苷酸。通过8％非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳解析DNA-蛋白质复合物，凝胶在滤纸上干燥并通过放射自显影法显色。
权利要求
1．具有下式结构的2,6,9-三取代嘌呤组合物
R1为卤素或R1’-X其中X为氨基、氧代、硫代、或砜部分。R1’为低级烷基、取代的低级烷基、环烷基、取代的环烷基、环杂烷基、取代的环杂烷基、芳基、取代的芳基、杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、杂烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、烷基环烷基、或烷基环杂烷基，每个取代基都具有1-20个碳原子；R2为氢或选自下列基团的碳氢化合物，所述基团包括低级烷基、取代的低级烷基、环烷基、取代的环烷基、芳基、取代的芳基、杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、杂烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、烷基环烷基、或烷基环杂烷基，其中，各碳氢化合物具有1-20个碳原子；R3为卤素、羟基、硫代、烷氧基、烷基硫代、低级烷基、-NR4R5或具有下式结构的组成部分
其中m=1-3,n=1-3，并且o=1-3；Y=羰基、-NR4R5，羟基、硫羟、烷氧基、烷基硫代，并且其中R4和R5各自为氢、或选自下列基团的烃，所述基团包括低级烷基、取代的低级烷基、烷氧基、氨基、酰氨基、羧基、环烷基、取代的环烷基、杂环基、环杂烷基、取代的环杂烷基、酰基、芳基、取代的芳基、芳氧基、杂芳基、取代的杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、烷基环烷基、烷基环杂烷基或氰基；其中各烃具有1-20个碳原子，其中当Y为羰基时，组合物中不存在R’4,R4”和R5”可以是单个氧原子，R4和R5可以是单个氧原子，并且其中当R3为2-羟基乙氨基和R2为甲基时，R1’-X不是氨基、3-甲基-2-丁烯基氨基、苄氨基或间-羟基苄氨基，当R3为2-羟基乙氨基并且R2为异丙基时，R1’-X不为苄氨基、间-羟基苄氨基或3-甲基丁氨基，当R3为2-羟基乙氨基并且R2为2-羟乙基时，R1’-X不为苄氨基并且当R3选自2-丙醇-2-甲氨基和2-二甲基氨基乙氨基并且R2为甲基时，R1’-X不为苄氨基。
2．权利要求1的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中X为氨基。
3．权利要求1的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R3为具有下式结构的组成部分
其中m=1-3、n=1-3、o=1-3、Y=羰基、-NR4R5、羟基、硫羟基、烷氧基、烷基硫代，并且其中R4和R5各自选自氢、低级烷基、取代的低级烷基、烷氧基、氨基、酰氨基、羧基、环烷基、取代的环烷基、杂环基、环杂烷基、取代的环杂烷基、酰基、芳基、取代的芳基、芳氧基、杂芳基、取代的杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、烷基环烷基、烷基环杂烷基或氰基，其中，当Y为羰基时，组合物中不存在R’4,R4”和R5”可以是单个氧原子并且R4和R5可以是单个氧原子。
4．权利要求3的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’选自芳烷基和杂芳烷基。
5．权利要求3的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’选自芳烷基、未取代的吡啶基烷基和取代的吡啶基烷基并且其中R2选自低级烷基、取代的低级烷基和烷基环烷基。
6．权利要求3的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’选自芳基、杂环基、杂芳基、取代的杂芳基和取代的芳基。
7．权利要求3的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’选自芳基、未取代的吡啶基、取代的吡啶基和取代的芳基，并且R2选自低级烷基、取代的低级烷基和烷基环烷基。
8．权利要求2的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R3是-NR4R5，其中R4和R5各自选自氢、低级烷基、取代的低级烷基、烷氧基、氨基、酰氨基、羧基、环烷基、取代的环烷基、杂环基、环杂烷基、取代的环杂烷基、酰基、芳基、取代的芳基、芳氧基、杂芳基、取代的杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、烷基环烷基、烷基环杂烷基或氰基。
9．权利要求8的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’选自芳烷基、取代的吡啶基烷基和未取代的吡啶基烷基，R2选自低级烷基、取代的低级烷基、环烷基和取代的环烷基，R4选自具有2-6个碳原子的低级烷基，并且R5选自氢、低级烷基、取代的低级烷基、芳基、取代的芳基、环烷基、芳基环烷基、杂环基、取代的杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、杂烷基、杂芳烷基和取代的环烷基。
10．权利要求8的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’选自芳基、取代的芳基、吡啶基和取代的吡啶基，R2选自低级烷基、取代的低级烷基、环烷基、烷基环烷基和取代的环烷基，R4选自具有2-6个碳原子的低级烷基，并且R5选自氢、低级烷基、取代的低级烷基、芳基、取代的芳基、环烷基、芳基环烷基、杂环基、取代的杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、杂烷基、杂芳烷基和取代的环烷基。
11．权利要求8的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’选自芳烷基、吡啶基烷基和取代的吡啶基烷基，R2选自低级烷基、取代的低级烷基和烷基环烷基并且R4和R5各自为取代的具有2-6个碳原子的低级烷基。
12．权利要求8的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为CH2-芳基或CH2-取代的芳基，R2为低级烷基或取代的低级烷基，并且R4和R5各自为-CH2CH2OH,-CHR’CH2OH或-CH2CHR’OH，其中R’为氢或具有1-6个碳原子的烷基。
13．权利要求12的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R2为异丙基。
14．权利要求8的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’选自芳基、取代的芳基、吡啶基和取代的吡啶基，R2选自低级烷基、取代的低级烷基和烷基环烷基并且R4和R5各为取代的具有2-6个碳原子的低级烷基。
15．权利要求8的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为芳基或取代的芳基，R2为低级烷基或取代的低级烷基，并且R4和R5各自为CH2CH2OH，-CHR’CH2OH或-CH2CHR’OH，其中R’为氢或具有1-6个碳原子的烷基。
16．权利要求15的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R2为异丙基。
17．权利要求8的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为由卤素、烷氧基、苯基、吡啶基或硝基取代的苄基，R2为异丙基，并且R4和R5各自为-CH2CH2OH。
18．权利要求8的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为由卤素、烷氧基、苯基、吡啶基或硝基取代的苯基，R2为异丙基，并且R4和R5各自为-CH2CH2OH。
19．权利要求8的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为二苯基，R2为异丙基，并且R4和R5各自为-CH2CH2OH。
20．权利要求8的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’选自3-硫代甲氧基苯基、4-硫代甲氧基苯基、4-溴苯基、4-苯基苄基、4-甲氧基苄基、4-二苯基、3-甲氧基苄基、4-(2-噻吩基)苄基、4-(4-甲基)苯基苄基、4-(4-三氟甲基)苯基苄基、4-(4-次氮基)苯基苄基、4-(2-吡啶基)苄基、胡椒基、3-甲氧基苄基、4-氯苄基和4-硝基苄基，R2为异丙基，并且R4和R5都为CH2CH2OH。
21．权利要求20的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为4-甲氧基苄基。
22．权利要求20的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为4-苯基苄基。
23．权利要求20的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1为4-甲氧基苄基。
24．权利要求20的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为4-二苯基。
25．权利要求20的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为3-甲氧基苄基。
26．权利要求20的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为4-(2-噻吩基)苄基。
27．权利要求20的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为4-(4-甲基)苯基苄基。
28．权利要求20的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为4-(4-三氟甲基)苯基苄基。
29．权利要求20的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为4-(4-次氮基)苯基苄基。
30．权利要求20的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为4-(2-吡啶基)苄基。
31．权利要求20的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为胡椒基。
32．权利要求20的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为3-硫代甲氧基苯基。
33．权利要求20的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为4-硫代甲氧基苯基。
34．权利要求20的2,6,9-三取代嘌呤组合物，其中R1’为4-溴苯基。
35．权利要求1组合物的阳离子盐。
36．权利要求1组合物的酸加成盐。
37．抑制哺乳动物细胞增殖的方法，它包括给所述哺乳动物以治疗有效量的权利要求1组合物。
38．权利要求37的方法，其中治疗有效量为大约0.001-大约100mg/kg哺乳动物。
39．权利要求37的方法，其中将组合物给患细胞增殖病的哺乳动物服用，所述细胞增殖病选自类风湿性关节炎、狼疮、Ⅰ型糖尿病、多发性硬化、癌症、再狭窄、宿主-移植物疾病和痛风。
40．权利要求39的方法，其中细胞增殖病为再狭窄。
41．权利要求39的方法，其中细胞增殖病为癌症。
42．权利要求39的方法，其中细胞增殖病为多囊性肾病。
43．权利要求39的方法，其中哺乳动物为人。
44．一种药物组合物，含有权利要求1组合物和一种或多种药用赋形剂。
45．权利要求43的药物组合物，其中该药物组合物为溶液剂形式。
46．权利要求43的药物组合物，其中该药物组合物为片剂形式。
47．用于治疗人和哺乳动物真菌感染的抗真菌剂，它包含权利要求1的组合物。
全文摘要
用于抑制细胞增殖疾病和用作抗真菌剂的2,6,9－三取代嘌呤组合物。
文档编号A61P25/00GK1231611SQ97198386
公开日1999年10月13日 申请日期1997年8月1日 优先权日1996年8月2日
发明者罗伯特·T·卢姆, 彻里·L·布卢姆, 理查德·麦克曼, 迈克尔·M·威克, 史蒂文·R·肖 申请人:Cv治疗公司