硫代苯并咪唑衍生物的制作方法

专利名称：硫代苯并咪唑衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及由式(1)代表的硫代苯并咪唑衍生物，更准确地说，涉及用作人类食糜酶活性抑制剂的硫代苯并咪唑衍生物。
以上所述表明食糜酶活性抑制剂有希望成为对于呼吸器官疾病，如支气管哮喘、炎性/变应性疾病如变应性鼻炎、特应性皮炎和荨麻疹；循环器官的疾病，如硬化的血管损伤、血管内狭窄、外周循环紊乱、肾衰和心衰；骨/软骨代谢疾病如类风湿性关节炎和骨关节炎等疾病的预防和/或治疗药物。
作为食糜酶活性抑制剂，已知三嗪衍生物(未审查的日本专利公布号8-208654)；乙内酰脲衍生物(未审查的日本专利公布号9-31061)；咪唑烷衍生物(PCT申请WO 96/04248)；喹唑啉衍生物(PCT申请WO97/11941)；杂环酰胺衍生物(PCT申请WO 96/33974)等。然而，这些化合物的结构与本发明的化合物的结构是完全不同的。
另一方面，与本发明化合物有关的技术公开在U.S专利号5,124,336中。该说明书介绍了具有拮抗血栓烷受体活性的硫代苯并咪唑衍生物。然而，该说明书没有提及所述化合物抑制人类食糜酶的活性。
因此，本发明的目地是提供为潜在的和临床上使用的人类食糜酶抑制剂的新的化合物。
本发明的公开因此，在广泛研究后达到以上目的，本发明的申请者已经发现以下1-15组化合物，从而完成了本发明。
1．由以下式(1)代表的硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐(在下文中称作“本发明的硫代苯并咪唑衍生物”) 其中R1和R2，同时或彼此独立代表氢原子、卤原子、三卤甲基、氰基、羟基、有1-4个碳原子的烷基或有1-4个碳原子的烷氧基，或R1和R2一起形成-O-CH2-O-、-O-CH2-CH2-O-或-CH2-CH2-CH2-，其中碳原子可由一个或多个具有1-4个碳原子的烷基取代；A代表单键、取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链或支链亚烷基，取代或未取代的、有6-11个碳原子的亚芳基，或取代或未取代的、有4-10个碳原子的亚杂芳基(在环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)，其中取代基代表卤原子、OH、NO2、CN、有1-6个碳原子的直链或支链烷基、有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基(所述取代基可在相邻位置通过一个缩醛键互相连接)、有1-6个碳原子的直链或支链烷硫基、有1-6个碳原子的直链或支链烷基磺酰基、有1-6个碳原子的直链或支链酰基、有1-6个碳原子的直链或支链酰氨基、三卤甲基、三卤甲氧基、苯基、氧代基团或可由一个或多个卤原子取代的苯氧基，其中所述取代基可在所述环或亚烷基的任何一个或多个位置上被独立取代；E代表COOR3、SO3R3、CONHR3、SO2NHR3、四唑基、5-氧代-1,2,4-噁二唑基或5-氧代-1,2,4-噻二唑基，其中R3代表氢原子或有1-6个碳原子的直链或支链烷基；G代表取代或未取代的、直链或支链的、可被一个或多个O、S、SO2和NR3间断的有1-6个碳原子的亚烷基，其中R3如上所定义，该取代基代表卤原子、OH、NO2、CN、有1-6个碳原子的直链或支链的烷基、有1-6个碳原子直链或支链的烷氧基(取代基可在相邻位置通过缩醛键互相连接)、三卤甲基、三卤甲氧基、苯基或氧代基团；m代表0-2的整数；当m是0和A是取代或未取代的、直链或支链的、有1-6个碳原子的亚烷基时，则J代表取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链、环状或支链烷基，有7-9个碳原子的取代或未取代芳基，有10-11个碳原子的取代的芳基，取代或未取代的、有4-10个碳原子的杂芳基(在环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)；当m是0和A是有6-11个碳原子的取代或未取代亚芳基或者有4-10个碳原子的取代或未取代亚杂芳基(在环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)时，则J代表取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链、环状或支链烷基，有6-11个碳原子的取代或未取代芳基或有4-10个碳原子的取代或未取代的杂芳基(在环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)；或当m是0和A是单键或者当m是1或2时，则J代表取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链、环状或支链烷基，有6-11个碳原子的取代或未取代芳基，或有4-10个碳原子的取代或未取代杂芳基(在环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)，其中所述取代基代表卤原子、OH、NO2、CN、有1-6个碳原子的直链或支链的烷基、有1-6个碳原子的直链或支链的烷氧基(取代基可在相邻位置通过缩醛键互相连接)、有1-6个碳原子的直链或支链烷硫基、有1-6个碳原子的直链或支链烷基磺酰基、有1-6个碳原子的直链或支链酰基、有1-6个碳原子的直链或支链酰氨基、取代或未取代的N-酰苯胺基、三卤甲基、三卤甲氧基、苯基、氧代基、COOR3基团或可由一个或多个卤原子取代的苯氧基，其中取代基在所述环或亚烷基的一个或多个位置上独立被取代；和X代表CH或氮原子。
2．硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐的特征在于，在上式(1)中，A是取代或未取代、有1-6个碳原子的直链或支链亚烷基，有6-11个碳原子的取代或未取代亚芳基或者有4-10个碳原子的取代或未取代亚杂芳基(在环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)。
3．硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐的特征在于，在上式(1)中，A是有4-10个碳原子的取代或未取代亚杂芳基(在环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)。
4．硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐的特征在于，在上式(1)中，m是1。
5．硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐的特征在于，在上式(1)中，m是2。
6．硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐的特征在于，在上式(1)中，m是0,A是取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链或支链亚烷基，J是有7-9个碳原子的取代或未取代芳基，有10-11个碳原子的取代的芳基，或取代或未取代的、有4-10个碳原子的杂芳基(在环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)。
7．硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐的特征在于，在上式(1)中，m是0,A是有6-11个碳原子的取代或未取代亚芳基或者有4-10个碳原子的取代或未取代亚杂芳基(在该环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)，J是有6-11个碳原子的取代或未取代芳基或者有4-10个碳原子的取代或未取代杂芳基(在该环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)。
8．硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐的特征在于，在上式(1)中，G是-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2CO-、-CH2CH2O-、-CH2CONH-、-CO-、-SO2-、-CH2SO2-、-CH2S-或-CH2CH2S-。
9．硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐的特征在于，在上式(1)中，R1和R2同时代表氢原子、卤原子、有1-4个碳原子的烷基或有1-4个碳原子的烷氧基，或R1和R2各独立代表氢原子、卤原子、有1-4个碳原子的烷基、有1-4个碳原子的烷氧基、三卤甲基、氰基或羟基。
10．硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐的特征在于，在上式(1)中，E代表COOH或四唑基。
11．硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐的特征在于，在上式(1)中，X代表CH。
12．硫代苯并咪唑衍生物或其医学上或接受的盐的特征在于，具有抑制人类食糜酶的活性。
13．药用组合物，其包含至少一种硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
14．药用组合物，它是对疾病的预防和/或治疗剂。
15．预防和/或治疗剂，其中所述疾病是炎性疾病、变应性疾病、呼吸器官疾病、循环器官疾病或骨/软骨代谢疾病。
以上有关本发明式(1)化合物的取代基的定义如下R1和R2同时或每个单独代表氢原子、卤原子、三卤甲基、氰基、羟基、有1-4个碳原子的烷基或有1-4个碳原子的烷氧基，或者R1和R2一起形成-O-CH2-O-、-O-CH2-CH2-O-或-CH2-CH2-CH2-，其中碳原子可由一个或多个有1-4个碳原子的烷基取代。作为有1-4个碳原子的烷基而言，可以提及甲基、乙基、(正，异-)丙基和(正、异、仲、叔-)丁基，优选甲基。优选R1和R2同时代表氢原子、氮原子、卤原子、有1-4个碳原子的烷基或有1-4个碳原子的烷氧基，或者R1和R2各独立代表氢原子、卤原子、三卤甲基、氰基、羟基、有1-4个碳原子的烷基或有1-4个碳原子的烷氧基。作为这里所用的卤原子，可以提及氟原子、氯原子、溴原子等，优选氯原子和氟原子。作为有1-4个碳原子的烷基，可以提及甲基、乙基、(正、异-)丙基和(正、异、叔-)丁基，优选甲基。作为有1-4个碳原子的烷氧基，可以提及甲氧基、乙氧基、(正、异-)丙氧基和(正、异、仲、叔-)丁氧基，优选甲氧基。
A代表单键、取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链或支链亚烷基，有6-11个碳原子的取代或未取代亚芳基，或有4-10个碳原子的取代或未取代亚杂芳基(在该环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)。可以优选提及取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链或支链亚烷基，有6-11个碳原子的取代或未取代亚芳基，或有4-10个碳原子的取代或未取代亚杂芳基(在该环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)。作为取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链或支链亚烷基，可以提及亚甲基、亚乙基、(正、异-)亚丙基和(正、异、叔-)亚丁基，优选亚乙基。作为有6-11个碳原子的取代或未取代亚芳基，可以提及亚苯基、亚茚基和亚萘基等，优选亚苯基。作为有4-10个碳原子的取代或未取代亚杂芳基(在该环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)，可以提及亚吡啶基、亚呋喃基、亚噻吩基、亚咪唑基、亚噻唑基、亚嘧啶基、亚噁唑基、亚异噁唑基、benzphenylene、亚苯并咪唑基、亚喹啉基、亚吲哚基、亚苯并噻唑基等，优选亚吡啶基、亚呋喃基和亚噻吩基。
另外，作为这里所用的取代基，可以提及卤原子、OH、NO2、CN、有1-6个碳原子的直链或支链烷基、有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基(其中该取代基可在相邻位置上通过缩醛键互相连接)、有1-6个碳原子的直链或支链烷硫基、有1-6个碳原子的直链或支链烷基磺酰基、有1-6个碳原子的直链或支链酰基、有1-6个碳原子的直链或支链酰基氨基、三卤甲基、三卤甲氧基、苯基或可由一个或多个卤原子取代的苯氧基。它们可在所述环或亚烷基的任何一个或多个位置上被独立取代。可以特别提及OH、氯代基、溴代基、硝基、甲氧基、氰基、亚甲二氧基、三氟甲基、甲基、乙基、(正、异-)丙基、(正、异、叔-)丁基等。
作为E，可以提及COOR3、SO3R3、CONHR3、SO2NHR3、四唑基、5-氧代-1,2,4-噁二唑基或5-氧代-1,2,4-噻二唑基，优选COOR3或四唑基。作为在此使用的R3可以提及氢原子或直链或支链的有1-6个碳原子的烷基，优选氢原子、甲基、乙基或叔-丁基，最优选氢原子。
G代表取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链或支链烷基(可被一个或多个O、S、SO2和NR3间隔，其中R3如上所定义)，所述取代基代表卤原子、OH、NO2、CN、有1-6个碳原子的直链或支链烷基、有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基(所述取代基可在相邻位置上通过缩醛键互相连接)、三卤甲基、三卤甲氧基、苯基或氧代基团。这里特别提及-CH2、-CH2CH2-、-CH2CO-、-CH2CH2O-、CH2CONH-、-CO-、-SO2-、-CH2SO2-、-CH2S-、-CH2CH2S-等，优选-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CO-或-CH2CH2O-。
m代表0-2的整数，优选0或2。
当m是0和A是取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链或支链亚烷基时，则J代表取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链、环状或支链烷基，取代或未取代的、有7-9个碳原子的芳基，有10-11个碳原子的取代芳基，取代或未取代的、有4-10个碳原子的杂芳基(在该环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)。优选有10-11个碳的取代芳基和取代或未取代的、有4-10个碳原子的杂芳基(在该环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)。作为取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链、环状或支链烷基，可以提及甲基、乙基、(正、异-)丙基、(正、异、仲、叔-)丁基、(正、异、新、叔-)戊基和环己基。作为有7-9个碳原子的取代或未取代芳基，可以提及茚基，作为有10-11个碳的取代芳基，可以提及萘基。作为有4-10个碳的取代或未取代的杂芳基(在该环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)，可以提及吡啶基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、嘧啶基、噁唑基、异噁唑基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、吲哚基、N-甲基吲哚基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并异噁唑基等，优选苯并噻吩基或N-甲基吲哚基。
当m是0和A是取代或未取代的有6-11个碳原子的亚芳基，或取代或未取代的有4-10个碳原子的亚杂芳基(在该环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)时，则J代表取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链、环状或支链烷基，取代或未取代的、有6-11个碳原子的芳基，或取代或未取代的、有4-10个碳原子的杂芳基(在该环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)，优选取代或未取代的、有6-11个碳原子的芳基和取代或未取代的、有4-10个碳原子的杂芳基(在该环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)。作为取代或未取代的、有6-11个碳原子的芳基，可以提及苯基、茚基、萘基等，优选苯基或萘基。作为取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链、环状或支链烷基和作为取代或未取代的、有4-10个碳原子的杂芳基(在该环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)，可以提及以上所述的那些基团。作为这里所用的取代基，可以提及卤原子、OH、NO2、CN、有1-6个碳原子的直链或支链烷基、有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基(该取代基可在相邻位置上通过缩醛键互相连接)、有1-6个碳原子的直链或支链烷硫基、有1-6个碳原子的直链或支链烷基磺酰基、有1-6个碳原子的直链或支链酰基、有1-6个碳原子的直链或支链酰基氨基、取代或未取代的N-酰苯胺基、三卤甲基、三卤甲氧基、苯基或可由一个或多个卤原子取代的苯氧基。它们可在所述环或烷基的任何一个或多个位置上被独立取代。这里可以特别提及OH、氯代基、溴代基、硝基、甲氧基、氰基、亚甲二氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、甲基、乙基、(正、异-)丙基、(正、异、仲、叔-)丁基、N-酰苯胺基团等。
X代表CH或氮原子，优选CH。
作为式(1)化合物，优选在表1-40中特别叙述的那些化合物。它们中最优选的化合物的编号是37、50、63、64、65、84、115、117、119、121、123、130、143、147、168、174、256、264、272、311、319、320、321、324、349、352、354、355、358、364、380、392、395、398、401、402、444、455、459、460、506、863、866和869。
表1-40中所述的A1-A21和J1-J85是以下所示的基团，其中E和G如上所述。

表1

表2

表3

表4

表5

表6

表7

表8

表9

表10

表11

表12

表13

表14

表15

表16

表17

表18

表19

表20

表21

表22

表23

表24

表25

表26

表27

表28

表29

表30

表31

表32

表33

表34

表35

表36

表37

表38

表39

表40

可用以下所示合成方法(A)或(B)制备本发明的硫代苯并咪唑衍生物(1)，其中E是COOH和m是0合成方法(A) 其中Z代表卤素、R1、R2、R3、A、G、J和X如上所定义。
因此，将2-硝基苯胺衍生物(a1)的硝基还原得到邻苯二胺(a2)。使CS2与上述二胺反应生成化合物(a3)，使卤化酯衍生物(a4)与(a3)反应得到(a5)。又使卤化衍生物(a6)与其反应得到(a7)，水解(a7)得到本发明的苯并咪唑衍生物(a8)。
可在催化还原的标准条件下进行硝基的还原反应。例如，在催化剂如Pd-C的存在下，在室温到100℃温度下用氢气进行反应。或者，也可采用在酸性条件下使用锌或锡处理的方法，或在中性或碱性条件下用锌粉的方法。
邻苯二胺衍生物(a2)与CS2的反应，可用例如在J.Org.Chem.19:631-637,1954中或在J.Med.Chem.36:1175-1187,1993中所叙述的方法进行(ETOH溶液)。
硫代苯并咪唑(a3)和卤化酯(a4)的反应可根据常规的S-烷基化条件进行，例如在碱如NaH、Et3N、NaOH或K2CO3存在下，在0℃-200℃温度下，在搅拌下进行。
硫代苯并咪唑(a5)和卤化衍生物(a6)的反应可根据常规的N-烷基化或N-酰化的条件，例如在碱如NaH、Et3N、NaOH或K2CO3存在下，在0℃-200℃温度下，在搅拌下进行。
作为羧基保护基R3的消除反应，优选使用利用碱如氢氧化锂或酸如三氟乙酸的水解方法。合成方法(B) 因此，2-硝基苯胺衍生物(a1)的氨基可用L保护得到(b1)。又使卤化衍生物(a6)与其反应得到(b2)，从中使L脱保护得到(b3)。将(b3)的硝基还原得到邻苯二胺衍生物(b4)。又使其与CS2反应得到化合物(b5)，使卤化酯衍生物(a4)与其反应得到(a7)，水解(a7)得到本发明的苯并咪唑衍生物。或者，也可使未保护的2-硝基苯胺衍生物(a1)与卤化衍生物(a6)或醛衍生物(b6)反应直接得到化合物(b3)。作为保护基L，可以提及三氟乙酰基、乙酰基、叔丁氧基羰基、苄基等。2-硝基苯胺衍生物(a1)和醛衍生物(b6)的反应可根据常规的还原胺化条件，用还原剂如复合氢化物，例如LiAIH4、NaBH4、NaB3CN、NaBH(OAc)3等或乙硼烷，在溶剂如乙醇、甲醇和二氯甲烷中，在0℃-200℃温度下进行。其它反应可如合成方法(A)进行。
可通过以下所示的合成方法(C)制备本发明的硫代苯并咪唑衍生物(1)，其中E是COOH,m是0和G是酰胺键合成方法(C) 其中Q代表亚甲基、亚苯基等，Z代表卤素。R1、R2、R3、A、J和X如上所定义，条件为R3是保护基团如乙基、甲基等，在酸中不活泼。
因此，使叔丁基酯卤化衍生物(c1)与硫代苯并咪唑化合物(a5)反应得到化合物(c2)，将其在酸性条件下水解得到产物(c3)。又与胺衍生物(c4)反应得到(c5)，将其水解得到本发明的苯并咪唑衍生物。
缩合酰胺化可用常规方法、用缩合剂进行。作为缩合剂，可以提及DCC、DIPC、EDC=WSCI、WSCI·HCl、BOP、DPPA等，这些缩合剂可单独使用或与HONSu、HOBt、HOOBt等联合使用。该反应可在合适的溶剂如THF、氯仿、叔丁醇等中，在0℃-200℃温度条件下进行。其它反应可如合成法(A)进行。
可通过以下所示合成法(D)制备本发明的硫代苯并咪唑衍生物(1)，其中E是COOH,m是0和G是醚键合成法(D) 其中Z代表卤素，R1、R2、R3、A、J和X如上所定义。
因此，使硫代苯并咪唑化合物(a5)与例如卤化醇衍生物(d1)反应得到化合物(d2)。又与酚衍生物(d3)反应得到产物醚(d4)，将其水解得到的本发明的苯并咪唑衍生物(a8)。
醚化反应可用膦化合物如三苯基膦和三丁基膦和偶氮化合物如DEAD和TMAD，在合适的溶剂如N-甲基吗啉和THF中，在0℃-200℃温度下，在Mitsunobu反应或其相关的反应中进行。其它反应可如合成法(A)进行。
可通过以下所示合成法(E)制备本发明的硫代苯并咪唑衍生物(1)，其中E是四唑和m是0合成法(E) 其中R1、R2、A、G、J和X如上所定义。
使腈(e1)与各种可转化的叠氮(azi)化合物反应得到四唑(e2)。
作为叠氮化合物，可以提及叠氮化三烷基锡例如叠氮化三甲基锡和叠氮酸或其铵盐。当使用有机锡叠氮化物时，相对于化合物(e1)使用1-4倍摩尔量。当用叠氮酸或其胺盐时，相对于化合物(e1)使用1-5倍摩尔量的叠氮化钠或叔胺如氯化铵和三乙胺。每个反应可在0℃-200℃温度下，在溶剂如甲苯、苯和DMF中进行。
可通过以下所示合成法(F)制备本发明的硫代苯并咪唑衍生物(1)，其中m是1或2合成法(F) 其中R1、R2、R3、A、G、J和X如上所定义。
因此，可以使硫代苯并咪唑化合物(a7)与过氧化物在合适的介质中反应得到亚砜衍生物(f1)和/或砜衍生物(f2)。作为所使用的过氧化物，可以提及过苯甲酸、间氯过苯甲酸、过乙酸、过氧化氢等，作为所用的溶剂，可以提及氯仿、二氯甲烷等。化合物(a7)与所使用的过氧化物的比率选自(但不限于)合适的范围，例如一般可优选使用1.2-5倍摩尔量。每个反应一般在大约0℃-50℃，优选0℃到室温下进行，一般在大约4-20小时内完成。
如果需要，可将本发明的苯并咪唑衍生物转化为医学上可接受的、无毒的阳离子盐。作为此类盐，可以提及碱金属离子如Na+和K+；碱土金属离子如Mg2+和Ca2+；金属离子如Al3+和Zn2+或有机碱如氨、三乙胺、1,2-乙二胺、丙二胺、吡咯烷、哌啶、哌嗪(pireradine)、吡啶、赖氨酸、胆碱、乙醇胺、N,N-二乙基乙醇胺、4-羟基哌啶、葡糖胺和N-甲基葡糖胺。其中优选Na+、Ca2+、赖氨酸、胆碱、N,N-二甲基乙醇胺和N-甲基葡糖胺。
本发明的苯并咪唑衍生物抑制人类食糜酶活性。准确地说，它们的IC50不大于1000，优选不小于0.01和低于1000，更优选不小于0.05和低于500。对人类食糜酶具有极好的抑制作用的本发明苯并咪唑衍生物，可用作许多疾病的临床上的预防和/或治疗药物。
本发明的苯并咪唑衍生物可与药学上可接受的载体一起作为药用组合物，制备成各种剂型后经口服或肠胃外途径给药。作为肠胃外给药，可经静脉内、皮下、肌内、经皮、直肠、经鼻和滴眼给药。
所述药用组合物的剂型包括以下类型。例如，在口服给药的情况下，可以提及片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、溶液、悬浮液、糖浆和胶囊。
这里所用的片剂可用常规方法，用药学上可接受的载体如赋形剂、粘合剂和崩解剂制备。丸剂、颗粒剂和粉剂也可用常规方法，用赋形剂等制备。溶液、悬浮液和糖浆可用常规方法，用甘油酯、醇、水、植物油等制备。胶囊可通过将颗粒、粉剂和溶液装填进由明胶等制成的胶囊中来制备。
在所述胃肠外制剂中，用于静脉内、皮下和肌内给药的肠胃外制剂可注射给药。作为注射剂，可将苯甲酸衍生物溶解于水溶性液体如生理盐水中或含有有机酯如丙二醇、聚乙二醇和植物油的非水溶性液体中。
在经皮给药的情况下，可使用如软膏和乳膏的剂型。软膏通过将苯甲酸衍生物与脂肪或脂质、凡士林等混合制备，乳膏可通过将苯甲酸衍生物与乳化剂混合制备。
在直肠给药的情况下，可用明胶软胶囊制备成栓剂。
在经鼻给药的情况下，可用含有液体或粉剂组合物的制剂。作为液体制剂的基质，可使用水、盐水、磷酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液等，另外可包含表面活性剂、抗氧化剂、稳定剂、防腐剂和增稠剂。作为粉剂的基质，可以提及易溶于水的聚丙烯酸盐、纤维素的低烷基醚、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、直链淀粉、支链淀粉酶等(它们是吸水性的)，或纤维素、淀粉、蛋白、树胶、交联乙烯基聚合物等(它们几乎不溶于水)，优选吸水性的。或者可将其混合使用。另外，对于粉剂而言，可加入抗氧化剂、色料、防腐剂、消毒剂、矫正剂等。这类液体制剂和粉制剂可以使用例如喷雾装置等给药。
对于滴眼给药而言，可使用作为水或非水的滴眼液。对于含水的滴眼液，可用无菌纯净水、生理盐水等作为溶剂。当无菌纯净水作为溶剂时，可加入悬浮剂如表面活性剂和聚合物增稠剂以便制备含水滴眼悬浮液。或者，可加入加溶剂如非离子表面活性剂以制备可溶的滴眼溶液。非水性滴眼液可用非水性溶剂(用于注射剂的溶剂)，用作非含水滴眼液。
用于眼部的制剂可通过制备滴眼液以外的其它方法制备，可以使用眼膏、敷用液、撒布粉和嵌入物。
对于鼻腔或口腔吸入而言，它们是作为本发明的苯并咪唑衍生物与常用的药用赋形剂的溶液或悬浮液一起吸入，例如，使用用于吸入的气溶胶喷雾等。或者，以冻干粉制剂形式的本发明的苯并咪唑衍生物可用吸入装置(可以直接接触肺)给药到肺部。
根据需要，可以向这些不同的制剂中加入药学上可接受的载体，如等渗剂、防腐剂、消毒剂、润湿剂、缓冲剂、乳化剂、分散剂、稳定剂等。
为了灭菌，可以向这些制剂中掺入抗菌剂、经滞留细菌的过滤器过滤处理、加热、辐照等。或者，可制备成无菌的固体制剂，在临用前将其溶解或悬浮在合适的无菌溶液中。
本发明的苯并咪唑衍生物的剂量，根据疾病的类型、给药途径、病人的状况、年龄、性别、体重等而定，但口服一般剂量是大约1-500mg/天/病人，优选1-300mg/天/病人。肠胃外给药如静脉内、皮下、肌内、经皮、直肠、鼻腔、滴眼和吸入给药，剂量大约为0.1-100mg/天/病人，优选0.3-30mg/天/病人。
当本发明的苯并咪唑衍生物作为预防剂使用时，可根据已知的方法依每个病人的状况给药。
作为本发明的预防和/或治疗剂所适应的疾病，可以提及例如呼吸器官的疾病如支气管哮喘，炎性/变应性疾病如变应性鼻炎、特应性皮炎和荨麻疹；循环器官的疾病如硬化性血管损伤、血管内狭窄、外周循环障碍、肾衰竭和心衰竭；骨/软骨代谢疾病如类风湿性关节炎和骨关节炎。
向2-((5,6-二甲基-1-(1-萘甲基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(23mg,0.08mmol)的四氢呋喃(1ml)和甲醇(0.5ml)溶液中加入4N氢氧化钠水溶液(0.25ml)。在室温下搅拌5小时后，加入6N盐酸以便终止该反应，随后用乙酸乙酯萃取。用饱和盐水洗涤乙酸乙酯层并用无水硫酸钠干燥。在减压下蒸发溶剂得到标题化合物(24mg，定量收率)。
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
计算值M=452.16，实测值(M+H)+=453.2
表41

表42

表43

表44

表45

实施例3．第547号化合物的制备将三乙胺(276μl,1.98mmol)和2-(溴乙基)苯甲酸叔丁酯(538mg,1.99mmol)加入到5,6-二甲基苯并咪唑-2-硫醇(236mg,1.32mmol)的2ml二甲基甲酰胺溶液中，并将其在80℃下搅拌3小时。当反应完成后加入水，随后用乙酸乙酯萃取。经无水硫酸钠干燥乙酸乙酯层后浓缩，经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯=3∶1)纯化残留物得到2-((5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸叔丁酯(288mg，产率59％)。
将2-((5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸叔丁酯(30mg,0.082mmol)溶于3ml氯仿中，向其中顺序加入三乙胺(17μl,0.123mmol)和苯甲酰氯(14μl,0.123mmol)，在室温下将该混合物搅拌2小时。当反应完成后加入水，随后用乙酸乙酯萃取。经无水硫酸钠干燥乙酸乙酯层后浓缩，得到2-((5,6-二甲基-1-(苯基羰基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸叔丁酯(38mg，定量收率)。
将2-((5,6-二甲基-1-(苯基羰基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸叔丁酯溶于1ml二氯甲烷中，向其中加入三氟乙酸(1ml)，并在室温下将该混合物搅拌6小时。反应完成后，在减压下蒸发溶剂并干燥过夜，得到标题化合物(33mg，定量收率)。
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
计算值M=416.12，实测值(M+H)+=417.0实施例4．第561号化合物的制备以与工作实施例3类似的方法得到标题化合物。
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
计算值M=452.09，实测值(M+H)+=453.2参考实施例4．3-(萘基甲基)咪唑并(5,4-b)吡啶-2-硫醇的制备向2-氨基-3-硝基吡啶(1680mg,12mmol)的二甲基甲酰胺(20ml)溶液中加入氢化钠(75mg,0.55mmol)和1-氯代甲基萘(74μl,0.55mmol)。在80℃下搅拌所得溶液17小时后加入水，随后用乙醚萃取。经无水硫酸镁干燥乙醚层后浓缩，经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯=4∶1)纯化残留物得到萘基甲基(3-硝基(2-吡啶基))胺(903mg，产率27％)。
向萘基甲基(3-硝基(2-吡啶基))胺(900mg,3.2mmol)的乙醇(40ml)溶液中加入90.0mg的10％的Pd-C。将得到的溶液在氢气氛下、在50℃温度下搅拌8小时后，经硅藻土过滤除去Pd-C。将得到的溶液浓缩得到(3-氨基(2-吡啶基))萘基甲基胺(860mg，产率99％)。向所得的(3-氨基(2-吡啶基))萘基甲基胺(860mg,3.2mmol)的乙醇(20ml)溶液中加入二硫化碳(6.1ml,102mmol)。在搅拌下将所得溶液加热至回流12小时后，将其放置在室温下5小时。过滤沉积的沉淀物并用乙醇(5ml)洗涤三次。在80℃减压下干燥5小时得到标题化合物(555mg，产率56％)。
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
计算值M=291.08，实测值(M+H)+=292.3参考实施例5．3-((2,5-二甲基苯基)甲基)咪唑并(5,4-b)吡啶-2-硫醇的制备用与参考实施例4类似的方法合成标题化合物。
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
计算值M=269.01，实测值(M+H)+=270.2实施例5．第256号化合物的制备以与参考实施例2类似的方法，用在参考实施例4中得到的3-(萘基甲基)咪唑并(5,4-b)吡啶-2-硫醇(30mg,0.1mmol)得到2-((3-(萘基甲基)咪唑并(5,4-b)吡啶-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(30mg，产率70％)。
以与实施例1类似的方法，将如此得到的2-((3-(萘基甲基)咪唑并(5,4-b)吡啶-2-硫代)甲基)苯甲酸甲酯(30mg,0.068mmol)水解，得到标题化合物(18.3mg，产率66％)。
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
计算值M=425.12，实测值(M+H)+=426.1
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
表46

表47

表48

实施例7．第264号化合物的制备将4-甲基-2-硝基苯胺(913mg,6mmol)溶于乙腈(18ml)中，向其中加入无水三氟乙酸(1.00ml,7.2mmol)并将该混合物回流1.5小时。冷却至室温后，在减压下浓缩并干燥，得到4-甲基-2-硝基三氟乙酰苯胺(1.396g，产率94％)。
将4-甲基-2-硝基三氟乙酰苯胺(1.396g,5.63mmol)溶于二甲基甲酰胺(14ml)中，然后在室温下顺序加入碳酸钾(940mg,6.80mmol)和1-氯代甲基萘(1.15g,6.51mmol)并加热至100℃。1小时40分钟后，加入5N氢氧化钠水溶液(7.5ml)，实际上回流15分钟。15分钟后，将其冷却至室温并加入水(180ml)，在4℃下放置过夜。过滤沉淀的结晶并干燥得到((1-萘基)甲基)(4-甲基-2-硝基-苯基)胺(1.587g，产率96％)。
向(1-萘基)甲基)(4-甲基-2-硝基-苯基)胺(1.0021g,3.43mmol)溶液中加入乙醇(5ml)和1,4-二噁烷(5ml)，再加入2.058M氢氧化钠水溶液(1ml)，在油浴中回流。15分钟后，从油浴中移出，然后分批加入锌粉(897mg,13.72mmol)。再在油浴中回流2小时。2小时后，在减压下浓缩并溶于乙酸乙酯(50ml)中，用饱和的盐水(25ml)洗涤两次。经硫酸镁干燥后，在减压下浓缩并干燥得到((1-萘基)甲基)(2-氨基-4-甲基-苯基)胺(943.1mg)，为棕色的油。
随后，将((1-萘基)甲基)(2-氨基-4-甲基-苯基)胺(943.1mg,3.59mmol)溶于乙醇(6.4ml)中，加入二硫化碳(7ml,116mmol)，然后回流。10小时后使其降至室温，在减压下浓缩。将乙醇(2ml)加入到残余物中，在室温下搅拌30分钟，在冰上再搅拌30分钟。过滤得到的结晶并干燥得到1-((1-萘基)甲基)-6-甲基-苯并咪唑-2-硫醇(459.1mg，产率44％,2步)。
将1-((1-萘基)甲基)-6-甲基-苯并咪唑-2-硫醇(431.1mg,1.42mmol)溶于二甲基甲酰胺(12ml)中，加入三乙胺(0.296ml,2.12mmol)和2-溴代甲基苯甲酸甲酯(390.1mg,1.70mmol)并加热至80℃。5小时50分钟后，加入三乙胺(0.296ml,2.12mmol)和2-溴代甲基苯甲酸甲酯(325mg,1.42mmol)并加热1小时10分钟。然后在减压下浓缩并溶于乙酸乙酯(80ml)中，用水(30ml)洗涤两次并经硫酸镁干燥。在减压下浓缩溶剂。将残余物在乙酸乙酯-己烷中结晶得到410mg，经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯=6∶1)纯化母液回收87mg相同组分的结晶，共有497mg2-((1-((1-萘基)甲基)-6-甲基-苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(产率78％)。
将2-((1-((1-萘基)甲基)-6-甲基-苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(497mg,1.098mmol)溶于甲醇(10ml)和四氢呋喃(10ml)中，向其中加入4N氢氧化锂水溶液(6.86ml)。在室温下搅拌2小时30分钟后，加入饱和的柠檬酸水溶液(10ml)以便终止反应，减压下将该混合物浓缩至溶剂量的1/3，将其溶于乙酸乙酯(80ml)中并用水(20ml)洗涤五次。在减压下浓缩有机层后，将乙腈(10ml)加入到残余物中，再在减压下将其浓缩，滤出得到的结晶并干燥得到标题化合物(439.1mg，产率91％)。
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
计算值M=438.14，实测值(M+H)+=439.3实施例8．第272号化合物的制备以与工作实施例7类似的方法得到标题化合物。
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
计算值M=454.14，实测值(M+H)+=455.3实施例9．第65号化合物的制备将2-硝基苯胺(829mg,6mmol)和1-甲基吲哚甲醛(1242mg,7.8mmol)溶于20ml四氢呋喃中，顺次加入乙酸(200μl)和NaBH(OAc)3(5087mg,24mmol)，在室温下搅拌过夜。然后加入饱和碳酸氢钠水溶液，随后用乙酸乙酯萃取，经无水硫酸钠干燥并蒸发溶剂。经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯=95∶5)纯化后，得到((1-甲基吲哚-3-基)甲基)(2-硝基苯基)胺(264mg，产率18％)。
将((1-甲基吲哚-3-基)甲基)(2-氨基苯基)胺(264mg,0.939mmol)溶于乙醇(10ml)中，加入Pd-C(50mg,10％Pd,0.047mmol)，在氢气氛中，在室温下搅拌6小时。当反应完成后，滤出Pd-C并蒸发溶剂得到((1-甲基吲哚-3-基)甲基)(2-氨基苯基)胺(212mg，产率90％)。
将((1-甲基吲哚-3-基)甲基)(2-氨基苯基)胺(212mg,0.845mmol)溶于吡啶(1ml)中，加入二硫化碳(1ml,16.9mmol)。将该混合物在氮气氛下回流1小时。将溶剂蒸发后，经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯=2∶1)纯化得到((1-甲基吲哚-3-基)甲基)苯并咪唑-2-硫醇(96mg，产率39％)。
将氢化钠(12mg,0.342mmol)和二甲基甲酰胺(2ml)加入到预先干燥的反应容器中。向该混合物中加入((1-甲基吲哚-3-基)甲基)苯并咪唑-2-硫醇(50mg,0.171mmol)和2-溴代甲基苯甲酸甲酯(59mg,0.257mmol)，然后将该混合物在60℃下搅拌1小时。加入水，随后用乙酸乙酯萃取。经无水硫酸钠干燥乙酸乙酯层后浓缩，经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯=2∶1)纯化残余物得到2-((1-((-甲基吲哚-3-基)甲基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(54mg，产率74％)。
向溶于四氢呋喃(2ml)和甲醇(1ml)中的2-((1-((1-甲基吲哚-3-基)甲基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(54mg,0.122mmol)的溶液中加入4N氢氧化锂水溶液(0.5ml)。在室温下搅拌过夜后，加入6N盐酸使反应停止，随后用乙酸乙酯萃取。用饱和的盐水洗涤乙酸乙酯层后，用无水硫酸钠干燥。在减压下蒸发溶剂得到标题化合物(48mg，产率92％)。
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
计算值M=427.14，实测值(M+H)+=428.2
向2-((1-((2-((叔-丁基)氧基羰基)苯基)甲基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(248mg,0.51mmol)中加入4N盐酸的二噁烷溶液(1.28ml,5.1mmol)，在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂后，在减压下干燥得到2-((2-((2-(甲氧基羰基)苯基)甲基硫代)苯并咪唑基)甲基)苯甲酸(220mg,定量收率)。
将2-((2-((2-(甲氧基羰基)苯基)甲基硫代)苯并咪唑基)甲基)苯甲酸(180mg,0.42mmol)溶于氯仿(6ml)中，顺次加入HOBT(68mg,0.504mmol)、苯胺(46μl,0.504mmol)、叔-丁醇(1.2ml)和EDCI(97mg,0.504mmol)，在室温下搅拌过夜。加入水，随后用二氯甲烷萃取。经无水硫酸钠干燥后过滤，蒸发溶剂。经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯=3∶2)纯化得到2-((1-((2-(N-苯基氨基甲酰基)苯基)甲基硫代)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(86mg，产率40％)。
向溶于四氢呋喃(2ml)和甲醇(1ml)中的如此得到的2-((1-((2-(N-苯基氨基甲酰基)苯基)甲基硫代)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(86mg,0.169mmol)溶液中加入4N氢氧化锂水溶液(0.5ml)，在60℃下搅拌约2小时。加入6N盐酸水溶液使反应停止，用乙酸乙酯萃取该溶液。用饱和的盐水洗涤乙酸乙酯层后，经无水硫酸钠干燥。在减压下蒸发溶剂得到标题化合物(83mg，定量收率)。
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
计算值M=493.15，实测值(M+H)+=494.2实施例12．以与工作实施例11类似的方法,用多种苯甲酸酯衍生物得到上表48中所示化合物。
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。实施例13．第619号化合物的制备将氢化钠(400mg,10.0mmol)和二甲基甲酰胺(30ml)加入到预先干燥的反应容器中。向该混合物中加入2-(苯并咪唑-2-基硫代甲基)苯甲酸甲酯(1500mg,5.0mmol)和溴代乙酸盐叔-丁酯(1463mg,7.5mmol)，将该混合物在80℃下搅拌2小时。加入水，随后用乙醚萃取。用无水硫酸钠干燥该醚层后浓缩，经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯=5∶1)纯化残余物，得到2-(2-((2-(甲氧基羰基)苯基)甲基硫代)苯并咪唑基)乙酸叔-丁酯(1298mg，产率63％)。
向2-(2-((2-(甲氧基羰基)苯基)甲基硫代)苯并咪唑基)乙酸叔-丁酯(1290mg,3.13mmol)中加入三氟乙酸(15ml)，在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂后，在压减下干燥得到2-(2-((2-(甲氧基羰基)苯基)甲基硫代)苯并咪唑基)乙酸(715mg，产率64％)。
将2-(2-((2-(甲氧基羰基)苯基)甲基硫代)苯并咪唑基)乙酸(35mg,0.1mmol)溶于四氢呋喃(3ml)中，向其中加入苯胺(11.2mg,0.12mmol)和EDCI(23mg,0.12mmol)，然后将该混合物在室温下搅拌过夜。然后加入水，随后用乙酸乙酯萃取。经无水硫酸钠干燥后过滤，蒸发溶剂。硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯=3∶2)纯化残留物得到2-((1-((N-苯基氨基甲酰基)甲基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲苯甲酯(27.5mg，产率64％)。
如工作实施例1中所述，将如此得到的2-((1-((N-苯基氨基甲酰基)甲基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(20mg,0.046mmol)水解，得到标题化合物(6.9mg，产率36％)。
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
计算值M=417.11，实测值(M+H)+=418.0
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
表49

表50

表51

表52

参考实施例6．2-((1-(2-羟乙基)-5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯的制备向在参考实施例2中得到的、溶于二甲基甲酰胺中的2-((5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(326mg,1mmol)的溶液中加入碳酸钾(207mg,1.5mmol)和2-溴代乙醇(150mg,1.2mmol)，将所得溶液在80℃下搅拌12小时。当反应完成后，用乙醚萃取并蒸发溶剂。经快速柱层析(己烷∶乙酸乙酯=4∶1)纯化残余物得到标题化合物(248mg,产率67％)。
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
计算值M=370.14，实测值(M+H)+=371.2实施例15．第736号化合物的制备向溶于N-甲基吗啉(3ml)中的2-((1-(2-羟乙基)-5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(45mg,0.23mmol)溶液中加入Pph3(62mg,0.24mmol)和DEAD(10.6ml,40％于甲苯中，0.24mmol)，在室温下搅拌该混合物。10分钟后，加入苯酚(11.3mg,0.12mmol)并将其在室温下搅拌12小时。蒸发溶剂，经薄层层析(己烷∶乙酸乙酯=1∶1)纯化残余物得到2-((5,6-二甲基-1-(2-苯氧乙基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(44mg，产率81％)。
以与实施例1类似的方法，使用2-((5,6-二甲基-1-(2-苯氧乙基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(35mg,0.078mmol)，进行水解反应得到标题化合物(31mg，产率94％)。用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
计算值M=432.15，实测值(M+H)+=433.2
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
以与实施例1类似的方法，将其水解得到标题化合物(5.2mg，产率76％)。
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
计算值M=440.12，实测值(M+H)+=441.3实施例18．第869号化合物的制备在冰上冷却下，向溶于二氯甲烷(5ml)中的、在实施例2中得到的第37号化合物的酯(39mg,0.094mmol)的溶液中，加入50-60％间-氯过苯甲酸(64mg,0.374mmol)。在室温下搅拌得到的溶液4小时后，倒入饱和的碳酸氢钠溶液，用氯仿萃取得到的溶液。用水洗涤氯仿层后浓缩，经快速层析(己烷∶乙酸乙酯=5∶1)纯化残余物得到2-(((1-((2,5-二甲基苯基)甲基)苯并咪唑-2-基)磺酰基)甲基)苯甲酸甲酯(37mg，产率87％)。
以与实施例1类似的方法，水解2-(((1-((2,5-二甲基苯基)甲基)苯并咪唑-2-基)磺酰基)甲基)苯甲酸甲酯(64mg,0.14mmol)得到标题化合物(53mg，产率87％)。
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
计算值M=434.13，实测值(M+H)+=435.2
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。实施例20．第952号化合物的制备向溶于二甲基甲酰胺(10ml)中的5,6-二甲基苯并咪唑-2-硫醇(713mg,4mmol)中加入三乙胺(836μl,6mmol)和z-溴代甲基苄腈(1176mg,6mmol)。在80℃下搅拌过夜后，向混合物中加入水，随后用乙酸乙酯提取。用无水硫酸钠干燥乙酸乙酯层后浓缩，经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯=3∶2)纯化残余物得到2-((5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苄腈(benzenecarbonitrile)(1159mg，产率99％)。
将氢化钠(178mg,4.90mmol)和四氢呋喃(30ml)加入到预先干燥的容器中。向该混合物中加入2-((5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苄腈(719mg,2.45mmol)和2,5-二氯代苄基氯(543μl,4.90mmol)，在60℃下将该混合物搅拌40分钟。加入水随后用乙酸乙酯萃取。经无水硫酸钠干燥乙酸乙酯层后浓缩，用硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯=3∶1)纯化残余物得到2-((1-((2,5-二甲基苯基)甲基)-5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苄腈(370mg，产率37％)。
将2-((1-((2,5-二甲基苯基)甲基)-5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苄腈(165mg,0.401mmol)溶于甲苯(3ml)中，向其中加入Me3SnN3(124mg,0.602mmol)，在氮气氛下回流过夜。当反应完成后，蒸发溶剂，经硅胶柱层析(二氯甲烷∶甲醇=19∶1)纯化残余物得到标题化合物(75mg，产率41％)。
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。
计算值M=454.19，实测值(M+H)+=455.2
用LC-MS鉴定分子量确定该化合物。实施例22．重组人肥大细胞食糜酶的制备根据Urada等(Journal Biological Chemistry 266:17173,1991)中所报道的方法制备重组pro-型人肥大细胞食糜酶。从而，通过肝素琼脂糖凝胶(Pharmacia)纯化用含有编码人肥大细胞食糜酶的cDNA的重组杆状病毒感染的昆虫细胞(Tn5)的培养上清液。通过Murakami等(Journal Biological Chemistry 270:2218,1995)中报道的方法进一步用肝素琼脂糖凝胶纯化后，得到的活化的人肥大细胞食糜酶。实施例23．抑制重组人肥大细胞食糜酶活性的测定将含有本发明化合物的DMSO溶液(2μl)加入到含有1-5ng在工作实施例22中得到的活化人肥大细胞食糜酶的50μl缓冲液A(0.5-3.0MNaCl,50mM Tris-HCl,pH8.0)中，向其中加入含有作为底物的0.5mM琥珀酰-丙氨酰-组氨酰-脯氨酰-苯丙氨酰对硝基苯胺(Bacchem)，使混合物在室温下反应5分钟。测量在405nm处吸光度随时间的变化，以评定抑制活性。
结果，在第63、64、65、143、174、256、264、272、311、354、319、349、358、395、401和402号化合物中观察到IC50=不小于1nM和低于10nM，在第37、50、84、115、117、119、121、123、130、147、168、256、320、321、324、352、355、364、380、392、398、444、455、459、460、506、863、866和869号化合物中观察到IC50=不小于10nM和不大于100nM。
如上文所述，本发明的苯并咪唑衍生物显示出有效的食糜酶抑制活性。因此揭示出本发明的苯并咪唑衍生物是可临床应用的、人类食糜酶活性的抑制剂，并可用于预防和/或治疗许多涉及人类食糜酶的疾病。
权利要求
1．由以下式(1)代表的硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐 其中R1和R2，同时或彼此独立代表氢原子、卤原子、三卤甲基、氰基、羟基、有1-4个碳原子的烷基或有1-4个碳原子的烷氧基或R1和R2一起形成-O-CH2-O-、-O-CH2-CH2-O-或-CH2-CH2-CH2-，其中碳原子可由一个或多个具有1-4个碳原子的烷基取代；A代表单键、取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链或支链亚烷基，取代或未取代的、有6-11个碳原子的亚芳基，或取代或未取代的、有4-10个碳原子的亚杂芳基(在环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)，其中取代基代表卤原子、OH、NO2、CN、有1-6个碳原子的直链或支链烷基、有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基(该取代基可在相邻位置通过一个缩醛键互相连接)、有1-6个碳原子的直链或支链烷硫基、有1-6个碳原子的直链或支链烷基磺酰基、有1-6个碳原子的直链或支链酰基、有1-6个碳原子的直链或支链酰氨基、三卤甲基、三卤甲氧基、苯基、氧代基团或可由一个或多个卤原子取代的苯氧基，其中所述取代基可在所述环或亚烷基的任何一个或多个位置上被独立取代；E代表COOR3、SO3R3、CONHR3、SO2NHR3、四唑基、5-氧代-1,2,4-噁二唑基或5-氧代-1,2,4-噻二唑基，其中R3代表氢原子或有1-6个碳原子的直链或支链烷基；G代表取代或未取代的、直链或支链的、可被一个或多个O、S、SO2和NR3间断的有1-6个碳原子的亚烷基，其中R3如上所定义，该取代基代表卤原子、OH、NO2、CN、有1-6个碳原子的直链或支链的烷基、有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基(该取代基可在相邻位置通过缩醛键互相连接)、三卤甲基、三卤甲氧基、苯基或氧代基团；m代表0-2的整数；当m是0和A是取代或未取代的、直链或支链的、有1-6个碳原子的亚烷基时，则J代表取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链、环状或支链烷基，有7-9个碳原子的取代或未取代芳基，有10-11个碳原子的取代的芳基，取代或未取代的、有4-10个碳原子的杂芳基(在环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)；当m是0和A是取代或未取代的有6-11个碳原子的亚芳基或者取代或未取代的有4-10个碳原子的亚杂芳基(在环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)时，则J代表取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链、环状或支链烷基，有6-11个碳原子的取代或未取代芳基或有4-10个碳原子的取代或未取代的杂芳基(在环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)；或当m是0和A是单键或者当m是1或2时，则J代表取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链、环状或支链烷基，有6-11个碳原子的取代或未取代芳基，或有4-10个碳原子的取代或未取代杂芳基(在环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子)，其中所述取代基代表卤原子、OH、NO2、CN、有1-6个碳原子的直链或支链的烷基、有1-6个碳原子的直链或支链的烷氧基(该取代基可在相邻位置通过缩醛键互相连接)、有1-6个碳原子的直链或支链烷硫基、有1-6个碳原子的直链或支链烷基磺酰基、有1-6个碳原子的直链或支链酰基、有1-6个碳原子的直链或支链酰氨基、取代或未取代的N-酰苯胺基、三卤甲基、三卤甲氧基、苯基、氧代基、COOR3基团或可由一个或多个卤原子取代的苯氧基，其中该取代基在所述环或亚烷基的一个或多个位置上独立被取代；和X代表CH或氮原子。
2．根据权利要求1的硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其特征在于在上式(1)中，A是取代或未取代、有1-6个碳原子的直链或支链亚烷基，有6-11个碳原子的取代或未取代亚芳基或者取代或未取代的有4-10个碳原子的亚杂芳基，在环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子。
3．根据权利要求1或2的硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其特征在于在上式(1)中，A是有4-10个碳原子的取代或未取代亚杂芳基，在环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子。
4．根据权利要求1、2和3中任一项的硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其特征在于在上式(1)中，m是1。
5．根据权利要求1、2和3中任一项的硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其特征在于在上式(1)中，m是2。
6．根据权利要求1、2和3中任一项的硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其特征在于在上式(1)中，m是0,A是取代或未取代的、有1-6个碳原子的直链或支链亚烷基，J是有7-9个碳原子的取代或未取代芳基，有10-11个碳原子的取代的芳基，或取代或未取代的、有4-10个碳原子的杂芳基，在环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子。
7．根据权利要求1、2和3中任一项的硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其特征在于在上式(1)中，m是0,A是有6-11个碳原子的取代或未取代亚芳基或者有4-10个碳原子的取代或未取代亚杂芳基，在该环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子，J是有6-11个碳原子的取代或未取代芳基或者有4-10个碳原子的取代或未取代杂芳基，在该环上可含有一个或多个氧、氮和硫原子。
8．根据权利要求1-7中任一项的硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其特征在于在上式(1)中，G是-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2CO-、-CH2CH2O、-CH2CONH-、-CO-、-SO2-、-CH2SO2-、-CH2S-或-CH2CH2S-。
9．根据权利要求1-8中任一项的硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其特征在于在上式(1)中，R1和R2同时代表氢原子、卤原子、有1-4个碳原子的烷基或有1-4个碳原子的烷氧基，或R1和R2各独立代表氢原子、卤原子、有1-4个碳原子的烷基、有1-4个碳原子的烷氧基、三卤甲基、氰基或羟基。
10．根据权利要求1-9中任一项的硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其特征在于在上式(1)中，E代表COOH或四唑基。
11．根据权利要求1-10中任一项的硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其特征在于在上式(1)中，X代表CH。
12．根据权利要求1-11中任一项的硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其特征在于具有抑制人类食糜酶的活性。
13．药用组合物，其包含至少一种根据权利要求1-12中任一项的硫代苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
14．根据权利要求13的药用组合物，其为疾病的预防和/或治疗剂。
15．根据权利要求14的预防和/或治疗剂，其中所述疾病是炎性疾病、变应性疾病、呼吸器官疾病、循环器官疾病或骨/软骨代谢疾病。
全文摘要
由通式(1)代表的硫代苯并咪唑衍生物或其药学上可接受的盐，其具有有效的人类食糜酶抑制活性，因此，临床上用作预防和/或治疗各种与人类食糜酶有关的疾病。
文档编号A61K31/415GK1316998SQ9981081
公开日2001年10月10日 申请日期1999年7月14日 优先权日1998年7月15日
发明者松本由之, 竹内进, 长谷直树 申请人:帝人株式会社