本发明的实施方案，但仅通过举例说明的方式给出，而非限制性 的。根据所述详细描述，本发明的范围内的各种变化和修改对于本领域技术人员来说是显 而易见的。
[0029] 附图简沐
[0030] 共同地构成附图的以下描述的图仅用于说明目的而不是为了限制。
[0031] 图1描述了编码人艾杜糖-2-硫酸酯酶（I2S)蛋白的成熟形式的氨基酸序列（SEQ IDNO: 1)，并且指示了蛋白质序列内用于N连接糖基化和半胱氨酸转化的潜在位点。
[0032] 图2描述了用于共表达I2S和FGE的示例性构建体（即，SUMF1)设计。（A)分开 的载体上的表达单位（用于共转染或随后的转染）；(B)相同载体上的表达单位（一次转 染）：（1)分隔的顺反子和（2)转录连接的顺反子。
[0033] 图3描述了观察到的与甲酰甘氨酸转化百分比相关的I2S比活性的示例性水平。
[0034] 图4描述了相较于参考重组I2S酶，针对使用在无血清细胞培养条件下生长的 I2S-AF2D和4D细胞系产生的重组I2S酶产生的示例性聚糖特征谱。
[0035]
[0036] 为了使本发明更容易被理解，首先定义某些术语。对下列术语和其他术语的附加 定义陈述于整个说明书中。
[0037] 氨基酸：如本文中所用，术语"氨基酸"在其最广泛意义上是指可并入多肽链中的 任何化合物和/或物质。在一些实施方案中，氨基酸具有一般结构H2N-C(H) (R) -COOH。 在一些实施方案中，氨基酸是天然存在的氨基酸。在一些实施方案中，氨基酸是合成氨基 酸；在一些实施方案中，氨基酸是D-氨基酸；在一些实施方案中，氨基酸是L-氨基酸。"标 准氨基酸"是指通常在天然存在的肽中发现的20种标准L-氨基酸中的任一种。"非标准 氨基酸"是指除标准氨基酸外的任何氨基酸，无论其是合成制备的还是从天然来源获得的。 如本文中所用，"合成氨基酸"涵盖化学修饰氨基酸，包括但不限于盐，氨基酸衍生物（如酰 胺）和/或取代。氨基酸，包括在肽中的羧基和/或氨基末端氨基酸，可通过甲基化、酰胺 化、乙酰化、保护基团和/或利用其他化学基团的取代来进行修饰，所述其他化学基团可改 变肽的循环半衰期而不会不利地影响它们的活性。氨基酸可参与二硫键。氨基酸可以包含 一种或多种翻译后修饰，例如与一种或多种化学实体（例如，甲基、乙酸酯基、乙酰基、磷酸 酯基、甲酰基部分、类异戊二烯基、硫酸酯基、聚乙二醇部分、脂质部分、碳水化合物部分、生 物素部分等的缔合。在一些实施方案中，可在用于细胞培养的补充培养基中提供本发明的 氨基酸，或可将所述氨基酸用于所述补充培养基。在一些实施方案中，提供于或用于补充细 胞培养基中的氨基酸可以以盐或水合物的形式提供。
[0038] 大致：如本文中所用，术语"大致"或"约"，如用于一个或多个目标值，意指与所述 参照值相似的值。在某些实施方案中，除非另外指出或另外地根据上下文显而易见的（除 其中这样的数值超过可能值的100%外），否则术语"大致"或"约"是指在任一方向（大于 或小于）上落在所述参照值的 25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、 11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少内的值的范围。
[0039] 分批培养：如本文中所用，术语"分批培养"是指培养细胞的方法，在所述方法中在 培养过程开始时提供最终将用于培养细胞的所有组分，包括培养基（参见下文中"培养基" 的定义）以及细胞本身。通常在某一点停止分批培养，随后收获培养基中细胞和/或组分， 并且任选地进行纯化。
[0040] 生物利用度：如本文中所用，术语"生物利用度"通常是指到达受试者的血流的施 用剂量的百分比。
[0041] 生物活性：如本文中所用，短语"生物活性"是指在生物系统（例如，细胞培养物、 生物体等）中具有活性的任何物质的特征。例如，当向生物体施用时对该生物体具有生物 作用的物质被认为是有生物活性的。生物活性还可通过体外测定（例如，体外酶促测定如 硫酸酯释放测定法）来确定。在具体实施方案中，当蛋白质或多肽具有生物学活性时，共 有蛋白质或多肽的至少一种生物活性的该蛋白质或多肽的一部分通常称为"生物活性"部 分。在一些实施方案中，从细胞培养系统产生和/或纯化蛋白质，当向受试者施用时，所 述蛋白质显示生物活性。在一些实施方案中，蛋白质需要进一步加工以变得具有生物活 性。在一些实施方案中，蛋白质需要翻译后修饰，例如但不限于，糖基化（例如，唾液酸化 (sialyation))、法尼基化（farnysylation)、切割、折叠、甲酰甘氨酸转化及其组合，以变得 具有生物活性。在一些实施方案中，作为前体（proform)形式（即未成熟的形式）产生的 蛋白质可能需要额外的修饰来变得具有生物活性。
[0042] 生物反应器：如本文所用，术语"生物反应器"是指用于宿主细胞培养物生长的容 器。生物反应器可具有任何尺寸，只要它对于哺乳动物细胞的培养是有用的。通常情况下， 生物反应器将至少为1升，并且可以是10、100、250、500、1000、2500、5000、8000、10,000、 12, 0000升或以上或其间的任何容积。生物反应器的内部条件，包括但不限于pH值、克分子 渗透压浓度、〇)2饱和度、0 2饱和度、温度及其组合，在培养期间通常受到控制。生物反应器 可由适合于在本发明的培养条件下在培养基中保持细胞的任何材料（包括玻璃、塑料或金 属）组成。在一些实施方案中，生物反应器可用于进行动物细胞培养。在一些实施方案中， 生物反应器可用于进行哺乳动物细胞培养。在一些实施方案中，可将生物反应器与来源于 这样的生物体的细胞和/或细胞系（例如但不限于哺乳动物细胞、昆虫细胞、细菌细胞、酵 母细胞和人细胞）一起使用。在一些实施方案中，生物反应器可用于大规模细胞培养生产， 并且通常为至少 100 升，并且可以为 200、500、1000、2500、5000、8000、10, 000、12, 0000 升或 以上或其间的任何容。本领域普通技术人员将意识到，并且将能够选择适合的生物反应器 用于实施本发明。
[0043] 细胞培养物：如本文中所用，这些术语是指在适合于细胞群体存活和/或生长的 条件下在培养基中生长的细胞群。如对于本领域普通技术人员将很清楚的，如本文中使用 的这些术语可指包含细胞群和所述群于其中生长的培养基的组合。
[0044] 培养：如本文中所用，术语"培养"或语法等同物是指在有利于生长或存活的条件 下维持细胞的过程。术语"培养"和"细胞培养"或任何同义词在本申请中可互换使用。
[0045] 培养皿：如本文中所用，术语"培养皿"是指可为培养细胞提供无菌环境的任何容 器。示例性培养皿包括但不限于玻璃、塑料或金属容器。
[0046] 酶替代疗法（ERT):如本文中所用，术语"酶替代疗法（ERT) "指的是通过提供缺失 的酶校正酶缺乏的任何治疗策略。在一些实施方案中，缺失的酶通过鞘内施用提供。在一 些实施方案中，缺失的酶通过向血流内的输注提供。一旦施用，酶被细胞吸收并转运至溶酶 体，在溶酶体中酶用于消除因酶缺乏而在溶酶体中积累的物质。通常情况下，为了使溶酶体 酶替代疗法有效，将治疗性酶递送至其中表现贮积缺陷的靶组织中适合的细胞中的溶酶体 中。
[0047] 表达：如本文中所用，核酸序列的"表达"是指下列事件的一个或多个：（1)RNA模 板从DNA序列的产生（例如，通过转录）；（2)RNA转录物的加工（例如，通过剪接、编辑、5' 帽形成和/或3'末端形成）；（3)RNA至多肽或蛋白质的翻译；和/或（4)多肽或蛋白质的 翻译后修饰。
[0048] 补料分批培养：如本文所用，术语"补料分批培养"是指培养细胞的方法，在所述方 法中，在培养过程开始后的某个时间给培养物提供额外的组分。所提供的组分通常包括已 在培养过程中被耗尽的细胞的营养补充剂。通常在某个点停止补料分批培养，并且收获培 养基中的细胞和/或组分和任选地纯化其。
[0049] 片段：如本文中所用，术语"片段"是指多肽，并且被定义为给定的多肽的任何分离 的部分，所述部分对于该多肽是独特的，或具有该多肽的特征。如本文中所用，该术语还指 给定的多肽的保留了全长多肽的至少一部分活性的任何分离的部分。优选地，保留的活性 的部分为全长多肽的活性的至少10%。更优选，保留的活性的部分为全长多肽的活性的至 少20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %或90 %。更优选，保留的活性的部分为全长多肽 的活性的至少95 %、96 %、97 %、98 %或99 %。最优选，保留的活性的部分为全长多肽的活 性的100%。如本文中所用，该术语还指包含至少在全长多肽中发现的已建立的序列元件的 给定的多肽的任何部分。优选地，序列元件跨越全长多肽的至少4-5,更优选至少约10、15、 20、25、30、35、40、45、50或更多个氨基酸。
[0050] 基因：如本文中所用，术语"基因"是指任何核苷酸序列DNA或RNA，所述核苷酸序 列的至少某一部分编码分开的终产物，通常地（但不限于）多肽，所述产物在细胞过程的某 一方面起作用。该术语并不意味仅指编码多肽或其它分离的终产物的编码序列，而且还可 包括调节基础表达水平的编码序列之前和之后的区域，以及各个编码区段（"外显子"）之 间的间插序列（"内含子"）。在一些实施方案中，基因可包括调节序列（例如，启动子、增 强子、聚腺苷酸化序列、终止序列、kozac序列、tata盒等）和/或修饰序列。在一些实施方 案中，基因可包括对不编码蛋白质但相反地编码功能性RNA分子例如tRNA基因、RNAi诱导 剂等的核酸的提及。
[0051] 基因产物或表达产物：如本文中所用，术语"基因产物"或"表达产物"一般是指从 基因转录的RNA(加工前和/或加工后）或由从基因转录的RNA编码的多肽（修饰前和/ 或修饰后）。
[0052] 基因控制元件：如本文中所用，术语"基因控制元件"是指调节与其