一种培美曲塞脂质体及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于制剂领域，具体地，涉及一种培美曲塞脂质体及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 培美曲塞是一种结构上含有核心为吡咯嘧啶基团的抗叶酸制剂，通过破坏细胞内 叶酸依赖性的正常代谢过程，抑制细胞复制，从而抑制肿瘤的生长。体外研究显示，培美曲 塞能够抑制胸苷酸合成酶、二氢叶酸还原酶和甘氨酰胺核苷酸甲酰转移酶的活性，这些酶 都是合成叶酸所必需的酶，参与胸腺嘧啶核苷酸和嘌吟核苷酸的生物再合成过程，培美曲 塞通过运载叶酸的载体和细胞膜上的叶酸结合蛋白运输系统进入细胞内。
[0003] -旦培美曲塞进入细胞内，它就在叶酰多谷氨酸合成酶的作用下转化为多谷氨酸 的形式。多谷氨酸存留于细胞内成为胸苷酸合成酶和甘氨酰胺核苷酸甲酰转移酶的抑制 齐U，多谷氨酸化在肿瘤细胞内呈现时间-浓度依赖性过程，而在正常组织内浓度很低。多 谷氨酸化代谢物在肿瘤细胞内的半衰期延长，从而也就延长了药物在肿瘤细胞内的作用时 间。临床前研究显示培美曲塞体外可抑制间皮瘤细胞系（MST0-211H，NCI-H2052)的生长。 间皮瘤细胞系MST0-211H的研究显示出培美曲塞与顺钼联合有协同作用。
[0004] 但是，现有的培美曲塞制剂存在体内吸收不佳、肝脏代谢损失和生殖毒性等问题， 如何降低其毒性，提高其治疗效果成为目前研究的主要方向。
[0005] 此外，培美曲塞还存在稳定性较差的问题，在高温、氧化的条件下易发生降解，还 产生可能引发毒副作用的杂质，在运输和贮藏的过程中，也常因为温度控制不严格而导致 培美曲塞制剂中的杂质含量明显增加等问题。
【发明内容】
[0006] 本发明旨在克服上述缺陷，提供一种稳定性好、毒性低、包封率适当的培美曲塞脂 质体及其制备方法。
[0007] 本发明提供了一种培美曲塞脂质体，其特征在于：由培美曲塞和脂质体混合物制 造而成，其中，所述培美曲塞和脂质体混合物的质量比为1 :〇. 1-10 ;
[0008] 所述脂质体混合物由磷脂类化合物、固醇类化合物及脂溶性衍生物组成。
[0009] 其中，上述磷脂类化合物、固醇类化合物及脂溶性衍生物的质量比为40-50: 40-50 :5-15。
[0010] 此外，本发明提供的培美曲塞脂质体中，磷脂类化合物选自天然或合成的卵磷脂 及其衍生物、大豆磷脂及其衍生物、脑磷脂及其衍生物、心磷脂及其衍生物、磷脂酰肌醇及 其衍生物、磷脂酰丝氨酸及其衍生物、磷脂酰甘油及其衍生物、磷脂酸及其衍生物、磷脂酰 乙醇胺及其衍生物、磷脂酰胆碱及其衍生物、磷脂酰肌醇及其衍生物、神经鞘磷脂及其衍生 物、磷脂及其衍生物、及上述物质的氢化产物中的一种或几种的混合物；最优选为氢化大豆 磷脂。
[0011] 固醇类化合物选自胆固醇、二氢胆固醇、麦角固醇、豆固醇、谷固醇、菌固醇中的一 种或几种的混合物；最优选为胆固醇。
[0012] 脂溶性衍生物选自聚乙二醇酯衍生物中的一种或几种的混合物；最优选为天然水 溶性VE。
[0013] 另外，本发明还提供了上述培美曲塞脂质体的制备方法，其特征在于：采用薄膜分 散法与PH梯度法相结合的方式进行培美曲塞脂质体的制备；
[0014] 其中，上述pH梯度法优选采用醋酸钙梯度法实现。
[0015] 具体工艺步骤如下所示：
[0016] 步骤一、将脂质体混合物置于容器内，用溶剂溶解；
[0017] 在该步骤一中，上述脂质体混合物与溶剂的质量比为I :50-80 ;优选为I :50-60 ; 最优选为1 :50。
[0018] 上述容器可以为印管、离心管、烧瓶等容器。
[0019] 上述溶剂选自氯仿、二氯甲烷、四氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲醇、乙醇、 丙酮等中的一种或几种的组合物；优选为氯仿、二氯甲烷、四氯甲烷、乙醇；最优选为氯仿。
[0020] 步骤二、于30°C以内的温度下减压蒸除溶剂，获得薄膜。
[0021] 步骤三、加入醋酸钙水溶液水化薄膜；
[0022] 在该步骤三中，上述醋酸钙水溶液的质量浓度为10% -90 %不等，优选pH为7. 3 左右的溶液，添加量任意，优选为溶剂体积量的10倍。
[0023] 步骤四、于30°C以内的温度下减压蒸馏20-60分钟。
[0024] 步骤五、于4°C以内的温度下超声1-20分钟，形成混合溶液。
[0025] 步骤六、透析4-10小时，形成醋酸钙梯度；
[0026] 步骤六中，上述透析过程优选在截留分子量为1000的透析袋中完成；
[0027] 该透析过程采用的透析液为生理盐水,透析后的混合溶液pH为4. 5-5. 5 ;透析液 的用量可根据需要进行调整，一般选用IL的透析液，进行2-5个周期的透析。
[0028] 步骤七、于上述透析后的混合溶液中，加入培美曲塞水溶液，于40-80°C的温度下 载药20-60分钟；
[0029] 在步骤七中，上述培美曲塞水溶液与所述透析后的混合溶液的体积比为1 :1_4 ; 优选的，将所述培美曲塞水溶液加入所述透析后的混合溶液后，其浓度变为初始浓度的 1/5-1/2 ；
[0030] 上述培美曲塞水溶液的质量浓度为l-10mg/ml，上述培美曲塞水溶液优选为用 MilliQ水溶解的培美曲塞溶液；
[0031] 此外，在该载药过程中应当注意避光。
[0032] 步骤八、透析4-10小时后保存备用。
[0033] 将上述过程获得的混合物，加入到透析袋中透析，该过程优选在截留分子量为 1000的透析袋中完成；
[0034] 该透析过程采用的透析液为PBS溶液；透析液的用量可根据需要进行调整，一般 选用IL的透析液，进行2-5个周期的透析。
[0035] 在本发明的方案中，上述脂质体混合物最优选由HSPC、chol、TPGS组成；
[0036] 其中，上述 HSPC、chol、TPGS 的质量比为 44-50 :40-45 :5-15 ;
[0037] 最优选的 HSPC、chol、TPGS 质量比为 47.4 :42.6 :10。
[0038] 另外，本发明提供的上述脂质体的制备方法，还可以用于水溶性弱酸性靶向药物、 抗肿瘤药物的脂质体的制备。
[0039] 本发明的作用和效果:
[0040] 在本发明的方案中，旨在提供一种培美曲塞脂质体。且该脂质体稳定性好、工艺简 便、药物耐药性低。
[0041] 本发明通过对工艺方案的研究，最终采用薄膜分散法与pH梯度法相结合的方式 进行培美曲塞脂质体的制备，在该方法的组合中，薄膜分散法旨在制备一种分散度适中、粒 子大小适当的空白薄膜，特别是在最优选的方案中，选用氢化大豆磷脂、胆固醇和天然水溶 性VE作为脂质体膜的材料，其最佳质量比为47. 4 :42. 6 :10,经实验表明，采用该配比和组 分获得的脂质体膜，更为稳定，更适用于培美曲塞脂质体的制造。
[0042] 此外，在本发明的工艺方法中可以看出，在载药阶段采用了 pH梯度法进行，最优 选的采用了醋酸钙梯度法将药物包裹入膜体中，经试验表明，针对培美曲塞这类水溶性的 药物，由于其本身的物理化学特性，更适合于采用如本发明所设计的脂质体的制造方法。
[0043] 此外，本发明制造培美曲塞脂质体经MCF-7ADR细胞株耐药性试验可知，本发明制 造的培美曲塞脂质体能使药物耐药性降低为非脂质体培美曲塞的60%以上。经稳定性测试 可知，该脂质体稳定性良好。经临床试验可知，该脂质体较普通制剂提高疗效率为80%以 上，在体内的存留时间能提高65%以上，靶向作用明显。
[0044] 说明书附图
[0045] 附图1为MTA空白制剂与MTA脂质体1#对抗MCF-7ADR细胞株耐药性测试结果。
【具体实施方式】
[0046] 实施例一、MTA脂质体1#
[0047] 将37mg的脂质体混合物（HSPC/chol/TPGS质量比为47. 4/42. 6/10)置于印管 中加0. 5ml氯仿溶解；混合物置于旋转蒸发仪中，室温，减压蒸发出去有机形成薄膜；力口 入5ml醋酸钙水溶液水化，旋蒸30min，去除残余的有机溶剂；将形成的脂质体冰浴超声 5min ;取上述脂质体溶液加入到截留分子量为1000的透析袋中，透析液（NS溶液）的体积 为1L，透析时间为6-8小时，换两次液体（1L*2)，形成醋酸钙梯度，增加对pH的监控（pH = 4. 5-5. 5)。
[0048] 取透析后脂质体溶液，加入预先配好的5mg/ml培美曲塞溶液（MiIliQ水溶解），终 浓度lmg/ml，载药过程溶液60°C水浴30min (避光）。取脂质体溶液加入到截留分子量为 1000的透析袋中，透析液（PBS溶液磷酸盐缓冲溶液）的体积为1L，透析时间为6-8小时， 换两次液体（1L*2)。
[0049] 实施例二、MTA脂质体2#
[0050] 将30mg的脂质体混合物（HSPC/chol/TPGS