质量比为50/45/5)置于印管中加 〇. 5ml氯仿溶解；混合物置于旋转蒸发仪中，室温，减压蒸发出去有机形成薄膜；加入5ml醋 酸钙水溶液水化，旋蒸20min，去除残余的有机溶剂；将形成的脂质体冰浴超声IOmin ;取上 述脂质体溶液加入到截留分子量为1000的透析袋中，透析液（NS溶液）的体积为1L，透析 时间为6-8小时，换两次液体（1L*2)，形成醋酸钙梯度，增加对pH的监控（pH = 4. 5-5. 5)。
[0051] 取透析后脂质体溶液，加入预先配好的10mg/ml培美曲塞溶液（MilliQ水溶解）， 终浓度2mg/ml，载药过程溶液60°C水浴30min (避光）。取脂质体溶液加入到截留分子量为 1000的透析袋中，透析液（PBS溶液磷酸盐缓冲溶液）的体积为1L，透析时间为6-8小时， 换两次液体（1L*2)。
[0052] 实施例三、MTA脂质体3#
[0053] 将40mg的脂质体混合物（HSPC/chol/TPGS质量比为44. 7/40. 3/15)置于印管中 加 Iml氯仿溶解；混合物置于旋转蒸发仪中，室温，减压蒸发出去有机形成薄膜；加入IOml 醋酸钙水溶液水化，旋蒸60min，去除残余的有机溶剂；将形成的脂质体冰浴超声IOmin ; 取上述脂质体溶液加入到截留分子量为1000的透析袋中，透析液（NS溶液）的体积为 1L，透析时间为6-8小时，换两次液体（1L*2)，形成醋酸钙梯度，增加对pH的监控（pH = 4. 5-5. 5)。
[0054] 取透析后脂质体溶液，加入预先配好的4mg/ml培美曲塞溶液（Mi 11 iQ水溶解），终 浓度2mg/ml，载药过程溶液40°C水浴60min (避光）。取脂质体溶液加入到截留分子量为 1000的透析袋中，透析液（PBS溶液磷酸盐缓冲溶液）的体积为1L，透析时间为6-8小时， 换两次液体（1L*2)。
[0055] 实施例四、MTA脂质体4#
[0056] 将40mg的脂质体混合物（心磷脂/谷固醇/TPGS质量比为40/50/15)置于印 管中加 Iml乙醇溶解；混合物置于旋转蒸发仪中，室温，减压蒸发出去有机形成薄膜；力口 入5ml醋酸钙水溶液水化，旋蒸20min，去除残余的有机溶剂；将形成的脂质体冰浴超声 Smin ;取上述脂质体溶液加入到截留分子量为1000的透析袋中，透析液（NS溶液）的体积 为1L，透析时间为6-8小时，换两次液体（1L*2)，形成醋酸钙梯度，增加对pH的监控（pH = 4. 5-5. 5)。
[0057] 取透析后脂质体溶液，加入预先配好的2mg/ml培美曲塞溶液（Mi 11 iQ水溶解），终 浓度lmg/ml，载药过程溶液80°C水浴20min (避光）。取脂质体溶液加入到截留分子量为 1000的透析袋中，透析液（PBS溶液磷酸盐缓冲溶液）的体积为1L，透析时间为6-8小时， 换两次液体（1L*2)。
[0058] 实施例五、MTA脂质体5#
[0059] 将40mg的脂质体混合物（氢化磷脂酰肌醇/二氢胆固醇/TPGS质量比为 45/45/10)置于印管中加 Iml乙醇溶解；混合物置于旋转蒸发仪中，室温，减压蒸发出去有 机形成薄膜；加入5ml醋酸钙水溶液水化，旋蒸20min，去除残余的有机溶剂；将形成的脂质 体冰浴超声8min ;取上述脂质体溶液加入到截留分子量为1000的透析袋中，透析液（NS溶 液）的体积为1L，透析时间为6-8小时，换两次液体（1L*2)，形成醋酸钙梯度，增加对pH的 监控（pH = 4. 5-5. 5)。
[0060] 取透析后脂质体溶液，加入预先配好的5mg/ml培美曲塞溶液（MiIliQ水溶解），终 浓度I. 5mg/ml，载药过程溶液40°C水浴30min (避光）。取脂质体溶液加入到截留分子量为 1000的透析袋中，透析液（PBS溶液磷酸盐缓冲溶液）的体积为1L，透析时间为6-8小时， 换两次液体（1L*2)。
[0061] 实施例的作用和效果:
[0062] 一、包封率试验：
[0063] 取MTA脂质体，利用HPLC方法测定脂质体的包封率。
[0064] 仪器：安捷伦1260
[0065] 色谱柱：C18 柱（（150mmX 4. 6mm，5um)
[0066] 流动相：0· 02mol/L磷酸二氢钠水溶液（磷酸调ρΗ3· 4)-乙腈（85:15, v/v)为流 动相
[0067] 波长：226nm
[0068] 流速：lml/min
[0069] 每组别测试三次，平均包封率结果如下表所示：
[0070]
【主权项】
1. 一种培美曲塞脂质体，其特征在于：由培美曲塞和脂质体混合物制造而成，其中，所 述培美曲塞和脂质体混合物的质量比为1 :〇. 1-10 ; 所述脂质体混合物由磷脂类化合物、固醇类化合物及脂溶性衍生物组成。
2. 如权利要求1所述的一种培美曲塞脂质体，其特征在于： 所述磷脂类化合物、固醇类化合物及脂溶性衍生物的质量比为40-50 :40-50 :5-15。
3. 如权利要求1所述的一种培美曲塞脂质体，其特征在于： 所述磷脂类化合物选自天然或合成的卵磷脂及其衍生物、大豆磷脂及其衍生物、脑磷 脂及其衍生物、心磷脂及其衍生物、磷脂酰肌醇及其衍生物、磷脂酰丝氨酸及其衍生物、磷 脂酰甘油及其衍生物、磷脂酸及其衍生物、磷脂酰乙醇胺及其衍生物、磷脂酰胆碱及其衍生 物、磷脂酰肌醇及其衍生物、神经鞘磷脂及其衍生物、磷脂及其衍生物、及上述物质的氢化 产物中的一种或几种的混合物； 所述固醇类化合物选自胆固醇、二氢胆固醇、麦角固醇、豆固醇、谷固醇、菌固醇中的一 种或几种的混合物； 所述脂溶性衍生物选自聚乙二醇酯衍生物中的一种或几种的混合物。
4. 如权利要求1-3任一所述的一种培美曲塞脂质体的制备方法，其特征在于： 采用薄膜分散法与PH梯度法相结合的方式进行培美曲塞脂质体的制备。
5. 如权利要求4所述的一种培美曲塞脂质体的制备方法，其特征在于，包括如下工艺 步骤： 步骤一、将脂质体混合物置于容器内，用溶剂溶解； 步骤二、于30°C以内的温度下减压蒸除溶剂，获得薄膜； 步骤三、加入醋酸钙水溶液水化薄膜； 步骤四、于30°C以内的温度下减压蒸馏20-60分钟； 步骤五、于4°C以内的温度下超声1-20分钟，形成混合溶液； 步骤六、透析4-10小时，形成醋酸钙梯度； 步骤七、于上述透析后的混合溶液中，加入培美曲塞水溶液，于40-80°C的温度下载药 20-60分钟； 步骤八、透析4-10小时后保存备用。
6. 如权利要求5所述的一种培美曲塞脂质体的制备方法，其特征在于： 在步骤一中，所述脂质体混合物与溶剂的质量比为I :50-80 ; 所述溶剂选自氯仿、二氯甲烷、四氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲醇、乙醇、丙酮 中的一种或几种的组合物。
7. 如权利要求5所述的一种培美曲塞脂质体的制备方法，其特征在于： 所述透析过程在截留分子量为1000的透析袋中完成； 步骤六中的透析过程采用的透析液为生理盐水，透析后的混合溶液PH为4. 5-5. 5 ; 步骤八中的透析过程采用的透析液为PBS溶液。
8. 如权利要求5所述的一种培美曲塞脂质体的制备方法，其特征在于： 在步骤七中，所述培美曲塞水溶液与所述透析后的混合溶液的体积比为I :1-4 ; 优选的，在步骤七中，将所述培美曲塞水溶液加入所述透析后的混合溶液后，其浓度变 为初始浓度的1/5-1/2 ; 优选的，所述培美曲塞水溶液的质量浓度为l-l〇mg/ml。
9. 如权利要求5所述的一种培美曲塞脂质体的制备方法，其特征在于： 所述脂质体混合物由HSPC、chol、TPGS组成； 其中，所述 HSPC、chol、TPGS 的质量比为 44-50 :40-45 :5-15 ; 优选为 HSPC、chol、TPGS 的质量比为 47. 4 :42· 6 :10。
10. 如权利要求5所述的一种培美曲塞脂质体的制备方法，其特征在于： 所述制备方法还可应用于水溶性的弱酸性靶向药物、抗肿瘤药物的脂质体的制备。
【专利摘要】本发明提供了一种培美曲塞脂质体，其特征在于：由培美曲塞和脂质体混合物制造而成，其中，所述培美曲塞和脂质体混合物的质量比为1：0.1-10；发明制造的培美曲塞脂质体能使药物耐药性降低为非脂质体培美曲塞的60％以上。经稳定性测试可知，该脂质体稳定性良好。经临床试验可知，该脂质体较普通制剂提高疗效率为80％以上，在体内的存留时间能提高65％以上，靶向作用明显。
【IPC分类】A61P35-00, A61K9-127, A61K47-22, A61K47-28, A61K47-24, A61K31-519
【公开号】CN104546723
【申请号】CN201510072663
【发明人】刘艳, 陈婷, 尹又, 高洁, 陈霁晖
【申请人】上海交通大学医学院附属新华医院
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年2月11日