一种抗乳腺癌细胞增殖的中药提取物及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于中药材提取物技术领域，具体涉及一种抗乳腺癌细胞增殖的中药提取物、包含该提取物的药物组合物及其应用。
【背景技术】
[0002]近年来，环境污染问题日益突出，人们的免疫力逐渐低下，恶性肿瘤的发病越来越频繁，并且其发病率也逐渐增高。恶性肿瘤已经成为了威胁人类身体健康的头号杀手，是危害生命的严重疾病。以乳腺癌为例，其是发生在乳腺上皮组织的恶性肿瘤。虽然乳腺并不是维持人体生命活动的重要器官，原位乳腺癌不会导致生命危险，但是由于乳腺癌细胞已经失去了正常细胞的特性，细胞和细胞之间的连接松散，细胞容易脱落。乳腺癌细胞脱落之后，游离的癌细胞会随着血液和淋巴液扩散至全身，危及生命。
[0003]近年来，我国乳腺癌发病率呈增长趋势，目前乳腺癌已经成为了威胁女性身心健康的一种常见肿瘤。目前乳腺癌的治疗方法主要为外科手术、放疗、化疗等方法，这些方法对于人体都有一定的伤害。药物疗法是肿瘤治疗各个阶段都不可或缺的重要措施之一。由于化学合成药物对患者的毒副作用及耐药性等问题，筛选天然药物作为肿瘤治疗的候选或辅助药物已成为研宄的热点。
[0004]山矾，乔木，嫩枝褐色，叶互生；叶柄长0.5-lcm;叶片薄革质，卵形、狭倒卵形、倒披针状椭圆形，长3.5-8cm,宽1.5-3cm,先端常呈尾状渐尖，基部楔形或圆形，边线具浅锯齿或波状齿，有的近全缘；中脉在叶面凹下，侧脉和网脉在两面均凸起，侧脉每边4-6条。总状花序长2.5-4cm，被展开的柔毛；苞片早落，阔卵形至倒卵形，长约1mm，密被柔毛；小苞片与苞片同形；花萼长2-2.5mm,萼筒倒圆锥形，无毛，裂片三角状卵形，与萼筒等长或稍短于萼筒，背面有微柔毛；花冠白色，5深裂几达基部，长4-4.5mm，裂片背面有微柔毛；雄蕊25-35，花丝基部稍合生；花盘环状，无毛；子房3室。核果卵状坛形，黄绿色，长7-10mm，夕卜果皮薄而脆，朱端宿萼裂片直立，有时脱落。花期2-3月，果期6-7月。生于海拔200-1500m的山谷、溪边灌丛中或山坡林下，分布于西南及江苏、浙江、江西、福建、台湾、湖北、湖南、广东、海南、广西等地。目前，尚没有文献报道山矾花提取物具有抗乳腺癌细胞增殖的生物活性。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于对山矾花有效部位的深入研宄，从而提供一种抗乳腺癌细胞增殖的中药提取物、包含该中药提取物的药物组合物及其应用。
[0006]本发明的目的是这样实现的:
[0007]一种抗乳腺癌细胞增殖的中药提取物，所述的中药提取物为山矾花乙醚提取物。需要说明的是，山帆花为山帆科植物山帆Symplocos sumuntia Buch.-Ham.ex D.Don[S.Caudataffal1.]的花，2?3月采花，晒干。
[0008]本发明所述的抗乳腺癌细胞增殖的中药提取物，其中的山矾花乙醚提取物按如下方法制备而成:取山矾花原料，用体积分数70% -80%的乙醇溶液回流提取，提取液回收乙醇得浸膏，浸膏加蒸馏水搅拌，再用2-5倍量的乙醚萃取3-6次，合并萃取的有机相，减压回收溶剂后，在低于65°C的条件下烘干，得山矾花乙醚提取物。
[0009]优选地，如上所述的抗乳腺癌细胞增殖的中药提取物，其中的乙醇溶液回流提取步骤优化为:用体积分数70% -80%的乙醇溶液提取3次，第I次用12倍量的乙醇溶液回流提取1.5-2.0h，第2次用10倍量的乙醇溶液回流提取1.0-1.2h，第3次用10倍量的乙醇溶液回流提取0.8-0.9h。
[0010]本发明还提供一种抗乳腺癌细胞增殖的药物组合物，该药物组合物由活性成分和药用辅料制备而成，其中的活性成分包括上述的山矾花乙醚提取物，其中的药用辅料包括填充剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂。
[0011]本发明人采用MTT法检测不同浓度的山矾花乙醚提取物处理MCF-7肿瘤细胞12，24，48h后细胞的存活率，并光镜观察乙醚提取物处理后MCF-7细胞形态学的变化；实验结果显示，乙醚提取物作用12h，便对MCF-7肿瘤细胞的增殖产生抑制作用；光镜观察发现，低浓度的乙醚提取物作用24h，肿瘤细胞出现空泡等早期凋亡现象，而高浓度的乙醚提取物处理后可见凋亡小体等出现。另外，本发明人还研宄了不同浓度的山矾花乙醇、乙酸乙酯提取物处理MCF-7肿瘤细胞48h后细胞的存活率，结果显示，不同浓度的乙醇或乙酸乙酯提取物均没有明显地细胞生长抑制作用，乙酸乙酯提取物甚至表现出一定的肿瘤细胞细胞促生长作用。基于此研宄结果，本发明还提供一种制药用途，即山矾花乙醚提取物在制备抗乳腺癌细胞增殖的药物中的应用。
【附图说明】
[0012]图1:乙醚提取物作用12_48h时对乳腺癌细胞存活率的影响曲线；
[0013]图2:不同提取物作用48h时对乳腺癌细胞存活率的影响曲线。
【具体实施方式】
[0014]以下是本发明山矾花提取物的制备实施例和药效实施例，对本发明的技术方案和技术效果做进一步的说明和解释。
[0015]实施例1山矾花乙醚提取物的制备
[0016]称取干燥的山矾花原料500g，用体积分数75 %的乙醇溶液提取3次，第I次用6L乙醇溶液回流提取90min，第2次用5L乙醇溶液回流提取60min，第3次用5L乙醇溶液回流提取50min。合并3次提取液，回收乙醇得浸膏，浸膏用少量双重蒸馏水洗出，再用3倍量的乙醚萃取5次，合并5次萃取的有机相，减压回收溶剂后，60°C烘干，得到13.71g干膏粉，粉碎，过100目筛，得山矾花乙醚提取物。
[0017]对比例I山矾花乙醇提取物的制备
[0018]称取干燥的山矾花原料100g，用体积分数75%的乙醇溶液提取3次，第I次用1.2L乙醇溶液回流提取90min，第2次用1.0L乙醇溶液回流提取60min，第3次用1.0L乙醇溶液回流提取50min。合并3次提取液，回收乙醇得浸膏，浸膏于60°C烘干，得到12.25g干膏粉，粉碎，过100目筛，得山矾花乙醇提取物。
[0019]对比例2山矾花乙酸乙酯提取物的制备
[0020]称取干燥的山矾花原料500g，用体积分数75%的乙醇溶液提取3次，第I次用6L乙醇溶液回流提取90min，第2次用5L乙醇溶液回流提取60min，第3次用5L乙醇溶液回流提取50min。合并3次提取液，回收乙醇得浸膏，浸膏用少量双重蒸馏水洗出，再用3倍量的乙酸乙酯萃取5次，合并5次萃取的有机相，减压回收溶剂后，60°C烘干，得到18.33g干膏粉，粉碎，过100目筛，得山矾花乙酸乙酯提取物。
[0021 ] 实施例2MTT法检测乙醚提取物对肿瘤细胞增殖的影响
[0022]取对数生长期的乳腺癌细胞株MCF-7悬液，接种于96孔培养板，每孔100 μ I (含I X 14个细胞)，置37°C，100 %湿度，5 % CO 2条件培养至细胞贴壁后，换新鲜培养基并加入不同浓度的山矾花乙醚提取物(实施例1制备，每一浓度设6个复孔)处理12，24，48h后，每孔加入90 μ I新鲜培养基和5% MTT 10 μ I，继续培养4h后弃上清，每孔加入100 μ IDMSO，振荡lOmin，用酶联免疫检测仪测定吸光值。细胞存活率(％ )=(实验组A值-本底A值)/(对照组A值-本底A值)X100%，实验重复3次。结果见图1。
[0023]通过图1的试验体外肿瘤细胞增殖抑制实验结果可以看出，低浓度的乙醚提取物(20，40，80 μ g/ml)作用12，24，48h，没有明显的细胞生长抑制作用，但高浓度的乙醚提取物(120，160，200 yg/ml)作用24以上时，对细胞有明显的生长抑制作用，并随着给药时间的延长，抑制作用也显著增强，200 μ g/ml的药物作用48h，细胞的存活率接近O。倒置显微镜观察MCF-7乳腺癌细胞经山矾花乙醚提取物处理后形态的变化，镜下观察发现，未经药物处理的MCF-7乳腺癌细胞贴壁伸展，相邻细胞连接成片，形态舒展，折光均匀，细胞核大而明显。低浓度的乙醚提取物处理24h后细胞收缩变小，与周围细胞分离，细胞核周围出现较多空泡样结构，细胞核物质边集，而高浓度的乙醚提取物作用24h后，部分细胞出现细胞核异常凝集，核固缩和凋亡小体形成等典型的细胞凋亡形态。
[0024]实施例3MTT法检测乙醇、乙酸乙酯提取物对肿瘤细胞增殖的影响
[0025]取对数生长期的乳腺癌细胞株MCF-7悬液，接种于96孔培养板，每孔100 μ I (含I X 14个细胞)，置37°C，100%湿度，5% CO 2条件培养至细胞贴壁后，换新鲜培养基并加入不同浓度的山矾花乙醇提取物(对比例I制备，每一浓度设6个复孔)、山矾花乙酸乙酯提取物(对比例2制备，每一浓度设6个复孔)处理48h后，每孔加入90 μ I新鲜培养基和5% MTT 10 μ 1，继续培养4h后弃上清，每孔加入100 μ I DMSO，振荡lOmin，用酶联免疫检测仪测定吸光值。细胞存活率(％ )=(实验组A值-本底A值)/ (对照组A值-本底A值)X100%，实验重复3次。结果见图2。
[0026]通过图2的试验体外肿瘤细胞增殖抑制实验结果可以看出，不同浓度的乙醇或乙酸乙酯提取物没有明显的细胞生长抑制作用，乙酸乙酯提取物甚至表现出一定的细胞促生长作用。而乙醚提取物对细胞有明显的生长抑制作用，并随着给药浓度的增加，抑制作用也显著增强。
【主权项】
1.一种抗乳腺癌细胞增殖的中药提取物，其特征在于，所述的中药提取物为山矾花乙酿提取物。
2.根据权利要求1所述的抗乳腺癌细胞增殖的中药提取物，其特征在于，所述的山矾花乙醚提取物按如下方法制备而成:取山矾花原料，用体积分数70% -80%的乙醇溶液回流提取，提取液回收乙醇得浸膏，浸膏加蒸馏水搅拌，再用2-5倍量的乙醚萃取3-6次，合并萃取的有机相，减压回收溶剂后，在低于65°C的条件下烘干，得山矾花乙醚提取物。
3.根据权利要求2所述的抗乳腺癌细胞增殖的中药提取物，其特征在于，所述的乙醇溶液回流提取步骤为:用体积分数70% -80%的乙醇溶液提取3次，第I次用12倍量的乙醇溶液回流提取1.5-2.0h，第2次用10倍量的乙醇溶液回流提取1.0-1.2h，第3次用10倍量的乙醇溶液回流提取0.8-0.9h。
4.一种抗乳腺癌细胞增殖的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物中的活性成分包括权利要求1所述的山矾花乙醚提取物。
5.山矾花乙醚提取物在制备抗乳腺癌细胞增殖的药物中的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种抗乳腺癌细胞增殖的中药提取物及其应用，该中药提取物为山矾花乙醚提取物，该提取物按如下方法制备而成：取山矾花原料，用体积分数70％-80％的乙醇溶液回流提取，提取液回收乙醇得浸膏，浸膏加蒸馏水搅拌，再用2-5倍量的乙醚萃取3-6次，合并萃取的有机相，减压回收溶剂后，烘干即得。本发明的中药提取物可显著抑制乳腺癌细胞的增殖，适合开发成抗癌药物。
【IPC分类】A61K133-00, A61K36-185, A61P35-00
【公开号】CN104606266
【申请号】CN201510030151
【发明人】陈爱芳, 姜玲, 薛秀华, 韩卫红
【申请人】青岛市市立医院
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年1月21日