然后迅速释放压力至常压，壁虎蛆虫被膨化 成粉体； (2) 膨化粉碎后的壁虎蛆虫粉体加入到膨胀溶剂体系提取装置（201210179076. 6)中， 加入6Kg液态二氧化碳、200mL乙醇及150g氯化铵，加压至6MPa，形成膨胀溶剂体系，保持 温度20°C，时间lOmin，壁虎蛆虫粉体中的蛋白质溶解，然后降压至常压，生成壁虎蛆虫蛋 白质粗品与乙醇-氯化铵的混合液； (3) 收集含有壁虎蛆虫蛋白质粗品的溶液，用孔径50Mm的微孔过滤器过滤去处固体杂 质； (4) 溶液用孔径IOOnm的超滤机超滤处理，压力0. 5MPa，温度为常温，收集含有相应分 子量的壁虎蛆虫蛋白质超滤溶液； (5) 超滤溶液用20%乙腈溶解，C18固相萃取柱用60%乙腈活化预处理，加0. 08%三氟乙 酸-水平衡，用10%乙腈溶液溶解的超滤溶液上柱，常温下用1〇~80%的乙腈梯度脱洗，流速 8mL/min，收集相关梯度的洗脱成分； (6) 将洗脱成分溶解在正丁醇-乙酸乙酯-水(体积比1. 25:3. 75:5)溶剂体系中，用超 声驻波液相制备色谱（200920274485. 8)分离纯化，超声波功率2. 0KW，频率ΙΟΟΟΚΗζ，流速 300mL/min，紫外检测器波长280nm ; (7) 纯化后的壁虎蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机在温度-30~50°C、时间18h干燥制备 成冻干蛋白粉。
[0034] 实施例5: 取壁虎蛆虫冻干蛋白粉100~150g、卵磷脂l~15g、液体石蜡200~350g，将三者搅拌均 匀，用研磨机以30~60r/min研匀成糊状，另取乌桕脂100~200g在水浴上加热40~60°C熔化 后，冷却至25~38°C，倒入研匀的壁虎蛆虫蛋白质-卵磷脂-液体石蜡混合物中迅速搅拌均 匀，趁热浇注于栓剂模具中，冷凝到10~20°C，从栓剂模具中取出即为成型的壁虎蛆虫蛋白 质栓剂，整理光滑后包装成品。
[0035] 实施例6: 取壁虎蛆虫冻干蛋白粉120g、卵磷脂10g、液体石蜡250g，将三者搅拌均匀，用研磨机 以60r/min研匀成糊状，另取乌桕脂150g在水浴上加热60°C熔化后，冷却至30°C，倒入研 匀的壁虎蛆虫蛋白质-卵磷脂-液体石蜡混合物中迅速搅拌均匀，趁热浇注于栓剂模具中， 冷凝到15°C，从栓剂模具中取出即为成型的壁虎蛆虫蛋白质栓剂，整理光滑后包装成品。
[0036] 实施例7: 脂质体注射剂制备： (I)Imol磷脂酰丝氨酸用玻璃平面成型法制成薄膜后，加入1000~3000L生理盐水水合 处理，再用超声波在频率500~2000KHz、功率0. 01~5KW处理l~5min。
[0037] (2)取上述溶液 l~100mL 加入到含量(λ 001~0· 01mol/L 的(λ l~1000mLCaCl2溶液 中，在转速30~75r/min条件下搅拌10~30min，然后在25~50°C条件下静置30~120min。
[0038] (3)将生成物放置离心机中，在转速1500~3000r/min离心分离5~30min，将离 心物从离心机中取出后加入2~50g壁虎蛆虫蛋白质混合均匀，在10~25 °C条件下静置 10~120min。
[0039] (4)上述物体加入含有0. 01~10mol/L的乙二胺四乙酸的生理盐水溶液0. 1~10L 中，混合均匀静置30~180min，得到单层脂质体。
[0040] (5)取l~10mg单层脂质体与10~200mL生理盐水溶液混合，制备成为注射剂。
[0041] 实施例8: 脂质体注射剂制备： (I)Imol磷脂酰丝氨酸用玻璃平面成型法制成薄膜后，加入2000L生理盐水水合处理， 再用超声波在频率1000 KHz、功率2KW处理5min。
[0042] (2)取上述溶液50mL加入到含量0. 005mol/L的1000 mLCaCl2溶液中，在转速45r/ min条件下搅拌30min，然后在30°C条件下静置60min。
[0043] (3)将生成物放置离心机中，在转速2000r/min离心分离20min，将离心物从离心 机中取出后加入20g壁虎蛆虫蛋白质混合均匀，在15°C条件下静置60min。
[0044] (4)上述物体加入含有lmol/L的乙二胺四乙酸的生理盐水溶液5L中，混合均匀静 置80min，得到单层脂质体。
[0045] (5)取5mg单层脂质体与IOOmL生理盐水溶液混合，制备成为注射剂。
[0046] 实施例9: 肠溶胶囊的制备： 取10~100g壁虎蛆虫蛋白质、500~2000g预凝胶淀粉及5-50g乳糖充分混合，填充入羟 丙基甲基纤维素肠溶胶囊中制备成为壁虎蛆虫蛋白质肠溶胶囊。
[0047] 实施例10: 肠溶胶囊的制备： 取50g壁虎蛆虫蛋白质、1000 g预凝胶淀粉及30g乳糖充分混合，填充入羟丙基甲基纤 维素肠溶胶囊中制备成为壁虎蛆虫蛋白质肠溶胶囊。
[0048] 实施例11: 卵巢癌疾病分期： 0期：癌灶局限于粘膜层，无淋巴结转移； I期：肿瘤局限于固有肌层以内，无淋巴结转移； II期：肿瘤浸润超过固有肌层，但无淋巴结转移； III期：淋巴结转移； IV期：远处转移(脑、肝、肺等）或腹膜转移。
[0049] 治疗方法： 患者需严格戒掉烟、酒、辛辣食物，患者按体重70Kg计，每天注射脂质体药剂1次，每次 30(^g ;或每天服用肠溶胶囊2次，每次3粒；或栓剂治疗，每日1次，每次1支。
[0050] 治疗结果分级标准： I、近期疗效（40天末与治疗前比较） (1) 完全缓解：病灶完全消失，无新的病灶出现； (2) 部分缓解：病灶缩小到治疗前的50%或更小，无新的病灶出现，多灶性病变时没有 一个病灶增大； (3) 稳定期：(￡:轻度缓解：病灶缩小面积30%或增大面积25%，自觉症状改善，体力基本 状况上升；宜:基本稳定：病灶缩小不到25%或增大面积不超过25%以上，自觉症状改善，体 力基本状况上升。
[0051] (4)扩展：单个面积或多个病灶总面积比治疗前增大25%以上或出现新的病变，临 床症状加重，体力基本状况下降。
[0052] ]1、中期疗效（7周~1年） (1) 完全缓解：无瘤生存； (2) 部分缓解癌体回变到治疗前的面积50%以上，或出现新的病灶；.癌体无增大 或缩小，病症改善或消失「I::体力基本状况上升。
[0053] (3)转移或扩展：病原灶扩大发展，出现新的转移灶，临床症状加重，体力状况下 降。
[0054] III、远期疗效（1~5年） (1) 无瘤生存； (2) 带瘤生存； (3) 死亡。
[0055] 治疗结果：
【主权项】
1. 一种壁虎蛆虫蛋白质在制备抗卵巢癌药品中的应用。
2. 根据权利要求1所述的壁虎蛆虫蛋白质在制备抗卵巢癌药品中的应用，其特征在于 所述壁虎蛆虫蛋白质的制备步骤如下： (1) 将1000 g壁虎蛆虫在常温膨化装置中常温条件下膨化粉碎； (2) 膨化粉碎后的物料加入到膨胀溶剂体系提取装置中，加入由l~10Kg液态二氧化 碳、100~500mL甲醇及100~300gNH 3 · H2O组成或由l~10Kg液态二氧化碳、100~500mL乙醇 及100~300g氯化铵组成的膨胀溶剂并加压至2~10MPa，形成膨胀溶剂体系，提取出壁虎蛆 虫蛋白质粗品； (3) 收集含有壁虎蛆虫蛋白质粗品的溶液并且用微孔过滤器过滤去掉杂质； (4) 用超滤机超滤处理，收集壁虎蛆虫蛋白质超滤溶液； (5) 超滤液溶解在乙腈中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分； (6) 将洗脱成分溶解在由正丁醇-乙酸乙酯-水按体积比1. 25:3. 75:5组成或由聚乙 二醇-葡聚糖T500按重量比4. 5:7组成的溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱分离纯 化； (7) 纯化后的壁虎蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉。
3. 根据权利要求1所述的壁虎蛆虫蛋白质在制备抗卵巢癌药品中的应用，其特征在于 所述抗卵巢癌药品的剂型为栓剂，制备方法如下： 取壁虎蛆虫冻干蛋白粉100~150g、卵磷脂l~15g、液体石蜡200~350g，将三者搅拌均 匀，用研磨机以30~60r/min研匀成糊状，另取乌桕脂100~200g在水浴上加热40~60°C熔化 后，冷却至25~38°C，倒入研匀的壁虎蛆虫蛋白质-卵磷脂-液体石蜡混合物中迅速搅拌均 匀，趁热浇注于栓剂模具中，冷凝到10~20°C，从栓剂模具中取出即为成型的壁虎蛆虫蛋白 质栓剂。
4. 根据权利要求1所述的壁虎蛆虫蛋白质在制备抗卵巢癌药品中的应用，其特征在于 所述抗卵巢癌药品的剂型为脂质体注射剂，制备方法如下： (1) Imol磷脂酰丝氨酸用玻璃平面成型法制成薄膜后，加入1000~3000L生理盐水水合 处理，再用超声波在频率500~2000KHz、功率0. 01~5KW处理l~5min ; (2) 取上述溶液l~100mL加入到含量0. 001~0. 01mol/L的0. l~1000mLCaCl2溶液中，在 转速30~75r/min条件下搅拌10~30min，然后在25~50°C条件下静置30~120min ; (3) 将生成物放置离心机中，在转速1500~3000r/min离心分离5~30min，将离心物从离 心机中取出后加入2~50g壁虎蛆虫蛋白质混合均匀，在10~25°C条件下静置10~120min ; (4) 上述物体加入含有0. 01~10mol/L的乙二胺四乙酸的生理盐水溶液0. 1~10L中，混 合均匀静置30~180min，得到单层脂质体； (5) 取l~10mg单层脂质体与10~200mL生理盐水溶液混合，制备成为注射剂。
5. 根据权利要求1所述的壁虎蛆虫蛋白质在制备抗卵巢癌药品中的应用，其特征在于 所述抗卵巢癌药品的剂型为肠溶胶囊，制备方法如下： 取10~100g壁虎蛆虫蛋白质、500~2000g预凝胶淀粉及5-50g乳糖充分混合，填充入羟 丙基甲基纤维素肠溶胶囊中，制备成为壁虎蛆虫蛋白质肠溶胶囊。
【专利摘要】本发明公开了一种壁虎蛆虫蛋白质在制备抗卵巢癌药品中的应用，所述制备方法如下：将壁虎蛆虫在常温膨化装置中膨化粉碎；然后加入到膨胀溶剂体系提取装置中提取出壁虎蛆虫蛋白质粗品；收集含有壁虎蛆虫蛋白质粗品的溶液并用微孔过滤器过滤去掉杂质；用超滤机超滤处理，收集壁虎蛆虫蛋白质超滤溶液；超滤液溶解在乙腈中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分；将洗脱成分溶解在溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱分离纯化；用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉，可用于制备抗卵巢癌药品。本发明制备的壁虎蛆虫蛋白质制剂质量稳定，结构清楚，药理明晰，疗效明显，含量可检可测，剂型多样，成本较低，适合工业化生产。
【IPC分类】A61K38-00, A61P35-00, C07K1-34, A61K9-127, A61K9-48, C07K1-16, C07K1-36, A61K9-02, A61K35-583, A61K35-64
【公开号】CN104645307
【申请号】CN201510092375
【发明人】徐华民, 赵荣华
【申请人】哈尔滨工业大学
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2015年3月2日