姜黄素在制备治疗自身免疫疾病药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种姜黄素在制备治疗自身免疫疾病药物中的应用。
【背景技术】
[0002]自身免疫疾病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。在正常机体中自身反应性T细胞受抗克隆型的调节性T细胞的制约，处在数量较少和活性低下的状态。一旦这一内稳状态被打破，自身反应性T细胞便可活化、增殖并引起自身免疫疾病。以T细胞介导为主的自身免疫性疾病包括寻常型银肩病、白塞病、自身免疫性甲状腺病、类风湿性关节炎、I型糖尿病和多发性硬化症等。
[0003]研宄表明T细胞的的功能和其细胞膜上的离子通道密切相关。在正常的T细胞上Kvl.3的表达量约为200-300个，但是当T细胞活化以后Kvl.3的表达量约为3000个，因此Kvl.3成为治疗自身免疫疾病的一个重要靶标分子。国际上有许多抑制剂用于治疗自身免疫性疾病，武汉大学从细尖狼蝎中发现了一种Kvl.3阻断剂，应用在制备治疗或预防自身免疫疾病的药物。
[0004]姜黄素是从姜科姜黄属植物姜黄、莪术、郁金等的根茎中提取的一种天然的黄色酸性酚类物质，是姜黄发挥药理作用的最主要的活性成分。姜黄素多产于日本、印度、中国等热带、亚热带国家。在亚洲各国，其应用历史悠久用处广泛，一直以来，姜黄素既可用来当作药物，亦可当作着色剂、调味品、香料及防腐剂。在印度和我国的传统医药学中，都认为姜黄素能行气、驱虫、散风活血、通经止痛等，具有良好的医疗保健作用；常用于治疗厌食、鼻炎、肝胆疾患、风湿病等疾病。姜黄素目前是世界上销量最大的七大天然食用色素之一。1970年后，国内外关于姜黄素的药理作用及生物活性有了更多的研宄报道:抗炎活性、抗氧化作用、抑癌作用、抗肿瘤作用等，特别是其保肝利胆的作用，使其在当前动物生产中肝胆相关疾病危害严重的情况下具有广阔应用前景。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种姜黄素的新用途，研宄表明姜黄素能够选择性的作用于钾通道亚型Kvl.3抑制其电流的产生，并抑制T细胞的增值，制备治疗以银肩病为代表的与T细胞相关的自身免疫疾病性药物。
[0006]本发明具体通过以下技术方案实现:
[0007]本发明提供一种姜黄素在制备治疗自身免疫疾病药物中的应用，所述的免疫疾病为以银肩病为代表的与T细胞相关的自身免疫疾病。
[0008]所述的姜黄素能够抑制钾通道亚型Kvl.3电流，对钾通道亚型Kvl.3有较强的抑制作用。
[0009]所述的姜黄素能抑制T细胞的增值同时下调T细胞产生的炎症因子。
[0010]本发明所述的药物可以按需要加工成任何医药上可接受的剂型，其中较优选的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射液或糖浆剂。
[0011]本发明所述的药物可以由使用者在使用前经稀释或直接使用。其配制可由通常的本领域技术人员所公知的加工方法制备，即将活性物质与液体溶剂或固体载体混合后，再加入填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、溶剂、表明活性剂、香味剂、防腐剂、润滑剂、甜味剂或色素中的一种或几种。
[0012]本发明的有益效果为:经试验证明姜黄素对钾通道亚型Kvl.3有较强的抑制作用，其IC5tl值为12 μΜ，同时10nM的姜黄素能抑制约50%的T细胞的增值同时下调T细胞产生的炎症因子，能够作为治疗自身免疫性疾病的药物。
【附图说明】
[0013]图1为姜黄素对对钾通道作用效果；Α为10 μ M姜黄素能够抑制约50%钾通道亚型Kvl.3电流；Β为姜黄素作用于Kvl.3的浓效曲线；
[0014]图2为姜黄素和环苞菌素对T细胞炎症因子的作用；A?G分别为1、10、10nM姜黄素和环苞菌素对IL-17、IL-22、IFN-γ、IL_2、IL_8、TNF_a、细胞生存率的影响；
[0015]图3为姜黄素和环苞菌素对以银肩病为代表的自身免疫疾病的治疗作用；A?D分别为对照、姜黄素和环苞菌素治疗后临床参数、耳朵厚度、耳朵重量、淋巴重量和时间变化关系；
[0016]图4为姜黄素和环苞菌素对小鼠银肩病模型中炎症因子的作用；A?G分别为1、1UOOnM 姜黄素和环苞菌素对 IFN- γ、TNF- a、IL-2、IL-12、IL-22, IL-23 的影响；
[0017]图5为姜黄素和环苞菌素对雌性小鼠银肩病模型治疗作用耳朵观察结果；
[0018]图6为姜黄素和环苞菌素对雄性小鼠银肩病模型治疗作用耳朵观察结果。
【具体实施方式】
[0019]下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
[0020]实施例1姜黄素对钾通道亚型Kvl.3的作用
[0021]细胞转染:
[0022]I)转染前一天，用不含抗生素的培养液培养更换培养皿中含抗生素培养液。
[0023]2)当细胞密度达到80-90%，弃培养液，PBS漂洗一次，加2mL无血清培养液(Opt1-MEM)。
[0024]3)配置 A 液:240ul 无血清培养基+1ul Iipofectamine 2000 per well(总体积250ul)室温下静置5min。
[0025]4)配置溶液B:250 μ L无血清培养液中加入4ngDNA，室温静置5min。
[0026]5)将A液与B液混匀，室温下静置20min。
[0027]6)将DNA-脂质体混后匀，轻轻滴加入细胞中。
[0028]7)6小时后，更换含有血清的全培养基。
[0029]实验前必须将细胞外液置于室温下平衡后再更换培养皿内的培养液，以防止溶液温度的剧烈变化。更换溶液时要防止细胞从培养皿底部脱落。倒置显微镜下选择细胞膜较为光滑、细胞质均匀的细胞，在室温20?25°C条件下进行膜片钳实验。选用100 μ I硼硅酸盐玻璃毛细管为玻璃电极材料，玻璃电极在拉制仪(