Hig2和urlc表位肽及包含它们的疫苗的制作方法
【专利说明】
[0001] 本申请是申请日为2009年08月14日，申请号为200980141320. 6,发明名称为 "HIG2和URLC表位肽及包含它们的疫苗"的中国发明专利申请的分案申请。
技术领域
[0002] 优先权
[0003] 本申请要求2008年8月19日提交的美国临时申请No. 61/089,972的权益，通过 述及将其全部内容收入本文。
技术领域
[0004]
[0005] 本发明涉及生物科学领域，更具体的说是癌症治疗领域。具体而言，本发明涉及作 为癌症疫苗极其有效的新肽，及用于治疗和预防肿瘤的药物。
[0006] 发明背景
[0007] 已经证明，⑶8阳性CTL可识别主要组织相容性复合物（MHC)I类分子上出现的 肿瘤相关抗原（TAA)衍生的表位肽，然后杀死肿瘤细胞。从TAA的第一个例子一一黑素 瘤抗原（MAGE)家族被发现起，人们主要通过免疫学手段（NPLl:B〇〇nT，IntJCancer 1993May8, 54(2):177-80；NPL2:BoonT&vanderBruggenP,JExpMed1996Mar 1，183(3) :725-9)已经发现了许多其它TAA。人们正在将这些TAA中的一些作为免疫治疗 的靶标进行临床开发。
[0008] 能够诱导强力且特异性的抗肿瘤免疫应答的新TAA的鉴定保证了针对各种类 型癌症的肽疫苗接种策略的进一步开发和临床应用（NPL 3:Harris CC，J Natl Cancer Inst 19960ct 16, 88(20) :1442-55 ；NPL 4:Butterfield LH et al. , Cancer Res 1999Jul 1, 59(13):3134-42 ；NPL 5:Vissers JL et al. , Cancer Resl999Nov 1,59 (21):5554-9； NPL 6:van der Burg SH et al. , J Immunol 1996May 1,156 (9):3308-14 ；NPL 7:Tanaka F et al. , Cancer Res 19970ct 15, 57(20):4465-8 ；NPL 8:Fujie T et al. , Int J Cancer 1999Jan 18, 80(2):169-72 ；NPL 9:Kikuchi M et al.,Int J Cancer 1999May 5,81(3):459-66;NPL 10:0iso M et al.，Int J Cancer 1999May 5,81(3):387-94)。迄 今为止，已经有数项使用这些肿瘤相关抗原衍生的肽进行临床试验的报告。不幸的是，迄 今为止在这些癌症疫苗试验中只观察到较低的客观应答率（NPL F et al.，J Clin Oncol 20020ct 15,20(20):4169-80 ；NPL 12:Coulie PG et al.,Immunol Rev 20020ct, 188:33-42 ；NPL 13:Rosenberg SA et al. , Nat Med 2004Sep, 10 (9):909-15)〇
[0009] 世界上有数种类型的HLA-A。在已知的HLA基因型中，已知HLA-A0201、HLA-A0206、 HLA-A1101、HLA-A2402、HLA-A2601、HLA-A3101 及HLA-A3303 等基因型具有比其他类型更 高的表达频率（NPL14:LeeKW，etal.，TissueAntigens2005:65:437-447)。然而， 各种基因型具有不同的氨基酸序列以及对表位肽的不同的亲和力（NPL15:Journalof ImmunologicalMethods, (1995)，Vol. 185,pp. 181-190)。例如，HLA-A0206 基因型的a-1 域的氨基酸残基与HLA-A0201基因型的不同（即SEQIDN0:8的第33个氨基酸--酪 氨酸残基被换成了苯丙氨酸）。考虑到这些不同，HLA-A0201限制性的表位肽对于拥有 HLA-A0206基因型的患者而言不大可能有用。因此，对不同类型的患者有用的肽仍然是本领 域的目标。
[0010] 已通过微阵列分析确认了HIG2(低氧诱导型基因2)和URLC10 (又称LY6K;淋巴细 胞抗原6复合物，座位K)在数种癌症组织如肾癌和肺癌中上调（PTL1:W02005/019475，PTL 2:W02004/031413)。因此，HIG2和URLC10是癌症免疫治疗的令人感兴趣的靶标，从它们衍 生的表位肽是本领域技术人员追求的对象。
[0011] 引用列表
[0012] 非专利文献
[0013] [NPL 1]:BoonT，IntJCancer1993May8,54(2):177-80
[0014] [NPL 2]:BoonT&vanderBruggenP,JExpMed1996Mar1, 183(3):725-9
[0015] [NPL 3]:HarrisCC，JNatlCancerInst19960ct16,88(20) : 1442-55
[0016] [NPL 4]:ButterfieldLHetal. ,CancerRes1999Jul1,59 (13):3134-42
[0017] [NPL 5]:VissersJLetal. ,CancerRes1999Nov1, 59(21):5554-9
[0018] [NPL 6]:vanderBurgSHetal. ,JImmunol1996May1, 156 (9):3308-14
[0019] [NPL 7]:TanakaFetal. ,CancerRes19970ct15, 57(20):4465-8
[0020] [NPL 8]:FujieTetal.，IntJCancer 1999Jan 18,80(2) : 169-72
[0021] [NPL 9]:KikuchiMetal.，IntJCancer1999May 5,81(3):459-66
[0022] [NPL 10]:0isoMetal.，IntJCancer 1999May 5,81 (3):387-94
[0023] [NPLll]:BelliFetal. ,JClinOncol20020ct15, 20(20) :4169-80
[0024] [NPL 12]:CouliePGetal.，ImmunolRev20020ct, 188:33-42
[0025] [NPL 13]:RosenbergSAetal. ,NatMed2004Sep,10 (9):909-15
[0026] [NPL 14]:LeeKW,etal.，TissueAntigens2005:65:437-447
[0027] [NPL15]:JournalofImmunologicalMethods, (1995),Vol. 185,pp. 181-190
[0028] 专利文献
[0029] [PTL 1]:W02005/019475
[0030] [PTL 2]:W02004/031413
[0031] 发明概述
[0032] 本发明部分基于具有SEQIDNO: 1或SEQIDNO: 2所示的氨基酸序列的两种肽的 新应用的发现。在本发明的语境下，使用自HIG2或URLC10衍生的候选肽刺激从健康供体 获得的外周血单个核细胞（PBMC)。建立了可特异性识别经相应候选肽冲激的HLA-A0206阳 性靶细胞的CTL，而且鉴定了能诱导针对呈递在靶细胞表面上的HIG2或URLC10的强而特异 性的免疫应答的HLA-A0206限制表位肽。
[0033] 因而，本发明的一个目的是提供具有CTL诱导能力、且具有氨基酸序列SEQID NO: 1或2的肽。此外，本发明涵盖修饰的肽的用途，其中替代、删除、插入和/或添加了一 个、两个或更多个氨基酸，只要所得的修饰的肽保留CTL诱导能力。
[0034] 当对其HLA抗原是HLA-A0206的受试者施用时，本发明的肽呈递在抗原呈递细胞 的表面上，然后诱导靶向相应肽的CTL。因此，本发明的一个目的是提供与HLA-A0206抗原 一起呈递任何本发明肽的抗原呈递细胞和外来体，以及用于诱导抗原呈递细胞的方法。
[0035] 施用本发明的HIG2或URLC10多肽或编码该多肽的多核苷酸、以及呈递HIG2或 URLC10多肽的外来体和抗原呈递细胞诱导抗肿瘤免疫应答。因此，本发明的又一个目的 是提供含有所述多肽或编码它们的多核苷酸，以及外来体和抗原呈递细胞作为其活性成分 的、意图施用于其HLA抗原是HLA-A0206的受试者的药物制剂。本发明的药物制剂可用作 疫苗。
[0036] 此外，本发明的另一个目的是提供治疗和/或预防（即防范）癌症（肿瘤），和/或 预防其手术后复发的方法，以及用于诱导CTL的方法、用于诱导针对癌症（肿瘤）的免疫应 答及抗肿瘤免疫的方法，其中受试者具有HLA-A0206抗原，此类方法包括施用SEQIDNO:l 或SEQIDNO: 2的肽、呈递SEQIDNO: 1或SEQIDNO: 2的外来体或抗原呈递细胞，或本发 明的药物制剂的步骤。另外，本发明的CTL还可用作针对癌症的疫苗。目标癌症的例子包 括但不限于肾癌、膀胱癌、宫颈癌、胆管细胞癌、食道癌、胃癌、NSCLC、骨肉瘤、胰腺癌和软组 织肿瘤。
[0037] 本发明包括：
[0038] 1. 一种药物制剂，其中该制剂包含一种或多种具有细胞毒性T淋巴细胞（CTL)诱 导能力的肽，其中所述肽包含选自下组的氨基酸序列：
[0039] (a)SEQ ID N0:1 和 2 ;和
[0040] (b) SEQ ID NO: 1和2,其中替代、插入、缺失和/或添加了 1个、2个或几个氨基酸，
[0041] 或者一种或多种编码这样的肽的多核苷酸，与药理学可接受的载体组合，该制剂 配制为用于选自下组的目的：
[0042] (i)治疗其HLA-A抗原是HLA-A0206的受试者中的癌症，
[0043] (ii)预防其HLA-A抗原是HLA-A0206的受试者中的癌症，
[0044] (iii)防止其HLA-A抗原是HLA-A0206的受试者中的癌症的手术后复发，和（iv) 上述的组合。
[0045] 2.如项1所述的药物制剂，其中所述癌症选自膀胱癌、宫颈癌、胆管细胞癌、食道 癌、胃癌、非小细胞肺癌（NSCLC)、骨肉瘤、胰腺癌、肾癌和软组织肿瘤。
[0046] 3.项1的药物制剂，其配制成疫苗。
[0047] 4. -种诱导具有高的CTL诱导能力的抗原呈递细胞的方法，其中所述方法包括选 自下组的步骤：
[0048] (a)使抗原呈递细胞与包含选自SEQ ID NO: 1和2的氨基酸序列的肽、或其中有至 少一个氨基酸添加、插入、缺失或替换为其他氨基酸的这样的肽接触，和
[0049] (b)将编码包含选自SEQ ID NO: 1和2的氨基酸序列的肽、或其中有至少一个氨基 酸添加、插入、缺失或替换为其他氨基酸的这样的肽的多核苷酸导入抗原呈递细胞，
[0050] 其中所述抗原呈递细胞表达HLA-A0206抗原。
[0051] 5. -种使用包含选自SEQIDNO: 1和2的氨基酸序列的肽、或其中有至少一个氨 基酸添加、插入、缺失或替换为其他氨基酸的这样的肽诱导CTL的方法，其中所述CTL识别 HLA-A0206抗原与所述肽的复合物。
[0052] 6. -种分离的抗原呈递细胞，该细胞在其表面上呈递HLA-A0206抗原与包含选自 SEQ ID NO: 1和2的氨基酸序列的肽、或其中有至少一个氨基酸添加、插入、缺失或替换为其 他氨基酸的这样的肽的复合物。
[0053] 7.-种分离的CTL，其识别HLA-A0206抗原与包含选自SEQ ID NO: 1和2的氨基 酸序列的肽、或其中有至少一个氨基酸添加、插入、缺失或替换为其他氨基酸的这样的肽的 复合物。
[0054] 8.-种用于诱导具有高的CTL诱导能力的抗原呈递细胞的作用剂，其中所述作用 剂包含：
[0055] (a)-种或多种具有CTL诱导能力的肽，其中所述肽包含选自下组的氨基酸序列：
[0056] (i)SEQ ID N0:1和 2;和
[0057] (ii)SEQ ID NO: 1和2,其中替代、插入、缺失和/或添加了1个、2个或几个氨基 酸，
[0058] (b)-种或多种编码这样的肽的多核苷酸。
[0059] 9. -种在其HLA抗原为HLA0206的受试者中诱导抗癌症免疫应答的方法，其中 所述方法包括对受试者施用包含下述物质的作用剂的步骤：具有CTL诱导能力且具有选自 SEQIDN0:1或2的氨基酸序列的肽；其中有至少一个氨基酸添加、插入、缺失或替换为其 他氨基酸的这样的肽；编码这样的肽的多核苷酸；项6的分离的抗原呈递细胞；或项7的分 离的CTL。
[0060] 10.项9的方法，其中所述癌症选自膀胱癌、宫颈癌、胆管细胞癌、食道癌、胃癌、非 小细胞肺癌（NSCLC)、骨肉瘤、胰腺癌、肾癌和软组织肿瘤。
[0061] 11. -种用于在其HLA抗原为HLA0206的受试者中诱导抗癌症免疫应答的作用剂， 其中所述作用剂包含与药理学可接受载体组合的：
[0062] (a)-种或多种具有CTL诱导能力的肽，其中所述肽包含选自下组的氨基酸序列：
[0063] (i)SEQ ID N0:1和2,和