后的评估动物行为反应的阶段。
[0188] 所记录的变量如下：
[0189]-行为效应：自主运动活性、运动行为障碍、触摸后的逃避性反应、易怒性、引发的 攻击性（causedaggressivity)和木僵行为、困倦、排尿及排便、感觉运动反应（视觉定位、 捏爪、捏尾以及对声音刺激的反应）。
[0190] _神经效应：瞳孔反应、眼睑反射、骨盆抬高、尾部位置、四肢及腹部的肌紧张、翻 转实验、抓握实验、颤抖及立毛。
[0191] _生理效应：唾液分泌、流泪、腹泻、直肠温度、心跳-呼吸节律。
[0192] -死亡率。
[0193] 在施用产品两周后，进行了如下实验：
[0194] 高架十字诛宮实验（LCS)
[0195] 实验器械呈十字型，架高于离地80cm处。其包括长度为50cm、宽度为15cm的四条 臂。两条相对的臂由高40cm的垂直墙封闭，另两条臂则对空间开放，并因此代表了产生焦 虑的位置。第18天，在接受处理后1小时，动物被置于器械十字的中央，并能够自由到达所 有四条臂。经ANYMAZE系统进行5分钟的动物行为记录。在本实验中研究的变量是进入开 放臂的次数，以及在开放臂中的停留时间。进入次数少以及在开放臂中的时间短被认为表 示焦虑（Lister，1987)。
[0196] 灯光厌恶刺激洮避反应（ALSAR)实验
[0197] 该模型利用了大鼠对强光环境的厌恶。大鼠在调节操作按压活动杠杆来获取30 秒时间的黑暗（作为正强化）的范围内学习掌控其厌恶的灯光环境。
[0198] 该实验仪器由一个强光照射的独立笼子（50x40x37cm)组成，并含有两个杠杆： 一个作用杠杆，触发它时能够获得30秒的黑暗，然后恢复光照，而另一个杠杆则是不起作 用的（不产生任何正强化）。在黑暗期间，对作用杠杆的按压不会提供额外的黑暗时间。将 大鼠置于笼中20分钟，并记录实验期间对每个杠杆的按压动作次数。
[0199] 该实验组合具有4组完全受控于电脑的全自动调节装置。因此在实验过程中并无 实验员出现在房间内。
[0200] 在施用待测产品18天后，测试大鼠在ALSAR模型的操作调节中获得的训练的认知 水平。
[0201] 所记录的变量是在作用（LA)和非作用（LI)杠杆上按压动作的总次数以及在光照 期间在两个杠杆上各自的按压次数。
[0202] 作用和非作用按压动作次数能够评价出测试阶段中操控活动的水平。获得性训 练（两个杠杆的辨别）则通过在光照期间对两个杠杆各自的按压动作次数进行评估（LA对 LI) 〇
[0203] 芒蓝
[0204] 所述产品是AE(藻类提取物）以实施例1制备的水溶性藻类提取物的冻干粉末和 粉碎浓缩部分。将AE溶于泉水，并在FOB实验以及附加行为测试前60分钟经胃饲针头口 服给药。
[0205] 统计学分析
[0206]对异质性的情况即采用克鲁斯卡尔-沃利斯检验（Kruskal-Wallistest)，其通 过比较曼-惠特尼U检验（Mann-WhitneyUtest)的平均值比较来对处理组和对照组进行 比对。
[0207] 秩和检验（Wilcoxon'stest)用于每组TO至T14之间重复FOB测定的两-两对 比以及在光照环境下两个ALSAR杠杆的区分。
[0208] 统计及图表处理操作采用StatvieW5 (SAS研究所公司，USA)软件包进行。
[0209] 结果
[0210] FOB实验
[0211] 比较经载体组处理的组在T0和T14之间的FOBs
[0212] 在TO的FOB，给药处理前，所有研究大鼠组的结果都是均一的（表2、表3)。
[0213] 在T14的FOB实验（给药处理后14天），克鲁斯卡尔-沃利斯检验显示在不同处 理组之间许多变量结果的均一性（表2)。
[0214] 另一方面，对于某些研究变量，与载体相比，特定剂量的AE显示出显著的效果（图 3) 〇
[0215] 每日施用AE两周后所改善的主要变量是：
[0216]-大鼠的行为及其在饲养笼里的自主运动活性：3种剂量处理的大鼠更活跃，也更 警惕，
[0217]-在观察笼里的大鼠行为：同样，2种加强剂量的大鼠更活跃，也更警惕，
[0218]-对显示目标的兴趣：3种剂量下，AE似乎对大鼠的好奇心以及对新生物的兴趣具 有刺激作用（增加了探索活动、欣快感（hedonisme)、抗抑郁效应），
[0219]-在3种AE剂量下，手指接近或受到触碰之后的逃避反应显著减少，这显现出AE 的抗应激/焦虑效应，
[0220] -在3种剂量下，捏尾部和捏爪的反应也显著减少。这些降低的反应是出于AE的 抗应激/焦虑效应和/或止痛效应，
[0221] -大鼠的心跳和呼吸频率似乎在3种AE剂量下处理的大鼠中更低，这是出于AE的 抗应激/焦虑效应，
[0222] -大鼠的烦躁、神经过敏以及易怒性则在2个AE最强剂量给药下显著减少，这是出 于镇静、抗应激和/或抗攻击性效应。
[0223] 表2:在经过14天剂量为20、40和80mg/kg的AE口服施用前（T0)和之后（T14) 的变量状态。
[0224]
[0225]
[0226] 表3 :在经过14天剂量为20、40和80mg/kg的AE口服施用前（TO)和之后（T14) 的变量状态。
[0227]
[0228]
[0229] #P〈0. 10 ;*P〈0. 05 ;**P〈0. 01 (曼-惠特尼检验：相对于载体）
[0230] FOBs中TO和T14的不同重复变量间的比较
[0231] 每天摄入一定剂量的AE共14天似乎能够对所研究的特定主要变量具有影响（表 4)：
[0232] _3种AE剂量下，观察笼内的大鼠行为及其自主运动活性显著增加（刺激效应或抗 焦虑效应），
[0233]-在观察场地对照大鼠的位移延迟增加，且其活动活性（跨越的空格数）下降，而 经AE处理的大鼠，这些变量在T0和T14的FOBs之中保持稳定（抗应激和抗抑郁效应），
[0234]-对于显示目标的兴趣：在剂量为20mg/kg，p. 〇? ( 口服）时，AE能够刺激大鼠对 呈现在它们面前的刺激目标产生兴趣（对新事物进行探索的积极性，欣快感：抗应激和抗 抑郁效应），
[0235]-在开放分支上跨越的空格数：与载体组相比，AE并未降低在开放分支上的跨越 空格数（抗应激效应），
[0236] -手指接近时的逃避反应：3个剂量下的AE降低了实验员将手指靠近后的逃避反 应（抗应激效应），
[0237] -在对照大鼠中，对捏尾产生的反应增加，而在AE为20mg/kg时则减少（抗应激效 应和/或止痛效应），
[0238] -3种AE剂量下，对捏后肢的反应减少（抗应激效应和/或止痛效应），
[0239] -在40和80mg/kg的AE剂量下，对声音刺激的跳跃反应显著减少（镇静和抗应激 效应），
[0240] -在20和40mg/kg的AE剂量下，心跳和呼吸频率下降（镇静和抗应激效应）， [0241 ]-烦躁、神经过敏和易怒性：在80mg/kg的剂量下，AE对大鼠的烦躁、神经过敏和易 怒性显示出积极效果（镇静、抗应激和/或抗攻击性效果）。
[0242] 表4:在各处理组中，AE对T0-T14间FOBs的变量时间依赖性变化的效果
[0243]
[0244]
[0245]N.S.:在TO和T14之间不显著
[0246] 、^在TO和T14之间下降
[0247]，界在?和T14之间上升
[0248] *:P〈0. 05 ;#:P〈0. 10(趋势）
[0249] 高架十字诛宮实验（LCS)
[0250] 在高架十字迷宫实验中，经过18天的每日处理，按20、40和80mg/kg口服AE显著 增加了大鼠进入开放臂中的次数（表5,图4)以及停留时间（表6,图5)，这显示出AE的抗 应激活性。
[0251] 表5 :AE对高架十字迷宫实验中进入开放臂次数的效果
[0252]
[0255] 灯光厌恶刺激洮避反应实验（ALSAR)
[0256] 在每日施用AE18天后，克鲁斯卡尔-沃利斯检验显示，在5分钟、10分钟、15分钟 和20分钟时，不同处理组中大鼠对两个杠杆（作用杠杆+非作用杠杆）的累积按压次数较 为平均（图6)。
[0257] 在灯光厌恶刺激逃避实验中，经20mg/kg的AE剂量给药处理了 18天后的大鼠，在 实验的首个5分钟结束时趋向于区分活动杠杆和非活动杠杆（图7)。
[0258] 在实验的10分钟阶段结束时，经40mg/kg的AE剂量口服处理的大鼠能够明显地 区分开活动杠杆和非活动杠杆，而那些经20和80mg/kg口服处理的则趋于区分操作两个杠 杆。而对照大鼠并非如此，其未能显示出能够区分的倾向（图8)。
[0259] 在实验的15分钟阶段结束时，经20和40mg/kg的AE剂量口服处理的大鼠能够明 显地区分开活动杜杆和非活动杜杆。经80mg/kg口服处理的大鼠则不再区分两个杜杆。对 照大鼠则未在此实验训练阶段中有任何区分表现（图9)。
[0260] 在实验的20分钟阶段结束时，经20和40mg/kg的AE剂量口服处理的大鼠仍然能 够明显地区分开活动杠杆和非活动杠杆。经80mg/kg口服处理的大鼠不再有任何区分表 现，而对照大鼠则开始表现有区分的端倪（图10)。
[0261] 这些结果显示了AE对于获得性训练的效果，尤其是在20和40mg/kg剂量口服后。
[0262] 牛理及无伤件数据
[0263]AE的施用，无论剂量多少，均未对每天经20、40或40mg/kg口服处理的大鼠表现出 任何体重或食物摄入影响。在20、40和80mg/kg口服处理21天后的动物中，均未检测到毒 性。
[0264] 结论
[0265] 本发明藻类提取物的施用显示出该产品的神经学效应，尤其是抗应激/焦虑、抗 抑郁、止痛活性以及训练和记忆促进的早期获得能力。
[0266] 实施例5 :通讨行为绝望实验对藻类提取物（AE)的效果评估
[0267] 对成年雄性Wistar大鼠口服施用3个剂量（10、20和40mg/kg/d)的本发明藻类 提取物（AE)作为预防性治疗，并采用行为绝望实验（BDT)对其抗焦虑效果进行评估。
[0268] 每天施用所述提取物作为半长期治疗共14天。所述提取物对一组12只大鼠的效 果通过BDT评估，将经载体（矿泉水）处理的对照批以及经10mg/kg/d剂量的丙咪嗪处理 的参照批作为比较。
[0269] 所用的大鼠根据ASAB和加拿大动物保护委员会颁布的伦理条例进行处理。
[0270] 设备和方法
[0271] 动逾
[0272] 取60只体重在200_225g的雄性Wistar大鼠（查尔斯河实验室，法国）。获 得大鼠后，将其标