靶向脂质体包裹水相纳米金复合物的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种靶向脂质体包裹水相纳米金复合物的制备方法。具体涉及靶向多肽连接的脂质体包裹水相纳米金颗粒的制备方法。本发明在肿瘤成像，热疗及载药领域具有应用前景。
【背景技术】
[0002]肿瘤早期诊断迫切需要一种具备多重模式结合、高效特异性主动靶向的生物探针。电子计算机X射线断层扫描技术(CT)是目前应用最广泛的诊断方式，其空间分辨率高，并且随着多层螺旋CT的应用和发展，成像越来越接近自然解剖结构。但是由于某些器官结构与周围组织缺乏自然对比，因此需要将密度高于或低于该器官的物质引入器官或器官间隙作为造影剂，使之产生对比以显影。
[0003]目前使用最广泛的CT碘造影剂，存在易被肾脏清除造成显影时间较短，易过敏，有一定肾毒性等缺点。纳米颗粒由于其特殊的物理化学性能，在肿瘤诊断和治疗领域已经成为一项研究热点。纳米金颗粒具有优异的生物和理化特性，较高的X射线吸收系数，独特的表面等离子共振现象，易于化学修饰，良好的生物相容性和被动肿瘤靶向性能等特点，在造影发面具有天然优势。尤其是靶向脂质体包裹的金纳米颗粒不仅具有更好的生物相容性，并且兼具了纳米金被动靶向和主动靶向的功能。因此，开发以纳米金为主体，生物相容性好，兼具主动靶向性的造影剂具有较高的研究意义和应用价值。
【发明内容】
[0004]本发明目的在于针对现有技术的不足，提供以纳米金为主体，使用靶向修饰的脂质体包裹纳米金复合物的制备方法。该方法通过控制反应条件，在脂质体表面连接不同靶向的多肽及抗体分子，成功包裹了水相纳米金颗粒。具有包裹量大，性能稳定，生物相容性好的特点。所得产物具有较好的临床应用前景。
[0005]—种靶向脂质体包裹水相纳米金复合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤:
(1)靶向脂质体的制备:
将巯基修饰的多肽分子溶解于磷酸盐缓冲溶液中(PBS，pH=7.0)，马来酰亚胺修饰的磷脂分子(DSPE-PEG-MAL)溶解于N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)中；然后将DSPE-PEG-MAL溶液加入到多肽溶液中，超声除去溶液中的气泡，然后磁力搅拌1小时；
反应液稀释3-5倍，装入透析袋透析，以除去DMF，PBS，以及未连接的多肽分子，得到多肽(P)连接的磷脂分子(P-DSPE)，冷冻干燥得到固体产物；
将氢化大豆磷脂(HSPC)，胆固醇，P-DSPE混合，加入氯仿溶解于圆底烧瓶中，然后旋转蒸发，至瓶壁上形成一层膜，放入真空干燥箱过夜；
(2)靶向脂质体包裹金纳米颗粒:
将纳米金溶液超滤离心浓缩，逐步加入硫酸铵溶液((NH4) 2S04)，然后将该含有纳米金的硫酸铵溶液加入到上述圆底烧瓶中，置于恒温水浴摇床上进行脂质体对纳米金的包裹，超声半小时后，过层析柱(葡聚糖凝胶)，收集脂质体层析液得到脂质体包裹纳米金的微球。
[0006]革E1向分子可以为革E1向神经鞭毛素蛋白(Neuropilin-l)的多肽分子的一种，或为革巴向Toll样受体4抗体(TLR4)。
[0007]纳米金为4纳米或13纳米。
[0008]本发明的优点在于:
(1)本发明采用靶向脂质体包裹纳米金颗粒的结构。所用原料生物安全性高，部分原料已经形成商品，具有一定的应用前景。
[0009](2)本发明制备的靶向脂质体包裹的纳米金复合颗粒，性质稳定性、兼具靶向性和造影功能。
[0010](3)本发明中的制备方法工艺简单，可操作性强，能进一步满足生产和应用。
【附图说明】
[0011]图1为实施例1所制备的靶向脂质体包裹纳米金颗粒的透射电镜图。
[0012]图2为实施例2所制备的靶向脂质体包裹纳米金颗粒的透射电镜图。
【具体实施方式】
[0013]以下通过具体的实施例对本发明的技术方案作进一步描述。以下的实施例是对本发明的进一步说明，而不限制本发明的范围。
[0014]实施例1:
1、靶向脂质体的制备:
将巯基修饰的多肽分子SH-N1，2.15mg溶解于1ml磷酸盐缓冲溶液中(PBS，pH=7.0)，马来酰亚胺修饰的磷脂分子(DSPE-PEG-MAL)8.9mg溶解于0.5ml N, N-二甲基甲酰胺(DMF)中。然后将DSPE-PEG-MAL溶液加入到多肽溶液中。超声除去溶液中的气泡，然后磁力搅拌1小时。
[0015]反应液稀释至5ml，装入透析袋透析，1-2小时换一次水，以除去DMF，PBS，以及未连接的多肽分子等。得到多肽(P)连接的磷脂分子(P-DSPE)。冷冻干燥得到固体产物。
[0016]将氢化大豆磷脂(HSPC)8mg，胆固醇3.4mg，P-DSPElmg混合，加入氯仿2.5ml溶解于圆底烧瓶中，然后41°C旋转蒸发，至瓶壁上形成一层膜。放入真空干燥箱过夜。
[0017]2、靶向脂质体包裹金纳米颗粒:
将粒径为4nm的纳米金溶液超滤离心浓缩，逐步加入硫酸铵溶液0.5ml ((NH4) 2S04)，然后将该含有纳米金的硫酸铵溶液加入到上述圆底烧瓶中。置于恒温水浴摇床上进行脂质体对纳米金的包裹，超声半小时后，过层析柱(葡聚糖凝胶)，收集脂质体层析液得到脂质体包裹纳米金的微球。
[0018]实施例2:
1、靶向脂质体的制备将巯基修饰的另一种革G向神经鞭毛素蛋白的多肽分子SH-N2，2.15mg溶解于1ml磷酸盐缓冲溶液中(PBS，pH=7.0)，马来酰亚胺修饰的磷脂分子(DSPE-PEG-MAL) 8.9mg溶解于
0.5ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中。然后将DSPE-PEG-MAL溶液加入到多肽溶液中。超声除去溶液中的气泡，然后磁力搅拌1小时。
[0019]反应液稀释至5ml，装入透析袋透析，1-2小时换一次水，以除去DMF，PBS，以及未连接的多肽分子等。得到多肽(P)连接的磷脂分子(P-DSPE)。冷冻干燥得到固体产物。
[0020]将氢化大豆磷脂(HSPC)8mg，胆固醇3.4mg，P-DSPElmg混合，加入氯仿2.5ml溶解于圆底烧瓶中，然后41°C旋转蒸发，至瓶壁上形成一层膜。放入真空干燥箱过夜。
[0021]2、靶向脂质体包裹金纳米颗粒
将粒径为13nm的纳米金溶液超滤离心浓缩，逐步加入硫酸铵溶液0.5ml( (NH4)2S04)，然后将该含有纳米金的硫酸铵溶液加入到上述圆底烧瓶中。置于恒温水浴摇床上进行脂质体对纳米金的包裹，超声半小时后，过层析柱(葡聚糖凝胶)，收集脂质体层析液得到脂质体包裹纳米金的微球。
[0022]实施例3:
1、靶向脂质体的制备
将Toll样受体4抗体，20ml (lmg/ml)溶解于lml磷酸盐缓冲溶液中(PBS，pH=7.0)，马来酰亚胺修饰的磷脂分子(DSPE-PEG-MAL)8.9mg溶解于0.5ml N, N-二甲基甲酰胺(DMF)中。然后将DSPE-PEG-MAL溶液加入到多肽溶液中。超声除去溶液中的气泡，然后磁力搅拌1小时。
[0023]反应液稀释至5ml，装入透析袋透析，1-2小时换一次水，以除去DMF，PBS，以及未连接的多肽分子等。得到多肽(P)连接的磷脂分子(P-DSPE)。冷冻干燥得到固体产物。
[0024]将氢化大豆磷脂(HSPC)8mg，胆固醇3.4mg，P-DSPElmg混合，加入氯仿2.5ml溶解于圆底烧瓶中，然后41°C旋转蒸发，至瓶壁上形成一层膜。放入真空干燥箱过夜。
[0025]2、靶向脂质体包裹金纳米颗粒
将粒径为13nm的纳米金溶液超滤离心浓缩，逐步加入硫酸铵溶液0.5ml( (NH4)2S04)，然后将该含有纳米金的硫酸铵溶液加入到上述圆底烧瓶中。置于恒温水浴摇床上进行脂质体对纳米金的包裹，超声半小时后，过层析柱(葡聚糖凝胶)，收集脂质体层析液得到脂质体包裹纳米金的微球。
【主权项】
1.一种靶向脂质体包裹水相纳米金复合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)靶向脂质体的制备: 将巯基修饰的多肽分子溶解于磷酸盐缓冲溶液中(PBS，pH=7.0)，马来酰亚胺修饰的磷脂分子(DSPE-PEG-MAL)溶解于N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)中；然后将DSPE-PEG-MAL溶液加入到多肽溶液中，超声除去溶液中的气泡，然后磁力搅拌1小时； 反应液稀释3-5倍，装入透析袋透析，以除去DMF，PBS，以及未连接的多肽分子，得到多肽(P)连接的磷脂分子(P-DSPE)，冷冻干燥得到固体产物； 将氢化大豆磷脂(HSPC)，胆固醇，P-DSPE混合，加入氯仿溶解于圆底烧瓶中，然后旋转蒸发，至瓶壁上形成一层膜，放入真空干燥箱过夜； (2)靶向脂质体包裹金纳米颗粒: 将纳米金溶液超滤离心浓缩，逐步加入硫酸铵溶液((NH4) 2S04)，然后将该含有纳米金的硫酸铵溶液加入到上述圆底烧瓶中，置于恒温水浴摇床上进行脂质体对纳米金的包裹，超声半小时后，过层析柱(葡聚糖凝胶)，收集脂质体层析液得到脂质体包裹纳米金的微球。2.根据权利要求1所述靶向脂质体包裹水相纳米金复合物的制备方法，其特征在于，革巴向分子可以为革G向神经鞭毛素蛋白(Neuropilin-Ι)的多肽分子的一种，或为革El向Toll样受体4抗体(TLR4)。3.根据权利要求1所述靶向脂质体包裹水相纳米金复合物的制备方法，其特征在于，纳米金为4纳米或13纳米。
【专利摘要】本发明涉及一种靶向脂质体包裹水相纳米金复合物颗粒的制备方法，包括靶向脂质体的制备和靶向脂质体包裹金纳米颗粒，到脂质体包裹纳米金的微球。本发明采用靶向脂质体包裹纳米金颗粒的结构。所用原料生物安全性高，部分原料已经形成商品，具有一定的应用前景。本发明制备的靶向脂质体包裹的纳米金复合颗粒，性质稳定性、兼具靶向性和造影功能。本发明中的制备方法工艺简单，可操作性强，能进一步满足生产和应用。
【IPC分类】A61K41/00, A61P35/00, A61K47/42, A61K49/04, A61K9/127
【公开号】CN105326792
【申请号】CN201510787539
【发明人】何丹农, 王萍, 刘婷, 金彩虹, 吴颖为, 陶晓峰
【申请人】上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2015年11月17日