:Yb/Er)表面连接氨基:
[0030]称取30mg介孔二氧化娃包覆的上转换纳米颗粒(NaYF4:Yb/Er)，加到装有3ml甲苯溶液的小瓶中，密封常温300rpm旋转6h (旋转速度不宜太快，不超过600rpm)。再加入50ul APTMS (体积比甲苯:APTMS = 60:1)，溶液密封常温旋转24h。旋转结束后，离心收集纳米颗粒，相对离心力为3500g，时间6min。取甲苯溶液3ml，吹打溶液直到颗粒混匀，溶液呈悬池液，再离心收集纳米颗粒，相对离心力为3500g，时间6min，再重复以上步骤，用3ml甲苯清洗一遍，然后放通风橱风干。此时获得表面接有氨基(-NH2)的纳米颗粒。
[0031]2)纳米颗粒的介孔二氧化硅层负载光敏剂酞菁二氯化钛:
[0032]称取2.5mg酞菁二氯化钛溶于3ml的吡啶溶液中，密封超声40min (超声池中放冰袋，保证超声过程水温常温)，之后溶液3000rpm离心lOmin，取上清液放于25ml小瓶中，沉淀放通风橱风干后称量质量叫。则上清液中酞菁二氯化钛的浓度是[(2.5-1^)/3=11^/ml ο (酞菁二氯化钛的称量质量1?，溶于吡啶之后，只溶解一部分，此时离心收集不溶解的沉淀，风干后称量m2.我们取用上清液，所以上清液中的酞菁二氯化钛的质量为(m1-ng，浓度
上清液体积V))。将30mg表面接有氨基(_NH2)的纳米颗粒浸入上清液中，密闭瓶口超声40min (超声水温保持不变)后，室温600rpm旋转24h。离心收集纳米颗粒，3000rpm离心lOmin。吸取5ml PBS溶液(0.1M PH7.5)吹打溶液直到颗粒混匀，溶液呈悬浊液，再离心收集纳米颗粒，3000rpm离心lOmin。重复以上步骤，再次用5mlPBS溶液清洗纳米颗粒。最后颗粒存放于2ml MES缓冲液中。获得负载有光敏剂酞菁二氯化钛的纳米颗粒
[0033]3)介孔二氧化娃包覆的上转换纳米颗粒(NaYF4:Yb/Er)表面修饰透明质酸:
[0034]称取30mg透明质酸(HA)放入4ml超纯水中活化过夜，再加入2ml MES缓冲液(缓冲液中EDC (9mg/ml)和NHS (9mg/ml))，保证EDC和NHS对透明质酸的作用终浓度都为3mg/ml ο溶液常温600rpm旋转30min。取2ml含有30mg纳米颗粒的MES缓冲液加入上面的溶液中，溶液密封超声40min后，室温旋转300rpm，8h，充分进行酰胺化反应。反应完成后lOOOOrpm离心lOmin离心收集产品，取4ml超纯水吹打溶液直到颗粒混匀，溶液呈悬浊液，离心收集纳米颗粒，lOOOOrpm离心lOmin。重复以上步骤，再次用4ml超纯水清洗纳米颗粒。纳米颗粒清洗2次后完成生物光敏剂的制备。将产品存放于2ml超纯水中，密封4°C保存。
[0035]对本实施例制备的新型生物光敏剂进行单线态氧产率的检测。单线态氧产率是利用荧光物质ABDA对单线态氧敏感而使其自身的荧光强度降低来检测的。负载不同光敏剂的纳米颗粒单线态氧产率检测结果显示:负载部花青MC540的上转换纳米颗粒的单线态氧产率为20%;负载酞菁锌(ZnPc)的上转换纳米颗粒的单线态氧产率为10%;负载酞菁二氯化钛的上转换纳米颗粒的单线态氧产率为40.7 %。本实施例制备的负载酞菁二氯化钛的上转换纳米颗粒单线态氧的产率与之前的相比有了大大的提高。
[0036]利用傅立叶红外光谱仪对制备的新型生物光敏剂进行检测，从红外光谱图分析得；3313cm 1处的吸收峰来源于HA的0 - Η伸缩键，2931cm 1处的吸收峰来代表C - Η伸缩键，1637cm 1处的吸收峰代表-CH2shoulder peak,810andlll0,1637cm 1处的吸收峰代表S1-ο-Si伸缩键。综合以上分析透明质酸分子(HA)已经包覆到颗粒的表面。
[0037]实施例3
[0038]本发明的生物光敏剂可用于深层组织的高效强靶向的光动力治疗。光的波长越大，组织穿透能力越强，近红外光可以到达组织深层。由于i3-NaYF4:Yb/Er这种晶相的上转换纳米颗粒，可以吸收近红外980nm的激光，而发射出520nm，540nm和653nm波长的可见光。其上负载光敏剂，就可以实现深层组织的光动力治疗。
[0039]本发明将酞菁二氯化钛和透明质酸负载到介孔二氧化硅包覆的上转换纳米颗粒(NaYF4:Yb/Er)上，透明质酸可以特异性识别CD44过量表达的癌细胞，例如:结肠癌细胞和乳腺癌细胞等，赋予了生物光敏剂的高靶向性。酞菁二氯化钛这种光敏剂与上转换纳米颗粒之间能量转换效率高，吸收上转换荧光产生大量的单线态氧，单线态氧可以损害细胞膜表面的蛋白质和磷脂，从而实现对癌细胞的杀伤功能。本发明制备的强穿透性和高靶向性的新型生物光敏剂可以有效提高深层组织光动力治疗的效果。
【主权项】
1.一种生物光敏剂，其特征在于，所述的生物光敏剂的制备过程如下: 1)在介孔二氧化硅包覆的上转换纳米颗粒的表面连接上氨基，获得表面接有氨基的纳米颗粒； 2)将酞菁二氯化钛浸入到表面接有氨基的纳米颗粒的介孔二氧化硅层中；获得负载有酞菁二氯化钛的纳米颗粒； 3)将负载有光敏剂酞菁二氯化钛的纳米颗粒表面修饰透明质酸完成制备。2.如权利要求1所述的生物光敏剂，其特征在于，所述的步骤1)是将介孔二氧化硅包覆的上转换纳米颗粒溶解在甲苯中，再加入APTMS制成混合溶液，混合溶液进行密封常温旋转；旋转结束后离心收集纳米颗粒，用甲苯清洗风干后获得表面接有氨基的纳米颗粒。3.如权利要求2所述的生物光敏剂，其特征在于，所述的混合溶液中介孔二氧化硅包覆的上转换纳米颗粒的浓度为2-10mg/ml。4.如权利要求2所述的生物光敏剂，其特征在于，所述的混合溶液中甲苯和APTMS的体积比为40-60: 1 ο5.如权利要求1所述的生物光敏剂，其特征在于，所述的步骤2)是将将酞菁二氯化钛溶于吡啶溶液中，密封溶解后进行离心，取上清液；将表面接有氨基的纳米颗粒浸入上清液中，密闭进行悬浮，然后离心收集纳米颗粒，将颗粒清洗后存放于MES缓冲液中，获得负载有酞菁二氯化钛的纳米颗粒。6.如权利要求5所述的生物光敏剂，其特征在于，所述的颗粒清洗是用PBS溶液进行的。7.如权利要求1所述的生物光敏剂，其特征在于，所述的步骤3)是将透明质酸活化后加入MES缓冲液中，并加入步骤2)制备的负载有酞菁二氯化钛的纳米颗粒，溶液密封超声室温旋转进行酰胺化反应制成产品。8.如权利要求7所述的生物光敏剂，其特征在于，所述的MES缓冲液中EDC和NHS对透明质酸的作用终浓度为l_3mg/ml。
【专利摘要】本发明的目的是提供一种生物光敏剂，即一种强穿透性和高靶向性的新型生物光敏剂.本发明将酞菁二氯化钛和透明质酸以合适的负载顺序和高效的结合方式对纳米颗粒进行修饰，修饰后的上转换纳米颗粒有高的单线态氧的产率，和对过量表达CD44蛋白的细胞的特异性识别的高靶向功能。
【IPC分类】A61K9/14, A61K47/04, A61K47/36, A61K41/00, A61P35/00
【公开号】CN105363032
【申请号】CN201510875313
【发明人】姜磊, 燕照霞, 刘涵云, 杨丽敏, 马洪超
【申请人】中国石油大学(华东)
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2015年12月3日