一种应用于农场现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及微生物肥料领域，特别是涉及一种应用于农场现场发酵的巨大芽孢杆 菌菌肥及应用。
【背景技术】
[0002] 地壳中磷的平均含量约为0.122%，在土壤形成过程中，磷有一定程度的迀移，随 着成土过程的进行，土壤磷含量也降低。我国大部分土壤磷含量在〇. 〇43%-〇. 046%之间，因 而在土壤中，磷含量是比较缺乏。由于磷是植物生长发育所必需的16种营养元素之一，作 物主要以磷酸根等化学形态吸收磷素，而土壤中的磷主要以固定态的矿物质状态存在，约 占全磷含量的70%左右，所以土壤中水溶性的无机磷酸根离子的含量高低在植物磷素营养 供应中起着重要作用。南方土壤绝大多数偏酸性，一般全磷含量低于0.04%，其中80%以上 磷为难溶状态，土壤质地多以原生矿物形态存在，少数以磷酸铝铁矿物态存在，还有一部分 磷为有机磷，多以有机化合物形态如磷脂等形式存在，在一般情况下，难以直接被植物吸收 利用，只有在长期的风化过程或者在适宜的条件下，这些磷酸盐通过土壤微生物的活化作 用逐步转化为水溶态，才能被作物吸收利用。我国现有1.24亿hm2耕地中，有0.81亿 hm2缺磷，约占总耕地面积的60%以上，现在的种植模式大多采用直接施用无机磷肥来满足 作物对磷素的需求，由于施入的磷肥的有效作用形式为磷酸根，在土壤中极易与碱性土壤 中的钙盐和酸性土壤中的铁、铝等离子发生反应，被土壤中胶体物质所固定，从而转化成无 效态，最终以难溶性磷酸盐或吸附态形式固定于土壤中，因而植物难以直接吸收利用，所以 磷肥的利用率很低，一般低于20%，为了提高磷肥的利用率，减少磷肥的投入，很多农业及 肥料科研工作者采用了很多方法提高磷肥的利用率，但效果不佳，其中利用解磷微生物对 土壤磷的分解，是提高土壤磷有效化利用的重要途径之一。对于解磷的芽孢杆菌主要集中 在巨大芽孢杆菌。
[0003]尽管国内外巨大芽孢杆菌在土壤中解磷的应用历史已经很长，但是在应用和研究 中仍存在着效果不稳定的问题。主要原因：目前大多微生物肥料生产还在延续上世纪的发 酵后直接吸附或液体灌装的生产模式，致使产品的生物量低，农业生产上接种量不足，增产 效果不稳定；由于巨大芽孢杆菌作为菌肥，为了能够利于生产，运输，我们生产产品中的芽 孢菌主要是以孢子的状态存在，但其应用于作物，土壤中，都需要的主要是营养态细胞，芽 孢施入土壤后能否及时萌发，或者其萌发效率的高低也会明显影响使用效果。
[0004]尽管有报道使用芽孢杆菌制剂时，为了使用芽孢尽快萌发，在使用前会经过活化， 即使芽孢状态的芽孢杆菌转化为营养态细胞，但传统上的活化主要是加入一些红糖，或葡 萄糖，培养基之类的营养物质诱导其生长繁殖，如芽孢杆菌制剂:红糖:水以1:1:10的比例 进行"活化"，但传统上的"活化"存在以下几个方面的问题： 一是高营养培养基加水后易使空气与水中的酵母菌，乳酸菌繁殖迅速，消耗培养基中 营养，迅速降低培养液中PH，抑制芽孢的萌发与生长； 二是芽孢萌发前期需要时间长，一般需要4小时，芽孢才会开始萌发，而此时，由于"活 化"液中酵母菌与乳酸菌的大量繁殖导致PH下降迅速，已经可以抑制芽孢的萌发与繁殖，从 而大大影响芽孢萌发； 三是高营养培养基中也易感染大肠杆菌，原著的植物病害菌等有害杂菌，导致施用后 效果差仍致有反作用。
[0005]然而到目前为止还没有公开过有关一种应用于农场现场发酵扩繁的能够较好控 制杂菌与促进芽孢快速萌发的巨大芽孢杆菌菌肥。
【发明内容】
[0006] 为了克服现有技术的缺点，本发明提供一种应用于农场现场发酵扩繁的能够较好 控制杂菌与促进芽孢快速萌发的巨大芽孢杆菌菌肥及其应用，具体说是提供一种可应用于 农场现场发酵扩繁，利用纳他霉素与多粘菌素抑制病原真菌，酵母菌等真菌与大肠杆菌，沙 门氏菌等革兰氏阴性菌的生长，利用肌苷，赖氨酸等芽孢萌发剂，能快速促进芽孢的萌发， 提高芽孢萌发效率，减少芽孢萌发时间，从而快速使用芽孢杆菌繁殖而占据优势菌种，而 更好的抑制其他的杂菌与有害菌。从而得到一种巨大芽孢杆菌含量高，杂菌少，解磷活性好 的可以在大农场低成本生产的巨大芽孢杆菌发酵液。
[0007]为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种用于农场现场发酵的巨大 芽孢杆菌菌肥，制备该巨大芽孢杆菌菌肥的原料按重量份为:巨大芽孢杆菌菌粉50-200份， 硫酸粘杆菌素10-50份，纳他霉素1-10份，肌苷0.5-5份，赖氨酸5-50份，玉米粉50-200份，豆 柏粉50-200份，磷酸氢二钠1-10份，氯化钾1-10份，红糖50-200份； 其中，所述的用于农场现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥的制备方法，包括以下步骤： ·_、巨大芽孢杆菌菌粉的制备 取出巨大芽孢杆菌菌种保藏管，用LB培养基划平板进行复苏，30°C培养2-3天。在平板 上挑选较大的菌落接种到装有LB培养基的茄子瓶中，在培养箱中30°C培养2-3天。等菌种成 熟后，将无菌生理盐水将其洗脱，即可作为巨大芽孢杆菌液体菌种接种至1000L发酵培养 基，接种量为5%，开搅拌120r/min，培养前12小时，每分钟通气量为液/气1:0.6，培养温度为 29-31°C; 12小时后，每分钟通气量为液/气1:0.9，培养温度为30-33°C;培养24-36小时，待 芽孢含量不低于60亿CFU/毫升，即可结束发酵，板框过滤除水，剩下菌体加硅藻土，调节菌 浓度为100亿CFU/克，水份含量低于5%，粉碎过100目筛，即得到巨大芽孢杆菌菌粉； 其中，所述LB培养基:蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂20g，水1000mL，pH7.2;其中 所述发酵培养基:豆饼粉2.3%玉米粉3.5%酵母膏0.08%磷酸氢二钾0.02%氯化 钠0.1%硫酸锰0.003%豆油0.014%;各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa，121°C灭 菌30分钟。
[0008] @、混匀，包装 将硫酸粘杆菌素10-50份，纳他霉素1-10份，肌苷0.5-5份，赖氨酸5-50份，玉米粉50-200份，豆柏粉50-200份，磷酸氢二钠1-10份，氯化钾1-10份，红糖50-200份，放置密封搅拌 罐中搅拌20-30分钟，混合均匀，再将步骤?制备的巨大芽孢杆菌菌粉50-200份加入搅拌罐 中搅拌均匀后，分装，抽真空包装，即得到用于现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥。
[0009] 其中，所述的农场现场发酵的方法为： 先将巨大芽孢杆菌菌肥加入其3-5倍重量的水润湿调匀，30分钟后再补足水以达到巨 大芽孢杆菌菌肥与水的比例为1:10至1:30的比例，调PH至8-8.2后，开始培养，前12小时每 分钟通气量液气比为1:0.6，12小时后通气量为1:0.8，培养温度为20-35°C，培养16-24小 时后即为现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥的发酵液。
[0010] 其中，所述一种用于农场现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥，其制备巨大芽孢杆菌菌 肥的最佳配方原料按重量份为：巨大芽孢杆菌菌粉100份，硫酸粘杆菌素18份，纳他霉素1 份，肌苷1份，赖氨酸18份，玉米粉157份，豆柏粉120份，磷酸氢二钠3份，氯化钾2份，红糖80 份； 其中，所述的现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥的发酵液在作物栽培中作为磷肥的应用， 其施用方法是用现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥的发酵液作底肥、基肥和追肥以及穴施和拌 种； 其中，所述作物为烤烟，水稻，棉花，番茄，辣椒，小麦，草莓，茄子，西瓜等。
[0011] 其中，用于制备用于现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥的各原料的水份含量低于6%。