农场现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥的制备方法，包括以下步骤： Φ、巨大芽孢杆菌菌粉的制备 取出巨大芽孢杆菌菌种保藏管，用LB培养基划平板进行复苏，30°C培养2-3天。在平板 上挑选较大的菌落接种到装有LB培养基的茄子瓶中，在培养箱中30°C培养2-3天。等菌种成 熟后，将无菌生理盐水将其洗脱，即可作为巨大芽孢杆菌液体菌种接种至1000L发酵培养 基，接种量为5%，开搅拌120r/min，培养前12小时，每分钟通气量为液/气1:0.6，培养温度为 29-31°C; 12小时后，每分钟通气量为液/气1:0.9，培养温度为30-33°C;培养30小时，芽孢含 量为64亿CFU/毫升，即可结束发酵，板框过滤除水，剩下菌体加硅藻土，调节菌浓度为100亿CFU/克，水份含量为4.6%，粉碎过100目筛，即得到巨大芽孢杆菌菌粉;其中所述LB培养基： 蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂20g，水1000mL，pH7.2;其中所述发酵培养基:豆饼粉 2.3%玉米粉3.5%酵母膏0.08%磷酸氢二钾0.02%氯化钠0.1%硫酸锰0.003% 豆油0.014%;各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa，121°C灭菌30分钟； ￡、混匀，包装 将硫酸粘杆菌素18份，纳他霉素1份，肌苷1份，赖氨酸20份，玉米粉180份，豆柏粉120 份，磷酸氢二钠4份，氯化钾2份，红糖80份，放置密封搅拌罐中搅拌20-30分钟，混合均匀，再 将步骤D制备的巨大芽孢杆菌菌粉100份加入搅拌罐中搅拌均匀后，分装，抽真空包装，即 得到用于现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥； 其中，所述的农场现场发酵的方法为： 先将巨大芽孢杆菌菌肥加入其4倍重量的水润湿调匀，30分钟后再补足水以达到巨大 芽孢杆菌菌肥与水的比例为1:15的比例，调PH至8.1后，开始培养，前12小时每分钟通气量 液气比为1 :〇 .6，12小时后通气量为1:0.8,培养温度为25°C，培养20小时后即为现场发酵 的巨大芽孢杆菌菌肥的发酵液。经检测，其发酵液中巨大芽孢杆菌的含量为22亿CFU/ml，杂 菌含量低于〇.1亿CFU/ml。
[0031 ] 实施例6 将实施例5现场农场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥的发酵液在茄子上的应用效果（以下简 称巨大芽孢杆菌菌液） 1. 试验地点:贵州省凤冈县何坝乡白腊洞 2. 试验方法:在茄子生长期间，叶面喷施1:500倍巨大芽孢杆菌菌液，20天1次，连喷3 次;在叶喷施后10天左右用1:1000倍巨大芽孢杆菌菌液再灌根一次，对照组用清水喷施； 3. 试验结果:试验组比对照组增产13.7%，亩净增收益达164元，最重要的是应用了巨大 芽孢杆菌菌液后，植株的病害减少了，在整个应用过程中没有使用农药，大大降低了种植成 本。
【主权项】
1. 一种用于农场现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥，其特征在于，制备该巨大芽孢杆菌菌 肥的原料按重量份为：巨大芽孢杆菌菌粉50-200份，硫酸粘杆菌素10-50份，纳他霉素1-10 份，肌苷0.5-5份，赖氨酸5-50份，玉米粉50-200份，豆柏粉50-200份，磷酸氢二钠1-10份，氯 化钾1-10份，红糖50-200份。2. 根据权利要求1所述的一种用于农场现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥，其特征在于，其 制备方法包括以下步骤： ①、巨大芽孢杆菌菌粉的制备 取出巨大芽孢杆菌菌种保藏管，用LB培养基划平板进行复苏，30°C培养2-3天;在平板 上挑选较大的菌落接种到装有LB培养基的茄子瓶中，在培养箱中30°C培养2-3天;等菌种成 熟后，将无菌生理盐水将其洗脱，即可作为巨大芽孢杆菌液体菌种接种至1000L发酵培养 基，接种量为5%，开搅拌120r/min，培养前12小时，每分钟通气量为液/气1:0.6，培养温度为 29-31°C; 12小时后，每分钟通气量为液/气1:0.9，培养温度为30-33°C;培养24-36小时，待 芽孢含量不低于60亿CFU/ mL，即可结束发酵，板框过滤除水，剩下菌体加硅藻土，调节菌浓 度为100亿CFU/ g，水份含量低于5%，粉碎过100目筛，即得到巨大芽孢杆菌菌粉;其中，所述 LB培养基:蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂20 g，水1000mL，pH7.2;其中所述发酵培养 基:豆饼粉2.3%玉米粉3.5%酵母膏0.08%磷酸氢二钾0.02%氯化钠0.1%硫 酸锰0.003%豆油0.014%;各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa，121°C灭菌30分钟； 參、混匀，包装 将硫酸粘杆菌素10-50份，纳他霉素1-10份，肌苷0.5-5份，赖氨酸5-50份，玉米粉50-200份，豆柏粉50-200份，磷酸氢二钠1-10份，氯化钾1-10份，红糖50-200份，放置密封搅拌 罐中搅拌20-30分钟，混合均匀，再将步骤(L:制备的巨大芽孢杆菌菌粉50-200份加入搅拌罐 中搅拌均匀后，分装，抽真空包装，即得到用于现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥。3. 根据权利要求1所述的一种应用于农场现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥，其特征在于， 所述的农场现场发酵的方法为： 先将巨大芽孢杆菌菌肥加入其3-5倍重量的水润湿调匀，30分钟后再补足水以达到巨 大芽孢杆菌菌肥与水的比例为1:10至1:30的比例，调PH至8-8.2后，开始培养，前12小时每 分钟通气量液气比为1:0.6，12小时后通气量为1:0.8，培养温度为20-35°C，培养16-24小 时后即为现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥的发酵液。4. 根据权利要求1所述的所述一种用于农场现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥，其特征在 于，制备巨大芽孢杆菌菌肥的原料按重量份为：巨大芽孢杆菌菌粉100份，硫酸粘杆菌素18 份，纳他霉素1份，肌苷1份，赖氨酸18份，玉米粉157份，豆柏粉120份，磷酸氢二钠3份，氯化 钾2份，红糖80份。5. 根据权利要求1所述的一种用于农场现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥，其特征在于，一 种用于农场现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥的应用是现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥的发酵 液在作物栽培中作为磷肥的应用。6. 根据权利要求5所述的现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥的发酵液在作物栽培中作为磷 肥的应用，其特征是，该发酵液作底肥、基肥和追肥以及穴施和拌种； 其中，所述作物为烤烟，水稻，棉花，番茄，辣椒，小麦，草莓，茄子，西瓜等。7.根据权利要求1所述的一种用于农场现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥，其特征在于，所 述的各组份原料的水份含量低于6%。
【专利摘要】本发明涉及一种应用于农场现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥及其制备方法与应用，制备该巨大芽孢杆菌菌肥的原料为：巨大芽孢杆菌菌粉，硫酸粘杆菌素，纳他霉素，肌苷，赖氨酸，玉米粉，豆粕粉，磷酸氢二钠，氯化钾，红糖。具体说是提供一种可应用于农场现场发酵扩繁的巨大芽孢杆菌菌肥，利用菌肥中的纳他霉素与硫酸粘杆菌素抑制发酵过程中的病原真菌，酵母菌等真菌与大肠杆菌，沙门氏菌等革兰氏阴性菌的生长，利用肌苷，赖氨酸等芽孢萌发剂快速促进巨大芽孢的萌发，提高芽孢萌发率；从而实现可以在简陋的农场现场进行发酵扩繁，设施简单，用菌量少，成本低，现场发酵的发酵液菌含量高，活性好，杂菌少，具有解磷，防病促生，增产提质的效果，效果稳定。
【IPC分类】C12N1/20, C12R1/11, C05F17/00, C05G3/00, A01C21/00
【公开号】CN105439726
【申请号】CN201510951105
【发明人】胡艳晖, 其他发明人请求不公开姓名
【申请人】佛山市艳晖生物科技有限公司
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2015年12月19日