专利名称：异硒唑酮类化合物和其配合物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及唑酮类化合物及其合成方法，尤其涉及双苯并异硒唑酮类化合物和其配合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用，以及制备该类化合物的方法。
背景技术：
近二十多年来，硒的生物学功能已广泛被人们所认识，随着对硒认识的不断深入，不同结构形式的硒化合物的药用吸收、分布以及药效和毒理表现特点已被揭示较为清楚。许多活性的硒化合物研究取得了一系列重要突破和进展，其中有机硒化合物在生命科学方面的特征及其广泛的药理作用日益受到重视。研究表明，有机硒化合物在抗炎、抗氧化、抗肿瘤和治疗心脑血管疾病方面有明显的作用，并能对免疫系统进行调节。代表性的药物有依布硒啉(Ebselen)，该药物作为治疗药物目前已进入临床研究阶段。
依布硒啉，即2-苯基-1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮(INNEbselen)，是国外开发中的抗炎新药，其特点是低毒并具有广泛的药理活性，为活性氧相关疾病的治疗提供了一个很有前途的手段，并为有机硒药物的发展展示了广阔的前景。随着针对Ebselen药物的深入研究，以苯并异硒唑酮为核心结构的多种化合物陆续被合成出来，且其药理活性也得到广泛研究。但迄今为止，有关苯并异硒唑酮用于制备抗肿瘤药物中的应用尚鲜有涉足。
发明内容
本发明目的一是提供一类具有抗肿瘤活性的双苯并异硒唑酮类化合物。所述的双苯并异硒唑酮类化合物具有下述通式(I)或通式(II)的结构 其中，M＝Se或Te，R＝H、Na或C1-6烷基。
其中Y＝Pt或Pd，X＝Se或Te。
本发明的另一目的在于提供制备上述通式(I)和通式(II)所示化合物的方法。
制备通式(I)所示化合物的方法，主要包括以下步骤1)邻氨基苯甲酸和盐酸在冰盐浴下搅拌混合后，向其中加入亚硝酸钠溶液，反应完成后将所得产物备用；2)硒粉和氢氧化钠溶于水后，向其加入连二亚硫酸钠，反应完成后将所得产物备用；3)将步骤1)所得的产物滴加到步骤2)所得的产物中，将混合物搅拌直至产生的氮气排完，再将反应混合物用盐酸酸化，过滤，并将过滤所得的沉淀水洗后置干燥器中干燥，所得的产物备用；4)将步骤3)所得的产物混悬于氯化亚砜、四氢呋喃或乙醇中，加入催化量的二甲基甲酰胺，搅拌回流，旋转蒸发除去多余的二氯亚砜，残渣用正己烷、石油醚或乙醚重结晶，所得的晶体备用；5) 将步骤4)所得的晶体溶于乙腈中，冰浴冷却至5℃以下，滴加25％氨水，调节pH值后升温至10-25℃，并继续反应，过滤，水洗沉淀，将不溶于水的部分置于烘箱中干燥后备用；6) 将步骤5)所得的产物与水按3g∶50ml的比例混合，搅拌下按1∶1的摩尔比滴加0.1mol/L NaOH溶液，将产品逐渐溶解后，把不溶的部分过滤掉后，在45℃下蒸干水，得到产物。
制备上述通式(I)化合物的另一种方法，主要包括以下步骤1)在氮气保护和冰浴条件下，将苯甲酰胺溶于无水四氢呋喃中后，滴入正丁基锂溶液；2)向步骤1)所得的反应液中加入碲粉，继续搅拌0.5-1小时，将反应液降温至0℃以下并加入CuBr2，在-40℃低温条件下搅拌一段时间后在室温下继续搅拌，最后将反应液倒入醋酸溶液中，过滤，所得滤饼保存备用；3)将步骤2)所得的滤饼与水按3g∶50ml的比例混合，搅拌下按1∶1的摩尔比滴加0.1mol/L NaOH溶液，产品逐渐溶解，把不溶的部分过滤掉后，在45℃下蒸干水，得到产物。
制备上述通式(II)化合物的方法，主要包括以下步骤1)将1，2-苯并异硒唑酮钠或1，2-苯并异碲唑酮钠与(DACH)PtCl2或(DACH)PdCl2混悬于甲醇中，回流1-3小时；2)向步骤1)所述的反应液中加入水，待沉淀生成后，过滤，用水、乙醚各洗涤滤饼数次，干燥滤饼即得。
本发明的另一目的在于提供一种具有抗肿瘤活性的药物组合物。该药物组合物由通式(I)或通式(II)所示结构的化合物和药学上可接受的载体配合而成，即将药学上可接受用量的通式(I)和通式(II)所示结构的化合物与药学上可接受的载体配合后，按本领域常规的制剂方法将其制备成任意一种适宜的药物组合物。
通常该组合物适合于口服给药和注射给药，也适合其他的给药方法，例如经皮给药。
该组合物可以是片剂、胶囊、粉剂、颗粒、锭剂、栓剂，或口服液或无菌胃肠外悬液等液体制剂形式。
该组合物可以是大或小容量注射剂、冻干粉针、无菌粉分装等制剂形式。
为了达到给药的一致性，本发明组合物优选为单剂形式。
用于口服给药的单剂形式可以是片剂和胶囊，并可含有常规赋形剂诸如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂，例如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨醇或甘氨酸；压片润滑剂，例如硬脂酸镁；崩解剂，例如淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉乙醇酸钠或微晶纤维素；或药学上可接受的湿润剂，诸如十二烷基硫酸钠。
固体口服组合物可以用常规的混合、填充或压片法制备。重复混合操作可以用于将活性剂充分分布到使用大量填充剂量的组合物中。这样的操作当然是本领域中常规的。片剂可以按照常规制备方法制得包衣片或素片。
口服液体制剂可以是例如乳剂、糖浆或酏剂的形式，或者可以作为干燥产品存在，使用前再用水或其他合适的载体重新构成。这种液体制剂可以含有常规添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂；乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇-油酸酯或阿拉伯胶；无水载体(可包括食用油)，例如杏仁油、馏化椰子油或油性酯，所述的油性酯包括甘油酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸；如果需要，还可加入常规调味剂或着色剂。
对于胃肠外给药，特别是注射剂，可利用两种活性组分分别与无菌载体制备单位液体剂型，并且根据所用的浓度将其悬浮于载体中。可以将辅助剂诸如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂溶解于该载体中。为了增强稳定性，可以将该组合物冷冻后再填充到小瓶中，并在真空下除去水分。胃肠外悬液是用实质上相同的方式制备而得，活性组分可以通过与环氧乙烷接触后，再悬浮于无菌载体中而进行灭菌。有利的是，在该组合物中包含表面活性剂或湿润剂以促进该化合物均匀分布。
另外，还可按照常规方法将药物组合物制成缓控释制剂，如缓释微丸或控释微丸。
根据不同的给药方法，组合物可以含有0.1％-99％重量，优选10-60％重量的活性物质。
本发明制备所得的系列化合物经药理学试验证明具有显著的抗肿瘤功效，预示此类化合物在制备预防、治疗各类肿瘤的药物方面有着广泛的应用前景。
具体实施例方式
以下将结合实施例具体说明本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明的实质。1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮(以下简称Eb-N)的制备1、氯化2-苯甲酸重氮盐的制备精密称取14.0g邻氨基苯甲酸，将其与40ml浓度为1∶1盐酸在冰浴条件下搅拌混合，然后，在其中慢慢滴入9.0g亚硝酸钠溶于20ml水的溶液，滴完后继续反应2小时，得到氯化2-苯甲酸重氮盐备用。
2、二硒化钠的制备在60ml的去离子水中加入8.8g硒粉和4.4g氢氧化钠，在搅拌条件下慢慢加入8.8g连二亚硫酸钠，继续反应2-4小时，得到二硒化钠溶液备用。
3、2，2’-二硒化双苯甲酸的制备在搅拌条件下，将步骤1所得的氯化2-苯甲酸重氮盐溶液滴加到步骤2所得的二硒化钠溶液中，继续搅拌反应2小时，直到产生的氮气排完，并经石蕊试纸证明溶液呈碱性。再将所得的反应混合物用盐酸酸化，过滤，将所得的沉淀水洗后置干燥器中干燥即得。其产率为90％。所得产物的重结晶体的熔点(m.p.)为294℃。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.33-8.04(m，4H，ph-H)13.6(br，COOH)IR(KBr)cm-1M(O-H)3005，M(CO2)1672，M(C-N)1264，MC＝C(苯环)1560，1460，1417；MS-FAB(m/z)201[1/2M+](Se-Se键断裂)。
4、2-硒氯苯甲酰氯的制备将40.0g的2，2’-二硒化双苯甲酸与200ml氯化亚砜、0.15ml浓度为1.8mmol的DMF混合后，搅拌回流3小时，旋转蒸发除去多余的二氯亚砜，残渣用正己烷重结晶，即得2-硒氯苯甲酰氯纯品。其产率为90％。熔点(m.p.)为66℃。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.33-8.16(m，4H，ph-H)IR(KBr)cm-1M(COCl)1641，MC＝C(苯环)1581，1545，1432MS-FAB(m/z)253。
5、1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮的制备将0.84g的2-硒氯苯甲酰氯溶于20ml乙腈中，在冰浴条件下进行反应，并在搅拌条件下滴加25％的氨水，可见大量沉淀生成，直至反应溶液的pH值为8左右。将反应溶液升至室温，继续反应2小时，过滤，水洗沉淀后将其干燥，即得产物。其产率为44％，m.p.200-201℃。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.32-8.09(m，Ph-H)，3.99(s，2H，CH2)；IR(KBr)cm-1M(N-H)3054，MC＝C(苯环)1595，1558，1441；元素分析C7H5NOSe计算值(％)C42.44，H2.54 N7.07，实测值(％)C42.57 H2.74 N7.20；MS-FAB(m/z)200[M+1]。
1，2-苯并异硒唑酮钠的制备将实施例1制备所得的1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮重结晶，再在所得的重结晶物中加入50ml水，并在搅拌条件下滴加0.1mol/L的NaOH溶液，使产品逐渐溶解，过滤除去不溶部分，所得滤液在45℃下蒸干水分即得。
1，2-苯并异硒唑酮铂配合物的制备将(DACH)PtCl2和过量的1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮混悬于甲醇中，回流1-3小时后，向其中加入水，待有白色沉淀生成后，过滤，用水、乙醚各洗涤滤饼数次，干燥后即得。
1，2-苯并异硒唑酮钯配合物的制备将(DACH)PdCl2和过量的1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮混悬于甲醇中，回流1-3小时后，再向其中加入水，等有白色沉淀生成后，过滤，用水、乙醚各洗涤滤饼数次，干燥后即得。
1，2-苯并异碲唑酮(以下简称ET-N)的制备 在氮气保护和冰浴条件下，苯甲酰胺溶于无水四氢呋喃中，并在搅拌条件下，向混合溶液中滴入正丁基锂溶液，继续反应0.5小时后，再加入碲粉，溶液呈棕黑色，继续搅拌0.5-1小时，降温至-40℃左右，加入CuBr2，在此温度下搅拌0.5小时后再在室温下继续搅拌2小时。将反应液倒入2％的醋酸溶液中，过滤取沉淀，干燥后得产品。
1，2-苯并异碲唑酮钠的制备将实施例5制备1，2-苯并异碲唑酮重结晶，再在所得的重结晶物中加入50ml水，并在搅拌条件下滴加0.1mol/L NaOH溶液，使产品逐渐溶解，过滤除去不溶部分，将所得滤液在45℃下蒸干水分即得所需的化合物。
1，2-苯并异碲唑酮铂配合物的制备将(DACH)PtCl2和过量1，2-苯并异碲唑酮的混悬于甲醇中，回流1小时，再在其中加入水，等有白色沉淀生成后，过滤，用水，乙醚各洗涤滤饼数次，干燥即得。
1，2-苯并异碲唑酮钯配合物的制备(DACH)PdCl2和过量1，2-苯并异碲唑酮的混悬于甲醇中，回流1小时，再在其中加入水，等有白色沉淀生成后，过滤，用水，乙醚各洗涤滤饼数次，干燥即得。
体外研究本发明化合物的抗肿瘤活性一、试验材料1、供试药物因实施例1、5制备所得的Eb-N和ET-N为淡黄色粉末，难溶于水，用含15％小牛血清的RPMI-1640培养液将起始浓度为100μmol/L的待测药物(Eb-N或ET-N)，然后再将上述浓度的待测药液稀释到所需浓度，即得到终浓度分别为50、20、10、5、1μmol/L的待测药液。
2、阳性对照药顺铂(DDP)，从普通药店购买得到。用生理盐水溶解，并用生理盐水将其稀释为浓度分别为5、2.5、1.25和0.625μg/ml的对照药液。
3、体外实验瘤株Bel-7742由北京大学医学部国家重点实验室提供，用含10％小牛血清的RPMI-1640培养液培养。
二、试验方法肿瘤株Bel-7742用含10％小牛血清的RPMI-1640培养液培养24h贴壁后，然后在各细胞孔中加入待测药液或对照药液，每种浓度的药物加药6孔，另设空白对照孔6孔。
细胞加药后分别培养24、48和72小时，在各个孔中加入噻唑蓝(MTT)液，1小时后，加二甲基亚砜(DMSO)显色，在BIO-RED 550型酶标仪上测其OD490值，计算各浓度药物的杀伤率，并用Bliss法求其IC50值。
三、实验结果，参见表1和表2。
表1 Eb-N对肝癌细胞(Bel-7742)的生长抑制作用 表2 ET-N对肝癌细胞(Bel-7742)细胞的生长抑制作用 结论体外试验结果表明，Eb-N和ET-N能显著抑制肿瘤细胞Bel-7742的生长，且其生长抑制作用存在明显的量效和时效关系，表明本发明化合物具有显著的抗肿瘤活性。
体内研究本发明化合物的抗肿瘤活性一、试验材料1、供试药物因实施例1、5制备所得的Eb-N和ET-N用1％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液悬浮配制成所需浓度的待测溶液，然后置于4℃冰箱保存备用。
2、阳性对照药环磷酰胺(CTX)粉针剂，上海华联制药有限公司生产，临用前制成生理盐水溶液。
3、实验动物ICR种小鼠、C57BL/6小鼠(SPF级，)，体重18-22g，雌、雄兼有，均购自北京维通利华实验动物有限公司，动物生产许可证编号SCXK(京)2002-0003。饲养于北京大学人民医院SPF级动物实验室内，许可证号SYXK11-00-0001。小鼠10只/笼，自由进食饮水。
4、瘤株小鼠肝癌(H22)为本实验室在昆明种小鼠传代保种的腹水型瘤株，实验时抽取第7天的癌性腹水，经生理盐水按1∶3稀释成瘤细胞悬液，供接种小鼠使用。
二、实验方法实验选取ICR小鼠50只，雌雄各半，体重为18-22g。于右腋部皮下接种H22瘤细胞悬液0.2ml/只。接种后将小鼠随机分为5组，每组10只。次日，根据预试验结果给药，设定供试药物Eb-N、ET-N的中剂量组为120mg/kg体重，每日灌胃给药1次，连续7天，每次给药容量为0.2ml/10g体重。阴性对照组给予等容量生理盐水。阳性对照组1次皮下注射给予环磷酰胺60mg/kg体重。于末次给药后次日，断颈处死动物，称体重，剖出实体瘤，称瘤重，按下述公式求抑瘤率。
以上实验均重复三次，各组实验结果进行统计学处理(t检验)。
三、试验结果，参见表3。
表3 Eb-N和ET-N在小鼠体内对H22肿瘤的生长抑制作用
结论体内试验结果表明，Eb-N和ET-N对小鼠体内H22肿瘤的生长具有显著抑制作用，表明本发明化合物具有显著的体内抗肿瘤活性。
权利要求
1.一种具有抗肿瘤活性的化合物，具有下述通式(I)的结构 其中M＝Se或Te，R＝H、Na或C1-6烷基。
2.一种制备通式(I)化合物的方法，主要包括以下步骤1)邻氨基苯甲酸和盐酸在冰盐浴下搅拌混合后，向其中加入亚硝酸钠溶液，反应完成后将所得产物备用；2)硒粉和氢氧化钠溶于水后，向其中加入连二亚硫酸钠，反应完成后将所得产物备用；3)将步骤1)所得的产物滴加到步骤2)所得的产物中，将混合物搅拌直至产生的氮气排完，再将反应混合物用盐酸酸化，过滤，并将过滤所得的沉淀水洗后置干燥器中干燥，所得的产物备用；4)将步骤3)所得的产物混悬于氯化亚砜、四氢呋喃或乙醇中，加入催化量的二甲基甲酰胺，搅拌回流，旋转蒸发除去多余的二氯亚砜，残渣用正己烷、石油醚或乙醚重结晶，所得的晶体备用；5)将步骤4)所得的晶体溶于乙腈中，冰浴冷却后，滴加25％氨水，调节pH值后升温至10-25℃，并继续反应，过滤，水洗沉淀，将不溶于水的部分置于烘箱中干燥后备用；6)将步骤5)所得的产物与水按3g∶50ml的比例混合，搅拌下按1∶1的摩尔比滴加0.1mol/L NaOH溶液，将产品逐渐溶解后，把不溶的部分过滤掉后，在45℃下蒸干水，得到产物。
3.一种制备通式(I)化合物的方法，主要包括以下步骤1)在氮气保护和冰浴条件下，将苯甲酰胺溶于无水四氢呋喃中后，滴入正丁基锂溶液；2)向步骤1)所得的反应液中加入碲粉，继续搅拌0.5-1小时，将反应液降温至0℃以下并加入CuBr2，在-40℃的低温条件下搅拌一段时间后在室温下继续搅拌，最后将反应液倒入醋酸溶液中，过滤，所得滤饼保存备用；3)将步骤2)所得的滤饼重结晶，然后将结晶物加入水中，随后滴加的NaOH溶液使结晶物逐渐溶解，把不溶的部分过滤除去，将滤液蒸干水分，即得。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于将步骤2)中的反应液温度降至-50℃～-30℃时再加入CuBr2。
5.一种具有抗肿瘤活性的化合物，具有下述通式(II)的结构 其中Y＝Pt或Pd，X＝Se或Te。
6.一种制备通式(II)化合物的方法，主要包括以下步骤1)将1，2-苯并异硒唑酮钠或1，2-苯并异碲唑酮钠与(DACH)PtCl2或(DACH)PdCl2混悬于醇试剂中，回流1-3小时；2)向步骤1)所述的反应液中加入水，待沉淀生成后，过滤，用水、乙醚各洗涤滤饼数次，干燥滤饼即得。
7.一种具有抗肿瘤活性的药物组合物，由权利要求1或6所述结构的通式(I)或通式(II)化合物和药学上可接受的载体配合而成。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其制剂形式为片剂、胶囊、粉剂、颗粒、锭剂、栓剂、口服液、无菌胃肠外悬液液体制剂、大或小容量注射剂、冻干粉针或无菌粉分装剂。
9.通式(I)或(II)化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，所述的肿瘤为实体瘤。
全文摘要
本发明公开了以苯并异硒唑酮为核心结构的一类新化合物和其配合物衍生物及其在抗肿瘤药物中的应用，以及合成该类化合物的方法。本发明的系列化合物经动物体内外试验证明具有抗肿瘤的药理作用，预示该类化合物具有用于制备抗肿瘤药物的应用。
文档编号C07D293/10GK1704408SQ200410042618
公开日2005年12月7日 申请日期2004年5月27日 优先权日2004年5月27日
发明者曾慧慧 申请人:武汉科艾硒医药科技发展有限公司