抗菌活性物质dm0507及其应用的制作方法

专利名称：抗菌活性物质dm0507及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新型的抗菌活性物质，更具体地是涉及抗菌活性物质DM0507及其应用，其中抗菌活性物质DM0507对很多菌种具有抗菌活性。
背景技术：
众所周知，微生物产生具有抗细菌、抗真菌和抗病毒等作用的抗菌活性物质。至今为止，青霉属细菌产生的青霉素、头孢霉属产生的头孢菌素、链霉菌属产生的链霉素、四环素及红霉素等作为抗菌活性物质已经得到了广泛的利用。
此外，已知这些抗菌活性物质经长年使用，其结果产生了对这些抗菌活性物质有耐受性的菌(抗性菌)，因而人类要寻求更加强有力的新型抗菌活性物质。

发明内容
所要解决的课题因此，本发明的目的在于提供一种新型的更加强有力的抗菌活性物质，该抗菌活性物质来源于天然物质，是一种广谱抗菌物质。
解决方案本发明人为了解决上述课题，经过坚持不懈的研究，结果发现从特殊的枯草芽孢杆菌培养液中能够得到对很多菌种具有抗菌活性的物质，从而完成了本发明。同时，本发明人还发现所述具有抗菌活性的物质即使添加在各种现有的产品中，其也能发挥抗菌活性的效果，从而完成了本发明。
即，本发明提供一种抗菌活性物质DM0507，其特征在于，通过包含以下步骤(a)～(d)的制造方法获得(a)培养枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)；(b)从所得的培养物回收上清；
(c)把上清的pH调整到3或3以下，回收所产生的沉淀物；(d)用乙醇从沉淀物中进行提取的步骤。
同时，本发明提供一种抗菌剂，该抗菌剂以上述抗菌活性物质DM0507作为有效成分。
并且，本发明提供一种饮料食品，该饮料食品含有上述抗菌活性物质DM0507。
此外，本发明提供一种抗菌活性物质DM0507的制造方法，其特征是包括下述步骤(a)～(d)(a)培养枯草芽孢杆菌；(b)从所得的培养物回收上清；(c)把上清的pH调整到3或3以下，回收所产生的沉淀物；(d)用乙醇从沉淀物中进行提取的步骤。
发明效果本发明的抗菌活性物质DM0507是一种对很多菌种具有抗菌活性的抗菌活性物质。
因此，使用本发明的抗菌活性物质DM0507，可得到各种具有优异的抗菌活性的抗菌剂和饮料食品等。
最佳实施形式本发明抗菌活性物质DM0507(以下简称“DM0507”)，可以通过包含以下所述步骤的制造方法得到。
(a)培养枯草芽孢杆菌；(b)对所得培养物进行离心后回收上清；(c)把上清的pH调整到3或3以下，回收所产生的沉淀物；(d)用乙醇从沉淀物中进行提取的步骤。
在上述制造方法的步骤(a)中，作为培养中所使用的枯草芽孢杆菌，只要是生产DM0507的枯草芽孢杆菌，并没有特别的限制。作为优选的枯草芽孢杆菌，例如可以列举枯草芽孢杆菌DB9011菌株(FERMBP-3418)和枯草芽孢杆菌MBI600菌株(beckerunderwood Inc.SUBTILEX(商品名))等，其中特别优选枯草芽孢杆菌DB9011菌株。
因为上述枯草芽孢杆菌的培养能根据常规的方法进行，所以培养条件并没有特别的限定。例如可以采用以下条件进行培养，即可以采用水解酪蛋白胨肉汤(DIFCO制造)，在30℃～40℃的温度优选35℃下振动培养24～48小时，优选振荡培养36小时。
下一步，从在上述步骤(a)中得到的培养物中回收上清(步骤(b))。在该步骤(b)中，可以采用离心分离的方法回收上清。具体的离心分离条件并无特别限定。例如可以采用10,000rpm～40,000rpm，优选20,000rpm的转速进行20分钟～1小时，优选1小时的离心分离。
将在上述步骤(b)中回收的上清，将其pH调整到3或3以下，优选调整到3.0，并回收产生的沉淀物(步骤(c))。在这个步骤(c)中，pH的调整可用硫酸和盐酸等的酸进行。此外，在调整pH之后，理想的是在4～10℃，优选4～5℃下放置8～24小时，优选放置12～18小时。并且，通过调整pH而产生的沉淀物的回收，可通过离心分离、超滤、冻结干燥、透析等方法回收，优选进行离心分离。具体的离心分离的条件没有特别限定，例如可以采用10,000rpm～40,000rpm，优选20,000rpm的转速进行20分钟～1小时，优选1小时的离心分离。
最后，使用乙醇对在上述步骤(c)中回收的沉淀物进行提取(步骤(d))。通过这个步骤(d)能够得到本发明的DM0507。由沉淀物提取DM0507的方法有多种，例如可以列举在沉淀物中添加乙醇，在使沉淀物处于悬浮的状态下静置15分钟～1小时左右，以将DM0507提取到乙醇中等方法。
如此得到的本发明的DM0507，是一种广谱抗菌活性物质，对如下(A)～(D)组微生物具有抗菌活性。
(A)组(需氧性和兼性厌氧微生物)猪链球菌(Streptococcus suis)肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ATCC6633蜡状芽孢杆菌状变种(Bacillus cereus var.mycoides)ATCC11778化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes)杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmoaicida)嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)
伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)JCM2434胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)2型副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)多杀性巴斯德菌(Pasteurella multocida)D型溶血巴斯德菌(Pasteurella haemolytica)鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium)猪霍乱沙门氏菌(Salmonella Choleraesuis)肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)ATCC10031琼氏不动杆菌(Acinetobacterjunii)不动杆菌属某种(Acinetobacter sp.)嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)血清型1的嗜肺军团菌(Legionella pneumophila serotype 1)鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum)鸡滑膜支原体(Mycoplasma synoviae)(B)组(微需氧性微生物)空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)大肠弯曲杆菌(Campylobacter coli)幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)ATCC43526(C)组(专性厌氧微生物)产气荚膜梭菌(Clostridium perfringenes)艰难梭菌(Clostridium difficile)疮疱丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)JCM6425脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)JCM8525牙龈炎病原菌(Tannerella forsythensis)JCM10827嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)JCM1132双岐杆菌(Bifidobacterium bifidum)JCM1255普氏厌氧球菌(Anaerococcus prevotii)JCM6508具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum)(D)组(真菌)尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)。
在这些微生物中，本发明的DM0507尤其对血清型1的嗜肺军团菌、牙龈卟啉单胞菌(プロフィロモナス·ジンジバ一リスPorphyromonas gingivalis)、疮疱丙酸杆菌具有很高的抗菌活性；其次对艰难梭菌、空肠弯曲杆菌、大肠弯曲杆菌、嗜麦芽寡养单胞菌具有很高的抗菌活性；再其次对杀鲑气单胞菌、鸡毒支原体、鸡滑膜支原体具有很高的抗菌活性。
本发明的DM0507，对如上所述的很多种微生物具有抗菌活性，所以可用于以其作为有效成分的抗菌剂和含有本发明的DM0507的抗菌用品、饮料和食品等。
为了制造以本发明的DM0507作为有效成分的抗菌剂，可以通过常规的制造方法将DM0507与已知的医药学上容许的适当医药载体组合形成制剂。关于在这种抗菌剂中的DM0507的含量，只要能让抗菌活性有效发挥，其含量并没有特殊的限制，例如可以测试DM0507相对于琼氏不动杆菌(Acinetobacter junii)的MIC(最小抑菌浓度)，并使DM0507在制品中的含量达到或超过MIC值，优选使DM0507在制品中的含量为MIC值的2～10倍。以下表示采用微量液体稀释法测试相对于琼氏不动杆菌的MIC的测试法。
<采用微量液体稀释法测试相对于琼氏不动杆菌的MIC的测试法>
对每一个试样进行2个系列的测试，DM0507浓度梯度是从10倍稀释开始，之后按2倍稀释的方式一直稀释到10240倍。首先，分别把2价离子调整水解酪蛋白胨肉汤(以下简称“CAMHB”)注入96孔的平底微型板，每孔注入100μl。在最初加入DM0507的孔中注入180μl的CAMHB。下一步，在最初的孔中加入20μl的DM0507，以进行稀释10倍，之后每次取100μl以稀释2倍的方式一直稀释到10240倍。琼氏不动杆菌在前一天分离培养，预先进行18～24小时的MHA培养。用生理盐水把琼脂培养基的新鲜培养菌调整为0.5麦氏(McFarland)浓度之后，稀释10倍，调为107cfu/ml.将调整过的菌液分别接种到各孔中，每孔5μl。最终的接种浓度为5×105cfu/ml(5×104cfu/100μl)。作为对照，制成只有CAMHB和菌液的孔以及只有CAMHB的孔。在35℃下将微型板培养18小时，之后将用肉眼确认生长被完全抑制的最少稀释倍数作为MIC值。
另外，使本发明的DM0507可以直接或者以采用上述方法制成的抗菌剂的形式包含于或浸渍于如下所示的现有产品中，形成如下所述的抗菌制品。
<非医药品、试剂、漱口剂等>
外用药、牙膏(牙膏、牙膏粉、牙膏水)、齿间牙刷、漱口剂、口腔炎等的消毒药、假牙用品(清洗、粘附、灭菌、消毒、消臭)、沐浴用剂、药用肥皂、口唇保护剂、指甲保护剂、皮肤消毒剂、鸡眼和老茧用剂、伤口消毒剂、糜烂和痱子防止剂、龟裂冻疮用剂、皮肤粗糙及皲裂用剂、头皮·头皮用剂、头皮屑和搔痒防止剂、腋用剂。
<日用品、盥洗室用品、纤维及皮革商品等>
浸渍在尿布、厨房用品、盥洗室用品、肥皂、碳素纤维、布、皮等中而制成的制品<清洁剂等>
卫生棉类(包括纸制品)、洗发香波、护发素、生理卫生用品、隐形眼镜清洁剂<化妆品等>
化妆水、乳液、洗面奶、护肤剂、面膜、雪花膏、护手霜、化妆油、剃须剂、防晒剂<消毒剂、灭菌剂等>
循环式大众浴池·温泉灭菌剂、游泳池灭菌剂、冷却(冷却水)剂、空调等的过滤器用剂。
<建材、涂料等>
木材、纸张、油性漆、水性漆、布、粘合剂、草席、涂装保护剂<食品添加剂等>
保鲜剂(含饮料)用于这些抗菌产品时，优选用于化妆水和牙膏。在生产这类抗菌用品时，除了将本发明的DM0507以有效量添加到产品原材料中以外，其他按照通常的生产方法进行生产即可。
而且，本发明的DM0507还可以添加到口香糖、糖果、小甜饼、零食等点心、辅助食品、清凉饮料等饮料和食品中。对于这些饮食品来说，优选用于口香糖和糖果。使通常的这类饮料和食品含有本发明的DM0507，能够生产保健食品，并且通过人们日常的摄取就可以起到清除牙周病菌和幽门螺旋杆菌等病菌的作用，或起到防止这些菌长期存在的预防作用。关于这类饮料和食品的生产方法，除了将本发明的DM0507以有效量添加到饮料和食品的原材料等中以外，其他按照通常的生产方法进行生产即可。
实施例下面根据实施例对本发明进行说明。但本发明并不受这些实施例的任何限制。
参考例1抗菌活性物质产生菌的筛选以抑制牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)JCM8525的繁殖的活性作为指标，对下述的枯草芽孢杆菌培养上清的抗菌活性进行了检测。
<被测试菌株>
·DB9011菌株(于1991年5月21日寄存在独立行政法人产业技术综合研究所专利生物寄存中心(邮政编码305-8566日本国茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6)，保藏号为FERM BP-3418。)·ATCC6633菌株·BN1001菌株(明治制果株式会社制B-NClean(商品名))·Kubota株(株式会社Asahi biotech公司产品BSK菌)·OUV23481菌株(Mizkan株式会社制金のっぶほね元気(商品名))·MBI600菌株(beckerunderwood Inc.制SUBTILEX(商品名))首先在水解酪蛋白胨S琼脂培养基(荣研化学株式会社制)中培养各种枯草芽孢杆菌，连续培养三代。下一步，在10ml灭菌过的水解酪蛋白胨肉汤(DIFCO制)中分别接种各1个白金环的菌株，在35℃下振荡培养24小时。
把振荡培养后的各培养液分别注入1.5ml的微管中，以15,000rpm的转速离心分离10分钟。下一步，回收离心过的上清，用0.45μm的过滤器过滤。将这种过滤后的培养上清渗入直径6.5mm的纸盘(DIFCO公司制)。另一方面，将作为抗菌活性指标使用的牙龈卟啉单胞菌预先用GAM肉汤培养基(日水制药株式会社制)进行厌气培养。之后，在高压蒸气灭菌后将GAM琼脂培养基(日水制药株式会社制)在50℃保温，将预先厌气培养好的牙龈卟啉单胞菌培养液与其混合后，注入培养皿以固化。把渗入了各种枯草芽孢杆菌培养滤液的纸盘置于该培养皿的中央，在35℃的温度下进行48小时的厌气培养。培养48小时后，测试各种枯草芽孢杆菌的对牙龈卟啉单胞菌产生的抑菌圈直径。其结果如表1所示。


从表1可知，DB9011菌株和MBI600菌株的培养上清相对于牙龈卟啉单胞菌具有很高的抗菌活性。
实施例1抗菌活性物质DM0507的生产(1)DB9011菌株的培养将在斜面培养基中生长，并在冰箱中保存着的DB9011菌株在水解酪蛋白胨S琼脂培养基(荣研化学株式会社制)中传代繁殖，并在35℃下培养24小时后形成菌落。下一步，将1个上述菌落接种在10ml水解酪蛋白胨肉汤(DIFCO制)中，在35℃的温度下振荡培养24小时。最后，将上述培养液1ml接种到预先高压蒸气灭菌过的3L的水解酪蛋白胨肉汤中，在温度35℃、时间30小时和转速200rpm的条件下进行振荡培养得到培养液。
(2)抗菌活性物质DM0507的提取将3L在上述(1)中调制所得的培养液维持在4℃，并在这一状态下以20,000rpm的转速离心分离30分钟，并回收离心分离后的上清。下一步，在离心分离后的上清中添加10N的盐酸将pH调节至3后，在冰箱里静置了一夜。将静置后的上清维持在4℃，并在这一状态下以20,000rpm的转速进行30分钟的离心分离，抛弃上清，回收沉淀物。在该沉淀物中施加99.5质量％的乙醇10ml使之悬浮，静置15分钟左右后提取抗菌活性物质DM0507。将该抗菌活性物质DM0507维持在4℃，并在这一状态下进一步以20,000rpm的转速进行30分钟的离心分离，之后在上清中添加1N的氢氧化钠，将pH调节至7.0后，用0.45μm的过滤器过滤，然后在-80℃的温度下冷冻保存。
(3)抗菌活性物质DM0507的物性测试<IR测试>
用以下的条件对DM0507实施IR测试，结果发现在3060.48、2958.27、2927.41、2871.49、2856.06、1737.55、1650.77、1573.63、1558.20、1469.49、1403.92、1274.72(单位均为cm-1)等中出现峰值(图1)。
(测试条件)测试装置HORIBA FT-710(堀場製作所製)测试方法KBr法测试温度室温<NMR测试>
用以下条件对DM0507实施了NMR测试。其测试结果如图2所示。
(测试条件)测试装置Unity INOVA600(Varian制)测试频率599.898MHz测试溶剂重DMSO测试温度30℃实施例2抗菌活性的测试使用在实施例1中得到的抗菌活性物质DM0507，测试其针对以下被测试菌株的抗菌活性。
<被测试菌株>
·金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)MSSA·金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)MRSA·猪葡萄球菌(Staphylococcus hyicus)·黄色微球菌(Micrococcus luteus)ATCC9341·变异链球菌(Streptococcus mutans)JCM5705·猪链球菌(Streptococcus suis)·肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)·化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)·鹑鸡肠球菌(Enterococcus gallinarum)
·枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)DB9011·枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ATCC6633·蜡状芽孢杆菌蕈状变种(Bacillus cereus var.mycoides)ATCC11778·化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes)·副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)ATCC17802·杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)·嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)·伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)JCM2434·胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)2型·副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)·多杀性巴斯德菌(Pasteurella multocida)D型·溶血巴斯德菌(Pasteurella haemolytica)·巴斯德菌属家禽病原菌(Pasteurella trehalosi)·埃希氏大肠菌(Escherichia coli)·鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium)·猪霍乱沙门氏菌(Salmonella Choleraesuis)·肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)ATCC10031·绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)·绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)质子泵高表达菌株·绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)质子泵缺失菌株·琼氏不动杆菌(Acinetobacter junii)·不动杆菌属某种(Acinetobacter sp.)·嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)·血清型1的嗜肺军团菌(Legionella pneumophilaserotype 1)·鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum)·鸡滑膜支原体(Mycoplasma synoviae)·空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)·大肠弯曲杆菌(Campylobacter coli)·幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)ATCC43526·产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)
·艰难梭菌(Clostridium difficile)·疮疱丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)JCM6425·脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)·牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingvalis)JCM8525·牙龈炎病原菌(Tannerella forsythensis)JCM10827·嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)JCM1132·双岐杆菌(Bifidobacterium bifidum)JCM1255·白假丝酵母菌(Candida albicans)·隐球菌属某种(Cryptococcus sp.)·黑曲霉(Aspergillus niger)·尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)(1)检验被测试菌株以适合的培养基及培养条件(表2)进行三代传代培养，并以下述(2)混合稀释或(3)划线涂抹中的任意一种方法接种到培养基中。下一步，将实施例1中制备的抗菌活性物质0507渗入到直径8mm的薄纸盘(Advantech公司制)中，每个渗入20μl，在错开培养皿盖的状态下在冰箱内静置30分钟，使乙醇挥发。作为对照，对只有乙醇的纸盘也进行了同样的操作。把DM0507的纸盘及作为对照用的纸盘各1个放在接种了被测试菌株的培养基中培养后，测试纸盘周围的抑菌圈大小。
(2)混合稀释用1ml的灭菌生理盐水把传代繁殖三代培养后的菌株调整为2麦氏浓度(6.0×108/ml)之后，再稀释10倍。然后，将该菌液以0.1质量％的比例添加到预先高压蒸气灭菌后保持在50℃的琼脂培养基中混合。并且，在预先注入了10ml琼脂培养基的培养皿中再覆上10ml加有菌液的培养基。此时的菌数是1.0×104/cm2。
(3)划线涂抹用1ml灭菌生理盐水把传代繁殖三代培养后的菌株调整为0.5麦氏浓度(1.5×108/ml)之后，在其中浸渍灭菌木杆棉棒(荣研器材株式会社产品)后，从3个方向对各个培养基划线。




※1琼脂培养基MHA水解酪蛋白胨S琼脂培养基(荣研化学株式会社制)GAMGAM琼脂培养基(日水制药株式会社制)
泽田泽田培养基(自己调制)B-CYEαB-CYE α琼脂培养基(荣研化学株式会社制)FrayFray琼脂培养基(自己调制)PDA马铃薯葡萄糖琼脂培养基(荣研化学株式会社制)※2鸡毒支原体(M.gallisepticum)、鸡滑膜支原体(M.synoviae)的划线涂抹鸡毒支原体以及鸡滑膜支原体使用Fray肉汁(自己调制)、根据其变黄来确认繁殖，并在35℃的温度下传代繁殖三代。在变黄的第三代肉汁中浸渍灭菌木轴棉棒，从三个方向在Fray琼脂培养基上划线。
※3牙龈炎病原菌(T.Forsythensis)JCM 10827的划线涂抹由于牙龈炎病原菌发育需要N-乙酰胞壁酸，所以将1.5％N-乙酰胞壁酸盘放置在培养基的中央进行培养.将15mg的N-乙酰胞壁酸溶解在1ml的纯化水中，用0.45μm的过滤器进行过滤，然后渗入到直径8mm的纸盘中，每个渗入20μl，并在室温下进行干燥。把所得物作为1.5％N-乙酰胞壁酸盘使用。
※4黑曲霉、尖孢镰刀菌(F.Oxysporum)的划线涂抹A.niger以及尖孢镰刀菌使用PDA的斜面培养基，在25℃下培养7天。在真菌已在其上发育的斜面培养基中添加2ml加入了0.1％Tween80的生理盐水，轻轻混合制成孢子液。将孢子液放入血球计算盘中测试孢子数，然后用加入了0.1％Tween80的生理盐水调节到1×106/ml。在孢子液中浸渍经过灭菌的木杆棉棒从三个方向在PDA平板培养基上划线。
从上述结果可知，本发明的DM0507具有非常宽的抗菌谱，并且针对不同的菌种其抗菌活性的强度也有所不同。
实施例3制造收敛性化妆水按照以下的配方，采用常规的制造方法混合各种成分，以制造收敛性化妆水。
(配方) (配合量质量％)甘油3.0山梨糖醇2.0
亲水性表面活性剂1.0乙醇14.0柠檬酸和磷酸盐缓冲剂0.1对酚磺酸锌 0.2DM0507*1.0香料适量防腐剂 适量纯化水 78.7*表示实施例1的产物实施例4制造乳液按照以下的配方，采用常规的制造方法混合各种成分，以制造乳液。
(配方) (配合量质量％)蜜蜡 0.5凡士林2.0三十碳烷 5.0亲油性乳化剂 0.8亲水性乳化剂 1.2香料 0.5防腐剂适量防氧化剂 适量丙二醇5.0乙醇 4.01％增粘剂水溶液 20.0氢氧化钾 0.1DM0507*1.0纯化水59.9*表示实施例1的产物实施例5制造药用牙膏按照以下的配方，采用常规的制造方法混合各种成分，以制造药用牙膏。
(配方) (配合量质量％)氯化十六烷基吡啶 0.01氯化钠 10.0磷酸氢钙 20.0黄蓍 2.0柠檬酸钠 适量柠檬酸 适量对羟基苯甲酸酯 0.5纯化水 其余部分香料 微量法定色素 微量DM0507*1.0*表示实施例1的产物实施例6制造药用肥皂按照以下的配方，采用常规的制造方法混合各种成分，以制造药用肥皂。
(配方) (配合量质量％)2，4，4’-三氯-2’-羟基二苯醚 0.3聚氧乙烯 适量月桂基醚磷酸酯 2.0混合植物提取液 2.0肥皂用原料 35.0柠檬酸 适量对羟基苯甲酸酯 0.5
纯化水 其余部分香料微量法定色素微量DM0507*1.0*表示实施例1的产物实施例7制造美容液按照以下的配方，采用常规的制造方法混合各种成分，以制造美容液。
(配方)(配合量质量％)甘油 5.0BG10.0透明质酸 0.01胶原蛋白 0.8氨基酸0.5植物提取液0.5卡波姆0.2对羟基苯甲酸酯0.2纯化水其余部分DM0507*1.0*表示实施例1的产物实施例8制造雪花膏按照以下的配方，采用常规的制造方法混合各种成分，以制造雪花膏。
(配方)(配合量质量％)甘油 6.0BG7.0
透明质酸 0.01植物提取液 0.5角鲨烷 10.0硬脂酸 2.0三十二烷醇 5.0对羟基苯甲酸酯 0.2纯化水 其余部分DM0507*1.0*表示实施例1的产物实施例9制造洗面奶按照以下的配方，采用常规的制造方法混合各种成分，以制造洗面奶。
(配方) (配合量质量％)甘油3.0BG 3.0硬脂酸 5.2矿物油 15.0碳酸二烷基酯10.0椰油基乙基牛磺酸0.5十八烷醇1.5对羟基苯甲酸酯 0.2纯化水 其余部分DM0507*1.0*表示实施例1的产物实施例10制造沐浴用剂按照以下的配方，采用常规的制造方法混合各种成分，以制造沐浴剂。
(配方) (配合量质量％)碳酸氢钠50.0干燥硫化钠 30.0氯化钛 1.2法定色素微量香料微量聚乙二醇其余部分DM0507*0.001*表示实施例1的产物在产业方面的应用本发明的DMK0507对很多菌种具有抗菌活性，所以可以应用在具有优异抗菌活性的抗菌剂、抗菌产品、饮料和食品等中。


图一为DM0507的IR谱图。
图二DM0507的NMR谱图。
权利要求
1.一种抗菌活性物质DM0507，其特征在于，由包含以下步骤(a)～(d)的制造方法获得(a)培养枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)；(b)从所得的培养物回收上清；(c)把上清的pH调整到3或3以下，回收所产生的沉淀物；(d)用乙醇对沉淀物进行提取的步骤。
2.根据权利要求1所述的抗菌活性物质DM0507，其特征在于，对以下(A)～(D)组微生物具有抗菌活性(A)组(需氧性和兼性厌氧微生物)猪链球菌(Streptococcus suis)肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ATCC6633蜡状芽孢杆菌蕈状变种(Bacillus cereus var.mycoides)ATCC11778化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes)杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)JCM2434胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)2型副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)多杀性巴斯德菌(Pasteurella multocida)D型溶血巴斯德菌(Pasteurella haemolytica)鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium)猪霍乱沙门氏菌(Salmonella Choleraesuis)肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)ATCC10031琼氏不动杆菌(Acinetobacter junii)不动杆菌属某种(Acinetobacter sp.)嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)血清型1的嗜肺军团菌(Legionella pneumophila serotype 1)鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum)鸡滑膜支原体(Mycoplasma synoviae)(B)组(微需氧性微生物)空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)大肠弯曲杆菌(Campylobacter coli)幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)ATCC43526(C)组(专性厌氧微生物)产气荚膜梭菌(Clostridium perfringenes)艰难梭菌(Clostridium diffcile)疮疱丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)JCM6425脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)JCM8525牙龈炎病原菌(Tannerella forsythensis)JCM10827嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)JCM1132双岐杆菌(Bifidobacterium bifidum)JCM1255普氏厌氧球菌(Anaerococcus prevotii)JCM6508具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum)(D)组(真菌)尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。
3.根据权利要求1或2所述的抗菌活性物质DM0507，其特征在于，枯草芽孢杆菌为保藏号为FERM BP-3418的枯草芽孢杆菌DB9011。
4.一种抗菌剂，其特征在于，以权利要求1至3任一项所述的抗菌活性物质DM0507作为有效成分。
5.一种饮料食品，其特征在于，含有权利要求1至3任一项所述的抗菌活性物质DM0507。
6.一种抗菌活性物质DM0507的制造方法，其特征在于包含以下步骤(a)～(d)(a)培养枯草芽孢杆菌；(b)从所得的培养物回收上清；(c)把上清的pH调整到3或3以下，回收所产生的沉淀物；(d)用乙醇从沉淀物中进行提取的步骤。
全文摘要
本发明的目的在于提供一种新型的更加强有力的抗菌活性物质，该抗菌活性物质来源于天然物质，为广谱抗菌物质，具体提供一种抗菌活性物质DM0507，其由包含以下步骤的制造方法获得(a)培养枯草芽孢杆菌；(b)从所得的培养物回收上清；(c)把上清的pH调整到3或3以下，回收所产生的沉淀物；(d)用乙醇从沉淀物中进行萃取。
文档编号C07G11/00GK101084318SQ200580019860
公开日2007年12月5日 申请日期2005年11月4日 优先权日2005年11月4日
发明者山下直美, 饭塚武, 中江太治, 佐竹幸子 申请人:株式会社Ahc, Aim资产管理株式会社