专利名称：一种不含溶血磷脂的高纯大豆磷脂酰胆碱的制备方法
技术领域：
一种不含溶血磷脂的高纯大豆磷脂酰胆碱的制备方法，属于磷脂技术领域。
背景技术：
大豆磷脂是植物油厂加工的副产品，是各种磷脂的混合物，主要包括磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇及磷脂酰丝氨酸等。对磷脂的不同加工方法使得到的磷脂组成不同，因而具有不同的磷脂应用和加工性能。近来发现大豆磷脂中的不含溶血磷脂的大豆磷脂酰胆碱具有重要的生物学功能及在医药工业上得到愈来愈广泛的应用，因而制备不含溶血磷脂的高纯度大豆磷脂酰胆碱具有非常重要的现实意义。国内外在提高磷脂中磷脂酰胆碱含量上做了大量工作，但这些方法大多采用普通溶剂分级法，能使磷脂酰胆碱含量达到75％，也有采用低温萃取来提高磷脂酰胆碱含量的报道，但磷脂酰胆碱含量仍然在80％以下，对采用柱色谱及超临界二氧化碳的报道，前者采用了单柱多溶剂洗脱系统，后者需加入夹带剂，且尚不能实现工业化生产，也达不到去除溶血磷脂的效果。通过文献检索，国内外未发现采用低温冷冻-单一溶剂双柱色谱相结合的方法工业规模制备不含溶血磷脂的高纯大豆磷脂酰胆碱的文献报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种不含溶血磷脂的高纯大豆磷脂酰胆碱的制备方法。采用低温冷冻-单一溶剂双柱色谱法逐步提高大豆磷脂酰乙醇胺的去除率，并将产品中的溶血磷脂完全去除，得到不含溶血磷脂的大豆磷脂酰胆碱含量大于90％的高纯大豆磷脂酰胆碱产品。
本发明的技术方案以大豆粉末磷脂为原料用溶剂提取，提取液冷冻，再经双柱色谱处理柱1洗脱处理，去除磷脂酰乙醇胺；柱2洗脱处理，去除溶血磷脂；其提取所用溶剂及柱1和柱2所用洗脱剂为同一种单一溶剂，其得到的产品中不含有溶血磷脂，大豆磷脂酰胆碱的含量大于90％。
(1)原料以大豆粉末磷脂为原料，要求原料中丙酮不溶物95％-98％，磷脂酰胆碱含量为25％-35％；(2)溶剂提取磷脂∶溶剂重量体积比以g/ml计为1∶3-1∶15，所用溶剂浓度为大于80％，常温下浸提半小时；(3)冷冻处理将提取液或适度浓缩后的提取液冷冻处理，冷冻的工艺条件为温度在-5℃-10℃，时间8-24小时，然后回升至常温，过滤，脱溶剂，得固形物；(4)柱1洗脱处理柱1填料为含有空轨道，能接受孤对电子的物质包括含硼化合物，含锰化合物，含锌化合物或含铝化合物；用溶剂配成固形物质量浓度为2％的溶液，过柱1，用洗脱剂洗脱，洗脱剂的浓度为大于75％，洗脱温度为20℃-60℃；(5)柱2洗脱处理柱2填料是带有表面羟基的极性化合物包括硅胶，硅藻土、凹凸棒土或白土，收集柱1洗脱液，适度浓缩后过柱2，再用洗脱剂洗脱，洗脱剂的浓度为大于80％，洗脱温度为25℃-65℃。
(6)柱2洗脱液真空浓缩脱溶后，真空干燥得产品。
提取所用溶剂及柱1和柱2所用洗脱剂为同一种单一溶剂甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇。
优选的柱1填料为三氧化二铝，三氧化二硼或二氧化锰。
所用的大豆磷脂原料来自于植物油厂油脂加工的副产品，并经进一步加工所得到的粉末磷脂，其丙酮不溶物95％-98％，且大豆磷脂酰胆碱含量为25％-35％。通过选择性溶剂在低温下对原料中大豆磷脂酰胆碱进行富集，经过双柱单一溶剂洗脱，最后经真空脱溶得到本产品。
本发明的有益效果本发明为制备不含溶血磷脂的高纯度大豆磷脂酰胆碱提供了一种可行的方法，使用该方法可以方便的制备在医药工业，脂质体工业及保健食品工业具有广泛用途的不含溶血磷脂的高纯度大豆磷脂酰胆碱产品。
图1一种不含溶血磷脂的高纯大豆磷脂酰胆碱的制备方法工艺框图。
图2双柱色谱单一溶剂流程图。
1.2.3.保护柱，4.柱1，5.柱2，6.脉动消除器，7.料液槽，8.淋洗液槽，9.定量泵，10.监测器，11.监测器，12.定量泵，13.收集器，14.收集器，15.溶剂净化。
具体实施例方式
实施例1将100克粉末磷脂加入300毫升95％乙醇，常温下搅拌浸出半小时，取上层清液于-5℃静置24小时，过滤，脱乙醇。配成固形物质量浓度为2％的乙醇溶液，经过三氧化二铝柱，在45℃下以95％乙醇洗脱，将洗脱液浓缩15倍后，经过硅胶柱，在45℃下以95％乙醇洗脱，洗脱液真空脱溶后进一步真空干燥得到7.5克产品。
表1该方法所得产品指标
实施例2将100克粉末磷脂加入700毫升80％甲醇，常温下搅拌浸出半小时，取上层清液浓缩到原体积的一半，于-6℃静置20小时，过滤，脱甲醇。配成固形物质量浓度为2％的甲醇溶液，经过二氧化锰柱，在20℃下以80％甲醇洗脱，将洗脱液浓缩10倍后，经过硅藻土柱，在25℃下以80％乙醇洗脱，洗脱液真空脱溶后进一步真空干燥得到9.2克产品。
实施例3将100克粉末磷脂加入1100毫升90％丙醇，常温下搅拌浸出半小时，取上层清液浓缩到原体积的三分之一，于-8℃静置15小时，过滤，脱溶剂。配成固形物质量浓度为2％的丙醇溶液，经过三氧化二铝柱，在50℃下以90％丙醇洗脱，将洗脱液浓缩10倍后，经过凹凸棒土柱，在55℃下以90％丙醇洗脱，洗脱液真空脱溶后进一步真空干燥得到4.7克产品。
实施例4将100克粉末磷脂加入1500毫升99.5％异丙醇，常温下搅拌浸出半小时，取上层清液浓缩到原体积的三分之一，于-10℃静置8小时，过滤，脱溶剂。配成固形物质量浓度为2％的异丙醇溶液，经过三氧化二硼柱，在60℃下以99.5％的异丙醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩10倍后，经过白土柱，在65℃下以99.5％的异丙醇溶液洗脱，洗脱液真空脱溶后进一步真空干燥得到7.8克产品。
权利要求
1.一种不含溶血磷脂的高纯大豆磷脂酰胆碱的制备方法，其特征是以大豆粉末磷脂为原料用溶剂提取，提取液冷冻，再经双柱色谱处理柱1洗脱处理，去除磷脂酰乙醇胺；柱2洗脱处理，去除溶血磷脂；其提取所用溶剂及柱1和柱2所用洗脱剂为同一种单一溶剂，其得到的产品中不含有溶血磷脂，大豆磷脂酰胆碱的含量大于90％；(1)原料以大豆粉末磷脂为原料，要求原料中丙酮不溶物95％-98％，磷脂酰胆碱含量为25％-35％；(2)溶剂提取磷脂溶剂重量体积比以g/ml计为1∶3-1∶15，所用溶剂浓度为大于80％，常温下浸提半小时；(3)冷冻处理将提取液或适度浓缩后的提取液冷冻处理，冷冻的工艺条件为温度在-5℃--10℃，时间8-24小时，然后回升至常温，过滤，脱溶剂，得固形物；(4)柱1洗脱处理柱1填料为含有空轨道，能接受孤对电子的物质包括含硼化合物，含锰化合物，含锌化合物或含铝化合物；用溶剂配成固形物质量浓度为2％的溶液，过柱1，用洗脱剂洗脱，洗脱剂的浓度为大于75％，洗脱温度为20℃-60℃；(5)柱2洗脱处理柱2填料是带有表面羟基的极性化合物包括硅胶，硅藻土、凹凸棒土或白土，收集柱1洗脱液，适度浓缩后过柱2，再用洗脱剂洗脱，洗脱剂的浓度为大于80％，洗脱温度为25℃-65℃；(6)柱2洗脱液真空浓缩脱溶后，真空干燥得产品。
2.根据权利要求1所述的不含溶血磷脂的高纯大豆磷脂酰胆碱的制备方法，其特征是提取所用溶剂及柱1和柱2所用洗脱剂为同一种单一溶剂甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇。
3.根据权利要求1所述的不含溶血磷脂的高纯大豆磷脂酰胆碱的制备方法，其特征是柱1填料为三氧化二铝，三氧化二硼或二氧化锰。
全文摘要
一种不含溶血磷脂的高纯大豆磷脂酰胆碱的制备方法，属于磷脂技术领域。本发明以大豆粉末磷脂为原料用溶剂提取，提取液冷冻，再经双柱色谱处理柱1洗脱处理，去除磷脂酰乙醇胺；柱2洗脱处理，去除溶血磷脂；其提取所用溶剂及柱1和柱2所用洗脱剂为同一种单一溶剂，其得到的产品中不含有溶血磷脂，大豆磷脂酰胆碱的含量大于90％，使用本发明可以方便的制备在医药工业，脂质体工业及保健食品工业具有广泛用途的不含溶血磷脂的高纯度大豆磷脂酰胆碱产品。
文档编号C07F9/00GK1837222SQ20061003983
公开日2006年9月27日 申请日期2006年4月17日 优先权日2006年4月17日
发明者曹栋, 史苏佳, 王兴国 申请人:江南大学