专利名称：一种葫芦素b的提取分离方法
技术领域：
本发明涉及天然产物有效成分的提取与分离，具体涉及一种葫芦素B的提取分离 方法。
背景技术：
葫芦素B是一种分布在多种植物中的葫芦烷类物质，人们在甜瓜、葫芦、白泄根等 植物中均有发现葫芦素B的分布。但是传统的葫芦素B提取技术主要有乙醇热提取法、超 声乙醇提取法等，在这些提取分离方法与技术中，其基于的技术原理均是针对具有生物活 性的目标化合物的理化性质而采取相应的分离方法与技术，整个过程中为一种物理过程， 并未考虑天然产物的所有化学成分的综合利用，因而资源利用率低、产品得率低且由于相 似组分多而使分离难度大。 结构转化提取法是指在提取过程中，先采用一些基于化学、生物反应技术(如水 解、酶解、微生物转化等)，将与目标化合物结构类似的化合物转化成目标物，再进行相关的 提取分离，从而提高目标化合物的提取得率的一种方法。该方法应用于天然产物微量、高值 成分的提取中，不仅可以使原料得到充分的利用，提高得率，同时也会使有效成分的分离纯 化难度大为降低，从而能降低生产成本，提高产品市场竞争力。 随着科学技术发展，目前绝大部分天然产物中的主要化学成分已阐明，这使得结 构转化法应用于天然产物有效成分的提取分离成为可能。目前，利用结构转化法应用于天 然产物的合成和对先导化合物结构修饰的研究较多，但在天然产物有效成分的提取分离方 面的报道却较少，而将其作为一种提取的方法或技术概念运用到提取分离中，目前还尚未 见报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种葫芦素B的提取分离方法，通过将结构转化 法方法运用到提取中以提高葫芦素B的提取率，该工艺过程简单，操作简便，有效成分的提 取率高。 为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案
—种葫芦素B的提取分离方法，包括如下步骤 1)将原料甜瓜蒂粉碎，用乙醇渗漉乙醇回流提取，提取液浓縮以后，用乙酸乙酯萃 取三次以上，回收乙酸乙酯，即得总葫芦素提取物； 2)取总葫戸素提取物溶于体积分数25 45%的乙醇水溶液中，在醋酸存在下进 行水解反应，充分反应后调节pH值至中性，浓縮至干；所述醋酸的浓度为0. 1 0. 3mol/L ;
3)步骤2)所得浓縮物经纯化处理得到葫芦素B含量在60X以上的葫芦素B产品。
进一步，本发明所述的纯化处理推荐采用如下方法所得浓縮物用体积分数25 45 %的乙醇水溶液溶解，再通过大孔树脂柱层析，以体积分数50 60 %的乙醇水溶液洗 脱，收集洗脱液，浓縮得到葫芦素B含量在60%以上的葫芦素B产品。本方法纯化制得的葫芦素B产品，其中葫芦素B的质量含量在60%以上，符合中药部颁标准药品质量标准的规 定。所述的大孔树脂优选XAD-16。 本发明步骤2)中采用酸性水解，其目的是将其中的葫芦素B葡萄糖苷转化为葫芦 素B，以增加葫芦素B的量。所述的酸性水解在体积分数25 45%的乙醇水溶液中进行， 当乙醇水溶液的体积分数低于25%时，不利于总葫芦素提取物的溶解；当乙醇水溶液的体 积分数高于45%时，则会影响水解效率。最优选酸性水解在体积分数30%的乙醇水溶液中 进行。 步骤2)所述的水解反应推荐在70 9(TC进行2 5小时，优选在70 8(TC进 行2小时。 步骤2)所述的水解反应体系中，优选醋酸浓度为0. 1 0.2mol/L，最优选 0.lmol/L。 步骤2)水解反应中所述的体积分数25 45%的乙醇水溶液的体积用量以总葫芦 素提取物的质量计推荐为50 100ml/g。 本发明步骤l)中，渗漉或回流提取使用的乙醇，优选体积分数为95%的乙醇。萃 取剂乙酸乙酯的体积推荐为浓縮后的提取物体积的3 4倍。
本发明具体推进所述的方法按照如下进行 1)将原料甜瓜蒂粉碎，用体积分数95%的乙醇渗漉或者体积分数95%的乙醇回 流提取，提取液浓縮以后，用体积为浓縮后的提取物体积3 4倍的乙酸乙酯萃取三次，回 收乙酸乙酯，再浓縮，即得总葫芦素提取物； 2)取总葫芦素提取物溶于体积分数25 45%的乙醇水溶液中，所述体积分数 25 45%的乙醇水溶液的体积用量以总葫芦素提取物的质量计推荐为50 100ml/g，在 0. 1 0. 2mol/L醋酸存在下于70 8(TC进行水解反应2小时，然后调节pH值至中性，浓 縮至干； 3)步骤2)所得提取物用体积分数25 45%的乙醇水溶液溶解，再通过XAD-16 大孔树脂柱层析，以体积分数50 60%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓縮得到葫芦素B 含量在60%以上的葫芦素B产品。 本发明与现有的提取分离葫芦素B的技术相比，所具有的优点在葫芦素B的提取 过程中，通过结构转化将葫芦素B的结构类似物(如葫芦素B葡萄糖苷)转化为葫芦素B， 提高了葫芦素B的提取率，生产工艺简单，操作简便。
具体实施例 下面以具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但本发明的保护范围不限 于此 实施例1 :总葫芦素提取物的制备 将原料甜瓜蒂lkg，粉碎，用体积分数95%乙醇80°C回流提取3次，每次1小时，提 取液浓縮以后，用3-4倍体积的乙酸乙酯萃取三次，取乙酸乙酯萃取液再浓縮，得总葫芦素 提取物138. 6g。
实施例2 取总葫戸素提取物O. 58g，加0. lmol/L醋酸(用体积分数30 %乙醇水溶液配制)50ml，在水浴80°C ，加热回流2h，回流结束后调节PH至7，减压浓縮至干，再用甲醇定容
至100ml 。样品经HPLC检测，测得葫芦素B在总葫芦素提取物含量为60. 39mg。 同样方法做对照试验，取总葫芦素提取物0.58g，加体积分数30X乙醇水溶液
50ml，在水浴80°C ，加热回流2h，回流结束后调节ra至7，减压浓縮至干，再用甲醇定容至
lOOml。样品经HPLC检测，测得葫戸素B在总葫戸素提取物含量为54. 63mg。 实施例3 取总葫戸素提取物O. 5g，加0. 2mol/L醋酸(用体积分数30 %乙醇水溶液配
制)50ml，在水浴80°C ，加热回流2h，回流结束后调节PH至7，减压浓縮至干，再用甲醇定容
至100ml。样品经HPLC检测，测得葫芦素B在总葫芦素提取物含量为57. 53mg。 同样方法做对照试验，取总葫芦素提取物0. 58g，加体积分数30%乙醇水溶液
50ml，在水浴80°C ，加热回流2h，回流结束后调节ra至7，减压浓縮至干，再用甲醇定容至
lOOml。样品经HPLC检测，测得葫戸素B在总葫戸素提取物含量为54. 63mg。 实施例4 取总葫戸素提取物O. 5g，加0. 3mol/L醋酸(用体积分数30 %乙醇水溶液配
制)50ml，在水浴80°C ，加热回流2h，回流结束后调节PH至7，减压浓縮至干，再用甲醇定容
至100ml。样品经HPLC检测，测得葫芦素B在总葫芦素提取物含量为56. 72mg。 同样方法做对照试验，取总葫芦素提取物0.58g，加体积分数30X乙醇水溶液
50ml，在水浴80°C ，加热回流2h，回流结束后调节ra至7，减压浓縮至干，再用甲醇定容至
lOOml。样品经HPLC检测，测得葫戸素B在总葫戸素提取物含量为54. 63mg。 实施例5 取总葫戸素提取物O. 5g，加0. lmol/L醋酸(用体积分数30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴80°C ，加热回流2h，回流结束后调节PH至7，减压浓縮至干，再用甲醇定容 至100ml。样品经HPLC检测，测得葫芦素B在总葫芦素提取物含量58. 86mg。
实施例6 取总葫戸素提取物O. 56g，加0. lmol/L醋酸(用体积分数30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴80°C ，加热回流5h，回流结束后调节PH至7，减压浓縮至干，再用甲醇定容 至100ml 。样品经HPLC检测，测得葫芦素B在总葫芦素提取物含量56. 32mg。
实施例7 取总葫戸素提取物O. 5g，加0. lmol/L醋酸(用体积分数30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴70°C ，加热回流2h，回流结束后调节PH至7，减压浓縮至干，再用甲醇定容 至lOOml。样品经HPLC检测，测得葫芦素B在总葫芦素提取物含量58.48mg。
实施例8 取总葫戸素提取物O. 5g，加0. lmol/L醋酸(用体积分数30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴80°C ，加热回流2h，回流结束后调节PH至7，减压浓縮至干，再用甲醇定容 至lOOml。样品经HPLC检测，测得葫芦素B在总葫芦素提取物含量59.04mg。
实施例9 取总葫戸素提取物O. 5g，加0. lmol/L醋酸(用体积分数30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴90°C ，加热回流2h，回流结束后调节PH至7，减压浓縮至干，再用甲醇定容 至50ml。样品经HPLC检测，测得葫芦素B在总葫芦素提取物含量56. 35mg。
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实施例10 取总葫戸素提取物O. 5g，加0. lmol/L醋酸(用体积分数30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴80°C ，加热回流2h，回流结束后调节PH至7，减压浓縮至干，再用甲醇定容 至100ml。样品经HPLC检测，测得葫芦素B在总葫芦素提取物含量为59. 32mg。
另取总葫芦素提取物0.5g，用甲醇溶解定容至lOOml，样品经HPLC检测，测得葫 芦素B在总葫芦素提取物含量为54. 56mg。水解后葫芦素B的含量比未经过水解提高了 8. 72%。 实施例11 取总葫戸素提取物1.4g，加0. lmol/L醋酸(用体积分数30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴80°C ，加热回流2h，回流结束后调节ffl至7，减压浓縮至干，用体积分数 30%乙醇溶解，再通过大孔树脂XAD-16柱层析，用体积分数60%乙醇洗脱至流出液淡黄 色，开始收集并富集，浓縮得到0. llg，其中葫芦素B的含量占60. 33%。
实施例12 取总葫戸素提取物0.8g，加0. lmol/L醋酸(用体积分数30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴80°C ，加热回流2h，回流结束后调节ffl至7，减压浓縮至干，用体积分数 30%乙醇溶解，再通过大孔树脂XAD-16柱层析，用体积分数50%乙醇洗脱至流出液淡黄 色，开始收集并富集，浓縮得到72. 6mg，其中葫芦素B的含量占65. 34%。
对比实施例1 取总葫戸素提取物O. 53g，加0.4mol/L醋酸(用体积分数30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴80°C ，加热回流2h，回流结束后调节PH至7，减压浓縮至干，再用甲醇定容 至100ml 。样品经HPLC检测，测得葫芦素B在总葫芦素提取物含量为46. 86mg。
同样方法做对照试验，取总葫芦素提取物0.58g，加体积分数30X乙醇水溶液 50ml，在水浴80°C ，加热回流2h，回流结束后调节ra至7，减压浓縮至干，再用甲醇定容至 lOOml。样品经HPLC检测，测得葫戸素B在总葫戸素提取物含量为54. 63mg。
权利要求
一种葫芦素B的提取分离方法，包括如下步骤1)将原料甜瓜蒂粉碎，用乙醇渗漉或者乙醇回流提取，提取液浓缩以后，用乙酸乙酯萃取三次以上，回收乙酸乙酯，即得总葫芦素提取物；2)取总葫芦素提取物溶于体积分数25～45％的乙醇水溶液中，在醋酸存在下进行水解反应，充分反应后调节pH值至中性，浓缩至干；所述醋酸的浓度为0.1～0.3mol/L；3)步骤2)所得浓缩物经纯化处理得到葫芦素B含量在60％以上的葫芦素B产品。
2. 如权利要求1所述的葫芦素B的提取分离方法，其特征在于步骤3)所述的纯化处理 采用如下方法所得浓縮物用体积分数25 45%的乙醇水溶液溶解，再通过大孔树脂柱层 析，以体积分数50 60%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓縮得到葫芦素B含量在60% 以上的葫芦素B产品。
3. 如权利要求2所述的葫芦素B的提取方法，其特征在于所述的大孔树脂为XAD-16。
4. 如权利要求1 3之一所述的葫芦素B的提取分离方法，其特征在于步骤2)所述的 水解反应在70 90。C进行2 5小时。
5. 如权利要求4所述的葫芦素B的提取分离方法，其特征在于步骤2)所述的水解反应 在70 8(TC进行2小时。
6. 如权利要求4所述的葫芦素B的提取分离方法，其特征在于步骤2)所述醋酸的浓度 为0.1 0. 2mol/L。
7. 如权利要求4所述的葫芦素B的提取分离方法，其特征在于步骤2)所述乙醇水溶液 的体积分数为30%。
8. 如权利要求1 3之一所述的葫芦素B的提取分离方法，其特征在于步骤2)水解 反应中所述的体积分数25 45%的乙醇水溶液的体积用量以总葫芦素提取物的质量计为 50 100ml/g。
9. 如权利要求1所述的葫芦素B的提取分离方法，其特征在于所述的提取分离方法按 照如下进行1) 将原料甜瓜蒂粉碎，用体积分数95%的乙醇渗漉或者体积分数95%的乙醇回流提 取，提取液浓縮以后，用体积为浓縮后的提取物体积3 4倍的乙酸乙酯萃取三次以上，回 收乙酸乙酯，即得总葫芦素提取物；2) 取总葫芦素提取物溶于体积分数25 45%的乙醇水溶液中，所述的体积分数25 45%的乙醇水溶液的体积用量以总葫芦素提取物的质量计为50 100ml/g，在0. 1 0. 2mol/L的醋酸存在下于70 8(TC进行水解反应2小时，然后调节pH值至中性，浓縮至 干；3) 步骤2)所得浓縮物用体积分数25 45%的乙醇水溶液溶解，再通过XAD-16大孔 树脂柱层析，以体积分数50 60%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓縮得到葫芦素B含量 在60X以上的葫戸素B产品。
全文摘要
本发明公开了一种葫芦素B的提取分离方法，包括如下步骤1)将原料甜瓜蒂粉碎，用乙醇渗漉或者乙醇回流提取，提取液浓缩以后，用乙酸乙酯萃取三次以上，回收乙酸乙酯，即得总葫芦素提取物；2)取总葫芦素提取物溶于25～45％乙醇水溶液中，在醋酸存在下进行水解反应，充分反应后调节pH值至中性，浓缩至干；然后所得提取物经纯化处理得到葫芦素B含量在60％以上的葫芦素B产品；所述醋酸的浓度为0.1～0.3mol/L。本发明与现有的提取分离葫芦素B的技术相比，具有如下优点提取过程中通过结构转化将葫芦素B的结构类似物(如葫芦素B葡萄糖苷)转化为葫芦素B，提高了葫芦素B的提取率，生产工艺简单，操作简便。
文档编号C07J9/00GK101759746SQ20091015483
公开日2010年6月30日 申请日期2009年11月24日 优先权日2009年11月24日
发明者单伟光, 单海峰, 占扎君, 唐岚 申请人:浙江工业大学