专利名称：一种提取纯化6,8-二异戊烯基金雀异黄素的方法
技术领域：
本发明属于天然植物提取技术领域，涉及一种提取纯化6，8- 二异戊烯基金雀异黄素的方法。
背景技术：
6，8- 二异戊烯基金雀异黄素(6，8-Diprenylgenistein)分子式为C25H26O5,分子量为406. 48，CAS登录号为:51225-28-6, mp. 140_142°C，为无色针晶，是一种异黄酮类化合物。广泛分布与豆科植物中，如攀登鱼藤iferris scandens Benth.茎、塞内加尔河刺桐 Erythrina senegalensis Harms 莲皮、朿Ij桐 iZrji力^^<3 variegate var. orientalis (L.) Merr. ^MMEuchresta horsfieldii (Leschen.) Benn.根和茎、厚果鸡血藤ifo'Weiiia pachycarpa Benth.地上部分和种子以及胀果甘草根中。药理研究表明，6，8_ 二异戊烯基金雀异黄素具有多种活性，浓度为10 μ M时，对牛的晶状体醛糖还原酶的抑制率为60%，对 cAMP磷酸二酯酶的IC5tl为203 μ Μ,另外，体外6. 25 μ g/mL时，对金黄色葡萄球菌和包皮垢分枝杆菌具有抑制作用。对于6，8- 二异戊烯基金雀异黄素的研究尚处于起步阶段，尚未见其提取工艺方面的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种提取纯化6，8- 二异戊烯基金雀异黄素的方法。为了实现上述目的，本发明是通过以下方案实现的
一种提取纯化6，8- 二异戊烯基金雀异黄素的方法，其特征在于包括以下步骤将富含 6，8-二异戊烯基金雀异黄素的药材晒干、粉碎，用石油醚回流脱脂，然后用60-80%乙醇溶液冷浸2-3次，每次1-3天，过滤，合并滤液，膜浓缩，将浓缩液加入无机盐溶液和聚乙二醇， 搅拌使其充分混合萃取，静置，取上相用超滤膜将含有6，8- 二异戊烯基金雀异黄素部分和聚乙二醇分离，将含有6，8- 二异戊烯基金雀异黄素部分上硅胶常压柱层析，石油醚-丙酮洗脱，二氯甲烷-丙酮重结晶即得到6，8- 二异戊烯基金雀异黄素单体成分。所述无机盐溶液为硫酸铵、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾中的一种或几种结合。所述膜浓缩所用超滤膜截留分子量为2000-6000，纳滤膜的截留分子量为 200-300。所述聚乙二醇的相对分子量是4000或6000，双水相体系中聚乙二醇的质量浓度为13- %，无机盐的质量浓度为10-13%，萃取温度为22-37°C，所述的静置时间为12-18小时。所述膜分离含有6，8- 二异戊烯基金雀异黄素部分和聚乙二醇所用超滤膜的截留分子量为2000-3000。本发明采用双水相萃取，选择性地富集黄酮类成分，工艺流程短、简单易行，可放大连续操作；采用膜分离浓缩可显著降低能耗。
具体实施例方式实施例1:
将厚果鸡血藤地上部分晒干、粉碎成粗粉，称取5000g先用6倍量(30L)石油醚回流脱脂2次，每次lh，再用8倍量75%乙醇冷浸2次，每次3天，过滤，合并滤液，滤液加入截留分子量4000的中空纤维超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量300的中空纤维纳滤膜浓缩， 浓缩液依次加入聚乙二醇和硫酸铵，使所形成的双水相萃取体系中聚乙二醇的质量浓度为 18%，硫酸铵的质量浓度为12%，条件下搅拌萃取lh，静置1 形成两相，取上相，采用截留分子量3000的超滤膜将含有6，8- 二异戊烯基金雀异黄素部分和聚乙二醇分离，收集透过液含有6，8- 二异戊烯基金雀异黄素部分，进行常压硅胶(200-300目)柱层析，石油醚-丙酮(9 1-6 4)梯度洗脱，TLC检测合并含有6，8- 二异戊烯基金雀异黄素的流分，减压浓缩干燥，二氯甲烷-丙酮重结晶即得到1. 36g6, 8- 二异戊烯基金雀异黄素晶体，含量为97. 8%。实施例2:
将日本山豆根根晒干、粉碎成粗粉，称取5000g先用4倍量(20L)石油醚回流脱脂2次， 每次2h，再用6倍量85%乙醇冷浸2次，每次1天，过滤，合并滤液，滤液加入截留分子量 2000的中空纤维超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量200的中空纤维纳滤膜浓缩，浓缩液依次加入聚乙二醇和磷酸氢二钾，使所形成的双水相萃取体系中聚乙二醇的质量浓度为 13%，磷酸氢二钾的质量浓度为11%，30°C条件下搅拌萃取1.证，静置1 形成两相，取上相， 采用截留分子量2000的超滤膜将含有6，8- 二异戊烯基金雀异黄素部分和聚乙二醇分离， 收集透过液含有6，8- 二异戊烯基金雀异黄素部分，进行常压硅胶(200-300目)柱层析，石油醚-丙酮(9 1-6 4)梯度洗脱，TLC检测合并含有6，8- 二异戊烯基金雀异黄素的流分，减压浓缩干燥，二氯甲烷-丙酮重结晶即得到1. 56g6, 8- 二异戊烯基金雀异黄素晶体，含量为 98. 4%ο实施例3:
将塞内加尔河刺桐茎皮晒干、粉碎成粗粉，称取5000g先用4倍量(20L)石油醚回流脱脂3次，每次1. 5h，再用9倍量70%乙醇冷浸3次，每次1天，过滤，合并滤液，滤液加入截留分子量6000的中空纤维超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量300的中空纤维纳滤膜浓缩，浓缩液依次加入聚乙二醇和磷酸二氢钾，使所形成的双水相萃取体系中聚乙二醇的质量浓度为22%，磷酸二氢钾的质量浓度为10%，37°C条件下搅拌萃取lh，静置1 形成两相， 取上相，采用截留分子量3000的超滤膜将含有6，8- 二异戊烯基金雀异黄素部分和聚乙二醇分离，收集透过液含有6，8- 二异戊烯基金雀异黄素部分，进行常压硅胶(200-300目)柱层析，石油醚-丙酮(9 1-64)梯度洗脱，TLC检测合并含有6，8- 二异戊烯基金雀异黄素的流分，减压浓缩干燥，二氯甲烷-丙酮重结晶即得到1. 71g6, 8- 二异戊烯基金雀异黄素晶体，含量为98. 1%。实施例4:
将厚果鸡血藤种子晒干、粉碎成粗粉，称取5000g先用5倍量(25L)石油醚回流脱脂3 次，每次lh，再用10倍量80%乙醇冷浸2次，每次2天，过滤，合并滤液，滤液加入截留分子量 4000的中空纤维超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量200的中空纤维纳滤膜浓缩，浓缩液依次加入聚乙二醇和硫酸铵，使所形成的双水相萃取体系中聚乙二醇的质量浓度为观％，
4硫酸铵的质量浓度为13%，22°C条件下搅拌萃取1.证，静置1 形成两相，取上相，采用截留分子量2000的超滤膜将含有6，8- 二异戊烯基金雀异黄素部分和聚乙二醇分离，收集透过液含有6，8- 二异戊烯基金雀异黄素部分，进行常压硅胶(200-300目)柱层析，石油醚-丙酮(9 1-6 4)梯度洗脱，TLC检测合并含有6，8- 二异戊烯基金雀异黄素的流分，减压浓缩干燥，二氯甲烷-丙酮重结晶即得到0. 86g6, 8- 二异戊烯基金雀异黄素晶体，含量为96. 6%。
权利要求
1.一种提取纯化6，8- 二异戊烯基金雀异黄素的方法，其特征在于包括以下步骤将富含6，8- 二异戊烯基金雀异黄素的药材晒干、粉碎，用石油醚回流脱脂，然后用60-80%乙醇溶液冷浸2-3次，每次1-3天，过滤，合并滤液，膜浓缩，将浓缩液加入无机盐溶液和聚乙二醇，搅拌使其充分混合萃取，静置，取上相用超滤膜将含有6，8- 二异戊烯基金雀异黄素部分和聚乙二醇分离，将含有6，8- 二异戊烯基金雀异黄素部分上硅胶常压柱层析，石油醚-丙酮洗脱，二氯甲烷-丙酮重结晶即得到6，8- 二异戊烯基金雀异黄素单体成分。
2.按权利要求1所述的方法，其特征在于所述无机盐溶液为硫酸铵、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾中的一种或几种结合。
3.按权利要求1所述的方法，其特征在于所述膜浓缩所用超滤膜截留分子量为 2000-6000,纳滤膜的截留分子量为200-300。
4.按权利要求1所述的方法，其特征在于所述聚乙二醇的相对分子量是4000或 6000，双水相体系中聚乙二醇的质量浓度为13- %，无机盐的质量浓度为10-13%，萃取温度为22-37°C，所述的静置时间为12-18小时。
5.按权利要求1所述的方法，其特征在于所述膜分离含有6，8-二异戊烯基金雀异黄素部分和聚乙二醇所用超滤膜的截留分子量为2000-3000。
全文摘要
本发明公开了一种提取纯化6,8-二异戊烯基金雀异黄素的方法，方法是将富含6,8-二异戊烯基金雀异黄素的药材晒干、粉碎，用石油醚回流脱脂，然后用60-80%乙醇溶液冷浸2-3次，每次1-3天，过滤，合并滤液，膜浓缩，将浓缩液加入无机盐溶液和聚乙二醇，搅拌使其充分混合萃取，静置，取上相用超滤膜将目标成分和聚乙二醇分离，将目标成分上硅胶常压柱层析，石油醚-丙酮洗脱，二氯甲烷-丙酮重结晶即得到6,8-二异戊烯基金雀异黄素单体成分。本发明原料丰富，采用双水相萃取和膜分离技术，设备要求低、能显著降低能耗。
文档编号C07D311/40GK102391235SQ20111030350
公开日2012年3月28日 申请日期2011年10月10日 优先权日2011年10月10日
发明者刘东锋, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司