专利名称：一种分离纯化利卡灵b的方法
技术领域：
本发明属于天然药物领域，具体涉及一种分离纯化利卡灵B的方法。
背景技术：
利卡灵B(Licarin B)分子式为C2tlH2tlO4,分子量为324. 38，为无色针晶，mp. 91-92°C (甲醇)。是从ongoing樟科(Lauraceae)植物中分离得到的一种木脂素类化合物，如李卡
Licarin aritu Ducke 树干、日本润楠ifecAi/ws japonica Sieb. et Zucc.叶以及红楠 Machilus thunbergii Sieb. et Zucc.树皮、木材和叶。药理研究表明，利卡灵B具有免疫抑制活性，对促细胞分裂剂(刀豆球蛋白A)诱导的人外周血液淋巴细胞增生有抑制作用，其 IC5tl为1.25yg/mL。迄今为止，尚未发现大量分离纯化利卡灵B的方法报道，亦没有采用酶法和高速逆流色谱法分离纯化利卡灵B的工艺报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分离纯化利卡灵B的方法。本发明的目的是通过以下技术方案实现的
一种分离纯化利卡灵B的方法，其特征在于包括以下步骤取原料李卡樟树干经粉碎处理后，用酶溶液水浴浸泡4-12小时，充分搅拌、过滤，取滤渣用5-10倍量的95%乙醇回流提取2-3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏，用正丁醇萃取得萃取物，再以正己烷-甲醇-乙腈-水为溶剂系统，采用高速逆流色谱分法分离萃取物，流分减压浓缩，乙醇重结晶即得利卡灵B。所述酶溶液为纤维素酶溶液或果胶酶溶液，酶含量为0. 4-0. 8%，酶溶液pH为 4. 0-4. 5，酶解温度为 35-450C。所述高速逆流色谱溶剂系统正己烷-甲醇-乙腈-水体积比为(4-8) :(3-6) (1-3):(2-5)。本发明的有益效果在于采用酶法提取，使有效成分更易溶出，可提高提取率；采用高速逆流色谱法分离纯化，具有分离效果好，高效、快速、产品纯度高等特点。
具体实施例方式实施例1
取原料李卡樟树干经粉碎过60目筛后，称取2kg加6LpH4. 2的纤维素酶溶液(纤维素酶加入量为药材量的0. 4%)于40°C水浴浸泡酶解8小时，充分搅拌、过滤，取滤渣用6倍量的95%乙醇回流提取2次，合并提取液，减压浓缩得浸膏，用正丁醇萃取得萃取物，再以正己烷-甲醇-乙腈-水为溶剂系统，按体积比为5:3:2:4配制，将溶剂系统置于分液漏斗中振摇，静置，分出上相和下相，上相为固定相，下相为流动相，用下相溶解萃取物，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满，再启动主机转动，控制转速为850r/min，同时以2ml/min流速泵入流动相，待两相达到动态平衡后，进样，紫外检测，收集流出液，旋转蒸发浓缩，乙醇重结晶，干燥得4. 87g利卡灵B产品，含量98. 6%。实施例2
取原料李卡樟树干经粉碎过60目筛后，称取2kg加8LpH4. 4的纤维素酶溶液(纤维素酶加入量为药材量的0. 5%)于38°C水浴浸泡酶解4小时，充分搅拌、过滤，取滤渣用5倍量的95%乙醇回流提取3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏，用正丁醇萃取得萃取物，再以正己烷-甲醇-乙腈-水为溶剂系统，按体积比为7 5 3 2配制，将溶剂系统置于分液漏斗中振摇，静置，分出上相和下相，上相为固定相，下相为流动相，用下相溶解萃取物，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满，再启动主机转动，控制转速为850r/min，同时以2ml/min流速泵入流动相，待两相达到动态平衡后，进样，紫外检测，收集流出液，旋转蒸发浓缩，乙醇重结晶，干燥得4. 76g利卡灵B产品，含量97. 3%。实施例3:
取原料李卡樟树干经粉碎过60目筛后，称取2kg加10LpH4. 0的纤维素酶溶液(纤维素酶加入量为药材量的0. 8%)于35°C水浴浸泡酶解10小时，充分搅拌、过滤，取滤渣用8倍量的95%乙醇回流提取3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏，用正丁醇萃取得萃取物，再以正己烷-甲醇-乙腈-水为溶剂系统，按体积比为4 6 1 5配制，将溶剂系统置于分液漏斗中振摇，静置，分出上相和下相，上相为固定相，下相为流动相，用下相溶解萃取物，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满，再启动主机转动，控制转速为850r/min，同时以2ml/min流速泵入流动相，待两相达到动态平衡后，进样，紫外检测，收集流出液，旋转蒸发浓缩，乙醇重结晶，干燥得4. 64g利卡灵B产品，含量98. 7%。实施例4:
取原料李卡樟树干经粉碎过60目筛后，称取2kg加7LpH4. 5的纤维素酶溶液(纤维素酶加入量为药材量的0. 6%)于45°C水浴浸泡酶解12小时，充分搅拌、过滤，取滤渣用10倍量的95%乙醇回流提取2次，合并提取液，减压浓缩得浸膏，用正丁醇萃取得萃取物，再以正己烧-甲醇-乙腈-水为溶剂系统，按体积比为8 3 3 5配制，将溶剂系统置于分液漏斗中振摇，静置，分出上相和下相，上相为固定相，下相为流动相，用下相溶解萃取物，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满，再启动主机转动，控制转速为850r/min，同时以2ml/min流速泵入流动相，待两相达到动态平衡后，进样，紫外检测，收集流出液，旋转蒸发浓缩，乙醇重结晶，干燥得4. 92g利卡灵B产品，含量98. 1%。
权利要求
1.一种分离纯化利卡灵B的方法，其特征在于包括以下步骤取原料李卡樟树干经粉碎处理后，用酶溶液水浴浸泡4-12小时，充分搅拌、过滤，取滤渣用5-10倍量的95%乙醇回流提取2-3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏，用正丁醇萃取得萃取物，再以正己烷-甲醇-乙腈-水为溶剂系统，采用高速逆流色谱分法分离萃取物，流分减压浓缩，乙醇重结晶即得利卡灵B。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述酶溶液为纤维素酶溶液或果胶酶溶液，酶含量为0. 4-0. 8%，酶溶液pH为4. 0-4. 5，酶解温度为35-45°C。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述高速逆流色谱溶剂系统正己烷-甲醇-乙腈-水体积比为(4-8) :(3-6) :(1-3) (2-5)。
全文摘要
本发明属于天然药物领域，具体涉及一种分离纯化利卡灵B的方法。方法包括取原料李卡樟树干经粉碎处理后，用酶溶液水浴浸泡，搅拌、过滤，取滤渣用5-10倍量的95%乙醇回流提取2-3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏，用正丁醇萃取得萃取物，再以正己烷-甲醇-乙腈-水为溶剂系统，采用高速逆流色谱分法分离萃取物，流分减压浓缩，乙醇重结晶即得利卡灵B。本发明采用酶法和高速逆流色谱技术结合，具有提取条件温和、高效的优点。
文档编号C07D307/86GK102391223SQ201110303500
公开日2012年3月28日 申请日期2011年10月10日 优先权日2011年10月10日
发明者刘东锋, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司