新型调节剂及使用方法
【专利摘要】本发明提供新型调节剂，包括抗体及其衍生物在内，以及使用这类调节剂治疗过度增殖障碍的方法。
【专利说明】新型调节剂及使用方法
[0001]交叉参考的专利申请
[0002]本专利申请根据35U.S.C.119(e)要求于2010年9月3日提交的系列号为N0.61/380, 181的美国临时专利申请的权益，将该专利申请以引用的方式全文并入本文。
【技术领域】
[0003]本申请案整体涉及组合物及其用于治疗或改善过度增殖障碍、它们的扩张、再发、复发或转移的方法。在一个广泛的方面，本发明涉及CD46调节剂(包括CD46拮抗剂和融合构建体)用于治疗或预防赘生性障碍的用途。在特别优选的实施例中，本发明提供抗CD46抗体用于对恶性肿瘤进行免疫治疗的用途，包括降低肿瘤起始细胞(tumor initiatingcell)出现率。
[0004]发明背景
[0005]干细胞和祖细胞分化及细胞增殖为一致发挥作用以支持器官发生期间的组织生长以及所有活生物体寿命期间大部分组织的细胞替换及修复的正常进程。分化和增殖决定通常受多种因素和信号控制，这些因素和信号达成平衡以维持细胞命运决定和组织架构。作为细胞对调节细胞分裂和组织成熟的微环境暗示作出响应的结果，正常组织架构得以维持。因此，细胞增殖和分化通常仅为替换受损或死亡细胞或为生长所需要而进行。遗憾的是，细胞增殖和/或分化的破坏可由多种因素引起，包括例如多种信号传导化学物质不足或过多、存在微环境改变、基因突变或它们的某种组合。当正常细胞增殖和/或分化受到扰乱或某种破坏时，其可引起多种疾病或障碍，包括癌症。
[0006]常规的癌症治疗包括化学疗法、放射疗法、手术、免疫疗法(例如生物响应修饰剂、疫苗或靶向治疗剂)或它们的组合。遗憾的是，太多癌症对这类常规治疗无响应或响应极小，从而留给患者极少的选择。例如，一些患者亚群表现出使他们无响应的基因突变(例如KRAS)，尽管某些疗法具有普遍有效性。此外，取决于癌症的类型，一些可用的治疗(如手术)可能并非可行的备选方案。当试图护理先前已进行治疗而随后复发的患者时，当前的护理标准治疗剂所固有的局限性尤为明显。在这类情形中，失败的治疗方案和所导致的患者恶化可造成难治性肿瘤，其通常自身表现为更具侵袭性的疾病，最终证明不能治愈。尽管多年来癌症的诊断和治疗已有很大改进，但由于现有疗法无法预防复发、肿瘤再发和转移，许多实体瘤的总存活率仍基本保持不变。因此，开发更多靶向的且有效的疗法仍是一个挑战。
[0007]—个有前景的研究领域涉及使用靶向治疗剂来追逐似乎造成许多癌症的致瘤“种子”细胞。为此，现已知大部分实体组织含有组织固有的成人干细胞群体，其产生占该组织的大部分的分化细胞类型。在这些组织中产生的肿瘤类似地由也从干细胞产生、但其总体增殖和组织化明显不同的异源细胞群体组成。虽然日益认识到大多数肿瘤细胞具有有限的增殖能力，但少数癌细胞群体(通常称为癌症干细胞或CSc)具有专有的广泛自我更新能力，由此能使它们具有肿瘤重新起始能力。更具体地讲，癌症干细胞假说认为，每一肿瘤中存在独特的细胞子集(即CSC)(约0.1-10% )，其能够无限自我更新并产生由于它们分化为肿瘤祖细胞且随后分化为最终分化的肿瘤细胞而复制能力逐渐受限的肿瘤细胞。
[0008]近年来，已变得更加明显的是，这些CSC (也称为肿瘤永续细胞(tumorperpetuating cell)或TPC)可能对传统的化学治疗剂或放射具有更大的抗性，因而在护理标准临床疗法后继续存在，随后刺激复发性肿瘤、继发性肿瘤和转移瘤的生长。此外，越来越多的证据表明，调节器官发生和/或正常组织固有干细胞自我更新的途径在CSC中失调或改变，从而导致自我更新癌细胞不断扩张和肿瘤形成。一般参见Al-Hajj等人，2004，PMID:15378087 ;和Dalerba等人，2007，PMID:17548814 ;将这些参考文献的每一者以引用的方式全文并入本文。因此，传统的以及较新的靶向治疗方法的有效性显然受抗性癌细胞的存在和/或出现所限制，这类抗性癌细胞即使面对这些各式各样的治疗方法仍能够延续癌症。Huff 等人,European Journal of Cancer (《欧洲癌症杂志》)42:1293-1297 (2006)以及Zhou等人,Nature Reviews Drug Discovery (《自然评论:药物发现》)8:806-823 (2009),将这些参考文献每一者以引用的方式全文并入本文。这些观察结果由当患有实体肿瘤时传统减积剂(debulking agent) 一直无法实质上提高患者存活率以及对肿瘤如何生长、复发和转移的了解逐渐深入得到证实。因此，治疗赘生性障碍的最新策略已认识到消除、消耗、沉默肿瘤永续细胞或促进其分化以降低肿瘤再发、转移或患者复发的可能性的重要性。
[0009]开发这类策略的努力已整合了涉及非传统异种移植(NTX)模型的最新工作，在所述模型中将原发性人实体肿瘤样本专门植入免疫功能降低的小鼠中并进行继代。这类技术证实存在具有产生异源肿瘤并无限刺激其生长的独特能力的细胞亚群。如先前所假设，在NTX模型中进行的工作已证实，所鉴别的肿瘤细胞CSC亚群表现出对诸如化学疗法和放射治疗的减积方案具有更大的抗性，这潜在地解释临床响应率与总存活率之间的不一致。此外，在CSC研究中使用NTX模型已引起了药物发现及候选药物临床前评价的根本变化，这个变化可产生对肿瘤再发和转移具有重大影响从而改善患者存活率的CSC靶向疗法。虽然已取得了进展，但与处理原发性和/或异种移植肿瘤组织相关的固有技术困难以及表征CSC特征及分化潜力的实验平台的缺乏构成重大的挑战。因此，仍十分需要选择性地靶向癌症干细胞并开发可用于治疗、预防和/或管理过度增殖障碍的诊断性、预防性或治疗性化合物或方法。.
【发明内容】
[0010]这些及其他目标由本发明提供，本发明在广泛意义上涉及可用于治疗⑶46相关障碍(例如过度增殖障碍或赘生性障碍)的方法、化合物、组合物和制品。为此，本发明提供有效靶向癌症干细胞且可用于治疗患有各种恶性肿瘤的患者的新型CD46调节剂。在某些实施例中，所公开的CD46调节剂可包含任何识别CD46多肽、其配体或其基因、与它们竞争、对它们进行激动、拮抗、与它们相互作用、与它们结合或与它们缔合，并调节、调整、改动、改变或改善CD46蛋白对一个或多个生理学途径的影响的化合物。在本发明的所选的实施例中，CD46调节剂可包含CD46自身或其片段，所述CD46自身或其片段呈分离形式或与其他部分融合或缔合(例如Fc-CD46、PEG-CD46或与靶向部分缔合的CD46)。在其他所选的实施例中，CD46调节剂可包含CD46拮抗剂，出于本申请案的目的，CD46拮抗剂应视为意指任何识别CD46、与其竞争、与其相互作用、与其结合或与其缔合，并中和、消除、减少、敏化、重新程序化赘生性细胞(包括肿瘤起始细胞)、抑制或控制所述细胞生长的构建体或化合物。在优选的实施例中，本发明的CD46调节剂包含抗CD46抗体或其片段或衍生物，意外地发现其可沉默、中和、减少、降低、消耗、缓和、减弱、重新程序化、消除肿瘤起始细胞或者抑制其繁殖、维持、扩张、增殖赘生性细胞或以别的方式促进赘生性细胞存活、再发、再生和/或转移的能力。
[0011]在一个实施例中，⑶46调节剂可包含人源化抗体，其中所述抗体包含SEQ ID NO:199中所示的重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:201中所示的轻链可变区氨基酸序列。在其他优选的实施例中，本发明将为包含hSCl.N71抗体和可药用载体的组合物的形式。在另一个优选的实施例中，CD46调节剂可包含人源化抗体，其中所述抗体包含SEQ ID NO:203中所示的重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:205中所示的轻链可变区氨基酸序列。在其他优选的实施例中，本发明将为包含hSCl.N149抗体和可药用载体的组合物的形式。
[0012]在某些其他实施例中，本发明将包含在施用给受试者后降低肿瘤起始细胞出现率的CD46调节剂。优选地，出现率的降低将使用体外或体内有限稀释分析来测定。在特别优选的实施例中，该分析可用体外有限稀释分析来进行，其包括将活人肿瘤细胞移植进免疫功能降低的小鼠中。或者，有限稀释分析可使用体外限制稀释分析来进行，其包括将活人肿瘤细胞限制稀释沉积于体外集落支持条件中。在任一种情况下，出现率降低的分析、计算或定量将优选包括使用泊松分布统计来提供精确计算。应当理解，虽然这类定量方法是优选的，但诸如流式细胞术或免疫组织化学之类的其他劳动密集度较小的方法也可用于提供所需的值，因此将它们明确地设想为处于本发明的范围内。在这类情况下，出现率的降低可使用流式细胞检测分析或对已知用于富集肿瘤起始细胞的肿瘤细胞表面标记物的免疫组织化学检测来测定。
[0013]因此，在本发明的另一个优选的实施例中，包含治疗CD46相关障碍的方法，该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的CD46调节剂，由此降低肿瘤起始细胞的出现率。此外，肿瘤起始细胞出现率的降低将优选使用体外或体内有限稀释分析来测定。
[0014]就此而言，应当理解本发明至少部分基于如下发现:⑶46多肽与涉及多种瘤形成(neoplasia)的病因的肿瘤 永续细胞(即癌症干细胞)缔合。更具体地讲，本专利申请意外地证明，施用多种例示性CD46调节剂可减少、抑制或消除肿瘤起始细胞的致瘤信号传导(即降低肿瘤起始细胞出现率)。这种信号传导减少，无论是通过减少或消除或重新程序化或沉默肿瘤起始细胞还是通过修饰肿瘤细胞形态(例如，诱导的分化、小生境破坏)实现，均继而通过抑制致瘤、肿瘤维持、扩张和/或转移和再发而更有效地治疗CD46相关障碍。在其他实施例中，所公开的调节剂可干扰、抑制或以其他方式延缓CD46介导的可刺激肿瘤生长的信号传导。另外，如下文更详细论述的，CD46多肽密切涉及补体途径。使用本文所述的新型CD46调节剂干预该途径，可通过不止一种机制(即肿瘤起始细胞减少和补体破坏)进一步改善所述障碍以提供附加效应或协同增强效应。
[0015]因此，本发明的另一个优选的实施例包括治疗有需要的受试者中的CD46介导的障碍的方法，所述方法包括向该受试者施用CD46调节剂的步骤。在尤其优选的实施例中，⑶46调节剂将与抗癌剂缔合(例如缀合)。此外，受试者肿瘤组织与正常的相邻组织相比较，无论是表现出CD46水平升高还是CD46水平降低或受到抑制，都可实现这种破坏和附带有益效果。
[0016]还应当理解，可以对本发明的⑶46调节剂进行加工和选择以与⑶46分子的单种异型物(isoform)或所选的一些异型物(即剪接变体)反应，或者相反，可包括泛CD46调节剂，所述泛CD46调节剂可与CD46异型物中的一些或全部反应或缔合。更具体地讲，如本文所公开的以及下面实例中所述的，可生成优选的调节剂如抗体并对其进行选择，使得它们可与单种剪接变体展现的结构域(例如，在特定的外显子接合点处)反应，或与多种或全部⑶46异型物中保守的结构域(例如外显子1-6)反应。这对于本发明是重要的，因为如以下实例5中所示，某些剪接变体已被发现优选在TIC上表达，且可充当可提供致瘤细胞出现率的选择性降低和/或癌症干细胞群体的消耗的治疗标靶。
[0017]因此，在一个所选的实施例中，本发明包括泛CD46调节剂。在其他所选的实施例中，本发明包括可免疫特异性地与一种或多种剪接变体缔合的CD46调节剂。优选的是，所述剪接变体可选自⑶46D、⑶46F和⑶46J。因此，在另外其他实施例中，本发明包括治疗有需要的受试者的方法，该方法包括施用治疗有效量的泛CD46调节剂。再其他的实施例包括治疗有需要的受试者的方法，该方法包括施用治疗有效量的可与一或多种剪接变体免疫特异性缔合的CD46调节剂。
[0018]本发明的其他方面利用到所公开的调节剂潜在破坏多个致癌存活途径而同时沉默肿瘤起始细胞的能力。这类多活性CD46调节剂(例如CD46拮抗剂)当与护理标准抗癌剂或减积剂组合使用时可证明尤其有效。另外，根据本发明教导，可组合使用两种或更多种CD46拮抗剂(例如特异性结合CD46上的两个分立表位的抗体)。此外，如下文相当详细论述的，本发明的CD46调节剂可在缀合或未缀合状态下且任选作为致敏剂与多种化学或生物学抗癌剂组合使用。
[0019]因此，本发明的另一优选的实施例包括敏化受试者的肿瘤以用抗癌剂进行治疗的方法，该方法包括向该受试者施用CD46调节剂的步骤。在本发明的一个特别优选的方面，CD46调节剂将特异性地引起肿瘤起始细胞出现率降低，如使用体外或体内有限稀释分析所测定的。
[0020]类似地，因为本发明的化合物可通过多种生理学机制发挥治疗有益效果，所以本发明还涉及所选的经特定加工以利用某些细胞过程的效应剂或调节剂。例如，在某些实施例中，可对优选的调节剂进行工程改造以与肿瘤起始细胞表面上或附近的CD46缔合并刺激受试者的免疫应答。在其它实施例中，调节剂可包含针对这样的表位的抗体，该表位可中和CD46活性并增加肿瘤微环境中可影响信号传导的CD46底物的浓度。在另外其他实施例中，所公开的调节剂可通过消耗或消除CD46相关细胞而起作用。因此，重要的是认识到，本发明并不限于任何特定作用模式，而是涵盖任何能实现所需结果的方法或CD46调节剂。
[0021]在该框架内，所公开的实施例的优选实施例是涉及治疗患有赘生性障碍的受试者的方法，该方法包括施用治疗有效量的至少一种中和性CD46调节剂的步骤。
[0022]其他实施例涉及治疗患有CD46相关障碍的受试者的方法，该方法包括施用治疗有效量的至少一种消耗性CD46调节剂的步骤。
[0023]在又另一个实施例中，本发明提供维持疗法的方法，其中在设计用于移除至少一部分肿瘤块的初始程序(例如化疗、放疗或手术)后施用所公开的效应剂一段时间。这类治疗方案可施用数周的时间、数月的时间或甚至数年的时间，其中CD46调节剂可预防性地起作用以抑制转移和/或肿瘤再发。在另外其他实施例中，所公开的调节剂可与已知的减积方案配合施用以预防或延缓转移。[0024]除上述治疗性用途外，还应当理解本发明的调节剂可用于诊断CD46相关障碍，尤其是过度增殖障碍。因此，一个优选的实施例包括诊断有需要的受试者中的过度增殖障碍的方法，该方法包括如下步骤:
[0025]a.从所述受试者获得组织样品；
[0026]b.使该组织样品与至少一种⑶46调节剂接触；以及
[0027]c.检测或定量与样品缔合的⑶46调节剂。
[0028]结合本申请案可容易领悟这类方法，且容易使用诸如自动读板仪、专用报告系统等之类的一般可用的商业技术来进行这类方法。在其他优选的实施例中，该检测或定量步骤将包括肿瘤起始细胞出现率的降低以及对其的检测。此外，有限稀释分析可如先前上文所提及进行，且将优选使用泊松分布统计来提供关于出现率降低的精确计算。
[0029]类似地，本发明还提供可用于诊断和监测诸如癌症之类的⑶46相关障碍的试剂盒。为此，本发明优选提供可用于诊断或治疗CD46相关障碍的制品，该制品包括含有CD46调节剂的容器和关于使用所述CD46调节剂治疗或诊断该CD46相关障碍的说明书。
[0030]本发明的其他优选的实施例也利用所公开的调节剂的性质，作为可用于通过诸如突光激活细胞分选(FACS)或激光介导的分区(laser mediated sectioning)之类的方法对肿瘤起始细胞的群体或亚群进行鉴别、分离、分区或富集的手段。
[0031]因此，本发明的另一个优选的实施例涉及对肿瘤起始细胞群体进行鉴别、分离、分区或富集的方法，该方法包括使所述肿瘤起始细胞与CD46调节剂接触的步骤。
[0032]上文为概述，因此必然简化、概括和省略细节；因此，本领域技术人员应了解，该概述仅是示例性的而并非意图以任何方式限制。本文所述的方法、组合物和/或装置和/或其他主体的其他方面、特征和 优点将在本文所述的教导中变得显而易见。提供该概述来以简化形式介绍下文在“【具体实施方式】”中进一步描述的一系列概念。该概述既无意于确定要求保护的主题的关键特征或基本特征，也无意于用于辅助判定要求保护的主题的范围。
【专利附图】
【附图说明】
[0033]图1A和IB分别绘出了来自直肠结肠癌患者、乳腺癌患者或非小细胞肺癌患者的实体瘤样本上的CD46表达的流式细胞术数据(图1A)和来自结肠直肠癌细胞、胰腺癌细胞、乳腺癌细胞、非小细胞肺癌细胞、骨髓癌细胞、卵巢癌细胞和头颈部癌细胞的源于患者的非传统异种移植肿瘤样本上的CD46表达的流式细胞术数据(图1B)。
[0034]图2提供了散点图，示出了使用细胞表面标记⑶46、上皮表面抗原(ESA)、⑶66c和CD324对肿瘤起始细胞的流式细胞术富集；
[0035]图3A-C示出了流式细胞术和荧光激活细胞分选(FACS)数据，通过在非传统异种移植模型中进行系列继代证明了 CD46hi细胞的肿瘤永续能力；
[0036]图4A-C图示了伊立替康对CD46hi肿瘤永续细胞在结肠直肠癌中的出现率的影响；
[0037]图5A-C示出了结肠直肠癌肿瘤永续细胞、肿瘤祖细胞和非致瘤细胞中的CD46剪接变体异型物表达；
[0038]图6示出了定量实时PCR数据，其说明了本体结肠直肠肿瘤细胞群体中的CD46外显子用法；[0039]图7A-C是分别显示结肠直肠正常相邻细胞和肿瘤细胞中的CD46蛋白的表达(图7A)、神经内分泌亚型和非神经内分泌亚型的胰腺正常相邻细胞和肿瘤细胞中的⑶46蛋白的表达(图7B)以及卵巢正常相邻细胞和肿瘤细胞中的CD46蛋白的表达(图7C);
[0040]图8A-C是示出了含有外显子10的⑶46剪接变体分别在如下细胞中的表达的示意图:结肠直肠正常相邻细胞和肿瘤细胞(图8A)、神经内分泌亚型和非神经内分泌亚型的胰腺正常相邻细胞和肿瘤细胞(图8B)以及卵巢正常相邻细胞和肿瘤细胞(图8C);
[0041]图9A和9B示意图说明了⑶46抗体内化进K562细胞中(图9A)并通过能够内化与阜草素毒素缀合的抗小鼠二抗的小鼠单克隆抗CD46抗体杀灭K562细胞(图9B);
[0042]图10A-R提供了十八种分立的抗CD46抗体的重链和轻链可变区的核酸和氨基酸序列，所述抗CD46抗体如本文实例中所描述进行分离和克隆；
[0043]图1lA和IlB是表格形式的图示，分别示出了如本文实例中描述分离和克隆的十八种分立CD46调节剂的遗传排列方式及如Chothia等人定义的重链和轻链CDR序列；
[0044]图12A 和 12B 图示了 ELISA 数据，显示了抗 CD46 抗体 SC1.N122 和 SC1.N29 与 CD46的各区域的结合(图12A)以及抗⑶46抗体SC1.N29与各⑶46外显子的结合(图12B)；
[0045]图13A和13B分别示出了 hSCl.N71的重链可变区的核酸和氨基酸序列(SEQ IDNO:198和SEQ ID NO:199)和轻链可变区的核酸和氨基酸序列(SEQ ID NO:200和SEQ IDNO:201)(图13A)以及hSCl.N149的重链可变区的核酸和氨基酸序列(SEQ ID NO:202和SEQ ID NO:203)和轻链可变区的核酸和氨基酸序列(SEQ ID NO:204和SEQ ID NO:205)，其中如Kabat等人定义的CDR序列标有下划线；
[0046]图14以表格形式提供了十二种分立⑶46调节剂的免疫化学特性；
[0047]图15A-15C示出了鼠抗体SC1.N71 (图15A)和人源化抗体衍生物hSCl.N71 (图15B)对四个不同浓度的抗原的亲和力测量结果，并提供了表格形式的总结，包括测量值(图 15C)；
[0048]图16A和16B分别示出了使用所公开的调节剂产生的标准曲线和在从健康受试者和患有各种瘤形成的患者获得的样品中测量并从标准曲线外推得到的可溶性CD46的血浆浓度；
[0049]图17是描绘所公开的CD46调节剂充当靶向剂的能力的图示，其通过使用与皂草素缀合的链霉亲和素介导细胞死亡。
[0050]图18A和18B示出了所公开的⑶46调节剂与细胞表面上表达的⑶46缔合的能力(图18A)以及介导0046*^细胞的细胞死亡的能力，同时慢病毒诱导的CD46_A°相对免疫(图18B)；
[0051]图19A和19B显示本发明的⑶46调节剂可介导链霉亲和素-ZAP缀合物的受体依赖的摄入和内化，其中在不存在调节剂时观察到相对低的杀灭(图19A)，并且显示所公开的调节剂有效介导在不同肿瘤类型中的杀灭(图19B);以及
[0052]图20A和20B示出了 CD46调节剂使癌症干细胞化学致敏的能力，其中图20A示出了所公开的调节剂与对照相比的效果，图20B证明与单独的化学疗法相比CD46调节剂可延缓肿瘤再发以及延长无进展生存期。
【具体实施方式】[0053]1.引言
[0054]在广泛意义上，本发明的实施例涉及新型CD46调节剂及其在治疗、管理、改善过度增殖障碍(包括癌症)或预防过度增殖障碍(包括癌症)的发生中的用途。不希望受任何特定理论的束缚，已发现所公开的调节剂可有效减少或延缓肿瘤生长以及消除或中和致瘤细胞以及改变这类细胞对抗癌剂的敏感性。另外，还令人惊奇地发现，所选的肿瘤永续细胞(TPC)与称为⑶46的蛋白质之间还存在迄今未知的表型关联。就这一点而言，已经发现，当与正常组织比较时以及当与一起构成实体瘤的大部分的肿瘤祖细胞(TProg)和非致瘤(NTG)细胞比较时，所选的TPC (即癌症干细胞或CSc)可表达升高水平的CD46，包括特异性剪接变体。因而，在所选的实施例中，⑶46包含肿瘤相关标记物(或抗原)且已发现可提供这样的物质，该物质能有效用于检测、敏化和/或抑制TPC以及由与所选的细胞的表面相关的或肿瘤微环境中的该蛋白质水平升高所引起的相关瘤形成。更具体地讲，甚至更出人意料地，鉴于⑶46被明显分泌(至少在一定程度上)，已进一步发现⑶46调节剂(包括FC-CD46构建体和免疫反应性拮抗剂(如该蛋白质的抗体))可用于在患者中消耗、敏化、消除、减少、重新程序化这些肿瘤永续细胞、促进其分化或以别的方式阻止或限制其扩散和/或继续刺激肿瘤生长或再发的能力。
[0055]在优选的实施例中，本发明的CD46调节剂将包含核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸、肽或多肽。如上文提及和下文更详细论述的，本文公开的所选的实施例将包含CD46的缀合或非缀合形式的抗体。CD46调节剂的其他实施例将优选包含CD46或其形式、变体、衍生物或片段，包括例如⑶46融合构建体(如⑶46-Fc、⑶46-靶向部分等)或⑶46-缀合物(如CD46-PEG、CD46-细胞毒性剂等)。在另外其他实施例中，调节剂可在遗传水平上起作用且可包含如反义构建体、siRNA、miRNA等之类的化合物。上述⑶46调节剂可通过竞争机理、激动或拮抗所选的途径或者消除或消耗特定细胞(包括非TPC支持细胞)来削弱肿瘤永续细胞的生长、增殖或存活和/或相关瘤形成，这例如取决于CD46的形式或者给药形式(dosing)及递送方法。
[0056]根据这些发现，本领.域的技术人员将理解，本发明特别优选的实施例很大程度上涉及CD46调节剂及它们在降低肿瘤起始细胞出现率中的用途。如本文中将充分论述的，与本发明相容的CD46调节剂广泛包括任何与CD46缔合、结合、复合或以别的方式反应或竞争且任选地导致肿瘤永续细胞出现率降低的化合物。本文所公开的例示性调节剂包含核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸、肽或多肽。在某些优选的实施例中，所选的调节剂将包含CD46的抗体或其免疫反应性片段或衍生物。这种抗体可以是本质上是拮抗性的或激动性的。在其他优选的实施例中，与本发明相容的效应剂将包含CD46构建体，该构建体包含CD46本身或其反应性片段。应了解，这类⑶46构建体可包含融合蛋白且可包括来自其他多肽(例如免疫球蛋白、钉肽(stapled peptide)或生物应答修饰剂)的反应性结构域。在另外其他的优选方面，CD46效应剂或调节剂将包含在基因组水平上发挥所需效应的核酸组件。与本发明教导相容的另外其他调节剂将在下文详细论述。
[0057]在一个相关方面，下文的论述是关于⑶46调节剂、⑶46拮抗剂和抗⑶46抗体。虽然下文提供每个术语的更详细定义，但应当理解，这些术语对于本公开的目的在很大程度上是可互换的，而不应当狭义地解释，除非上下文中指明。例如，如果对⑶46拮抗剂表达一种看法，则其也适用于本发明的那些恰巧是拮抗性的抗体。相似地，术语⑶46调节剂明确包括所公开的CD46拮抗剂和抗CD46抗体，且对后者的提及也适用于调节剂，除非上下文排除这个适用。
[0058]I1.CD46
[0059]⑶46也称为膜辅因子蛋白或MCP。它是广泛表达的I型跨膜蛋白，但由于选择性外显子剪接和糖基化而具有多种异型物。最近Karosi等人，Laryngoscope (《喉镜》)118:1669-1676 (2008年9月)报道检测了该分子的十四种异型物，将该文献以引用的方式全文并入本文。从位于染色体lq32的单个基因转录出mRNA并经历广泛的选择性剪接而产生编码多种蛋白质异型物的多个转录物。构成该基因的14个外显子中，看起来外显子1-6是所有CD46蛋白异型物中保守的，而外显子7至9编码以不同程度被利用的富含丝氨酸-苏氨酸-脯氨酸(“STP”)的区域，从而引起这些蛋白质异型物中的主要超可变性。外显子11和12编码CD46的跨膜区，而外显子13和14编码该蛋白质的胞质内尾部。最长的mRNA转录物即变体A(NM_002389)含有来自该基因全部十四个外显子的序列。据信外显子7、8、9和13的可变剪接产生CD46的十四种异型物中的大多数，其中主要观察到的66和56kDa的蛋白质异型物因选择性包括或不包括外显子8而形成。选择性地包括/不包括外显子13可导致该分子的胞质内尾部的编码序列的改变，这提示这些改变会影响该蛋白质的亚细胞运输、稳定性以及信号传导性质。
[0060]如Karosi等人中所述，CD46mRNA异型物D包含CD46基因的外显子1_6、8_12和14 (等同于序列NM_153826，其编码蛋白质NP_722548)，异型物F包含外显子1_6、9_12和14 (等同于序列NM_172353，其编码NP_758863)，异型物J包含外显子1_6、8、10-12和14 (等同于序列NM_172356，其编码NP_758866)。更具体地讲，⑶46分子包含四个N末端短共有重复序列(SCR)模块(“Sushi”结构域:4个半胱氨酸，呈1-3，2-4键拓扑结构)，其中这些SCR结构域由该基因的前六 个外显子编码。SCR2、3和4模块具有C3b/C4b结合和调节活性(下文中论述)，而SCRl模块和SCR4末端序列对于补体调节功能不是必需的。由选择性利用的外显子7-9以及外显子10编码的近膜的细胞外序列被大量糖基化，主要通过O-连接碳水化合物糖基化。
[0061]为了本公开的目的，术语“CD46”应视为意指上文刚说明的任何蛋白质，包括任何剪接变体或其免疫反应性片段以及任何编码这类蛋白质、剪接变体或片段的核酸序列，除非上下文另外指出。因而，如本文中所论述的，“CD46标记物”应广泛地包括任何构成或编码CD46的可检测的蛋白质、肽或核酸序列。在优选的实施例中，CD46标记物将包含全长糖蛋白(变体a)或其剪接变体或免疫反应性片段。甚至更优选地，⑶46蛋白标记物将存在于所选的致瘤细胞群体的细胞表面。在其他优选的实施例中，CD46标记物将包含编码全长CD46、其剪接变体或片段的核酸序列(如DNA或mRNa)。
[0062]就上述变体而言，还应当理解，可以对本发明的⑶46调节剂进行加工和选择以与CD46分子的单种异型物(即剪接变体)或所选的一些异型物反应，或者相反，可包括泛⑶46调节剂，所述泛⑶46调节剂可与⑶46异型物中的一些或全部反应或缔合。更具体地讲，如本文所公开的以及下面实例中所述的，可生成所公开的调节剂如抗体并对其进行选择，使得它们与单种剪接变体展现的结构域(例如，在特定的外显子接合点处)反应或与多种或全部⑶46异型物中保守的结构域(例如外显子1-6)反应。这对于本发明是重要的，因为如以下实例5中所示，某些剪接变体已被发现优选在TIC上表达，且可充当可提供致瘤细胞出现率的选择性降低和/或癌症干细胞群体的消耗的治疗标靶。
[0063]在任何情况下，已将多种生物学功能归因于CD46，其中许多涉及免疫系统的调节。CD46的一个主要免疫调节功能涉及调节补体以保护宿主细胞免受作为高等真核生物先天性免疫应答的一部分的补体蛋白的损害。具体地讲，CD46是因子I所介导的补体蛋白C3b和C4b的蛋白水解切割的辅因子。已证实其可活化C3转化酶(将C3b切割成无活性片段的分子)，从而防止不当的补体活化。除了其在先天性免疫中的作用外，CD46还调节获得性免疫应答。通过CD46进行的信号传导会引起T细胞的增殖，以及向特定类别的调节性T细胞(称为Trl)的分化，以产生大量的IL-10 (—种抗炎细胞因子)为特征。此外，由于精子表达高水平的CD46，已提出CD46参与繁殖，也许是参与精子与卵母细胞的融合。CD46还似乎在胎盘中高度表达，且可起到保护胎儿免受母体的免疫排斥的作用。
[0064]还进一步证实⑶46在大多数正常人细胞上遍在表达，红细胞例外。例如，有报道称在上皮细胞中强表达，在淋巴细胞和内皮细胞中适度表达，在其他细胞如破骨细胞、骨细胞、间质细胞和肌肉细胞中弱表达。由于其普遍表达,多种人病原体已进化出策略来利用CD46作为受体或共受体用于与细胞结合作为感染的前体。这些病原体包括人疱疫病毒6、麻疹病毒、腺病毒的一些血清型和来自奈瑟氏菌属(Neisseria)家族的共生菌的致病种。某些逆转录病毒据信可通过在其表面上带有CD46模拟物来规避补体介导的免疫(Stoiber等人，Molecular Immunology (《分子免疫学》)2005 ;Saifuddin 等人,J Gen Virol (《普通病毒学杂志》)，1997) ο
[0065]还已将⑶46与多种疾病相关联，包括自体免疫障碍如多发性硬化症(MS)。MS是一种慢性炎性疾病，其中自体免疫应答攻击隔离神经元轴突的髓鞘蛋白，导致髓鞘脱失和随后这些细胞传导受损，结果是神经紊乱和缺陷。MS会导致脑和脊髓的白质的结疤(硬化)。它是一种复杂的疾病，病因错综复杂，由免疫、遗传和环境因素构成，尽管已探索了数种机理，但对MS发病机制的理解还远未完成。由于CD46在调节T细胞免疫和炎症中的作用，因此据信其参与MS发病机制。更具体地讲，最近的数据已证实，CD46在多发性硬化症中欠缺或受损，在这些患者中IL-1O的产生受到严重削弱。这个L-1O的产生的缺少可能参与在多发性硬化症患者中观察到的炎症(A.L.Astier, Immunology (《免疫学》)，2008年6月；124⑵:149-154，将其以引用的方式并入本文)。在一些情形中，有可能是自身反应性抗CD46抗体在损害该分子的正常功能。在这些抗体充当调节剂(如本发明描述的那些调节剂)的意义上，它们在本发明的范围内并因此可以使用。
[0066]⑶46除了存在于正常细胞上以外，其在某些癌症中的表达水平可能升高。例如，已报道在如下癌症中CD46表达升高:乳腺癌(Thorsteinsson等人，APMIS106 =869-78(1998)；Hofman 等人,Breast Cancer Res.Treat.(《乳腺的研究和治疗》)32:213-9 (1994));结肠/结肠直肠癌(Andrew等人，Cancer Res.(《癌症研究》)50:5225-30 (1990) ;Koretz等人，Br.J.Cancer (《英国癌症杂志》)68:926-31 (1993) ; Juhl 等人，J.Surg.0ncol.(《外科肿瘤学杂志》)64:222-30 (1997) ;Bjorge 等人，Cancer Immunol.1mmunother.(《癌症免疫学及免疫疗法》)42:185-92(1996));肺癌(Varsano等人，Clin.Exp.1mmunol.(《临床和实验免疫学》)113:173-82(1998) ;Varsano 等人，Am.J.Respir.Cell.Mol.Bio1.(《美国呼吸系统细胞和分子生物学杂志》)19:522-9(1998));卵巢癌(Bjorge等人，Int.J.Cancer (《国际癌症杂志》)70:14-25(1997));肾癌(Blok等人，Lab.1nvest.(《实验室研究》)80:335-44(2000) ;Gorter 等人，Lab.1nvest.(《实验室研究》)74:1039-49 (1996))；胰腺癌(Juhl等人，J.Surg.0ncol.(《外科肿瘤学杂志》)64:222-30 (1997));和前列腺癌(Jarvis等人，J.Allergy Clin.1mmunol (《过敏症与临床免疫学杂志》)99 (N0.1,PART2):S215(1997) ；Liu, Cancer Res.(《癌症研究》)60:3429-3434 (2000));还可参见 PCTW002/18948 ；PCT W001/88537。
[0067]自从对该蛋白首次描述时，就已生产了⑶46的多种抗体。这些抗体包括:E4.3 (CD46-SCR1), Sparrow 等人，Hum Tmmunol (《人类免疫学》)1983 7:I ;M177(CD46-SCR2)，Seya 等人，J Immunol (《免疫学杂志》)1990 145:238;J4/48 (CD46-SCR1)，Pesando 等人，J Immunol (《免疫学杂志》)1986 137:3689;GB24 (CD46-SCR3/4), Hsi 等人，Am J Reprod Tmmunol Microbiol (《美国生殖免疫学和微生物学杂志》)198818:21 ；H316 (CD46-SCR1)，Stem 等人，J Immunol (《免疫学杂志》)1986137:1604 ；MH61 (CD46-SCR3)，Okabe 等人，Fertil Steril (《生育与不育》)199054:1121 ；TRA-2-10(CD46-SCRl)，Cho 等人，Clin Exp Immunol (《临床和实验免疫学》)1991 83:257;MCI20.6(CD46-SCR1)，Naniche 等人，J Virol(《病毒学杂志》)199367:6025 ; 158.2A5，Vilella等人；197.2B1, Vilella等人；和MPA7，美国专利N0.7，744，878，将上述参考文献每一者以引用方式并入本文。一般参见Loveland等人，Prot Rev,网址为:http://prow.nc1.nih.gov/guide/2027814670g.htm。对于上述列表中的许多抗体,提供了反应性短共同重复结构域(SCR)。
[0068]II1.肿瘤起始细朐
[0069]与现有技术的任何教导形成对比的是，本发明提供尤其可用于靶向肿瘤起始细胞以及特别是肿瘤永续细胞，从而有利于治疗、管理或预防赘生性障碍的CD46调节剂。更具体而言，如先前所指出，已意外地发现，特定肿瘤细胞亚群表达CD46且很可能修改对癌症干细胞自我更新及细胞存活很重要的形态发生素信号传导的局部协调(localizedcoordination)。因此,在优选.的实施例中，根据本发明的教导⑶46的调节剂可用于降低肿瘤起始细胞出现率，从而有利于治疗或管理过度增殖性疾病。
[0070]如本文中所使用，术语肿瘤起始细胞(TIC)涵盖肿瘤永续细胞(TPC ;即癌症干细胞或CSC)与高度增殖性肿瘤祖细胞(称为TProg) 二者，其通常一起构成本体肿瘤或肿块的独特亚群(即0.1-40% )。出于本发明的目的，术语肿瘤永续细胞和癌症干细胞是等同的且可在本文中互换使用。另一方面，TPC与TProg不同，因为其可完全重演存在于肿瘤内的肿瘤细胞的组成，且如通过连续移植(经由小鼠继代两次或两次以上)低数目的分离细胞所证实的，具有无限制自我更新能力。如下文将更详细论述的，使用适当细胞表面标记物的荧光活化细胞分选(FACS)为一种分离高度富集细胞亚群(> 99.5%纯度)的可靠方法，其至少部分归因于其区分单细胞与细胞团(即成对细胞等)的能力。使用这类技术已证实，当将低细胞数目的高度纯化TProg细胞移植进免疫功能降低小鼠中时，其可刺激初次移植物中肿瘤生长。然而,不同于经纯化的TPC亚群，TProg产生的肿瘤并不完全反映亲本肿瘤的表型细胞异质性且在重新起始后续移植物中的连续致瘤方面明确无效。相比的下，TPC亚群完全重构亲本肿瘤的细胞异质性且当连续分离和移植时可有效起始肿瘤。因此，本领域技术人员会认识到，尽管TPC与TProg 二者均可在初次移植物中产生肿瘤，但二者之间的明确差异在于TPC具有在以低细胞数目连续移植后持久刺激异源肿瘤生长的独特能力。表征TPC的其他常见方法涉及形态、细胞表面标记物的检查、转录谱和药物反应，不过标记物表达可随培养条件和体外细胞系继代而变。 [0071]因此，出于本发明的目的，像支持正常组织中的细胞层次的正常干细胞一样，肿瘤永续细胞优选由其无限自我更新而同时维持多谱系分化潜能的能力来限定。因此，肿瘤永续细胞能够产生致瘤子代(即肿瘤起始细胞=TP(^PTPiOg)和非致瘤(NGT)子代二者。如本文所使用，非致瘤细胞(NGT)是指由肿瘤起始细胞产生、但自身不能自我更新或产生构成肿瘤的肿瘤细胞异质谱系的肿瘤细胞。在实验上，NTG细胞不能在小鼠中可再现地形成肿瘤，即使是在以过量细胞数目移植时也不能。
[0072]如所指出，TProg由于其有限的在小鼠中产生肿瘤的能力而被归类为肿瘤起始细胞(或Tic)。TProg为TPC的子代且通常能够进行有限次数的非自我更新细胞分裂。此外，TProg细胞可进一步分裂成早期肿瘤祖细胞(ETP)和晚期肿瘤祖细胞(LTP)，其每一者均可由表型(例如细胞表面标记物)和重演肿瘤细胞架构的不同能力来区分。尽管存在这类技术性差异，但ETP和LTP 二者在功能上也与TPC不同，因为它们当以低细胞数目移植时其一般不太能够连续重构肿瘤，且它们通常不反映亲本肿瘤的异质性。虽然存在上述区别，但也已证实各种TProg群体在极少数情况下可获得通常归于干细胞的自我更新能力且自身变成TPC (或CSC)。在任何情况下，两种类型的肿瘤起始细胞均很可能在单个患者的典型肿瘤块中呈现，且用如本文所公开的调节剂进行治疗。也就是说，不管在肿瘤中所呈现的特定实施例或混合体(mix)如何，所公开的组合物一般可有效降低这类CD46阳性肿瘤起始细胞的出现率或改变其化学敏感性。
[0073]在本发明的上下文中，与构成肿瘤本体的TProg (ETP和LTP 二者)、NTG细胞和浸润肿瘤的非TPC来源细胞(例如成纤维细胞/基质细胞、内皮细胞和造血细胞)相比，TPC更具致瘤性，相对更静止且通常更具化学抗性。鉴于常规疗法和方案在很大程度上已被设计成既使肿瘤减积又攻击快速增殖的细胞，TPC很可能比增殖较快的TProg和其他本体肿瘤细胞群体对常规疗法和方案更具抗性。此外，TPC常常表达使其对常规疗法具有相对化学抗性的其他特征，例如多重抗药性转运蛋白的表达增加、DNA修复机制增强和抗凋亡蛋白增强。这些性质(每一者均有助于TPC的耐药性)构成标准肿瘤学治疗方案无法确保大部分晚期瘤形成患者长期受益的关键原因；即无法充分地靶向以及去除那些刺激持续肿瘤生长和再发的细胞(即TPC或CSc)。
[0074]不同于许多上述现有技术的治疗方案，不管所选的调节剂的形式或特异性标靶(例如遗传物质、CD46或CD46配体)如何，本发明的新型组合物优选在施用给受试者后都降低肿瘤起始细胞的出现率。如上文所述，肿瘤起始细胞出现率的降低可因如下原因而发生:a)消除、消耗、敏化、沉默或抑制肿瘤起始细胞；b)控制肿瘤起始细胞的生长、扩张或再发；c)中断肿瘤起始细胞的起始、繁殖、维持或增殖；或d)以其他方式阻碍致瘤细胞的存活、再生和/或转移。在一些实施例中，肿瘤起始细胞出现率的降低因一个或多个生理学途径的变化而发生。途径的变化，无论是通过减少或消除肿瘤起始细胞还是通过修改其潜力(例如诱导的分化、小生境破坏)或以其他方式干扰其对肿瘤环境或其他细胞发挥影响的能力来实现的，均继而使得可以通过抑制致瘤、肿瘤维持和/或转移和再发而更有效地治疗⑶46相关障碍。
[0075]可用于评估这种肿瘤起始细胞出现率降低的方法包括体外或体内有限稀释分析，优选随后使用泊松分布统计进行计算，或评估预定的明确事件(例如能否在体内产生肿瘤)的出现率。虽然这种有限稀释分析是计算肿瘤起始细胞出现率降低的优选方法，但其他要求较低的方法尽管精确度略小也可用于有效测定所需值，且完全与本文教导相符。因此，如本领域技术人员将理解的，通过熟知的流式细胞计数手段或免疫组织化学手段测定出现率值的降低也是可能的。对于所有上述方法，参见例如Dylla等人，2008，PMCID:PMC2413402&Hoey等人，2009，PMID =19664991 ;将上述参考文献每一者以引用方式全文并入本文。
[0076]关于有限稀释分析，肿瘤起始细胞出现率的体外计算可通过将分级分离或未分级分离的人肿瘤细胞(例如分别来自经处理和未经处理的肿瘤)沉积进能促进集落形成的体外生长条件中来完成。以此方式，集落形成细胞可通过对集落进行简单计数和表征来计算，或通过由例如将人类肿瘤细胞的连续稀释物沉积于板中并在平板接种后至少10天评定各孔是集落形成阳性还是阴性所组成的分析来计算。体内有限稀释实验或分析(一般而言其测定肿瘤起始细胞出现率的能力更精确)涵盖例如将来自未经处理的对照或经处理的条件的人肿瘤细胞的连续稀释物移植于免疫功能降低小鼠中，随后在移植后至少60天评定各小鼠是肿瘤形成阳性还是阴性。通过体外或体内有限稀释分析推导细胞出现率值，优选是通过将泊松分布统计应用于阳性和阴性事件的已知出现率，从而得出满足阳性事件(在这个情况下分别为集落或肿瘤形成)定义的事件的出现率来进行。
[0077]关于与本发明相容的可用于计算肿瘤起始细胞出现率的其他方法，最常见方法包括可定量流式细胞计数技术和免疫组织化学染色程序。尽管不如上文刚刚描述的有限稀释分析技术精确，但这些程序的劳动密集度小得多且可在相对短的时间范围内提供合理的值。因此，应当理解，技术人员可使用利用一或多种抗体或试剂的流式细胞术细胞表面标记物谱测定，从而测量多种样品的TIC水平，所述抗体或试剂可结合本领域公认的已知用于富集肿瘤起始细胞的细胞表面蛋白(例如下文实例I中所述的潜在相容的标记物)。在又一个相容的方法中，本领域技术人员可通过免疫组织化学计算原位(例如组织切片中)TIC出现率，其中所述免疫组织化学使用一种或多种能够结合据信可区分这些细胞的细胞表面蛋白的抗体或试剂。
[0078]使用任一上文提及的方法于是有可能对根据本文教导由所公开的CD46调节剂提供的TIC(或其中的TPC)出现率的降低进行定量。在一些情况下，本发明的化合物可使TIC出现率降低(通过上文所述的多种机制，包括消除、诱导的分化、小生境破坏、沉默等)1 %、15 %、20 %、25 %、30 %或甚至35 %。在其他实施例中，TIC出现率的降低可为约40 %、45 %、50 %、55 %、60 %或65 %。在某些实施例中，所公开的化合物可使TIC的出现率降低70%、75%、80%、85%、90%或甚至95%。当然，应当理解TIC出现率的任何降低很可能会导致瘤形成(neoplasia)的致瘤性、持续性、再发性和侵袭性相应降低。
[0079]IV.CD46 调节剂
[0080]在任何情况下，本发明涉及CD46调节剂(包括CD46拮抗剂)用于诊断、治疗和/或预防多种CD46相关恶性肿瘤中的任一者的用途。所公开的调节剂可单独使用或与多种抗癌化合物(例如化学治疗剂或免疫治疗剂或生物响应修饰剂)结合使用。在其他所选的实施例中，可将两种或更多种分立的CD46调节剂组合使用以提供增强的抗赘生性作用或可用于制造多特异性构建体。[0081]在某些实施例中，本发明的CD46调节剂将包含核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸、肽或多肽。甚至更优选地，调节剂将包含可溶性CD46(sCD46)或其形式、变体、衍生物或片段，包括例如⑶46融合构建体(如⑶46-Fc、⑶46靶向部分等)或⑶46-缀合物(如⑶46-PEG、⑶46-细胞毒性剂、⑶46-brm等)。还应当理解，在其他实施例中，⑶46调节剂包含抗体(如抗CD46单克隆抗体)或其免疫反应性片段或衍生物。在尤其优选的实施例中，本发明的调节剂将包含中和抗体或其衍生物或片段。在其他实施例中，CD46调节剂可包含内化抗体。在另外其他实施例中，CD46调节剂可包含消耗性抗体。此外，与上述融合构建体一样，这些抗体调节剂可与所选的细胞毒性剂、聚合物、生物响应修饰剂(BRM)或其类似物缀合、键联或以其他方式缔合以，提供具有各种(以及任选多种)作用机制的定向免疫疗法。在另外其他实施例中，调节剂可在遗传水平上起作用且可包含如反义构建体、siRNA、微RNA等诸如此类的化合物。
[0082]还应当理解，所公开的CD46调节剂可通过多种机制消耗或消除或抑制肿瘤细胞(尤其是TPC)的生长、繁殖或存活和/或相关瘤形成，包括激动或拮抗所选的途径或消除特定细胞，这取决于例如CD46调节剂的形式、任何相关的有效负载或剂量和递送方法。因此，虽然本文所公开的优选的实施例涉及消耗、抑制或沉默特定肿瘤细胞亚群(例如肿瘤永续细胞)，但必须强调这类实施例仅为示例性的而不在任何意义上具有限制性。相反，如随附权利要求书中所述的，本发明广义地涉及CD46调节剂及其用于治疗、管理或预防多种CD46介导的过度增殖性障碍的用途，不管任何具体机制或靶标肿瘤细胞群体。
[0083]在相同意义上，本发明所公开的实施例可包含一种或多种⑶46拮抗剂。为此，应当理解，本发明的CD46拮抗剂可包含能识别CD46蛋白或其片段、与它们反应、与它们结合、与它们组合、与它们竞争、与它们缔合或以其他方式与它们相互作用，且消除、沉默、减少肿瘤起始细胞或其他赘生性细胞(包括本体肿瘤或NTG细胞)、抑制、阻碍、制止或控制它们的生长的任何配体、多肽、肽、融合蛋白、抗体或其免疫活性片段或衍生物。在所选的实施例中，⑶46调节剂包含⑶46拮抗剂。
[0084]如本文中所使用的，拮抗剂是指这样的分子，其能够中和、阻断、抑制、去除、降低或干扰特定或指定蛋白质的活性，包括受体与配体的结合或酶与底物的相互作用。更一般而言，本发明的拮抗剂可包含抗体及其抗原结合片段或衍生物、蛋白质、肽、糖蛋白、糖肽、糖脂、多糖、寡糖、核酸、反义构建体、siRNA、miRNA、生物有机分子、肽模拟物、药剂以及它们的代谢物、转录和翻译控制序列等等。拮抗剂也可包括小分子抑制剂、融合蛋白、受体分子及衍生物(它们特异性结合至蛋白质，从而隔离其与其底物标靶的结合)、蛋白质的拮抗性变体、针对蛋白质的反义分子、RNA适体以及针对蛋白质的核糖酶。
[0085]在本文所用且应用于两个或更多个分子或化合物的术语“识别”或“特异性识别”应认为意指分子的共价或非共价反应、结合、特异性结合、组合、缔合、相互作用、连接、键联、联合、聚结、合并或接合，从而一个分子对另一个分子施加影响。
[0086]此外，如本文实例中所证明的，人⑶46的一些调节剂可在某些情况下与来自非人物种(如鼠类)的CD46发生交叉反应。在其他情况下，例示性的调节剂可对人CD46的一种或多种异型物具有特异性且不会表现出与来自其他物种的CD46直向同源物的交叉反应性。
[0087]在任何情况下，本领域的技术人员将理解，所公开的调节剂可以缀合或未缀合的形式使用。也就是说，调节剂可与药物活性化合物、生物响应修饰剂、细胞毒性剂或细胞生长抑制剂、诊断部分或生物相容修饰剂缔合或与它们缀合(例如以共价或非共价形式)。就此而言，应当理解这类缀合物可包含肽、多肽、蛋白质、融合蛋白、核酸分子、小分子、模拟剂、合成药物、无机分子、有机分子和放射性同位素。此外，如上文所指出的，所选的缀合物可以各种摩尔比共价或非共价键联至⑶46调节剂，这至少部分取决于用来实现缀合的方法。
[0088]V.杭体
[0089]a.概沭
[0090]如先前所提及的，本发明的尤其优选的实施例包括抗体形式的CD46调节剂。本文中的术语“抗体”以最广泛意义使用且具体涵盖合成抗体、单克隆抗体、寡克隆或多克隆抗体(polyclonal antibody)、多克隆抗体(multiclonal antibody)、重组产生的抗体、胞内抗体、多特异性抗体、双特异性抗体、单价抗体、多价抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、灵长源化抗体、Fab片段、F (ab')片段、单链FvFc (ScFvFc)、单链Fv (scFv)、抗独特型(抗-1d)抗体和任何其他免疫活性抗体片段，只要它们表现出所需生物活性(即CD46缔合或结合)即可。在更广泛意义上，本发明的抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性片段，即含有抗原结合位点的分子，其中这些片段可与或不与另一免疫球蛋白结构域(包括但不限于Fe区或其片段)融合。此外，如本文更详细地叙述的，术语“抗体”具体包括如下文所述的Fe变体，包括全长抗体和包含Fe区的变体Fe融合物或其片段，任选包含至少一个氨基酸残基修饰且与免疫球蛋白的免疫活性片段融合。
[0091]如下文将更详细论述的，通用术语“抗体”或“免疫球蛋白”包含五种不同类别的抗体，它们可以生物化学方法进行区分，且根据它们的重链恒定域的氨基酸序列可容易归类为适当类别。出于历史原因，完整抗体的主要类别称为IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。在人中，根据结构和某些生化性 质，IgG类别和IgA类别可进一步分为公认的亚类(同种型)，即IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。应当理解，人中的IgG同种型按照其在血清中的丰度顺序来命名，其中IgGl最丰富。
[0092]虽然所有五种类别的抗体(即IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)和所有同种型(即IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)以及其变异形式均在本发明的范围内，但将仅出于示例的目的相当详细地论述包含IgG类免疫球蛋白的优选实施例。然而应当理解，该公开内容仅说明例示性组合物和实施本发明的方法，而不以任何方式限制本发明或随附权利要求书的范围。
[0093]就此而言，人IgG免疫球蛋白包含两条分子量为大约23，000道尔顿的相同多肽轻链和两条分子量为53，000-70，000 (取决于同种型)的相同重链。对应于不同类别抗体的重链恒定域分别由相应小写希腊字母α、δ、ε、Y及μ表示。来自任何脊椎动物物种的抗体的轻链可根据其恒定域的氨基酸序列而归属于被称为K和λ的两种明显不同类型之一。本领域技术人员应当理解，不同类别免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的。
[0094]该四条链以Y构型通过二硫键接合，其中轻链括住重链，重链在Y的开口开始且贯穿可变区到达Y的两个末端。每条轻链通过一个共价二硫键键与重链连接，而铰链区中的两个二硫键接合重链。各个重链和轻链也具有规则间隔的链内二硫桥，其数目可根据IgG的同种型而变。[0095]每条重链在一端具有可变域(Vh)，随后是多个恒定域。每条轻链在一端具有可变域(\)且在其另一端具有恒定域；轻链恒定域与重链的第一恒定域对齐，且轻链可变域与重链可变域对齐。就此而言，应当理解，轻链部分的可变域(\)和重链部分的可变域(Vh)二者决定抗原识别和特异性。相反，轻链恒定域(Q)和重链恒定域(Ch1、Ch2*Ch3)赋予并调节重要的生物学性质，如分泌、经胎盘运动性(transplacental mobility)、循环半衰期、补体结合等等。按照惯例，恒定区结构域的编号随着其逐渐远离抗体的抗原结合位点或氨基末端而增加。因此，抗体的氨基末端或N端构成可变区，羧基末端或C端构成恒定区。因此，Ch3域和Q域实际上分别包含重链和轻链的羧基末端。[0096]术语“可变”是指这样的事实:在各种免疫球蛋白当中，可变域的某些部分在序列上相差很大，并且这些热点(hot spot)在很大程度上限定了特定抗体的结合和特异性特征。这些高变位点自身表现于分别在轻链和重链可变域二者中的三个称为互补决定区(CDR)的区段中。在CDR旁侧的可变域的更高保守性部分称为构架区(FR)。更具体地讲，在天然存在的单体IgG抗体中，抗体每个臂上存在的六个CDR为短的非邻接氨基酸序列，这些氨基酸在抗体在含水环境中呈现其三维构型时经专门定位而形成抗原结合位点。
[0097]构成重链和轻链可变域的其余部分的构架区在氨基酸序列方面显示较小的分子间可变性。相反，构架区主要采取β片层(β-sheet)构象，且⑶R形成连接β片层结构并在一些情况下构成β片层结构的一部分的环(loop)。因此，这些构架区起到形成可使六个CDR通过链间非共价相互作用以正确取向进行定位的骨架(scaffold)的作用。由经定位的CDR形成的抗原结合位点限定与免疫反应性抗原(即CD46)上的表位互补的表面。这个互补表面能促进抗体与免疫反应性抗原表位的非共价结合。应当理解，CDR的位置可容易由本领域普通技术人员鉴别。
[0098]如下文更详细论述的，重链和轻链可变区的全部或部分可使用标准的重组和表达技术进行重组或工程改造以提供有效的抗体。也就是说，来自第一抗体的重链或轻链可变区(或其任何部分)可与来自第二抗体的重链或轻链可变区的任何选定部分混合和匹配。例如，在一个实施例中，包含第一抗体的三个轻链⑶R的整个轻链可变区可与包含第二抗体的三个重链⑶R的整个重链可变区配对以提供有效抗体(operative antibody)。此外，在其他实施例中，可将来源于各种抗体的单独重链和轻链CDR混合和匹配以提供具有优化的特征的所需抗体。因此，例示性抗体可包含来自第一抗体的三个轻链CDR、来源于第二抗体的两个重链⑶R和来自第三抗体的第三重链⑶R。
[0099]更具体地讲，在本发明的内容中，应当理解可根据本发明教导将图1lB中所公开的重链和轻链CDR中的任一者以这个方式重新排列以提供优化的抗CD46 (如抗CD46)抗体。
[0100]在任何情况下，互补决定区残基编号可定义为Kabat等人(1991，NIH出版号91-3242，弗吉尼亚州斯普林菲尔德的美国国家技术信息服务局(National TechnicalInformation Service, Springfield, Va.))的那些编号，具体而言，轻链可变域中为残基24-34 (CDRl)、50-56 (CDR2)和 89-97 (CDR3)，重链可变域中为 31-35 (CDRl)、50-65 (CDR2)和95-102(⑶R3)。注意，各⑶R在抗体之间差别很大(且根据定义不会表现出与Kabat共有序列具有同源性)。构架残基的最大比对通常需要在编号系统中插入间隔残基才能用于Fv区。另外，任何给定的Kabat位点编号处的某些单独残基的种类(identity)可因物种间或等位基因分歧而在抗体链之间有差异。另参见Chothia等人，J.Mol.Biol.(《分子生物学杂志》)196:901-917(1987)以及MacCallum等人，J.Mol.Biol.(《分子生物学杂志》)262:732-745(1996)，其中定义包括彼此比较时氨基酸残基的重叠或子集。上述参考文献中的每一者以引用的方式全文并入本文中，并且示出涵盖上面所引用的参考文献每一者所定义的⑶R的氨基酸残基以供比较。
[0101]CDR 定 SI
[0102]
【权利要求】
1.一种分离的⑶46调节剂。
2.根据权利要求1所述的分离的CD46调节剂，其中所述CD46调节剂包含CD46拮抗剂。
3.根据权利要求1所述的分离的CD46调节剂，其中所述CD46调节剂包含抗体或其免疫反应性片段。
4.根据权利要求3所述的分离的CD46调节剂，其中所述抗体或其免疫反应性片段包含单克隆抗体。
5.根据权利要求4所述的分离的CD46调节剂，其中所述单克隆抗体选自嵌合抗体、人源化抗体和人抗体。
6.根据权利要求4所述的分离的CD46调节剂，其中所述单克隆抗体包含具有三个互补决定区的轻链可变区和具有三个互补决定区的重链可变区，其中所述重链和轻链互补决定区包含图1lB中所示的互补决定区。
7.根据权利要求6所述的分离的CD46调节剂，其中所述单克隆抗体是人源化抗体。
8.根据权利要求4所述的分离的CD46调节剂，其中所述单克隆抗体包含轻链可变区和重链可变区，其中所述轻链可变区包含与选自SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:45、SEQ IDNO:49、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:69、SEQID NO:73,SEQ ID NO:77、SEQ ID N0:81和SEQ ID NO:85中所示氨基酸序列的氨基酸序列具有至少60%同一性的氨 基酸序列，并且其中所述重链可变区包含与选自SEQ ID NO:15,SEQ ID NO:19, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO:3USEQ ID NO: 35, SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:59、SEQ IDNO:63, SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:71、SEQID NO:75, SEQ ID NO:79 和 SEQ ID NO:83 中所示氨基酸序列的氨基酸序列具有自身60%同一性的氨基酸序列。
9.一种核酸，所述核酸编码根据权利要求8所述的氨基酸重链可变区或氨基酸轻链可变区。
10.一种载体,所述载体包含根据权利要求9所述的核酸。
11.一种人源化抗体，所述抗体衍生自根据权利要求8所述的单克隆抗体。
12.根据权利要求1所述的分离的CD46调节剂，所述调节剂包含来自CD46变体A的氨基酸序列或其片段。
13.根据权利要求12所述的分离的CD46调节剂，其中所述CD46调节剂还包含免疫球蛋白恒定区的至少一部分。
14.根据权利要求1所述的分离的CD46调节剂，其中所述调节剂在施用给受试者后降低肿瘤起始细胞的出现率。
15.根据权利要求14所述的分离的CD46调节剂，其中所述出现率的降低是使用对已知用于富集肿瘤起始细胞的肿瘤细胞表面标记物的流式细胞术分析或对已知用于富集肿瘤起始细胞的肿瘤细胞表面标记物的免疫化学检测来测定。
16.根据权利要求14所述的分离的CD46调节剂，其中所述出现率的降低是使用体外或体内有限稀释分析来测定。
17.根据权利要求16所述的分离的CD46调节剂，其中所述出现率的降低是使用体内有限稀释分析来测定的，所述体内有限稀释分析包括将活的人肿瘤细胞移植进免疫能力降低的小鼠中。
18.根据权利要求17所述的分离的CD46调节剂，其中所述出现率的降低是使用体内有限稀释分析来测定的，所述体内有限稀释分析包括用泊松分布统计对肿瘤起始细胞出现率进行定量。
19.根据权利要求16所述的分离的CD46调节剂，其中所述出现率的降低是使用体外有限稀释分析来测定的，所述体外有限稀释分析包括将活的人肿瘤细胞有限稀释沉积进体外集落支持条件中。
20.根据权利要求19所述的分离的CD46调节剂，其中所述出现率的降低是使用体外有限稀释分析来测定的，所述体外有限稀释分析包括用泊松分布统计对肿瘤起始细胞出现率进行定量。
21.根据权利要求14所述的分离的CD46调节剂，其中所述肿瘤起始细胞包含肿瘤永续细胞。
22.—种治疗CD46相关障碍的方法，所述方法包括施用治疗有效量的CD46调节剂给有需要的受试者。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述CD46调节剂包含CD46拮抗剂。
24.根据权利要求22所述的方法，其中所述CD46调节剂包含抗体或其免疫反应性片段。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述抗体或其免疫反应性片段包含单克隆抗体。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述单克隆抗体选自嵌合抗体、人源化抗体和人抗体。
27.根据权利要求25所述的方法，其中所述单克隆抗体包含具有三个互补决定区的轻链可变区和具有三个互补决定区的重链可变区，其中所述重链和轻链互补决定区包含图1lB中所示的互补决定区。
28.根据权利要求25所述的方法，其中所述单克隆抗体包含轻链可变区和重链可变区，其中所述轻链可变区包含与选自SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:25,SEQ IDNO:29, SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:49、SEQID NO:53、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:85中所示氨基酸序列的氨基酸序列具有至少60%同一性的氨基酸序列，并且其中所述重链可变区包含与选自SEQ ID NO: 15, SEQ IDNO:19、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:39、SEQID NO:43、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:7U SEQ ID NO:75, SEQ IDNO:79 和 SEQ ID NO:83 中所示氨基酸序列的氨基酸序列具有自身60 %同一性的氨基酸序列。
29.根据权利要求25所述的方法，其中所述单克隆抗体包含泛CD46抗体。
30.根据权利要求25所述的方法，其中所述单克隆抗体与一种或多种CD46剪接变体免疫特异性缔合。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述一种或多种CD46剪接变体包含选自CD46D、CD46F和CD46J的剪接变体。
32.根据权利要求22所述的方法，其中所述过度增殖障碍包含赘生性障碍。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述赘生性障碍包含实体瘤。
34.根据权利要求32所述的方法，其中所述赘生性障碍包含肾上腺癌、膀胱癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胰腺癌、前列腺癌或乳腺癌。
35.根据权利要求22所述的方法，所述方法还包括降低肿瘤起始细胞在所述受试者中的出现率的步骤。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述出现率的降低是使用对已知用于富集肿瘤起始细胞的肿瘤细胞表面标记物的流式细胞术分析来测定的。
37.根据权利要求35所述的方法，其中所述出现率的降低是使用对已知用于富集肿瘤起始细胞的肿瘤细胞表面标记物的免疫化学检测来测定。
38.根据权利要求35所述的方法，其中所述出现率的降低是使用体外或体内有限稀释分析来测定。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述出现率的降低是使用体内有限稀释分析来测定的，所述体内有限稀释分析包括将活的人肿瘤细胞移植进免疫能力降低的小鼠中。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述出现率的降低是使用体内有限稀释分析来测定的，所述体内有限稀释分析包括用泊松分布统计对肿瘤起始细胞出现率进行定量。
41.根据权利要求38所述的方法，其中所述出现率的降低是使用体外有限稀释分析来测定的，所述体外有限稀释分析 包括将活的人肿瘤细胞有限稀释沉积进体外集落支持条件中。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述出现率的降低是使用体外有限稀释分析来测定的，所述体外有限稀释分析包括用泊松分布统计对肿瘤起始细胞出现率进行定量。
43.根据权利要求22所述的方法，所述方法还包括施用抗癌剂的步骤。
44.根据权利要求22所述的方法，其中所述CD46调节剂包含CD46变体A或其片段。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述CD46调节剂还包含免疫球蛋白恒定区或其片段。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述CD46调节剂包含融合蛋白。
47.根据权利要求22所述的方法，所述方法还包含施用第二CD46调节剂的步骤，其中所述第二⑶46调节剂与所述⑶46调节剂不同。
48.一种在有需要的受试者中降低肿瘤起始细胞的出现率的方法，所述方法包括施用CD46调节剂给所述受试者的步骤。
49.根据权利要求48所述的方法，其中所述肿瘤起始细胞包含肿瘤永续细胞。
50.根据权利要求49所述的方法，其中所述肿瘤永续细胞包含一种或多种标记物。
51.根据权利要求48所述的方法，其中所述CD46调节剂包含CD46拮抗剂。
52.根据权利要求48所述的方法，其中所述CD46调节剂包含抗体。
53.根据权利要求52所述的方法，其中所述抗体包含单克隆抗体。
54.根据权利要求48所述的方法，其中所述受试者患有选自肾上腺癌、膀胱癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胰腺癌、前列腺癌和乳腺癌的赘生性障碍。
55.根据权利要求48所述的方法，其中所述肿瘤起始细胞的出现率降低至少10%。
56.根据权利要求48所述的方法，其中所述出现率的降低是使用对已知用于富集肿瘤起始细胞的肿瘤细胞表面标记物的流式细胞术分析来测定的。
57.根据权利要求48所述的方法，其中所述出现率的降低是使用对已知用于富集肿瘤起始细胞的肿瘤细胞表面标记物的免疫化学检测来测定。
58.根据权利要求48所述的方法，其中所述出现率的降低是使用体外或体内有限稀释分析来测定。
59.根据权利要求58所述的方法，其中所述出现率的降低是使用体内有限稀释分析来测定的，所述体内有限稀释分析包括将活的人肿瘤细胞移植进免疫能力降低的小鼠中。
60.根据权利要求59所述的方法，其中所述出现率的降低是使用体内有限稀释分析来测定的，所述体内有限稀释分析包括用泊松分布统计对肿瘤起始细胞出现率进行定量。
61.根据权利要求58所述的方法，其中所述出现率的降低是使用体外有限稀释分析来测定的，所述体外有限稀释分析包括将活的人肿瘤细胞有限稀释沉积进体外集落支持条件中。
62.根据权利要求61所述的方法，其中所述出现率的降低是使用体外有限稀释分析来测定的，所述体外有限稀释分析包括用泊松分布统计对肿瘤起始细胞出现率进行定量。
63.一种敏化受试者中的肿瘤以便用抗癌剂治疗的方法，所述方法包括施用CD46调节剂给所述受试者的步骤。
64.根据权利要求63所述的方法，其中所述CD46调节剂是抗体。
65.根据权利要求63 所述的方法，其中所述肿瘤是实体瘤。
66.根据权利要求63所述的方法，其中所述抗癌剂包含化学治疗剂。
67.根据权利要求63所述的方法，其中所述抗癌剂包含生物剂。
68.一种在有需要的受试者中诊断过度增殖障碍的方法，所述方法包括如下步骤: 从所述受试者获得组织样品； 使所述组织样品与至少一种CD46调节剂接触；以及 检测或定量与所述样品缔合的所述CD46调节剂。
69.根据权利要求68所述的方法，其中所述CD46调节剂包含单克隆抗体。
70.根据权利要求69所述的方法，其中所述抗体与报告分子有效缔合。
71.一种可用于诊断或治疗CD46相关障碍的制品，所述制品包括含有CD46调节剂的容器和关于使用所述CD46调节剂治疗或诊断所述CD46相关障碍的说明书。
72.根据权利要求71所述的制品，其中所述CD46调节剂是单克隆抗体。
73.根据权利要求72所述的制品，其中所述容器包含可读板。
74.一种治疗患有包含实体瘤的赘生性障碍的受试者的方法，其中所述方法包括施用治疗有效量的与一种或多种CD46剪接变体免疫特异性缔合的CD46调节剂的步骤。
75.根据权利要求74所述的方法，其中所述一种或多种CD46剪接变体包含选自CD46D、CD46F和CD46J的剪接变体。
76.根据权利要求74所述的方法，其中所述CD46调节剂包含拮抗剂。
77.根据权利要求74所述的方法，其中所述CD46调节剂包含抗体。
78.根据权利要求77所述的方法，其中所述抗体包含单克隆抗体。
79.根据权利要求74所述的方法，其中所述赘生性障碍选自肾上腺癌、膀胱癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胰腺癌、前列腺癌和乳腺癌。
80.一种治疗患有赘生性障碍的受试者的方法，所述方法包括施用治疗有效量的至少一种与细胞毒性剂缔合的CD46调节剂。
81.根据权利要求80所述的方法，其中所述CD46调节剂与所述细胞毒性剂缀合。
82.根据权利要求81所述的方法，其中所述CD46调节剂包含抗体。
83.根据权利要求82所述的方法，其中所述抗体包含单克隆抗体。
84.根据权利要求80所述的方法，其中所述赘生性障碍选自肾上腺癌、膀胱癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胰腺癌、前列腺癌和乳腺癌。
85.一种对肿瘤起始细胞群体进行鉴别、分离、分区或富集的方法，所述方法包括使所述肿瘤起始细胞与CD46调节剂接触的步骤。
86.根据权利要求82所述的方法，其中所述CD46调节剂包含抗体。
87.根据权利要求83所述的方法，其中所述抗体包含单克隆抗体。
88.根据权利要求82所述的方法，所述方法还包括将所述肿瘤起始细胞进行流式细胞术分析的步骤。
89.根据权利要求85所述的方法，其中所述流式细胞术分析包括FACS。
90.一种耗尽患有过度增殖障碍的患者中的肿瘤起始细胞的方法，所述方法包括施用⑶46调节剂的步骤。
91.根据权利要求90所述的方法，其中所述CD46调节剂包含单克隆抗体。
92.根据权利要求91所述的方法，其中所述单克隆抗体与细胞毒性剂缔合。
93.根据权利要求92所述的方法，其中所述单克隆抗体是泛CD46抗体。
94.根据权利要求92所述的方法，其中所述单克隆抗体与单种CD46剪接变体免疫特异性缔合。
95.根据权利要求94所述的方法，其中所述单种CD46剪接变体包含选自CD46D、CD46F和⑶46J的剪接变体。
96.一种包含人源化抗体的⑶46调节剂，其中所述抗体包含实质上如SEQ ID NO:199中所示的重链可变区氨基酸序列和实质上如SEQ ID NO:201中所示的轻链可变区氨基酸序列。
97.一种组合物，所述组合物包含hSCl.N71抗体和可药用载体。
98.一种包含人源化抗体的⑶46调节剂，其中所述抗体包含实质上如SEQ ID NO:203中所示的重链可变区氨基酸序列和实质上如SEQ ID NO:205中所示的轻链可变区氨基酸序列。
99.一种组合物，所述组合物包含hSCl.N149抗体和可药用载体。
100.一种在有需要的受试者中抑制或预防转移的方法，所述方法包括施用药学有效量的CD46调节剂的步骤。
101.根据权利要求100所述的方法，其中所述受试者在施用所述CD46调节剂之前或之后进行减积手术。
102.根据权利要求101所述的方法，其中所述减积手术包括施用至少一种抗癌剂。
103.根据权利要求100所述的方法，其中所述受试者在施用CD46调节剂时处于好转期。
104.一种在有需要的受试者中进行维持疗法的方法，所述方法包括施用药学有效量的⑶46调节剂的步骤。
105.根据权利要求104所述的方法，其中所述受试者在施用CD46调节剂之前受过赘生性障碍治疗。
106.根据权利要求104所述的方法，其中所述受试者在施用所述CD46调节剂时无所述赘生性障碍的症状。
107.根据权利要求105所述的方法，其中所述CD46调节剂在所述受试者受过所述赘生性障碍治疗之后超过六个月施用。
108.根据权利要 求105所述的方法，其中所述CD46调节剂包含单克隆抗体。
【文档编号】C07K16/40GK103476429SQ201180053061
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2011年9月2日 优先权日:2010年9月3日
【发明者】S.J.戴拉, O.富尔德, R.A.斯图尔, W.C.安德森, S.奥施马 申请人:斯坦申特雷克斯公司