专利名称：一种高纯度灯盏花乙素的制备方法
技术领域：
本发明属于天然产物化学领域，具体涉及一种高纯度植物原料药灯盏花乙素的制备方法。
背景技术：
灯盏花是菊科植物短葶飞蓬的干燥全草，又名灯盏细辛，分布在云南、四川、贵州、广西、湖南等地。灯盏花素系从灯盏花中分离出的黄酮类有效成分，其中主要为灯盏花乙素(又名灯盏乙素，野黄芩苷)，化学名为4’5、6_三羟基黄酮-7-0-葡萄糖醛酸苷，目前从市场上购得的灯盏花素原料药经HPLC分析，灯盏花乙素含量在90%左右，临床上广泛用于治疗心脑血管疾病，疗效确切。但其注射液稳定性差，储存时间短，临床上个别患者用后时有冷热反应、皮肤瘙痒、皮疹等现象发生，这些现象的出现主要由于原料药中一些未除去杂质所 致。多年来灯盏花素原料药精制方法一直未能很好的解决，因此有必要研究新的制备方法来解决高纯度灯盏花乙素的工艺问题。关于高纯度灯盏花乙素的工艺问题，中国专利200510010723提出一种制备高纯度灯盏花乙素的方法，将灯盏花素在碱液中溶解，再加入大量的有机溶剂进行沉淀，将沉淀物溶解后加酸析出沉淀，过滤、干燥得到灯盏花乙素，其纯度能达到99%以上，但该方法需要使用酸碱和大量有机溶剂，给环境带来很大的污染，且收率不高，工业化放大困难。
发明内容
为解决上述问题，本公开目的在于提供一种反相层析填料，该填料是交联聚甲基丙烯酸酯均粒微球，其做为柱层析填料床不但利于以水溶液做为流动相分离纯化灯盏花乙素达到高纯度和高产率，
为达到上述目的，本发明的技术方案是采用苏州纳微生物科技公司生产的Uni PMM系列单分散交联聚甲基丙烯酸酯微球树脂作为层析填料。其过程包括将该树脂做为填料装入色谱柱成为固定相。把含有待分离或分析含灯盏花乙素的灯盏花粗品流过该色谱柱，然后再把吸附在Uni PMM系列固定相上的待分离或分析的灯盏花乙素洗脱下来，
具体技术方案如下
一种高纯度灯盏花乙素的制备方法，按照下述步骤进行
(1)色谱柱平衡装柱完成后，用超纯水以每小时f4倍柱体积的流速平衡色谱柱；
(2)样品制备称取灯盏花乙素粗品加入到沸水，搅拌均匀，慢慢滴加精氨酸溶液，控制pH为6. 0 9. 0之间，使样品溶解完全,定各后趁热用滤纸过滤后备用；
(3)上样将步骤(2)得到的样品液，以每小时f4倍柱体积的流速连续流过树脂柱 ，所用树脂体积(L)和灯盏花乙素粗品的重量(g)比为100: f 100:3 ；
(4)洗脱上样结束后继续用去离子水洗脱，然后以每小时f4倍柱体积的速度洗脱，根据UV检测情况分管收集，检测纯度；将纯度合格的收集液合并，得到收集液，减压浓缩得到浸膏；
(5)干燥将所得浸膏冷冻干燥得到灯盏花乙素，其纯度大于99%。其中步骤(I)中优选为2倍柱体积每小时的流速的流速平衡色谱柱；
其中步骤(2)中优选pH值为8.0，
其中步骤(2)中所述的灯盏花乙素粗品纯度80、2%，
其中步骤(2)中所述的灯盏花乙素粗品的浓度为l(Tl00mg/ml，
其中步骤(2)中优选为2倍柱体积每小时的流速连续流过树脂柱；
其中步骤(3)中所述的树脂为Uni PMM系列交联聚甲基丙烯酸酯均粒微球树脂；
其中步骤(4)中优选为2倍柱体积每小时的速度洗脱；
采用本技术方案的有益效果是苏州纳微生物科技有限公司生产的Uni PMM系列树脂做为柱层析填料时可以使用去离子水做流动相的对样品进行分离，不需要有机溶剂，且具有极好的选择性，一次操作就可得到99%以上纯度的灯盏花乙素，与现有工艺相比，具有操作简单，效率高，重现性好，容易工业化生产，环境污染小等优点。
具体实施例方式下面通过实施例更详细地说明本发明。但是本发明的范围并不限于这些实施例。实施例I
灯盏花素上样液制备将12g精氨酸溶解在50mL沸水中供调pH使用。称取30g灯盏花素粗品(纯度90. 1%)，加入400mL沸水，搅拌均匀，慢慢滴加精氨酸溶液，控制pH为8. 0，使样品溶解完全，定容至600mL,趁热膜过滤后备用。灯盏花乙素的纯化采用49X460 mm玻璃柱，Uni PMM40-500树脂(苏州纳微生物科技有限公司)为层析填料，装柱体积867 mL，用3倍柱体积超纯水以每小时I倍柱体积的流速平衡色谱柱。取配制的灯盏花素上样液520 mL，以每小时I倍柱体积的流速连续流过树脂柱上样，上样结束后继续用去离子水洗脱，然后以每小时I倍柱体积的速度洗脱，根据UV检测情况分管收集，检测纯度。将纯度合格的收集液合并，得到收集液共300mL，HPLC检测纯度为99. 18%，本次试验灯盏乙素回收率为67. 9%。
实施例2
灯盏花素上样液制备将6g精氨酸溶解在20mL沸水中供调pH使用。称取15g灯盏花素粗品(纯度80%)，加入600mL沸水，搅拌均匀，慢慢滴加精氨酸溶液，控制pH为8. 0，使样品溶解完全，定容至750mL,趁热膜过滤后备用。灯盏花乙素的纯化采用49X460 mm玻璃柱，苏州纳微生物科技有限公司生产的Uni PMM40-500树脂为层析填料，装柱体积867mL，用3倍柱体积的超纯水以每小时4倍柱体积的流速平衡色谱柱。取按配制的灯盏花素上样液433 mL，以每小时4倍柱体积的流速连续流过树脂柱上样，上样结束后继续用去离子水洗脱，然后以4倍柱体积每小时的速度洗脱，根据UV检测情况分管收集，检测纯度。将纯度合格的收集液合并，得到收集液共285mL，添加冰醋酸，使收集液PH为2-3，静止沉淀，过滤，将滤饼在60°C下烘干，得到灯盏乙素干品5. 7g，HPLC检测纯度为99. 51%，本次试验灯盏乙素回收率为70%。
权利要求
1.一种高纯度灯盏花乙素的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行 (1)色谱柱平衡装柱完成后，用超纯水以f4倍柱体积每小时的流速平衡色谱柱； (2)样品制备称取灯盏花乙素粗品加入到沸水，搅拌均匀，慢慢滴加精氨酸溶液，控制pH为6. O 9. O之间，使样品溶解完全,定各后趁热用滤纸过滤后备用； (3)上样将步骤(2)得到的样品液，以f4倍柱体积每小时的流速连续流过树脂柱 ，所用树脂体积(L)和样品的重量(g)比为100: f 100:3 ； (4)洗脱上样结束后继续用去离子水洗脱，然后以f4倍柱体积每小时的速度洗脱，根据UV检测情况分管收集，检测纯度；将纯度合格的收集液合并，得到收集液，减压浓缩得到浸膏； (5)干燥将所得浸膏冷冻干燥得到灯盏花乙素，其纯度大于99%。
2.根据权利要求I所述的一种高纯度灯盏花乙素的制备方法，其特征在于其中步骤(O中优选为2倍柱体积每小时的流速的流速平衡色谱柱。
3.根据权利要求I所述的一种高纯度灯盏花乙素的制备方法，其特征在于其中步骤(2)中pH值为8.0。
4.根据权利要求I所述的一种高纯度灯盏花乙素的制备方法，其特征在于其中步骤(2)中所述的灯盏花乙素粗品纯度80、2%，其中步骤(2)中所述的灯盏花乙素粗品的浓度为l(Tl00mg/ml，其中步骤(2)中以2倍柱体积每小时的流速连续流过树脂柱。
5.根据权利要求I所述的一种高纯度灯盏花乙素的制备方法，其特征在于其中步骤(3)中所述的树脂为UniPMM系列交联聚甲基丙烯酸酯均粒微球树脂。
6.根据权利要求I所述的一种高纯度灯盏花乙素的制备方法，其特征在于其中步骤(4)中以2倍柱体积每小时的速度洗脱。
全文摘要
本发明公开了一种高纯度灯盏花乙素的制备方法，属于天然产物化学领域。其采用均粒聚甲基丙烯酸酯系列树脂为层析填料，使用去离子水做流动相,即可实现对灯盏花乙素的纯化，得到的终产品纯度大于99%。该树脂做为柱层析填料时具有机械强度高，分离效果好等优点，且其流动相为去离子水，与常规柱层析所用有机溶剂相比更加经济，环保。
文档编号C07H1/06GK102659872SQ201210103239
公开日2012年9月12日 申请日期2012年4月11日 优先权日2012年4月11日
发明者万水昌, 吴俊成, 江必旺, 裘金明, 陈荣姬 申请人:苏州纳微生物科技有限公司