一种阳离子重组蛋白的方法
【专利摘要】本发明公开了一种阳离子重组蛋白的方法。步骤如下：首先将需要重组的蛋白用3KDa的膜超滤浓缩后，再用HAC调pH到4.5；Tris-lmmol/LEDTA,pH=7.1分步进行洗脱；平衡、冼脱流速75cm/h，214nm紫外监测仪用PBS缓冲液洗脱，收集洗脱峰；并收集样品进行SDS-PAGE屯泳分析；超声破碎的悬浊菌液13000rpm；分析前可以放入甘氨酸电泳液中3-5分钟；洗脱流速至少达到75cm/h。本发明的有益效果是，实验简单，费用较低，数据准确。
【专利说明】—种阳离子重组蛋白的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种实验方法，具体来说，一种阳离子重组蛋白的方法。
【背景技术】
[0002]质粒是真核细胞细胞核外或原核生物拟核区外能够进行自主复制的遗传单位，包括真核生物的细胞器(主要指线粒体和叶绿体)中和细菌细胞拟核区以外的环状脱氧核糖核酸(DNA)分子。现在习惯上用来专指细菌(大肠杆菌)、酵母菌和放线菌等生物中细胞核或拟核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体(Vector)。许多细菌除了拟核中的DNA外，还有大量很小的环状DNA分子，这就是质粒(plasmid)(补充:部分质粒为RNA)。质粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四环素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些质粒称为附加体(episome)，这类质粒能够整合进真菌的染色体，也能从整合位置上切离下来成为游离于染色体外的DNA分子。质粒在宿主细胞体内外都可复制，通过个些特性，人们可以把一些目的DNA片断构建在质粒中，通过转化入大肠杆菌中，不断的复制，来得到目的产物。这就是转化的目的。
【发明内容】
[0003]为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案:
一种阳离子重组蛋白的方法，步骤如下:首先将需要重组的蛋白用3KDa的膜超滤浓缩后，再用HAC调pH到4.5 ；Tris-lmmol/L EDTA, pH=7.1分步进行洗脱；平衡、冼脱流速75cm/h, 214nm紫外监测仪用PBS缓冲液洗脱，收集洗脱峰；并收集样品进行SDS-PAGE屯泳分析。
[0004]本发明中，超声破碎的悬浊菌液13000rpm。
[0005]本发明中，分析前可以放入甘氨酸电泳液中3-5分钟。
[0006]本发明中，洗脱流速至少达到75cm/h。
[0007]本发明的有益效果是，实验简单，费用较低，数据准确。
【具体实施方式】
[0008]一种阳离子重组蛋白的方法，步骤如下:首先将需要重组的蛋白用3KDa的膜超滤浓缩后，再用HAC调pH到4.5 ；Tris-lmmol/L EDTA, pH=7.1分步进行洗脱；平衡、冼脱流速75cm/h, 214nm紫外监测仪用PBS缓冲液洗脱，收集洗脱峰；并收集样品进行SDS-PAGE屯泳分析。超声破碎的悬浊菌液13000rpm。
[0009]分析前放入甘氨酸电泳液中5分钟。洗脱流速达到75cm/h。
[0010]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本【技术领域】的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种阳离子重组蛋白的方法，其特征在于，步骤如下:首先将需要重组的蛋白用3KDa的膜超滤浓缩后，再用HAC调pH到4.5 ；Tris-lmmol/L EDTA, pH=7.1分步进行洗脱；平衡、冼脱流速75cm/h，214nm紫外监测仪用PBS缓冲液洗脱，收集洗脱峰；并收集样品进行SDS-PAGE屯泳分析。
2.如权利要求1所述的一种阳离子重组蛋白的方法，其特征在于，超声破碎的悬浊菌液 13000rpm。
3.如权利要求1所述的一种阳离子重组蛋白的方法，其特征在于，分析前可以放入甘氨酸电泳液中3-5分钟。
4.如权利要求1所述的一种阳离子重组蛋白的方法，其特征在于，洗脱流速至少达到75cm/h。
【文档编号】C07K1/34GK103613639SQ201310523238
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年10月30日 优先权日:2013年10月30日
【发明者】徐丽 申请人:徐丽