专利名称：等排抗疱疹肽衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有抗疱疹性质的肽衍生物，并涉及使用该衍生物治疗病毒传染的方法。更具体地说，本发明涉及具有抗疱疹病毒活性的肽衍生物(下文称为“肽”)，涉及含有肽的药物组合物以及涉及使用肽以抑制疱疹病毒的复制和治疗病毒感染的方法。
疱疹病毒使人和动物遭受多种疾病，例如，疱疹单纯性病毒，1型和2型(HSV-1和HSV-2)分别引起唇疱疹和生殖器的损害;水痘带状疱疹病毒(VZV)会引起水痘和带状疱疹;非洲淋巴细胞瘤病毒(EBV)会引起传染性单核细胞增多症。
在过去20年来，在研究处置疱疹病毒传染的新治疗剂中，研究人员对已知的如嘌呤和嘧啶核苷类似物一类的化合物予以最大的注意。结果，有几种核苷类似物已开发为抗病毒剂。至今最成功的是无环鸟苷(acyclovir)，它是选为治疗生殖器疱疹单纯性感染的药物。
但是，虽然有一些重要进展，但对用于治疗疱疹病毒感染的有效、安全的治疗剂的需求继续存在。有关这方面的现代治疗剂的述评可参阅M.C.Nahata，“Antiviral DrugsPharmacokinetics，Adverse Effects and Therapeutic Use”，J.Pharm.Technol.，3，100(1987)。
本申请揭示了一组具有抗疱疹病毒活性的肽衍生物。这些肽的抗疱疹病毒的选择作用，与大的安全度相结合，使得这些肽成为抗疱疹病毒所要求的制剂。
下述文献公开了涉及抗疱疹活性的肽或肽衍生物B.M.Dutia等人，Nature，321，439(1986)，E.A.Cohen等人，Nature，321，411(1986)，J.H.Subak-Sharpe等人，UK英国专利申请2185024，7月，8月，1987出版，P.Gaudreau等人，J.Biol.Chem.，262，12413(1987)，E.A.Cohen等人，美国专利4，795，740，1月，3，1989，R.Freidinger等人，美国专利4，814，432，3月，21，1989，V.M.Garskey等人，美国专利4，837，304，6月，6，1989，R.Colonno等人，美国专利4，845，195，7月，4，1989，P.Gaudreau等人，J.Med.Chem.，33，723(1990)，J.Adams等人，欧洲专利申请408，973，1月，23，1991出版，P.L.Beaulieu等人，欧洲专利申请411，332，2月，6，1991出版，J.Adams等人，欧洲专利申请411，333，2月，6，1991出版，J.Adams等人，欧洲专利申请411，334，2月，6，1991出版，R.L.Tolman等人，欧洲专利申请412，595，2月，13，1991出版，W.T.Ashton等人，欧洲专利申请438，873，7月，31，1991出版，P.L.Beaulieu等人，欧洲专利申请461，546，12月，18，1991出版，以及P.Gaudreau等人，J.Med.Chem.，35，346(1992)。
上述文献中的主题肽和本申请的肽可以通过特征的结构和生物学上的不同而区别的。
区别本发明肽和常用的明显结构特征在于取代内在酰胺的酮亚甲基。因而本发明的肽可以认为是酮亚甲基等排物。
下文所用的缩略语和符号的定义列于本申请的“发明详述”的一节中。
本发明的肽，或其治疗上可用盐，可以用通式1表示
其中A是苯基(低级)链烷酰基;在其芳基部分用低级烷基、氨基、卤素、羟基或低级烷氧基单取代的苯基(低级)链烷酰基;用苯基或单取代的苯基双取代的低级链烷酰基，其中，单取代的基选自低级烷基、卤素、羟基和低级烷氧基;或者是｛苯基(低级)烷基｝氨羰基｝;而B是N(CH3)-CHR4(CO)其中R4是低级烷基;或者A和B一起形成通式为R5-NH-C(O)的饱和或未饱和的烷基氨羰基，其中，R5是(2-10C)-烷基、低级环烷基、1-(低级烷基)-(低级环烷基)、1-(2-丙烯)-3-丁烯基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基或1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基;
D是NH-CHR6C(O)，其中R6是低级烷基或用羧基、羟基、巯基或苄氧基取代的低级烷基;
R1是低级烷基、低级环烷基、1-(低级烷基)-(低级环烷基)或NR7R8，其中，R7是氢原子或低级烷基而R8是低级烷基，或R7和R8与其相连的氮原子一起形成吡咯烷代、哌啶子基、吗啉代或4-甲基哌嗪代;R2是氢或低级烷基而R3是低级烷基，或者R2是氢而R3是低级烷烯基或苯基-(1-4C)烷基，或者R2和R3与和其相连的碳原子一起形成低级环烷基;
E是NHR9，其中R9是(4-9C)烷基;低级环烷基;用低级烷基或(低级烷基)-(低级环烷基)单取代或双取代的低级环烷基;或者E是NHNR10-R11，其中R10是氢或低级烷基而R11是(4-9C)烷基;或者E是NHCH(R12)-Z，其中R12是(4-9C)烷基;低级环烷基或(低级环烷基)-(低级烷基)和Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是低级烷基。
本发明的肽或其治疗上可用盐的优选类是用通式1表示的，其中A是苯基(低级)链烷酰基;(4-氨基苯)(低级)-链烷酰基;(4-卤代苯)-(低级)链烷酰基，(4-羟苯基)-(低级)链烷酰基;｛4-(低级烷氧基)苯基｝-(低级)链烷酰基;用苯基、4-卤代苯基或4-(低级烷氧基)苯基双取代的低级链烷酰基，或者苯基(低级)烷基氨羰基;而B是(N-Me)Val，(N-Me)Ile或(N-Me)Tbg;或者A和B一起形成饱和或未饱和的通式为R5-NH-C(O)的烷基氨羰基，其中R5如上所定义的;D是(S)-2-氨基-3-羟基-3-甲丁酸或(R)-2-氨基-3-巯基-3-甲丁酸的氨基酸残基或是选自Val、Ile、Tbg和β-EtNva的氨基酸残基，R1是低级烷基、低级环烷基、1-(低级烷基)-(低级环烷基)、NMe2、NEt2、吡咯烷代或吗啉代;R2和R3如上所定义的;而E是NHR9其中R9是(4-9C)烷基;低级环烷基;以低级烷基单取代或双取代的低级环烷基;或(低级烷基)-(低级环烷基);或E是NHNR10R11，其中R10是氢、甲基或乙基而R11是(4-9C)烷基;或E是NHCH(R12)-Z其中R12是(4-9C)烷基或(低级环烷基)--甲基而Z如上所定义的。
本发明肽或其治疗上可用盐的更优选的系类是以通式1表示的，其中A是苯乙酰基、苯丙酰基、(4-氨苯基)丙酰基、(4-氟苯基)丙酰基、(4-羟苯基)丙酰基、(4-甲氧苯基)丙酰基、2-(苯甲基)-3-苯丙酰基、2-｛(4-氟苯基)甲基｝-3-(4-氟苯基)丙酰基、2-｛(4-甲氧苯基)甲基｝-3-(4-甲氧苯基)丙酰基或苄氨羰基;B是(N-Me)-Val或(N-Me)-Ile;D是Val、Ile或Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、环丁基、环戊基、环己基、1-甲环戊基、NMe2、NEt2、吡咯烷代或吗啉代;R2是氢而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、1，1-二甲乙基、丙基、2-丙烯基或苄基，含有R2和R3的碳原子具有(R)-构型，或R2和R3分别各为甲基或乙基或者R2和R3与和它们相连的碳原子一起形成环丁基、环戊基或环己基;而E是NHR9其中R9是2-甲丙基、2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1，1，2，2-四甲丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲丙基，2-(R，S)-甲丁基、2，2-二甲丁基、3，3-二甲丁基、1(R)，2，2-三甲丁基、1(R)，3，3-三甲丁基、2-乙丁基、2，2-二乙丁基、2-乙基-1(R)-甲丁基、2-乙基-2-甲丁基、1(R)-乙基-3，3-二甲丁基、2，2-二甲戊基顺或反-2-甲环己基、2，2-二甲环己基或环己基甲基;或者E是NHR10R11，其中R10是氢、甲基、或乙基和R11是1，1-二甲乙基;或E是NHCH(R12)-Z1，其中含有R12的碳原子有(S)-构型，R12是1，1-二甲乙基、1-甲丙基、2-甲丙基、2，2-二甲丙基或环己基甲基而Z是CH2OH、C(O)OH、CONH2或C(O)OR13其中R13是甲基、乙基或丙基。
肽或其治疗上可用盐的另外更优选的类是以通式1表示的，其中A和B一起形成饱和或未饱和的烷基氨羰基，它选自丁氨羰基、1-甲乙基氨羰基、1-甲丙基氨羰基、1-乙丙基氨羰基、1，1-二甲丁基氨羰基、1-乙丁基氨羰基、1-丙丁基氨羰基、1-乙戊基氨羰基、1-丁戊基氨羰基、2-乙丁基氨羰基、2-乙戊基氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙丁基氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基、(1-丙环戊基)氨羰基、(1-丙环己基)-氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基和1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基以及D、R1、R2、R3和E都如上面最后情况所定义的。
本发明或其治疗上可用盐的最佳类是通式1表示的，其中A是苯丙酰基、2-(苯甲基)-3-苯丙酰基或苄氨羰基;B是(N-Me)Val;D是Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、环丁基、环戊基、环己基或1-甲环戊基;R2是氢原子和R3是甲基、乙基、1-甲乙基、丙基或苄基，而含有R2和R3的碳原子具有(R)-构型，或R2和R3各分别为甲基或乙基，或R2和R3与和它们相连的碳原子一起形成环丁基、环戊基或环己基;而E是NHR9，其中R9是2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2，2-二甲丁基或1(R)-乙基-3，3-二甲丁基或E是NHCH(R12)-Z，其中含有R12的碳原子有(S)-构型，R12是2，2-二甲丙基而Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是甲基乙基或丙基。
本发明肽或其治疗上可用的盐的另一类最优选的是由通式1表示的，其中A和B一起形成饱和或未饱和的烷基氨羰基，它选自1-乙丙基氨羰基、1-乙丁基氨羰基、1-丙丁基氨羰基、2-乙戊基氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基、(1-丙环戊基)-氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯氨羰基以及1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基;而D、R1、R2、R3和E与最后一种情况中所定义的一样。
在本发明的范围内包括的有一种药用组合物，它含有抗疱疹病毒有效量的通式1的肽，或其治疗上可用盐，以及药物上或兽医上可用载体。
本发明范围内也包括一种化妆组合物，它含有通式1的肽或其治疗上可用盐以及适用于局部使用的生理上可用载体。
本发明的一个重要方面包括通过对哺乳动物施用抗疱疹病毒有效量的本发明通式1的肽或其治疗上可用盐而治疗疱疹病毒感染的一种方法。
另一重要方面包括抑制疱疹病毒复制的方法，它通过将病毒与疱疹病毒核苷酸还原酸抑制量的通式1的肽或其治疗上可用盐相接触。
还有另一方面包括对哺乳动物的疱疹病毒感染的治疗方法，它通过对哺乳动物施用一种抗疱疹病毒有效量的通式1的肽或其治疗上可用盐以及一种抗病毒核苷类似物的混合物。一种含该混合物的药用组合物也属于本发明范围之内。
通式1的肽的制备方法描述于下文。
发明详述或者通式1可描述如下
涉及氨基酸或氨基酸衍生物的术语“残基”是指由相应的α-氨基酸，通过除去羧基的羟基和α-氨基的氢所衍生物的基团。
一般来说，对氨基酸和保护基，本文所用的缩略语是基于生物化学命名法的IUPACIUB委员会所推荐的，参阅European Journal of Biochemistry 138，9(1984)。例如Val、Ile、Asp和Leu分别代表L-缬氨酸、L-异亮氨酸、L-天冬氨酸和L-亮氨酸。
当E是如上所限定的NHCH(R12)-Z时，在通式1的肽的主线性轴(即主链)上的不对称碳原子，(该主链除去端基A和Z(E的)，但含有带“R12”的碳原子)具有S构型。但有例外，对含有CH2C(O)R1的碳原子，其中R1是低级烷基、低级环烷基或1-(低级烷基)-(低级环烷基)和对含有2-巯基烷基支链的碳原子，在当D的R6是上述支链的情况下。对后面两个例外，碳原子有R构型。
当E如上面所定义的是NHR9时，在端基A和在端基E中，存在于氨基酸或衍生氨基酸残基的支链中的不对称碳原子可以有S或R构型。
符号“Me”、“Et”、“Pr”和“Bu”分别代表甲基、乙基、丙基和丁基的烷基基团。
例如符号“MeEt2C”和“EtPr2C”分别代表1-乙基-1-甲丙基和1-乙基-1-丙丁基。
符号“Tbg”代表(S)-2-氨基-3，3-二甲丁酸的氨基酸残基。符号“Cpg”代表(S)-α-氨环戊基乙酸的氨基酸残基。符号“rMeLeu”代表(S)-2-氨基-4，4-二甲戊酸的氨基酸残基。符号“z-Me亮氨醇”代表(S)-2-氨基-4，4-二甲戊醇，并由α-氨基中移去一个氢。符号“β-EtNva”代表(S)-2-氨基-3-乙戊酸的氨基酸残基。
本文所用的其他符号是对(S)-3-甲基-2-(甲氨基)-丁酸的残基是(N-Me)Val;对(S)-3-甲基-2-(甲氨基)-戊酸的残基是(N-Me)Ile;对(S)-2-(甲氨基)-3，3-二甲丁酸的残基是(N-Me)Tbg;对(S)-α-氨基-1-羧环丁烷乙酸的残基是Asp(cyBu);对(S)-α-氨基-1-羧基环戊乙酸的残基是Asp(cyPn);对3-(R)-甲基-L-天冬氨酸(即｛S-(R＊，S＊)｝-2-氨基-3-甲丁二酸)的残基是Asp{(R)-Me};对3-(R)-丙基-L-天冬氨酸(即｛S-(R＊，S＊)｝-2-氨基-3-丙丁二酸)的残基是Asp{(R)-Pr};对3-(R)-烯丙基-L-天冬氨酸(即｛S-(R＊，S＊)｝-2-氨基-3-(2-丙烯基)丁二酸)的残基是Asp{(R)-烯丙基｝。
用于本文的术语“卤素”是指选自溴、氯、氟或碘的卤素基团。
本文所用的术语“(2-10C)烷基”是指含有2～10个碳原子的直链和支链烷基基团，包括乙基、丁基、1-甲丙基、1-乙丙基、1-丙丁基、2-丙戊基等。
本文所用的术语“(4-9C)烷基”是指含有4～9个碳原子的直链和支链烷基基团，包括，如1-甲丙基、2-甲丙基、2，2-二甲丙基、1，2，2-三甲丙基、3，3-二甲丁基、1-乙基-2，2-二甲丁基和4，4-二甲戊基。
本文所用的术语“低级烷基”或单独或与另一基团相连而用时都是指含1-6个碳原子的直链烷基基团和含有3-6个碳原子的支链烷基基团并包括甲基、乙基、丙基、丁基、己基、1-甲乙基、1-甲丙基、2-甲丙基和1，1-二甲乙基。
本文所用的术语“1-(低级烷基)-(低级环烷基)”是指在位1有低级烷基取代基的低级环烷基基团;例如，1-乙环丙基、1-丙环戊基和1-丙环己基。
本文所用的术语“低级环烷基”无论是单独使用或与其它基团结合使用时，都是指含有3-6个碳原子的饱和环烃基团，包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
本文所用的术语“低级链烯基”是指含有2-6个碳原子的直链链烯基和含3-6个碳原子的支链链烯基基团，包括乙烯、1-丙烯、2-丙烯、1-甲基-乙烯基、2-甲基-1-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基和2-丁烯基。
本文所用的术语“低级烷氧基”是指含有1-4个碳原子的直链烷氧基基团和含有3-4个碳原子的支链烷氧基基团，包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、1-甲乙氧基、丁氧基和1，1-二甲乙氧基。最后的基团通常认为是叔丁氧基。
本文所用的术语“苯基-(1-4C)烷基”是指苯烷基团，其中其烷基部分是含有1-4个碳原子的直链或支链烷基，包括苄基、2-苯乙基、3-苯丙基、2-甲基-2-苯乙基｛PhCH(CH3)CH2}、1-乙基-2-苯乙基｛PhCH2CH(C2H5)｝等。
本文所用的术语“低级链烷酰基”或单独使用或与其它基团结合使用，是指1-氧代烷基基团，其中，其1-氧代烷基部分是指含有2-6个碳原子的直链或支链的1-氧代烷基例如乙酰基、丙酰基(1-氧代丙基)和1-氧代-5-甲己基。
本文所用的术语“药物上可用载体”或“兽医上可用载体”是指无毒的、通常为隋性的用于活性组份的赋形剂，它对活性组份没有副作用。
本文所用的术语“生理上可用载体”是指含一个或多个无毒赋形剂的可用的化妆用载体，它不与其中所含的活性组分反应或降低其效力。
本文所用的术语“兽医上可用载体”是指用于对家畜给药的药品物质的生理上可用赋形剂，包括一种或多种无毒药物上可用赋形剂，它与药品物质不反应或降低其效力。
术语“有效量”是指抗病毒剂的预定抗病毒的剂量，也就是制剂的量足以有效地抵抗体内病毒有机体。
本文所用的术语“偶合剂”是指一种制剂，它能够引起氨基酸或肽游离羧基与另一个氨基酸或肽的游离氨基脱水偶合而在反应物之间形成酰胺键。同样，这样的制剂能实施酸和醇的偶合而形成相应的酯并通过活化羧基基团促进并便于脱水偶合。这种偶合剂和活化基团描述于肽化学的普通教科书中;例如，E.Schroeder和K.L.Lubke，“The Peptides”Vol 1.Academic Press，New York，N.Y.1965，pp2～128，和K.D.Kopple，“Peptides and Aminoacids”，W.A.Benjamin，Inc.New York，N.Y.1966，pp33～51。偶合剂的实例有二苯磷酰叠氮化物、1，1′-羰基二咪唑、二环己基碳化二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺或1-羟基-苯并三唑，并在有二环己基碳化二亚胺存在情况下使用。一种很有实效和有用的偶合剂是(苯并三唑-1-基氧)三(二甲氨基)-磷鎓六氟磷酸盐，它描述于B.Castro等人的文章Tetrahedron Letters，1219(1975)，也可参阅D.Hudson，J.Org.Chem，53，617(1988)，或就其本身，或在1-羟基苯并三唑存在下进行。还有另一个极有效和有用的偶合剂是商购的2-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲脲鎓四氟硼酸盐。
通式1的肽的制备方法，其中可结合肽合成中所常用的方法，例如，氨基酸残基和/或肽碎片的经典的溶液偶合。这种方法描述于，如，上述的E.Schroder和K.Luke，教科书系“The PeptidesAnalysis，Synthesis，Biology”，E.Gross等人编辑，Academic Press，New York，N.Y.1979-1987，Vol 1-8，和J.M.Stewart和J.D.Young的“Solid Phase Peptide Synthesis”，2nd ed.Pierce Chem Co.，Rockford，IL，USA，1984。
上述肽制备方法的一般特征是用合适的保护基团，保护各种氨基酸残基或衍生物的氨基酸残基(或者，如有必要，肽的非肽碎片)的可反应的侧链基团，所述合适的保护基团将阻止在该位点上发生的化学反应直到保护基团最后除去。当整体在羧酸基反应时也通常保护在氨基酸或碎片上的α-氨基基团，接着选择性地除去α-氨基保护基团，以使在该位点上进行其后的反应。另一个共同特征是用一个合适的保护基团初步保护氨基酸残基或肽碎片的C-端羧基，如有的话，它是成为肽的C-端官能基，该合适的保护基团将阻止在该位点上发生的化学反应直到所要求的肽的顺序已装配后除去保护基团。
通式Ⅰ的肽的主要中间体是通式2的中间体
其中W是α-氨基保护基，如叔丁基氧羰基(Boc)，苄氧羰基(Z)或芴-9-基甲氧羰基(Fmoc)，而D和R1如上所限定的。化合物的制备可通过将通式W-D-CH2C(O)OCH2CH＝CH2的烯丙酯以迈克尔法加到通式为(低级烷基)-OC(O)CH＝CHC(O)R1的芴衍生物中，以得到通式为W-D-CH{C(O)OCH2CH＝CH2}CH{CH2C(O)R1}C(O)O-(低级烷基)的迈克尔加成化合物。
此后，将后者化合物用四重三苯膦的钯化合物和三苯膦，在有吡咯烷存在下，按照R.De′ziel的方法(Tetrahedron Letter，28，4371(1987)，进行处理而实施水解，然后将稀丙酯脱羧基而得到主中间体的相应烷基酯。将后者酯在有碱，如氢氧化钠或氢氧化锂的存在下进行水解而得到作为主中间体的非对映异构体的混合物。
或者，通式2的主中间体中，W和D如上面最后情况下所定义的，而R1是NR7R8，其中R7和R8各为低级烷基或R7和R8和与它们相连的氮原子一起形成吡咯烷代、哌啶子基、吗啉代或4-甲基哌嗪代，其制备方法如下将上面提及的通式W-D-CH2C(O)OCH2CH＝CH2(其中W和D如本文所定义的)的烯丙酯与通式BzlOC(O)CH＝CHC(O)OBzl{(E)-2-丁烯二酸二苄酯的富马酰衍生物，按迈克尔反应条件进行反应而得到通式W-D-(RS)-CH{CH{C(O)OBzl}CH2C(O)OBzl}C(O)-OCH2CH＝CH2的相应迈克尔加成化合物。将后面的加成物在有吡咯烷存在下用四重三苯膦钯化合物和三苯膦处理(De′ziel，参阅上面)得到通式W-D-CH2-(R，S)-CH{CH2C(O)OBzl}C(O)OBzl的相应的二苄酯。其后，在有覆盖氢氧化钯的碳存在下进行氢解，得到相应的二羧酸，该酸通过与过量乙酸酐加热而转化为相应的酸酐。在有吡啶存在下用合适的仲胺与酸酐反应而得到主要为通式W-D-CH2-(RS)-CH{CH2C(O)NR7R8｝C(O)-OH(其中W、D和NR7R8如上所定义的)的所要异构体的区域异构体(regioisomers)混合物。后者的产品转化为其苄基酯而所得的区域异构体的混合物通过高效液体色谱分离而得到作为主要产品的所要异构体。然后在有氢氧化钯覆盖的碳存在下氢化后者产品而得到通式2的主中间物，其中W和D如本文所定义的而R1是本文所定义的NR7R8。
因此，通常通式1的肽可通过逐步偶合而制备，按肽、合适的氨基酸或衍生的氨基酸残基，以及肽的非肽碎片(如主中间体)的顺序的次序而进行，如有必要，这些都可适当保护并且如果有，则在完成逐步偶合而得到通式1的肽时除去全部保护基。较具体的方法描述于下面的实施例中。
本发明式Ⅰ的肽可以按治疗上可用盐的形式制备。在特定肽具有碱功能残基的情况下，这种碱的盐的实例有与有机酸如乙酸、乳酸、琥珀酸、甲磺酸或对-甲苯磺酸、以及聚合酸如丹宁酸或羧甲基纤维素配合的盐，也有与无机酸如氢卤酸，如盐酸、或硫酸或磷酸配合的盐。如有必要，特定酸的加成盐转成另一酸的加成盐例如按R.A.Boissonnas等人(Helv.Chim.Acta，43，1849)，(1960))所描述的方法通过用合适的离子交换树脂处理而转成非毒性的、药物上可用的盐。
在特定肽具有一个或多个羧基的情况下，这种羧基盐的实例有与钠、钾或钙阳离子相结合的盐或与有机碱，例如与三乙胺或N-甲基吗啉相结合的盐。
抗疱疹活性式Ⅰ肽的抗病毒活性可以通过生物化学、微生物学以及生物学方法来说明，表明化合物对疱疹单纯性病毒1型和2型(HSV-1和HSV-2)以及其它疱疹病毒如水痘带状疱疹病毒和非洲淋巴细胞瘤病毒的复制得有抑制作用。
在下面实施例中指出了代表性的式1肽对疱疹核苷酸还原酶的抑制效应。值得注意的是，与这种特定的抑制疱疹核苷酸还原酶有关的是肽对正常细胞复制所需的细胞核苷酸还原酶活性的这种抑制效应相当小或没有。
用于说明式1肽对病毒复制的抑制效应的方法是细胞培养技术;参阅，例如，T.Specfor等人的文章，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82，4254(1985)。
肽的治疗效用可以按实验动物来说明，例如，通过使用一种基于因疱疹单纯性病毒诱发眼病的老鼠模型的检测以进行抗病毒药剂试验，这描述于C.R.Brandt等人的文章，J.Virol.Meth.，36，209(1992)。
当本发明的肽或其治疗上可用盐之一，用作抗病毒剂时，对温血动物如人、猪或马是局部给药或全身给药，以含有一种或多种药物上可用载体的赋形剂配制，其比例决定于肽的溶解度和化学性质，和所选择的给药的途径和标准的生物学实践。对局部给药，肽可以配制在药物上可用赋形剂中，它含有0.1-5%，最好为0.5-2%的有效成分。这种制剂可以是溶液、霜剂或洗剂。
作为全身的给药，式1的肽是通过静脉、皮下或肌肉注射、以与药物上可用赋形剂或载体的组合物形式给药。为了注射给药，肽最好是在灭菌水溶液赋形剂的溶液中使用，赋形剂中也可含有如缓冲剂或防腐剂的其它溶质以及足量的药物上可用盐或葡萄糖，以使溶液等渗。
上述制剂的合适赋形剂或载体描述于标准药物教科书中，如，在“Remington′s Pharmaceutical Sciences”，18版，Mack，Publishing Company，Easton，Penn，1990。
肽的剂量随着给药方式和所择特定有效成分而不同。再者它也随着治疗的特定宿主而不同。通常，治疗是以小增量开始直到达到在这种治疗情况下的最佳效果。一般来说，肽最好是按可产生抗病毒疗效而不会引起任何有毒或有害副作用的浓度量给药。
涉及局部使用，肽是按合适的局部制剂对身体的感染面积即皮肤或口部或生殖腔部分，以足以覆盖感染面积的量皮肤给药。要重复治疗，例如，每4-6小时一次直到损害治愈。
涉及全身的给药，式1的肽的给药剂量是每天每公斤体重10μg-500μg，虽然上面提到的剂量会有不同。但，为了达到有效结果，最好使用的剂量是每天每公斤体重约10μg-200μg。
本发明的另一方面是含有疱疹病毒预防量的式1肽，或其治疗上可用盐、与生理上可用的化妆用载体一起的化妆组合物。在制剂中可以含有另外组分，如皮肤软化剂。本发明的化妆制剂是用于预防地阻止皮肤疱疹损伤的产生。对皮肤的易感染面积可以夜间施用。通常化妆制剂比相应的用于局部使用的药物组合物含有更少的肽。在化妆组合物中肽的优先含量为0.01-0.2%(重量)。
虽然上述公开的制剂表明是用于治疗疱疹病毒感染的有效并相当安全的药剂，不排除这些制剂可以和其它抗病毒药物疗法或药物一起给药以获得有利的结果。这种其它的抗病毒药物疗法或药物包括抗病毒核苷，如无环鸟苷和抗病毒表面活性剂或抗病毒干扰素，如在美国专利4，507，281(1985，3月26日)，由S.S.Asculai和F.Rapp所公开的那些药物。
更具体地涉及通过同时给药以治疗疱疹病毒感染，发现与式1的肽结合使用抗病毒核苷类似物可以协同增加其抗疱疹活性，而不伴随毒性作用的增加。因而，同时提供用于治疗哺乳动物的疱疹感染的药物组合物，它含有一种药物上或兽医上可用的载体、有效量的一种抗病毒核苷类似物或其治疗上可用盐和一种式Ⅰ的核糖核苷酸还原酶抑制肽或其治疗上可用盐相结合的混合物。
本文也提供了一种治疗哺乳动物疱疹病毒感染的方法。方法包括对哺乳动物以一种抗疱疹病毒有效量的组合物给药，该组合物是式1化合物或其治疗上可用盐和一种抗病毒核苷类似物或其治疗上可用盐的结合物。
用于组合物的抗病毒核苷类似物是一种可酶促地转化(体内)为疱疹DNA聚合酶的病毒DNA聚酶抑制剂和/或用于疱疹DNA聚合酶的另外基质。抗病毒核苷类似物可选自已知的核苷类似物。本发明的优先核苷类似物包括无环鸟苷及其类似物，例如通式2的化合物或其治疗上可用盐
其中R14是氢、羟基或氨基(当通式2中R14是羟基时就代表无环鸟苷)。
按照本发明所使用的其它优选抗病毒核苷类似物包括阿糖腺苷、碘苷、三氟胸苷、羟甲无环鸟苷(ganciclovir)、依多西啶(edoxudine)、布罗瓦维(brovavir)、弗西它平(fiacitabine)、潘西克罗维(penciclovir)、法西克罗维(famciclovir)、洛西克罗维(rociclovir)。
术语“协同效应”当用于上面定义的核苷类似物和通式1的肽结合物的抗病毒或抗疱疹活性时，是指抗病毒或抗疱疹效应大于结合物中二个单独组分的预计加成的效应。
当使用本发明结合物以治疗疱疹感染时，则对温血动物，如人、猪或马，以在含有一种或多种药物上可用载体的赋形剂中的结合物给药，其比例决定于核苷类似物和通式1的肽的溶解度和化学性质，所择的给途药径、标准的生物学实践，以及由两个活性组分的相对量，以提供一种协同抗病毒效应。最好，结合物以局部给药。例如，两种活性制剂(即抗病毒核苷类似物和通式1的肽，或它们治疗上可用盐)可以在药物上可用赋形剂中配制成溶液、乳剂、霜剂或洗剂形式。这种制剂可含有0.01-1.0%(重量)的核苷类似物，或一种其治疗上可用盐，和约0.05-1%(重量)的通式1肽或其治疗上可用盐。
在任何情况下，两种活性制剂在药物组合物中的含量是按可提供协同抗疱疹效应的量。
以下实施例进一步说明本发明。温度是以摄氏度数给出的。溶液百分率或比率按体积对体积关系表示，除非另有说明，核磁共振谱记录在Bruker 200MHz或400MHz的分光计(而400MHz光谱在前言注明);化学位移(δ)按百万分之几报导。用于实例的缩略语包括Boc叔丁氧羰基;Bu丁基;Bzl苄基;DMF二甲基甲酰胺;Et乙基;EtOH乙醇;EtOAc乙酸乙酯;Et2O二乙醚;Me甲基;MeOH甲醇;Pr丙基;TLC薄层色谱THF四氢呋喃。
实施例1用于偶合反应的一般方法｛也可参阅R.Knorr等人，Tetrahedron Letters，30，1927(1989)｝将第一反应物，即游离胺(或其氢氯化物盐)，溶于CH2Cl2或乙腈中，溶液冷至4℃。在氮气氛下，在搅拌的溶液中加入4当量的N-甲基吗啉。20分钟后，加入1当量第二反应物，即游离羧酸，和1.05当量的偶合剂。为此目的的实用和有效的偶合试剂是(苯并三唑-1-基氧)三-(二甲氨)磷鎓六氟磷酸盐，或优选的是2-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲脲鎓四氟硼酸盐。反应用TLC监测。反应完成后，在低压下蒸发CH2Cl2(或乙腈)。残留物溶于EtOAc。溶液依次用1N柠檬酸水溶液、10% Na2CO3水溶液和盐水洗涤。干燥有机相(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩至干。残留物按照Still的快速色层技术｛W.C.Still等人，J.Org.Chem，43，2923(1978)｝在硅胶(SiO2)上纯化。
实施例2中间体H-Asp(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH(CH2CM3)CH2OBzl的制备(a)(S)-α-叠氮-1-｛(苯甲氧基)羰基｝环戊乙酸这化合物是由描述于M.N.Aboul-Enein等人的Pharm.Acta.Helv.，55，50(1980)中的2-氧代螺[4.4]壬烷-1，3-二酮，按照不对称叠氮化方法，使用Evan助剂[参阅D.A.Evans等人，J.Amer.Chem.Soc.，112，4011(1990)]而制备的。
更明确地说，在氩气氛下，将1.6M的丁基锂的己烷溶液(469ml，750mmol)滴加到手性助剂4(S)-(1-甲乙基)-2-噁唑烷酮(oxazolidinone)｛96.8g，750mmol，描述于L.N.Pridgen and J.Prol.，J.Org.Chem.，54，3231，(1989)中｝在-40℃的无水THF的溶液中。混合物在-40℃下搅拌30分钟然后冷却到-78℃。将2-氧代螺[4.4]壬烷-1，3-二酮逐滴加到冷却的混合物中。然后将混合物在0℃搅拌1小时。然后将20%(w/v)的柠檬酸水溶液(600ml)加到混合物中，分离有机相并用EtOAc提取水相。用盐水洗涤合并的有机相，干燥(MgSO4)并在减压下浓缩而得到3-｛2-(1-羧基环戊基)-1-氧乙基)｝-4(S)-(1-甲乙基)-2-噁唑烷酮的浅红色固体(300g)。
后者固体(约750mmol)溶于乙腈(1升)中。将苄基溴化物(128.3g，89.2ml，750mmol)和1，8-二氮杂二环[5.4.0]-十一碳-7-烯(114g，112ml，750mmol)加到溶液中。在氩气下搅拌混合物16小时。在减压下除去挥发物。残留物溶于H2O/EtOAc。分出有机相，用10%(w/v)的柠檬酸水溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)并在减压下浓缩至干并得到油状物。油状物由己烷/EtOAc中结晶而得到白色固体的相应苄基酯(204g，73%)。
在无水THF(200ml)中的后者化合物(70g，187mmol)的溶液冷却至-78℃。含6%(w/v)枯烯的0.66M的1，1，1，3，3，3-六甲二硅氮烷钾的THF溶液(286ml，189mmol)在15分钟期间加到冷溶液中。混合物在-78℃搅拌45分钟。将2，4，6-三异丙基苯磺酰基叠氮化物(67g，216mmol)在无水THF中的溶液以一次性加到冷的混合物中，2分钟后加入冰醋酸(50ml，860mmol)。加热混合物并在35～45℃搅拌1小时，减压下移去挥发物。用己烷/EtOH(4∶1，1.7升)研制黄色残留物。所得白色固体收集在滤器上。滤液和SiO2(230～240筛孔)混合。在减压下除去挥发物，在35℃减压下干燥残留固体以除去枯烯。然后将残留固体放在SiO2柱上。用己烷/EtOAc(9∶1)洗脱残留固体和SiO2并浓缩洗脱液而得到3-｛｛2(S)-叠氮-1-氧代-2-｛1-｛苯甲氧基｝-羰基｝环戊基｝乙基｝-4(S)-(1-甲乙基)-2-噁唑烷酮(66g，86%)。
将后者化合物(13.42g，32.4mmol)在THF/H2O(3∶1，608ml)的溶液冷却到0℃。在冷溶液中加入过氧化氢/H2O(3∶7，16.3ml，518mmolH2O2)，接着加入LiOH·H2O(2.86g，68.2mmol)。混合物在0℃搅拌45分钟，然后用10%(w/v)的硫化钠水溶液(400ml)骤冷，在加入NaHCO3(1.93g)后，在减压下浓缩混合物。通过连续提取(NaHCO3水溶液/氯仿)20小时而回收手性助剂。此后将水相冷至0℃，加入浓盐酸使之酸性并用EtOAc提取。用盐水洗涤提取物，干燥(MgSO4)并在减压下浓缩得到白色固体的所要化合物(8.2g，84%)，化合物的1H NMR(CDCl3)表明为δ1.6-1.8(m，5H)，1.95-2.05(m，2H)，2.20-2.30(m，1H)，4.55(s，1H)，5.12(s，2H)和7.4(m，5H)。
化合物用于本实施例的(c)节中。
(b)NH2-(S)CH(CH2CMe3)CH2OBzl按照A.Giannis和K.Sandhoff(Angew.Chem.Int.Ed.Engl，28，218(1989))方法，将H-γ MeLeu-OH用LiBH4/Me3SiCl还原而得到氨基醇NH2-(S)-CH(CH2(Me3)CH2OH。将后者化合物(812mg，6.2mmol)、三乙胺(659mg，6.51mmol)和二-叔-丁基二碳酸酯(1.42g，6.51mmol)在无水THF(15ml)中的混合物，在4℃氮气氛下搅拌15分钟，然后在室温再搅拌4小时。减压下蒸发THF。残留物溶于EtOAc。溶液用10%柠檬酸水溶液、5%NaHCO3水溶液和盐水洗涤。干燥有机相(MgSO4)并在减压下浓缩至干。通过快速色层法纯化(SiO2，洗脱液∶己烷-EtOAc，2∶1)残留物而得到Boc-NH-(S)-CH(CH2CMe3)-CH2OH(1.23g，86%)。
在Boc-NH-(S)-CH(CH2CMe3)-CH2OH(1.23g，5.35mmol)在苄基氯(13ml)的溶液中依次加入四丁铵二硫酸盐(106mg)和50%NaOH水溶液(3ml)。所得混合物在35～40℃下搅拌90分钟，用EtOAc稀释，并用H2O和盐水洗涤。有机相干燥(MgSO4)并在减压下浓缩至干。残留物溶于己烷。溶液倒入SiO2柱。用己烷洗脱以除去苄基氯，然后用己烷-EtOAc(2∶1)洗脱而得到Boc-NH-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl。最后化合物的1H NMR(CDCl3)表明为δ0.95(s，9H)，1.42(s，9H)，1.30-1.55(m，2H)，3.42(d，J＝4Hz，2H)，3.88(阔，1H)，4.54(m，3H)，7.23-7.4(m，5H)。后者化合物(1.23g，3.99mmol)溶于6N HCl/二噁烷(10ml)。溶液在氮气氛下4℃时搅拌45分钟。蒸发溶剂得到所求化合物的盐酸盐(1.05g)。化合物用于本实施例的下一节中而不需再纯化。
(c)本实施例的标题化合物通过按照实施例1的偶合方法，并使用上节的NH2-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl的盐酸化物作为第一反应物而将本实施例(a)节的(S)-α-叠氮-1-｛(苯甲氧基)-羰基｝环戊乙酸作为第二反应物，得到N-{(S)-1-苄氧甲基-3，3-二甲丁基｝-(S)-α-叠氮-1-｛(苯甲氧基)羰基｝环戊乙酰胺。按照N.Maiti等人的方法(Tetrahedron Letter，27，1423(1986))在MeOH中用二氯化锡还原后者化合物而得到本实施例的标题化合物。化合物的1H NMR(CDCl3)表明为δ0.98(s，9H)，1.22-2.25(m，12H)，3.4(d，J＝4Hz，2H)，3.64(s，1H)，4.18(宽，m，1H)，4.52(s，2H)，5.12(s，2H)，7.18(d，J＝7Hz，1H)，7.22-7.38(宽，m，10H)。
实施例3中间体Boc-Tbg-CH2-(RS)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)OH的制备(a)丙二酸单烯丙酯的镁盐将2，2-二甲基-1，3-二噁烷-4，6-二酮(100g，0.69mol)和烯丙醇(47ml，0.69mol)在苯(800ml)中的溶液加热回流24小时。在减压下蒸发溶剂。在减压下蒸馏残留物得到丙二酸单烯丙酯(71g，71%，bp123-127°/2.2mmHg)。将后者酯(71g，0.48mol)溶于无水THF(300ml)中。溶液中加入乙醇镁(28.5g，0.245mol)。在氩气下在室温(20～22℃)搅拌混合物4小时。在减压下蒸发，残留物用Et2O研制而得到一种褐色固体。将固体研磨这细粒并在减压下干燥而得到所要镁盐(56g，73%)。该盐用于本实施例的下一节。
(b)将Boc-Tbg-CH2C(O)OCH2＝CH21，1-羰基二咪唑(12.6g，78mmol)加到Boc-Tbg-OH(15g，64mmol)在无水乙腈(150ml)的溶液中。在氩气氛下在室温搅拌混合物2小时。将丙二酸单烯丙酯的镁盐(24g，78mmol)和4-(N，N-二甲氨基)吡啶(100mg)加到混合物中。混合物加热回流1小时，然后在室温搅拌18小时。其后，在减压下浓缩混合物。残留物溶于EtOAc(300ml)中。将溶液用10%柠檬酸水溶液(2×100ml)和盐水(2×100ml)洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发至干。残留物用快速色层法纯化(SiO2，洗脱液己烷-EtOAc，9∶1)而得到棕色油状的所要烯丙酯(19.4g，96%)，放置结晶。1H NMR(CDCl3)表明，该化合物作为在氯仿中按3∶1之比的酮-烯醇互变体混合物存在，δ0.96(s，9H，烯醇形式)，1.04(s，9H)，1.46(s，9H)，3.65(s，2H)，3.90(d，J＝8.5Hz，1H，烯醇形式)，4.20(d，J＝7.5Hz，4.65(m，2H)，5.10(宽，d，J＝7.5Hz，1H)，5.20-5.40(m，2H)，5.80-6.05(m，1H)，12(s，1H，烯醇形式)。
烯丙酯用于本实施例的(d)节中。
(c)(E)-5，5-二甲-4-氧代-2-己烯酸乙基酯按照S.Manfredini等人的方法(Tetrahedron Letters，29，3997(1988))制备这种乙基酯。粗制油状产品用快速色层(SiO2，洗脱液己烷)纯化而得到黄色油状的所要乙基酯。1H NMR(CDCl3)δ1.21(s，9H)，1.33(t，J＝7.5Hz，3H)，4.28(q，J＝7.5Hz，2H)，6.78(d，J＝15.5Hz，1H)，7.51(d，J＝15.5Hz，1H)。
乙基酯用于本实施例的下一节。
(d)本实施例的标题化合物将描述于本实施例(b)节的Boc-Tbg-CH2C(O)OCH2＝CH2(0.67g，2.1mmol)在氩气氛下溶于无水THF(25ml)中。溶液中加入氢化钠(60%油分散体，0.095g，2.4mmol)。混合物在室温搅拌30分钟。将本实施例(c)节中描述的(E)-5，5-二甲基-4-氧代-2-己烯酸乙酯(0.435g，2.36mmol)加到混合物中，搅拌混合物直到TLC判断反应完成为止(约6小时)。其后，混合物用10%柠檬酸水溶液骤冷。减压下除去THF而所得浓缩液用EtOAc提取(3×25ml)。提取物用水洗，干燥(MgSO4)并在减压下浓缩。残留物用快速色层法(SiO2，洗脱液己烷-EtOAc，9∶1)纯化而得到相应的迈克尔反应加成物(1.06g，100%)。
迈克尔加成物按下面转化为Boc-Tbg-CH2-(RS)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)OH在氩气氛下将四重三苯膦钯(O)(0.20g，0.18mmol)和三苯膦(0.060g，0.23mmol)溶于CH2Cl2(10ml)中。加入乙腈(20ml)并将溶液冷却到0℃。在溶液中加入吡咯烷(0.28ml，2.7mmol)后加入迈克尔加成物(1.06g，2.1mmol)。将混合物在1小时期间升至室温并搅拌20小时。之后在氩气下回流加热反应混合物1小时以完成反应。蒸发溶剂并用快速色层法(SiO2，洗脱液己烷-EtOAc 9∶1)纯化残留物而得到Boc-Tbg-CH2(RS)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)OEt(0.77g，83%)。然后将后者化合物(0.77g，1.7mmol)溶于乙二醇二甲醚-H2O(1∶1，10ml)中。在溶液中加入氢氧化锂一水化合物(0.31g，7.4mmol)。在室温搅拌混合物4小时，用10%柠檬酸水溶液(20ml)使之酸化并用EtOAc(3×25ml)提取。干燥提取物(MgSO4)并在减压下浓缩而得到褐色固体的本实施例的标题化合物(0.69g，由Boc-Tbg-CH2C(O)O-CH2CH＝CH2的总产率为80%)。产品是55045的非对映异构体混合物(由NMR表明)。1H NMR(CDCl3)δ0.99(s，9H，少量异构体)，1.14(s，9H，主要异构体)，1.43(s，9H)，2.68-3.12(m，4H)，3.30(m，1H)，4.09(d，J＝9Hz，1H)，5.11(d，J＝9Hz，1H)。
实施例4中间体H-TbgCH2CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH(CH2CM3)CH2OBzl的制备按照本实施例1的偶合方法并使用实施例2的标题化合物(3.42g，7.13mmol)作为第一反应物将实施例3的标题化合物(2.50g，6.48mmol)用作第二反应物，粗制产品的快速色层分离(SiO2，洗脱液己烷-EtOAc，4∶1)得到标题化合物的相应N-Boc衍生物(4.64g，84%;Rf＝0.21，己烷-EtOAc，7∶3)。后者衍生物(4.64g，5.44mmol)在6N HCl/二噁烷(50ml)的溶液中在室温搅拌1小时，并在减压下浓缩。残留物溶于Et2O。将后者溶液用NaHCO3的饱和水溶液和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩而得到含有二种非对映异构体黄色油。通过快速色层(SiO2，洗脱液己烷-EtOAc-MeOH，5∶4.5∶0.5)而分离二种异构体。得到无色油状的所要化合物(即，更极性;Rf＝0.18，EtOAc-己烷-MeOH 7∶3∶0.5)，(2.52g，52%)。本实施例的标题化合物的异构体是用于下一个实施例中而不需再纯化。
实施例5Boc-(N-Me)Val-Tbg-CH2(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl的制备按照实施例1的偶合方法并使用实施例4的标题化合物(4.45g，5.95mmol)作为第一反应物而用N-甲基缬氨酸(4.41g，17.9mmol)作为第二反应物，粗制产品的快速色层分离(SiO2，洗脱液己烷-EtOAc，7∶3)得到本实施例的标题化合物(4.02g，72%收率)。1H NMR(CDCl3)δ0.87(d，J＝7Hz，6H)，0.90(s，18H)，1.10(s，9H)，1.48(s，9H)，1.5-2.0(m，10H)，2.30(m，1H)，2.5-3.1(m，5H)，2.80(s，3H)，3.30(m，2H)，4.0(d，J＝12.5Hz，1H)，4.20(m，1H)，4.32(d，J＝8.5Hz，1H)，4.49(d，J＝4.5Hz，2H)，4.64(d，J＝11Hz，1H)，5.18(d，J＝5Hz，2H)，6.78(宽，d，J＝8.5Hz，1H)，7.11(宽，d，J＝8.5Hz，1H)，7.18(宽，d，J＝11Hz，1H)，7.2-7.45(m，10H)。
实施例6PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(CyPn)-γMe亮氨醇的制备实施例5的标题化合物(4.02g，4.25mmol)在6N HCl/二噁烷(30ml)中的溶液在室温搅拌1小时后，在减压下浓缩，得到以盐酸盐形式的实施例5标题化合物的游离N-端氨基衍生物。之后，按实施例1偶合方法并用后者化合物作第一反应物而将苯基丙酸(2.00g，13.3mmol)作为第二反应物，通过快速色层(SiO2，洗脱液己烷-EtOAc，3∶2)纯化粗制产品得到PhCH2CH2C(O)-N-Me-Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp-(cyPn)(OBzl)-NH-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl的白色泡沫状物(4.00g，94%)，Rf＝0.35，己烷-EtOAc，1∶1)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.79(d，J＝7Hz，3H)，0.91(s，9H)，0.93(s，9H)，1.08(s，9H)，1.5-1.9(m，10H)，2.27(m，1H)，2.5-2.85(m，7H)，2.90(s，3H)，2.97(m，4H)，3.27(dd，J＝11，7Hz，1H)，3.55(dd，J＝11，4.5Hz，1H)，3.48(q，J＝7.5Hz，2H)，4.22(m，1H)，4.27(d，J＝8Hz，1H)，4.48(1，J＝8.5Hz，2H)，4.53(d，J＝11Hz，1H)，4.63(d，J＝0.5Hz，1H)，5.16(q，J＝13Hz，2H)，6.72(d，J＝8Hz，1H)，7.02(d，J＝8.5Hz，1H)，7.17(d，J＝9.5Hz，1H)，7.18-7.4(m，10H)。
将后者化合物(4.00g，4.03mmol)进行氢解｛20%Pd(OH)2/C(200mg)，1大气压H2，EtOH，5小时｝。反应完成后，以通过45μm膜的过滤而从反应混合物中除去催化剂。减压下浓缩滤液得到一种清彻油。将油溶于Et2O(100ml)。减压下将溶液蒸发至干。重复溶解和蒸发方法，从而得到一种白色固体。固体用己烷研制，过滤并在减压下干燥而得到标题化合物(3.12g，95%)，1H NMR(d6-DMSO)，400MHz，表明化合物以50∶50的两种旋转异构体的混合物存在于DMSO中。δ0.71-0.92(m，24H)，1.05(s，4.5H)，1.06(s，4.5H)，1.20-1.78(m，10H)，1.93-2.16(m，2H)，2.48-2.83(m，6H)，2.84(s，1.5H)，2.92(s，1.5H)，2.96-3.06(m，1H)，3.10-3.23(m，2H)，3.72-3.81(m，1H)，4.09-4.14(m，1H)，4.22(d，8Hz，0.5H)，4.54-4.62(宽m，1H)，4.73-4.81(m，1.5H)，7.12-7.29(m，6H)，7.94(d，J＝10Hz，1H)，8.04(d，J＝8Hz，0.5H)，8.32(d，J＝8.5Hz，0.5H)。
按照实施例6的方法，但以2-(苯甲基)-3-苯丙酸(二苄基乙酸代替苯丙酸。得到(PhCH2)2CHC(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇。
实施例7Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)CO-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇的制备将异氰酸1-乙丙酯(28mg，0.248mmol)加到实施例4的标题化合物(23mg，0.030mmol)和三乙胺(6mg，0.057mmol)在无水CH2Cl2的溶液中。在氩气氛下在0℃搅拌反应混合物1小时，然后在室温搅拌18小时。TLC(EtOAc-己烷，1∶1)表明反应完成。减压下蒸发溶剂。通过快速色层(SiO2，洗脱液己烷-EtOAc，6∶4)纯化残留物而得到本实施例的标题化合物的相应的二苄基衍生物(16mg)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.9(t，J＝7Hz，3H)，0.92(t，J＝7Hz，3H)，0.94(s，9H)，0.95(s，9H)，1.10(s，9H)，1.25-1.90(m，14H)，2.52(m，1H)，2.68(m，1H)，2.81(m，1H)，2.94-3.07(m，2H)，3.27(dd，J＝7.2，9Hz，1H)，3.36(dd，J＝5.5，9Hz，1H)，3.46(m，1H)，4.07(d，J＝9Hz，1H)，4.23(m，1H)，4.28(d，J＝9Hz，1H)，4.48(dd，J＝10Hz，2H)，4.66(d，J＝10Hz，1H)，4.74(d，J＝9Hz，1H)，5.17(dd，J＝14Hz，2H)，7.10(d，J＝8.5Hz，1H)，7.2-7.45(m，11H)。
将后面二苄基衍生物进行氢解(10%钯覆盖的碳，1大气压，EtOH)而得到标题化合物。质谱703(M+Na)+。
实施例8用于加工通式1肽C-端的其它代表性中间体的制备(a)NH2-(R)-CH(Et)CMe3在4，4-二甲基-3-戊酮(106g，0.92mmol)和(R)-α-甲苄胺(111g，0.92mmol)在苯(1升)中的冷溶液(0℃)中，加入TiCl4(50.5ml，0.46mmol)在苯(200ml)中的溶液，其速度是要使混合物的温度保持在10°以下。然后，混合物在40°机械搅拌3小时，冷却到室温并通过硅藻土过滤。用Et2O洗涤硅藻土。合并滤液和洗液并浓缩。残留物溶于无水MeOH(2升)中。溶液冷却到0°并分批加入NaBH4(20g，0.53mmol)，同时将混合物的温度保持在5°以下。蒸发甲醇。残留物溶于Et2O。将溶液用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发至干而得到红色油(NMR表明是一种18∶1的非对映异构体的混合物)。用快速色层(SiO2，洗脱液EtOAc/己烷，7∶93)纯化油而得到一种液体的N-(1-(R)-苯乙基)-1(R)-乙基-2，2-二甲丙胺(110g，54%)。将这物质溶于己烷(1.5升)。在溶液中，在15分钟期间加入6N HCl的二噁烷溶液(90ml)。所得白色固体收集在滤器中然后用己烷洗涤而得到N-(1(R)-苯基-乙基)-1(R)-乙基-2，2-二甲丙基氢氯化物(125g，97%)。1H NMR(CDCl3)δ0.55(t，J＝7.5Hz，3H)，1.14(s，9H)，1.54-1.95(m，2H)，2.23(d，J＝6.5Hz，3Hz)，2.36-2.44(m，1H)，4.31-4.49(m，1H)，7.30-7.48(m，3H)，7.74-7.79(m，2H)。
后面化合物(41.5g)在MeOH(120ml)中的溶液与10%(W/V)Pd/C混合，并在帕尔(Parr)氢解器上在50psi氢气下在室温搅动混合物48小时。过滤混合物，浓缩滤液而得到以其盐酸加成盐形式存在的所要NH2-(R)-CH(Et)CMe3的白色固体(25g，100%)。1H NMR(CDCl3)δ1.10(s，9H)，1.22(t，J＝7Hz，2H)，1.58-1.90(m，2H)，2.70-2.85(m，1H)，8.10-8.40(宽，s，3H)。
按同样方法，按前面方法中，以3，3-二甲基-2-丁酮代替4，4-二甲基-3-戊酮，而得到NH2-(R)-CH(Me)CMe3·HCl。
(b)NH2N(Me)CMeNaOH(3.3g，8.2mmol)加到盐酸叔丁基肼(5.1g，41mmol)溶液中。15分钟后，在混合物中加入二叔丁基二碳酸酯(9.0g，42mmol)在THF(15ml)中的溶液中。混合物在室温搅拌15小时后用Et2O(3×20ml)萃取。合并的提取物用Na2CO3的饱和水溶液洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩而得到一种白色固体(7.6g)。后面的物质(1.3g，6.9mmol)溶于无水DMF。在溶液中加入NaH在矿物油的60%(W/V)分散液(0.28g，即6.9mmol的NaH)，然后加入DMF(1.5ml)。混合物搅拌20分钟后，加入纯甲基碘(0.97g，6.9mmol)。在室温搅拌反应混合物15小时后在H2O2和Et2O之间分配。分出有机相，用0.5N HCl水溶液洗涤(2×)。合并的水相用NaHCO3碱化并用EtPAc提取(3×)。EtOAc提取物干燥(MgSO4)并浓缩至干而得到Boc-NHN(Me)CMe3的白色固体(0.9g，64%);1H NMR(CDCl3)δ1.07(s，9H)，1.44(s，9H)，2.43(s，3H)，5.29(s，1H)。后面固体(0.9g)溶于6N HCl/二噁烷(5ml)。溶液在室温放置30分钟后浓缩至干。用己烷研制残留物而得到白色固体的NH2N(CH3CMe3·HCl(0.5g)。
按同样方式，但用乙基碘代替前面方法中的甲基碘，得到NH2N(Et)-CMe3·HCl，mp.129-134℃。
实施例9按照实施例7的方法，制备用于加工通式1的肽的N-端的其它代表性中间体的方法(a)异氰酸1-丙基丁酯这中间体由商购的4-氨基庚烷通过V.S.Goldesmidt和M.Wick，Liebigs.Ann.Chem，575 1217(1952)的方法制备。
(b)异氰酸1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯酯将丙腈(14.5g，264mmol)在无水Et2O(40ml)的溶液滴加到1.0M烯丙基溴化镁/Et2O(880ml)中。反应混合物在回流时机械搅拌2小时，然后冷却到0℃。在冷却的反应混合物中小心地加入NH4Cl饱和水溶液(320ml)。分出有机相，干燥(MgSO4)，冷却至0°并在同样温度下与1M HCl/Et2(200ml)混合。收集所得固体，在减压下干燥(约27g)。后面物质溶于CH2Cl2(200ml)。用10%(W/V)的Na2CO3水溶液(2×)洗涤溶液，然后用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩至干以得到黄色油。蒸发该油(82-85°/20乇)得到无色液体的1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯胺(11.6g，34%);1H NMR(CDCl3)，400MHz)δ0.89(t，J＝7Hz，3H)，1.39(q，J＝7Hz，2H)，2.11(d，J＝7Hz，2H)，5.06-5.14(m，4H)，5.80-5.89(m，2H)。
后者化合物通过V.S.Goldesmidt和M.Wick(同上)的方法转化为异氰酸1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯酯。
上一节(b)方法的第一步，即1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯胺的制备是基于G.Alvernhe和A.Laurent[Tetrahedron Lett.，1057(1973)]所述的通用方法。其总体方法是在适当选择可用于制备其它所需异氰酸酯中间体的反应物，以最终制备在N-端有不饱和的通式1的肽，即通式1的肽，其中A-B是通式R5-NH-C(O)的不饱和的烷氨基羰基，其中R5是支链的不饱和烃基团，如1-甲基-1-(2-丙烯)-3-丁烯基。但要注意，当所需异氰酯中间体是用于按照实施例7的方法，则最终产品将是N-端饱和的通式1的相应肽。再者，后者方法代表用于制备这种相应肽的实用方法，例如，MePr2CNHC(O)-或EtPr2-CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Aap(cyPn)-NHCH2CMe3，分别参阅实施例13的表Ⅳ中所列的第8和第5个化合物。
另一方面，当需要保留N-端的不饱和时，通式1的N-端不饱和肽可以按相应的饱和肽相同方法制备，只是要使用羧基保护基，这种保护基可以在有不饱和存在时选择性地除去。用于此目的的实用羧基保护基是烯丙基。因此，所需要的N-端不饱和肽可以按照实施例2-4和7的方法制备，但要以(S)-α-叠氮-1-(2-丙烯基氧羰基)-环戊酸代替实施例2的(S)-α-叠氮-1-｛(苯甲氧基)-羰基｝环戊酸。前者化合物可以按实施例2(a)中用于苯甲氧基衍生物所述的完全相同的方法制备，除了用烯丙基溴代替苄基溴之外。最后去保护步骤(即除去羧基保护基、或当目的肽的E是NHCH(12)-Z，其中R12按本文所限定的，Z为C(O)OH的情况下的基团)可以按照R.Déziel，Tetrahedron Lett.，28 4371(1987)中所述方法进行，最好在有四重(三苯膦)钯(O)存在下使用吡咯烷进行。这样制备的通式1的N-端不饱和肽的实例是Me(CH2＝CH-CH2)2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，参见列于实施例13表Ⅳ中的第7个化合物。
也应注意，当目的N-端不饱和肽的E是NHCH(R10)-Z(其中R10按本文所定义的，Z是CH2OH)时，则用于将含羟基C-端单元结合进行所需肽中的中间体要保护原来的C端羟基。在这种情况下的羟基保护基也可以是能在有不饱和时选择性除去的保护基。在这种情况下方便的保护基是烯丙氧羰基基团，参见E.J.Corey和J.W.Suggs，J.Org.Chem，38，3223(1973)。
因此，通过使用适当的中间体，实施例1-7的系列偶合和去保护方法就可以用来制备通式1的其它化合物，例如在以下实施例表中所列举的那些。在某些情况下，最终产品的沉淀不是纯物质。在这种情况下，产品可以通过半制备HPLC在C-18反相柱上，使用各含0.06%TFA的乙腈和水的梯度而进行纯化。为此，在纯化前将粗制产品溶于0.1M NH4OH水溶液，使用0.1M AcOH水溶液使溶液pH回到约7。当使用时，在这方式下，非对映异构体的混合物可以分离。
可以这样制备的通式1其它化合物的一些实例是(PhCH2)2CHC(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3和(PhCH2)2CHC(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3。
实施例10抑制疱疹单纯性病毒(HSV-1)核糖核苷酸还原酶(a)酶的制备HSV-1核糖核苷酸还原酶(部分纯化)是通过用菌株F HSV-1病毒以形成10菌斑单位/细胞感染的休眠BHK 21/C13细胞而制得的，如描述于E.A.Cohen等人，J.Gen.Virol.，66 733(1985)中的方法。
(b)对所列举的肽的测定和结果按照P.Gaudreau等人在J.Biol.Chem，262，12413(1987)中所述方法，得到列于下面表1的测定结果。对每一个列举的通式1化合物的测定结果，是以产生50%最大抑制酶活性的化合物浓度(IC50)来表示。用于每个测定的酶制剂的单位数是一定的，它基于酶制剂的比活度。结果是相对于不含测试化合物的对照实验中所得的活度，并以四次测定的平均值表示而且各次之间的相差低于10%。
表1通式1的化合物 FAB/MS IC50(m/z) μM(M+Na)+实施例6标题化合物 813*0.27PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)- 849 0.19CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)- 848 0.26CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-NH2PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)- 791 0.33CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)- 803 0.32CH{CH2C(O)-(环戊基)}C(O)-Asp-(cyPn)-NHCH2CMe3PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)- 751.5 0.33CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-Me}-NHCH2CMe3Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 659 0.23CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(S)-CH{CH2C(O)- 716 0.17(吡咯烷代)}C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeuclnolEt2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 717 0.12CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHEt2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 716 0.22CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-NH2实施例7的标题化合物 703 0.15Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)- 671 0.22(环戊基)}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 597*0.20CMe3)C(O)-Asp{(R)-Me}-NHCH2CMe3
表1(续)通式1的化合物 FAB/MS IC50(m/z) μM(M+Na)+Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 745 0.15CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 731 0.20CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 665*0.08CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3＊(M+H)+实施例11在细胞培养中疱疹单纯性病毒(HSV-2)复制的抑制测定将BHK-21/C13细胞(ATCC CCL 10)以加有8%(V/V)胎牛血清(FBS，Gibco Canade Inc)的α-MEM培养基(Gibco Canada Inc，Burlirgton，Ontario，Canada)在150cm2T-锥形瓶(1.5×106细胞/瓶)培养2天。细胞进行胰酶消化后转入24孔试验板的新鲜培养基中，得到在每孔750μl培养基中有25×105细胞。细胞在37℃保温6小时，使其附着在板上，此后，细胞以500μl加有0.5%(V/V)FBS的α-MEM洗涤一次，然后以750μl相同培养基(低血清)培养3天。在此血清不足阶段后，除去低血清培养基，而细胞在500μlBBMT中培养2-3小时。｛BBMT培养基描述于P.Brazeau等人的Proc.Natl.Acad，Sci USA，79，7909(1982)｝。之后细胞在100μl BBMT培养基中以HSV-2(感染复数＝0.02.PFU/细胞)感染。(注所用HSV-2是菌株HG-52，参见Y.Langelier和G.Buttin，J.Gen.Virol.，57，21(1981);病毒保存在-80℃)。在37℃下病毒吸附1小时后，除去培养基，用BBMT(3×250μl)洗涤细胞。在每孔的细胞，以有或没有(对照)适当浓度的测试制剂溶于200μl的BBMT培养基培养。在37℃保温29小时后，通过先将试验板在-80℃冷冻，接着解冻而收集感染细胞。藉助于融冰碎片将每孔中的细胞由孔壁刮下。完全解冻后，收集细胞悬浮液并用150μl BBMT培养基冲洗每个孔。病毒样品(悬浮液加洗液)在4℃轻轻地声处理4分钟。通过离心除去细胞碎片(在4℃，1000×g下10分钟)。收集上清液并贮存在-80℃直到测定病毒浓度。
病毒浓度的测定是按照M.Langlois等人在Iournal of Biological Standardization，14，201(1986)中的比色测定法的改进法进行的。
更具体地说，按上述同样方法，将BHK-21/C13细胞胰酶消化并转入96孔微滴定板的新鲜培养基中而得到每孔100μl的培养基中有20000细胞。在制备板上的细胞在37℃保温2小时。在这期间，病毒样品解冻而轻轻地声处理15秒钟，并制成对数稀释样品系(1/5序列50μl样品加200μl BBMT培养基，序列稀释是以多道吸管进行的。
在完成上面BHK-21/C13细胞的两小时培养后，培养基以加有3%(V/V)FBS的α-MEM培养基代替。现在细胞已可以用各种病毒样品稀释液进行感染。将不同稀释液的等分样品(50μl)转入试验板的合适的孔中。所得感染细胞在37℃保温2天。然后在每孔中加入50μl 0.15%(V/V)中性红染料在Hank平衡盐溶液(pH7.3，Gibco Canada Inc)中的溶液。制备好的试验板在37℃保温45分钟。吸出每孔中的培养基，细胞用200μl Hank平衡盐溶液洗一次。洗涤后，通过加入100μl 1∶1的0.1M索楞逊(Sorensen)柠檬酸盐缓冲液(pH4.2)和乙醇的混合物后，染料由细胞中释出。(索楞柠檬酸盐缓冲液按下方式制备首先，在1N NaOH水溶液(200ml)中溶解一水柠檬酸(21g)而制备0.1M柠檬酸二钠溶液，并加入足量的过滤水制成1升。然后，0.1M柠檬酸二钠溶液(61.2ml)与0.1N HCl水溶液(38.8ml)混合，如需要，将所得溶液的pH调到4.2)。对孔中的混合液进行轻轻地旋涡动作以保证适当的混合。试验板孔通过分光光度计板阅读器(spectrophotometer plate reader)在540μm扫描以计算存活细胞数。在这情况下，对各种不同浓度试验制剂可以测定其病毒生长抑制百分率，以及可以计算出达到50%抑制病毒复制的试验制剂的浓度，即EC50。
结果下面表Ⅱ给出了按照本实施例细胞培养测定法评估式1的肽所得结果的实例。
表Ⅱ通式1的化合物 EC50μM实施例6的标题化合物 15PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH-(R)- 65CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH-(R)- 60CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-NH2Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 56CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(S)-CH{CH2C(O)- 200(吡咯烷代)}C(O)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)- 50(环戊基)}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 30CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 24CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3(1-丙环戊基)氨羰基-Tbg- 40CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)- 30(环戊基)}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3
实施例12对细胞培养基抑制HSV-2复制中无环鸟苷、实施例6的式1标题肽以及二制剂的结合物的比较下面表Ⅲ说明了按照实施例11的测定方法评估无环鸟苷、实施例6的标题肽以及两者结合物时所得的结果。
表Ⅲ化合物 EC50评估样品浓度的范围 μM无环鸟苷*0.032 to 20 μM 3.5肽**1.23 to 100 μM 19无环鸟苷 0.32 to 20 μM 1.4+2μM 肽无环鸟苷 0.32 to 20 μM 0.9+4μM 肽无环鸟苷 0.32 to 20 μM 0.9+6μM 肽无环鸟苷 0.32 to 20 μM 0.8+8μM 肽无环鸟苷 0.32 to 20 μM 0.42+10μM 肽＊无环鸟苷得自Bourroughs Wellcome Inc.，Kirkland，Quebec，Canada＊＊实施例6的式1标题肽结果表明，在无环鸟苷和式1的肽之间有协同作用，将肽加到无环鸟苷所得的结合物其EC50大大低于单独无环鸟苷所得的EC50。
无环鸟苷和式1的肽相结合的协同作用可通过对上述结果使用均等兴奋方法(isobole method)而进一步说明，参见J.Suhnel，Aritiviral Research，13，23(1990)及其参考文献。在这方法的使用中所得正结果在所附
图1中图示地说明。
实施例13本申请的式1肽的其它实施例综合于下表Ⅳ和Ⅴ中，包括其特征的质谱数据以及实施例10测试中的测试结果，即IC50;和实施例11的细胞培养测试的结果，即EC50。
表Ⅳ具有通式A-B-Tbg-CH2-(R)-CH- FAB/MS IC50EC50(CH2C(O)Me3)C(O)-Asp(cyPn)-E的 (m/z) μM μM式1化合物 (M+H)+其中A-B和E是如下所规定的:
A-B EPr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Me)CMe3679 0.28 14Pr2CHNHC(O) NHCH2CMe2Et 679 0.24 16Pr2CHNHC(O) NHCH2-(R,S)-CH(Me)Et 665 0.29 50EtPr2CHNHC(O) NHCH2CHEt2679 0.41 42MePr2CHNHC(O) NHCH2CMe2Et 693 0.36 29Pr2CHNHC(O) NHNHCMe3666 0.22 84Me(CH2=CHCH2)2- NHCH2CMe3691 0.27 30CNHC(O)MePr2CNHC(O) NHCH2CMe3678 0.28 26Pr2CHNHC(O) NHCH2-(cyclohexyl) 691 0.36 47EtPr2CNHC(O) NHCH2CMe3693 16(CH2=CHCH2)2- NHCH2CMe3661 0.37 100CHNHC(O)
表IV(续)具有通式A-B-Tbg-CH2-(R)-CH- FAB/MS IC50EC50(CH2C(O)Me3)C(O)-Asp(cyPn)-E的 (m/z) μM μM式1化合物 (M+H)+其中A-B和E是如下所规定的:
A-B EBu2CHNHC(O) NHCH2CMe3693 0.53 65Pr2CHNHC(O) NH-(S)-CH(CMe3)CH2OH 695 0.23 48Me2PrCNHC(O) NHCH2CMe3651 0.39 58Pr2CHNHC(O) NHCH2CEt2Me 693 0.34 18Pr2CHNHC(O) NHCMe2CMe3693 0.51 38(CH2=CHCH2)2- NH-(R)-CH(Me)CMe3675 0.32 48CHNHC(O)Pr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Me)C(Me)2- 693 0.50 21EtPr2CHNHC(O) cis-NH-(2-甲基- 691 0.67 75环己基)Pr2CHNHC(O) trans-NH-(2-甲基- 691 0.69 60环己基)(R,S)-EtPrCH- NHCH2CMe3651 0.23 35NHC(O)(R,S)-EtBuCH- NHCH2CMe3665 0.26 35NHC(O)Pr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Et)CMe3693 0.34 10Pr2CHNHC(O) NH-(2,2-二甲基- 706 0.40 24环己基)EtPr2CNHC(O) NH-(R)-CH(Me)CMe3708 0.41 10Pr2CHNHC(O) NHCH2CMe2Pr 694 0.42 35
表IV(续)具有通式A-B-Tbg-CH2-(R)-CH- FAB/MS IC50EC50(CH2C(O)Me3)C(O)-Asp(cyPn)-E的 (m/z) μM μM式1化合物 (M+H)+其中A-B和E是如下所规定的:
A-B EPr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Me)CH2CMe3694 0.37 14Pr2CHNHC(O) NHCH2CH2CMe3701*0.58 72Pr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Pr)CMe3707 0.43 15Pr2CHNHC(O) NH-(2,2-二甲基- 691 0.38 31环戊基)Pr2CHNHC(O) NH-N(Me)CMe3680 0.27 110Pr2CHNHC(O) NHCH2CEt3707 0.52 19EtPr2CNHC(O) NH-(R)-CH(Et)CMe3722 0.36 6Pr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Me)CHEt2693 0.33 16Pr2CHNHC(O) NHN(Et)CMe3694 0.22 80*(M+Na)表V通式1的化合物 FAB/MS IC50EC50(m/z) μM μM(M+H)+Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2- 673*0.36 39C(O)CHMe2)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2-CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH- 679 80(CH2C(O)CH2CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-Leu-OH
表V(续)通式1的化合物 FAB/MS IC50EC50(m/z) μM μM(M+H)+Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2- 691 0.37 61C(O)-(环己基)}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2- 663 0.31 46C(O)-(环丁基)}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2- 651 0.30 62C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-allyl}-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2- 653 0.25 46C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-Pr}-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2- 679 0.21 33C(O)CMe2Et)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2-CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2- 691 0.24 35C(O)-(1-甲环戊基}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(CMe2Et)-C(O)- 693 0.25 13CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp-(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3Pr2CHNHC(O)-Val-CH2-(R)-CH(CH2- 665 0.22 37C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3＊(M+Na)
权利要求
1.通式1的肽，或其治疗上可用盐，其中A是苯基(低级)链烷酰基；在其芳基部分用低级烷基、氨基、卤素、羟基或低级烷氧基单取代的苯基(低级)链烷酰基；用苯基或单取代苯基双取代的低级链烷酰基，其中，单取代的基选自低级烷基、氨基、卤素、羟基或低级烷氧基；或者是{苯基(低级)-烷基}氨羰基}；而B是N(CH3)-CHR4(CO)其中R4是低级烷基；或A和B一起形成通式为R5-NH-C(O)的饱和或未饱和的烷基氨羰基，其中R5是(2-10C)-烷基、低级环烷基、1-(低级烷基)-(低级环烷基)、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基或1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基；D是NH-CHR6C(O)，其中R6是低级烷基或用羧基、羟基、巯基或苄氧基取代的低级烷基；R1是低级烷基、低级环烷基、1-(低级烷基)-(低级环烷基)，或NR7R8，其中R7是氢原子或低级烷基而R8是低级烷基，或R7和R8与和它们相连的氮原子一起形成吡咯烷代、哌啶子基、吗啉代或4-甲基哌嗪代；R2是氢或低级烷基而R3是低级烷基，或者R2是氢而R3是低级烷烯基或苯基-(1-4)烷基，或者R2和R3与和它们相连的碳原子一起形成低级环烷基；E是NHR9，其中R9是(4-9C)烷基；低级环烷基；以低级烷基或(低级烷基)-(低级环烷基)单取代或双取代的低级环烷基；或E是NHNR10R11，其中R10是氢或低级烷基而R11是(4-9C)烷基；或者E是NHCH(R12)-Z，其中R12是(4-9C)烷基；低级环烷基或(低级环烷基)-(低级烷基)和Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是低级烷基。
2.按权利要求1定义的肽，或其治疗上可用盐，其中A是苯基(低级)链烷酰基;(4-氨苯基)-(低级)-链烷酰基;(4-卤代苯)-(低级)链烷酰基，(4-羟苯基)-(低级)链烷酰基;｛4-(低级烷氧基)苯基｝-(低级)链烷酰基;用苯基、4-卤代苯基或4-(低级烷氧基)苯基双取代的低级链烷酰基，或者苯基(低级)烷基氨羰基;而B是(N-Me)Val，(N-Me)Ile或(N-Me)Tbg;或者A和B一起形成饱和或未饱和的通式为R5-NH-C(O)的烷基氨羰基，其中R5如权利要求1所定义的;D是(S)-2-氨基-3-羟基-3-甲丁酸或(R)-2-氨基-3-巯基-3-甲丁酸的氨基酸残基或是选自Val、Ile、Tbg和β-EtNva的氨基酸残基，R1是低级烷基、低级环烷基、1-(低级烷基)-(低级环烷基)、NMe2、NEt2、吡咯烷代或吗啉代;R2和R3如权利要求1所定义的;而E是NHR9，其中R9是(4-9C)烷基;低级环烷基;以低级烷基单取代或双取代的低级环烷基;或(低级烷基)-(低级环烷基);或E是NHNR10R11，其中R10是氢、甲基或乙基而R11是(4-9C)烷基;或E是NHCH(R12)-Z，其中R12是(4-9C)烷基或(低级环烷基)-甲基而Z是如权利要求1所定义的。
3.权利要求2所定义的肽或其治疗上可用盐，其中A是苯乙酰基、苯丙酰基、(4-氨苯基)-丙酰基、(4-氟苯基)丙酰基、(4-羟苯基)丙酰基、(4-甲氧苯基)丙酰基、2-(苯甲基)-3-苯丙酰基、2-｛(4-氟苯基)甲基｝-3-(4-氟苯基)-丙酰基、2-｛(4-甲氧苯基)甲基｝-3-(4-甲氧苯基)丙酰基或苄氨羰基;B是(N-Me)-Val或(N-Me)-Ile;D是Val、Ile或Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、环丁基、环戊基、环己基、1-甲环戊基、NMe2、NEt2、吡咯烷代或吗啉代;R2是氢而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、1，1-二甲乙基、丙基、2-丙烯基或苄基，含有R2和R3的碳原子具有(R)-构型，或R2和R3分别各为甲基或乙基，或R2和R3与和它们相连的碳原子一起形成环丁基、环戊基或环己基;而E是NHR9，其中R9是2-甲丙基、2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1，1，2，2-四甲丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲丙基，2-(R，S)-甲丁基、2，2-二甲丁基、3，3-二甲丁基、1(R)，2，2-三甲丁基、1(R)，3，3-三甲丁基、2-乙丁基、2，2-二乙丁基、2-乙基-1(R)-甲丁基、2-乙基-2-甲丁基、1(R)-乙基-3，3-二甲丁基、2，2-二甲戊基，顺-或反-2-甲环己基、2，2-二甲环己基或环己甲基;或者E是NHR10R11，其中R10是氢、甲基、或乙基而R11是1，1-二甲乙基;或E是NHCH(R12)-Z，其中含有R12的碳原子有(S)-构型，R12是1，1-二甲乙基、1-甲丙基、2，甲丙基、2，2-二甲丙基或环己基甲基而Z是CH2OH、C(O)OH、CONH2或C(O)OR13其中R13是甲基、乙基或丙基。
4.按权利要求2所定义的肽，或其治疗上可用盐，其中A和B一起形成饱和或未饱和的烷基氨羰基，它选自丁氨羰基、1-甲乙基氨羰基、1-甲丙基氨羰基、1-乙丙基氨羰基、1，1-二甲丁基氨羰基、1-乙丁基氨羰基、1-丙丁基氨羰基、1-乙戊基氨羰基、1-丁戊基氨羰基、2-乙丁基氨羰基、2-乙戊基氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙丁基氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基、(1-丙环戊基)氨羰基、(1-丙环己基)氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯氨羰基和1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基;D是Val、Ile或Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、环丁基、环戊基、环己基、1-甲环戊基、NMe2、NEt2、吡咯烷代或吗啉代;R2是氢而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、1，1-二甲乙基、丙基、2-丙烯基或苄基，而含R2和R3的碳原子有(R)-构型，或R2和R3各分别为甲基或乙基，或R2和R3与和它们相连的碳原子一起形成环丁基、环戊基或环己基;而E是NHR9，其中R9是2-甲丙基、2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1，1，2，2-四甲丙基、1-(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2-(R，S)-甲丁基、2，2-二甲丁基、3，3-二甲丁基、1(R)，2，2-三甲丁基、1(R)，3，3-三甲丁基、2-乙丁基、2，2-二乙丁基、2-乙基-1-甲丁基、2-乙基-2-甲丁基、1(R)-乙基-3，3-二甲丁基、2，2-二甲戊基、顺-或反-二甲环己基、2，2-二甲环己基或环己基甲基;或者E是NHNR10R11，其中R10是氢、甲基或乙基而R11是1，1-二甲乙基;或E是NHCH(R12)-Z，其中含R12的碳原子有(S)-构型，R12是1，1-二甲乙基、1-甲丙基、2-甲丙基、2，2-二甲丙基或环己甲基而Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是甲基、乙基或丙基。
5.按权利要求3定义的肽，或其治疗上可用盐，其中A是苯丙酰基、2-(苯甲基)-3-苯丙酰基或苄氨羰基;B是(N-Me)Val;D是Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、环丁基、环戊基、环己基或1-甲环戊基;R2是氢而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、丙基或苄基而含R2和R3的碳原子有(R)-构型，或R2和R3各分别为甲基或乙基或R2和R3与和它们相连的碳原子一起形成环丁基、环戊基或环己基;而E是NHR9，其中R9是2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-二甲丙基、1(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2，2-二甲丁基或1(R)-乙基-3，3-二甲丁基，或E是NHCH(R12)-Z，其中含有R12的碳原子有(S)-构型，R12是2，2-二甲丙基而Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是甲基乙基或丙基。
6.按权利要求4所定义的肽或其治疗上可用盐，其中A和B一起形成饱和或未饱和的烷基氨羰基，它选自1-乙丙基氨羰基、1-乙丁基氨羰基、1-丙丁基氨羰基、2-乙戊基氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙基氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基(1-丙环戊基)-氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基以及1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基;D是Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、环丁基、环戊基、环己基或1-甲环戊基;R2是氢而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、丙基或苄基，含有R2和R3的碳原子有(R)-构型，或者R2和R3各分别为甲基或乙基，或R2和R3与和它们相连的碳原子一起形成环丁基、环戊基或环己基;而E是NHR9，其中R9是2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2，2-二甲丁基或1(R)-乙基-3，3-二甲丁基或E是NHCH(R12)-Z，其中含R12的碳原子有(S)-构型，R12是2，2-二甲丙基和Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是甲基、乙基或丙基。
7.按权利要求1定义的肽是选自以下PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OH，PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-NH2，PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)-(环戊基)｝C(O)-Asp-(cyPn)-NHCH2CMe3，PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-Me}-NHCH2CMe3，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH｛CH2C(O)-(吡咯烷代)｝-C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OH，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-NH2，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH｛CH2C(O)-(cyclopentyl)}-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-Me}-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，(1-丙环戊基)氨羰基-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH｛CH2C(O)-(环戊基)｝-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe2Et，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2-(R，S)-CH(Me)Et，EtPr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CHEt2，MePr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHNHCMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHNHCMe3，Me(CH2＝CHCH2)2-CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，MePr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2-(环己基)，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，(CH2＝CHCH2)2-CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Bu2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(S)-CH(CMe3)CH2OH，Me2PrCNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CEt2Me，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCMe2CMe3，(CH2＝CHCH2)2-CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)C(Me)2Et，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-cis-NH-(2-甲环己基)，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-trans-NH-(2-甲环己基)，(R，S)-EtPrCH-NHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，(R，S)-EtBuCH-NHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-(2，2-二甲环己基)，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe2Pr，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Pr)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(2，2-二甲环戊基)，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-N(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CEt3，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CHEt2，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHN(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CHMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CH2CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-Leu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)-(环己基)｝-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)-(环己基)｝-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-allyl}-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-Pr}-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe2Et)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)-(1-甲基-环戊基｝C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(CMe2Et)-C(O)-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，andPr2CHNHC(O)-Val-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3.
8.一种药物组合物，它含有抗疱疹病毒有效量的权利要求1中定义的肽，或其治疗上可用盐，以及药物上或兽医上可用的载体。
9.一种化妆组合物，它含有权利要求1中所定义的肽或其治疗上可用盐以及生理上可接受的适用于局部使用的载体。
10.一种治疗哺乳动物的疱疹病毒感染的方法，包括对哺乳动物以一种抗疱疹病毒有效量的权利要求1所定义的肽或一种其治疗上可用的盐给药。
11.一种抑制疱疹病毒复制的方法，将病毒与一种疱疹病毒核糖核苷酸还原酶抑制量的通式1的肽或其治疗上可用盐相接触。
12.一种药物组合物，含有一种药物上或兽医上可用载体，以及有效量的一种抗病毒核苷类似物或其治疗上可用盐和一种权利要求1所定义的核糖核苷酸还原酶抑制肽或其药物上可用盐的结合物。
13.按权利要求12的一种药物组合物，其中核苷类似物是通式2的化合物或其治疗上可用盐
其中R14是氢、羟基或氨基。
14.按权利要求12的药物组合物，其中抗病毒核苷类似物选自阿糖腺苷、碘苷、三氟胸苷、羟甲无环鸟苷、依多西啶、布罗瓦维、弗西它平、潘西克罗维、法西克罗维、洛西克罗维。
15.一种治疗哺乳动物的疱疹病毒感染的方法，包括对它施用一种有效量的一种抗病毒核苷类似物或其治疗上可用盐和权利要求1的通式1的核糖核苷酸还原酶抑制肽或其治疗上可用盐的结合物。
16.按权利要求15的方法，其中核苷类似物和通式1的肽是按顺序地或同时给药。
17.按权利要求15的方法，其中结合物是局部给药。
18.按权利要求15的方法，其中抗病毒核苷类似物是选自无环鸟苷、6-脱氧无环鸟苷、2，6-二氨基-9-｛(2-羟乙氧基)甲基｝嘌呤、阿糖腺苷、碘苷、三氟胸苷、羟甲无环鸟苷、依多西啶、布罗瓦维、弗西它平、潘西克罗维、法西克罗维、洛西克罗维。
19.一种治疗哺乳动物的疱疹单纯性病毒型1或型2感染的方法包括对其施用一种有效量的权利要求8的药物组合物，其中组合物的通式1的肽选自以下PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH2CH2CMe3，(1-丙环戊基)氨羰基-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)-(cyclopentyl)}-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe2Et，EtPr2CHNC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NHCH2CEt2Me，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Me)CH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Pr)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NHCH2CEt3，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Me)CHEt2，andPr2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(CMe2Et)C(O)-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3.
20.按权利要求1所定义的肽或其治疗上可用盐的肽的制备方法，包括a)按肽、氨基酸或氨基酸残基的、以及肽的非肽碎片的顺序的次序逐步偶合，其中ⅰ)残基或碎片的反应侧链基团用适宜的保护基保护以阻止其在该位点上所产生的化学反应，直到逐步偶合完成后最终除去保护基为止;ⅱ)偶合反应物的α-氨基以α-氨基保护基保护，而反应物的游离羧基与第二反应物的游离α-氨基偶合;α-氨基保护基是一种可以选择性地除去以使在该α-氨基上可以进行其后的偶合步骤;ⅲ)氨基酸残基或肽片段的C-端羧基是成为保护的C-端功能团，如果有，则要用一合适的保护基保护，该保护基将阻止在该位点上发生的化学反应，直到肽所要的氨基酸顺序已装配后为止;b)在偶合完成后，除去任何保护基，如需要，进行标准转化以得到权利要求1的肽，并且如必要，将肽转化成治疗上可用盐。
全文摘要
本文公开了通式为A—B—D—CH
文档编号C07K5/04GK1096300SQ9310679
公开日1994年12月14日 申请日期1993年6月8日 优先权日1993年6月8日
发明者皮埃尔·L·博兰尤, 尼尔·莫斯, 罗伯特·德泽尔, 雷蒙德·普兰特 申请人:比奥·梅加·贝林格尔·英格海姆研究公司