专利名称：生物素衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及式I的生物素化合物及其盐
其中Q不存在，或为-NH-(CH2)n-CO-或-NH-(CH2)n-NH，R1为x-Arg-Gly-Asp-Y、A-Cys(R2)-B-U或环-(Arg-Gly-Asp-Z)，其中Z在侧链与Q键连或在Q不存在时与生物素键连，x和y各自独立地为氨基酸残基或二-、三-、四-或五肽残基，其中氨基酸各自独立地选自Ala、Asn、Asp、Arg、Cys、Gln、Glu、Gly、4-Hal-Phe、His、homo-Phe、Ile、Leu、Lys、Met、Nle、Phe、Phg、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，且上述氨基酸也可被衍生，A不存在，或为Asp或为选自下列一组的肽Ala-Asp，Thr-Ala-Asp，Lys-Thr-Ala-Asp，Lys-Thr-Ala-Asn，Lys-Thr-Gly-Asp，Lys-Ala-Ala-Asp，Arg-Thr-Ala-Asp，Ser-Ala-Asp，Gln-Ser-Ala-Asp，Glp-Ser-Ala-Asp，Gly-Lys-Thr-Ala-Asp，Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp，Ile-Ser-Ala-Gly，Arg-Ser-Ala-Gly，Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp，Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp，Asp-Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp，Asp-Asp-Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp，Gly-Lys-Thr-Cys(Trt)-Asp，Met-Asp-Asp-Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp，Asp-Met-Asp-Asp-Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp，B不存在，或为OH、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Orn、Phe、4-Hal-Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、Val或这些氨基酸残基的N-甲基化衍生物，或为选自下列一组的肽片段Pro-Arg、Pro-Arg-Asn，Pro-Arg-Asn-Pro，Pro-Arg-Asn-Pro-His，Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys，Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly，Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro，Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala，Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr，其中如果R1为A-Cys(R2)-B-U、则残基A和B中只能有一个不存在，R2为H、C1-6烷基、Trt、Dpm或Bzl，U为OH、OR9、NH2、NHR9或N(R9)2，Z各自独立地为氨基酸残基或二-、三-或四肽残基，其中氨基酸残基也可选自Ala、Asn、Asp、Arg、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、Val或M，上述氨基酸也可被衍生，且氨基酸残基可按肽的方式通过α-氨基和α-羧基基团相连，M始终存在，M为NH(R8)-CH(R3)-COOH，R3为R5-R4、R6-R4或R7-R4，R4为OH、NH2、SH或COOH，R5为C1-6亚烷基，R6为C7-14亚烷基苯基，R7为C8-14亚烷基苯基亚烷基，
R8为H、C1-6烷基或C7-12亚烷基苯基，R9为C1-6烷基，Hal为F、Cl、Br或I，且n为1，2，3，4，5，6，7，8，9或10，如果其中存在光学活性的氨基酸或氨基酸衍生物残基，则包括D和L两种构型。
WO9415956(生物素化的内皮素受体拮抗剂)、WO9413313(生物素化的LHRH拮抗剂)或WO9418325(生物素化的坏死因子)等专利文献中记载了类似的生物素化的肽化合物。
T.J.Lobl等人在Anal.Biochem.170，502(1988)中曾提到，为了改进纯化的程度而在树脂上进行固相合成过程中将肽生物素化。在DE4310643、DE4336758、EP0406428和WO89/05150等专利文献中公开了类似的环状或线状肽化合物。
本发明的目的是发现具有有价值的性质的新的化合物，特别是那些能够被用于药剂制备中的化合物。现已发现式I化合物和它们的盐具有非常有用的药理特性。它们特别适用于作为整合蛋白抑制剂。它们特别地抑制了αv、β3或β5整合蛋白受体与配体间的相互作用，例如血纤维蛋白原与β3整合蛋白受体的结合。这些化合物对整合蛋白αvβ3、αvβ5、αvβ1、αvβ6和αIIbβ3尤其有效，这种作用可被，例如J.W.Smith等人在J.Biol.Chem.265，12267-12271(1990)中所述的方法证实。
P.C.Brooks、R.A.Clark和D.A.Cheresh等人在Scicnce 264，569-71(1994)中报道了血管发生对血管整合蛋白与脑外基质蛋白相互作用的依赖性。
P.C.Brooks、A.M.Montgomery，M.Rosenfeld、R.A.Reisfeld，T-Hu、G.Klier和D.A.Cheresh等人在Cell79，1157-64(1994)中报道了通过环肽抑制该相互作用，从而引发生成血管的血管细胞的程序设计死亡的可能性。
式I化合物抑制整合蛋白受体与配体间的相互作用，例如血纤维蛋白原与血纤维蛋白原受体(糖蛋白IIb/IIIa)的相互作用，从而作为GPIIb/IIIa拮抗剂阻止了肿瘤细胞通过转移而扩散。这一点可通过以下观察结果得以证实肿瘤细胞由局部肿瘤向血管系统扩散是通过肿瘤细胞与血小板相互作用，形成小颗粒(小血栓)而发生的。肿瘤细胞通过小颗粒的保护而被屏蔽，并且不被免疫系统的细胞识别。
小颗粒可被吸附于血管壁，从而有助于肿瘤细胞进一步向该组织渗透。由于小颗粒的形成受血纤维蛋白原与被激活的血小板上的血纤维蛋白原受体的结合的介导，因此GPIIa/IIIb拮抗剂被认为是肿瘤转移的有效抑制剂。
这些化合物能用作人和兽类药物中药剂的活性物质，尤其适于预防和治疗血栓形成、心肌梗塞、动脉硬化、动脉粥样硬化、炎症、中风、心绞痛、肿瘤、溶骨病特别是骨质疏松、病源性血管生成疾病如炎症、眼科疾病如视网膜病、黄斑变性、近视、眼组织胞浆菌病、类风湿性关节炎、骨关节炎、青光眼、溃疡性结肠炎、节段性回肠炎、动脉粥样硬化、牛皮癣、血管成形术后再狭窄、病毒感染、细菌感染、真菌感染、急性肾衰竭。此外，它们在伤口愈合过程中起辅助作用。
在插入生物材料、植入物、导管或心脏起搏器的手术操作过程中，式I化合物可用作杀菌活性物质。在此情况下，它们起抗菌剂作用。可利用P.Valentin-Weigund等人在Infection and Immunity，2851-2855(1988)中所述的方法来证实抗菌活性的效力。
由于式I化合物是血纤维蛋白原与血小板上血纤维蛋白原受体的配体结合的抑制剂，因此可将它们作为体内诊断工具，用于血管系统中血栓的检测和定位，因为生物素残基是一个可被紫外线检测出的基团。
作为血纤维蛋白原结合抑制剂的式I化合物也可被用作有效手段，用于研究各个激活阶段血小板的机制或细胞内血纤维蛋白原受体的信号机制。“生物素标记物”的可检测单位使得研究与受体结合后的所述机制成为可能。
上文和下文中给定的氨基酸残基的缩写表示下列的氨基酸残基Abu4-氨基丁酸Aha6-氨基己酸
Ala丙氨酸Asn天冬酰胺Asp天冬氨酸Arg精氨酸Cys半胱氨酸Dab2，4-二氨基丁酸Dap2，3-二氨基丙酸Glp焦谷氨酸Glu谷氨酸Gly甘氨酸His组氨酸homo-phe 高苯丙氨酸Ile异亮氨酸Leu亮氨酸Lys赖氨酸Met蛋氨酸Nle正亮氨酸Orn鸟氨酸Phe苯丙氨酸Phg苯甘氨酸4-Hal-Phe 4-卤代-苯丙氨酸Pro脯氨酸Ser丝氨酸Thr苏氨酸Trp色氨酸Tyr酪氨酸Val缬氨酸
Bit
此外，下文所用的缩写具有下面的定义BOC叔丁氧基羰基CBZ苄氧基羰基DCCI 二环己基碳化二亚胺DMF二甲基甲酰胺Et 乙基Fmoc 9-芴基甲氧基羰基HOBt 1-羟基苯并三唑Me 甲基MBHA 4-甲基二苯甲基胺Mtr4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯基磺酰基OBut 叔丁酯OMe甲酯OEt乙酯POA苯氧基乙酰基TFA三氟乙酸Trt三苯甲基。
上述氨基酸可能存在有两种或多种对映体形式，则在上文和下文中，例如作为式I化合物的组成部分包括所有对映体形式以及它们的混合物(例如DL形式)。作为式I化合物组成部分的氨基酸可进一步被适当的保护基保护。
本发明的化合物也包括所谓的前药衍生物，即已被例如烷基、酰基、糖或多肽修饰且能在体内迅速裂解成本发明活性化合物的式I化合物。
本发明还涉及制备式I化合物及其盐的方法，其特征在于(a)将式II化合物与式III化合物进行酰化反应H-Q-R1II式II中
Q不存在，或为-NH-(CH2)n-CO-或-NH-(CH2)n-NHR1为x-Arg-Gly-Asp-Y、A-Cys(R2)-B-U或环-(Arg-Gly-Asp-Z)，其中Z在侧链与Q键连或在Q不存在时与生物素键连，
式III中L为Cl、Br、I、游离的或活性功能性修饰的OH基团，或(b)将式IV化合物与式V化合物进行酰化反应H-R1(IV)式IV中R1为x-Arg-Gly-Asp-Y、A-Cys(R2)-B-U或环-(Arg-Gly-Asp-Z)，其中Z在侧链与Q键连或在Q不存在时与生物素键连，
式V中Q为不存在，或为-NH-(CH2)n-CO-或-NH-(CH2)n-NH-，L为H、Cl、Br、I、游离的或活性功能性修饰的OH基团，或(c)通过溶剂分解剂或氢解剂将它们从其功能性衍生物中释放出来，和/或通过用酸或碱处理将碱性或酸性的式I化合物转化为其一种盐。
在上下文中，除非另有解释，残基Q、R1和L的含义与式I、II和III中所述相同。
在上述各式中，烷基优选为甲基、乙基、异丙基或叔丁基。
亚烷基优选为亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基或亚己基。亚烷基苯基优选为苄基或苯乙基。亚烷基苯基亚烷基优选为4-亚甲基苄基或4-亚乙基苄基。
残基-R6-R4优选为2-、3-或4-羟基苄基、2-、3-或4-氨基苄基、2-、3-或4-巯基苄基、2-、3-或4-羟基苄基，还优选2-、3-或4-羟基苯乙基、2-、3-或4-氨基苯乙基、2-、3-或4-巯基苯乙基或2-、3-或4-羧基苯乙基。
Q优选为6-氨基己酸或不存在。
M优选为Dap、Ser、Cys、Asp、D-Asp、Dab、高丝氨酸、高半胱氨酸、Glu、D-Glu、Thr、Orn、Lys、D-Lys、4-氨基甲基-Phe或4-氨基甲基-D-Phe。
x优选为Ala、Asn、Asp、Arg、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，也优选为Lys-Gly，Lys-Ala，Lys-β-Ala，Tyr-Gly，Tyr-Ala，Tyr-β-Ala，Phe-Gly，Phe-Ala，Phe-β-Ala，Tyr-Gly-Gly，Phe-Gly-Gly，Lys-Gly-Gly，Tyr-Gly-Ala，Phe-Gly-Ala，Lys-Gly-Ala，Arg-Gly-Asp，Lys-Gly-Gly-Gly，Tyr-Gly-Gly-Gly，Phe-Gly-Gly-Gly，Lys-Gly-Gly-Ala，Tyr-Gly-Gly-Ala，Phe-Gly-Gly-Ala，Lys-Gly-Gly-β-Ala，Tyr-Gly-Gly-β-Ala，Phe-Gly-Gly-β-Ala，也优选为Lys-Gly-Gly-Gly-Gly，Tyr-Gly-Gly-Gly-Gly，Phe-Gly-Gly-Gly-Gly，Lys-Gly-Gly-Ala-Gly，Tyr-Gly-Gly-Ala-Gly，Phe-Gly-Gly-Ala-Gly，Lys-Gly-Gly-β-Ala-Gly，Tyr-Gly-Gly-β-Ala-Gly or Phe-Gly-Gly-β-Ala-Gly.Y优选为Ala，Ash，Asp，Arg，Cys，Gln，Glu，Gly，His，Ile，Leu，Lys，Met，Phe，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr or Val，也优选为Tyr-Ala，Tyr-Asn，Tyr-Asp，Tyr-Arg，Tyr-Cys，Tyr-Gln，Tyr-Glu，Tyr-Gly，Tyr-His，Tyr-Ile，Tyr-Leu，Tyr-Lys，Try-Met，Tyr-Phe，Tyr-Pro，Tyr-Ser，Tyr-Thr，Tyr-Trp，Tyr-Tyr，Tyr-Val，Phe-Ala，Phe-Asn，Phe-Asp，Phe-Arg，Phe-Cys，Phe-Gln，Phe-Glu，Phe-Gly，Phe-His，Phe-Ile，Phe-Leu，Phe-Lys，Phe-Met，Phe-Phe，Phe-Pro，Phe-Ser，Phe-Thr，Phe-Trp，Phe-Tyr，Phe-Val，Trp-Ala，Trp-Asn，Trp-Asp，Trp-Arg，Trp-Cys，Trp-Gln，Trp-Glu，Trp-Gly，Trp-His，Trp-Ile，Trp-Leu，Trp-Lys，Trp-Met，Trp-Phe，Trp-Pro，Trp-Ser，Trp-Thr，Trp-Trp，Trp-Tyr，Trp-Val，Asp-Ala，Asp-Asn，Asp-Asp，Asp-Arg，Asp-Cys，Asp-Gln，Asp-Glu，Asp-Gly，Asp-His，Asp-Ile，Asp-Leu，Asp-Lys，Asp-Met，Asp-Phe，Asp-Pro，Asp-Ser，Asp-Thr，Asp-Trp，Asp-Tyr，Asp-Val，Ser-Pro-Lys，Tyr-Pro-Lys，Phe-Pro-Lys，Trp-Pro-Lys，Asp-Pro-Lys，Ser-Gly-Lys，Tyr-Gly-Lys，Phe-Gly-Lys，Trp-Gly-Lys，Asp-Gly-Lys，Ser-Ala-Lys，Tyr-Ala-Lys，Phe-Ala-Lys，Trp-Ala-Lys，Asp-Ala-Lys，Ser-Pro-Ala，Ser-Leu-Lys，Tyr-Leu-Lys，Phe-Leu-Lys，Trp-Leu-Lys，Asp-Leu-Lys，Ser-Ile-Lys，Tyr-Ile-Lys，Phe-Ile-Lys，Trp-Ile-Lys，Asp-Ile-Lys，Ser-Pro-Ala-Ser，Tyr-Pro-Ala-Ser，Phe-Pro-Ala-Ser，Trp-Pro-Ala-Ser，Asp-Pro-Ala-Ser，Ser-Gly-Ala-Ser，Tyr-Gly-Ala-Ser，Phe-Gly-Ala-Ser，Trp-Gly-Ala-Ser，Asp-Gly-Ala-Ser，Ser-Ala-Ala-Ser，Tyr-Ala-Ala-Ser，Phe-Ala-Ala-Ser，Trp-Ala-Ala-Ser，Asp-Ala-Ala-Ser，Ser-Val-Ala-Ser，Tyr-Val-Ala-Ser，Phe-Val-Ala-Ser，Trp-Val-Ala-Ser，Asp-Val-Ala-Ser，Ser-Leu-Ala-Ser，Tyr-Leu-Ala-Ser，Phe-Leu-Ala-Ser，Trp-Leu-Ala-Ser，Asp-Leu-Ala-Ser，Ser-Ile-Ala-Ser，Tyr-Ile-Ala-Ser，Phe-Ile-Ala-Ser，Trp-Ile-Ala-Ser，Asp-Ile-Ala-Ser，也优选为Ser-Pro-Ala-Ser-Ser，Tyr-Pro-Ala-Ser-Ser，Phe-Pro-Ala-Ser-Ser，Trp-Pro-Ala-Ser-Ser，Asp-Pro-Ala-Ser-Ser，Ser-Gly-Ala-Ser-Ser，Tyr-Gly-Ala-Ser-Ser，Phe-Gly-Ala-Ser-Ser，Trp-Gly-Ala-Ser-Ser，Asp-Gly-Ala-Ser-Ser，Ser-Ala-Ala-Ser-Ser，Tyr-Ala-Ala-Ser-Ser，Phe-Ala-Ala-Ser-Ser，Trp-Ala-Ala-Ser-Ser，Asp-Ala-Ala-Ser-Ser，Ser-Val-Ala-Ser-Ser，Tyr-Val-Ala-Ser-Ser，Phe-Val-Ala-Ser-Ser，Trp-Val-Ala-Ser-Ser，Asp-Val-Ala-Ser-Ser，Ser-Leu-Ala-Ser-Ser，Tyr-Leu-Ala-Ser-Ser，Phe-Leu-Ala-Ser-Ser，Trp-Leu-Ala-Ser-Ser，Asp-Leu-Ala-Ser-Ser，Ser-Ile-Ala-Ser-Ser，Tyr-Ile-Ala-Ser-Ser，Phe-Ile-Ala-Ser-Ser，Trp-Ile-Ala-Ser-Ser or Asp-Ile-Ala-Ser-Ser，
x、y和z定义中的氨基酸和氨基酸残基也可被衍生，优选为N-甲基、N-乙基、N-丙基、N-苄基或Cα-甲基衍生物。
还优选Asp和Glu的衍生物，尤其是侧链羧基的甲基、乙基、丙基、丁基、叔丁基、新戊基或苄基酯，及在-NH-C(＝NH)-NH2基团上被乙酰基、苯甲酰基、甲氧羰基或乙氧羰基取代的Arg的衍生物。
而且，x和y定义中所提到的氨基酸或氨基酸残基上可加上本身已知的合适保护基。
Z优选为M，更优选为D-Phe-M，D-Trp-M，D-Tyr-M，D-Phe-Lys，D-Phe-D-Lys，D-Trp-Lys，D-Trp-D-Lys，D-Tyr-Lys，D-Tyr-D-Lys，D-Phe-Orn，D-Phe-Dab，D-Phe-Dap，D-Phe-D-Orn，D-Phe-D-Dab，D-Phe-D-Dap，D-Phe-4-氨基甲基-Phe，D-Phe-4-氨基甲基-D-Phe，D-Trp-4-氨基甲基-Phe，D-Trp-4-氨基甲基-D-Phe，D-Tyr-4-氨基甲基-Phe，D-Tyr-4-氨基甲基 -D-Phe，D-Phe-Asp，D-Phe-D-Asp，D-Trp-Asp，D-Trp-D-Asp，D-Tyr-Asp，D-Tyr-D-Asp，D-Phe-Cys，D-Phe-D-Cys，D-Trp-Cys，D-Trp-D-Cys，D-Tyr-Cys，D-Tyr-D-Cys，Phe-D-Lys，Trp-D-Lys，Tyr-D-Lys，Phe-Orn，Phe-Dab，Phe-Dap，Trp-Orn，Trp-Dab，Trp-Dap，Tyr-Orn，Tyr-Dab，Tyr-Dap，Phe-4-氨基甲基-D-Phe，Trp-4-氨基甲基-D-Phe，Tyr-4-氨基甲基-D-Phe，Phe-D-Asp，Trp-D-Asp，Tyr-D-Asp，Phe-D-Cys，Trp-D-Cys，Tyr-D-Cys，D-Phe-Lys-Gly，D-Phe-M-Gly，D-Trp-Lys-Gly，D-Trp-M-Gly，D-Tyr-Lys-Gly，D-Tyr-M-Gly，D-Phe-Val-Lys，D-Phe-Gly-Lys，D-Phe-Ala-Lys，D-Phe-Ile-Lys，D-Phe-Leu-Lys，D-Trp-Val-Lys，D-Trp-Gly-Lys，D-Trp-Ala-Lys，D-Trp-Ile-Lys，D-Trp-Leu-Lys，D-Tyr-Val-Lys，D-Tyr-Gly-Lys，D-Tyr-Ala-Lys，D-Tyr-Ile-Lys，D-Tyr-Leu-Lys，也优选为M-Pro-Ala-Ser-Ser。
式I化合物可能含有一个或多个手性中心，因此存在着各种立体异构体形式。式I化合物包括所有这些形式。
相应地，本发明尤其其中至少一个所述残基具有如上所述优选含义的式I化合物。部分优选的化合物组可由下式Ia至If表示，它们对应于式I，其中未定义的基团取式I中所述的定义，IaQ Q不存在，且R1为x-Arg-Gly-Asp-Y；IbQ 为-NH-(CH2)5-CO-且R1为X-Arg-Gly-Asp-Y；IcQ 为-NH-(CH2)5-CO-且R1为cyclo-(Arg-Gly-Asp-z)；IdQ 为-NH-(CH2)5-CO-且R1为cyclo-(Arg-Gly-Asp-M)；IeQ 为-NH-(CH2)5-CO-且R1为A-Cys(R2)-B；IfQ 为-NH-(CH2)n-CO-，n 为1，2，3，4，5 or 6.
式I的化合物，以及制备它们的反应物，是用已知的方法制备的，如在文献中所述(例如在标准著作如Houben-Weyl，Methoden derOrganischen Chemie〔有机化学方法〕(Methods of OrganicChemistry)，(Georg-Theime-Verlag.Stuttgart)，尤其是在已知的并适用于所提到的反应的条件下进行。也可利用在本文中未详细提到的已知的改进方法。
如果需要，起始物料也可就地形成，因此不必从反应混合物中将它们分离出来而是直接进一步反应产生式I的化合物。
优选通过将式II化合物与式III化合物反应来获得式I化合物。
一般来说，式II和式III化合物是已知的。如果它们不是已知的，则可按已知方法制得。
式III化合物中的残基-CO-L为预活化的羧酸，优选为碳酰卤、对称或混合酐或活性酸。在典型的酰化反应中用于活化羧基的这类残基在文献中已有记载(如在Houben-Weyl，Methoden der organischenChemie，Georg-Thieme-Verlag，Stuttgart)。活性酯优选就地形式，例如通过加入HOBt或N-羟基琥珀酰亚胺。L优选为H、Cl、Br或-ON-琥珀酰亚胺。
一般来说，在酸结合剂存在下于惰性溶剂中进行反应，酸结合剂优选为有机碱，如三乙胺、二甲基苯胺、吡啶或喹啉或过量的式III的羧基组分。
较为有利的是加入碱金属或碱土金属氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐，或碱金属或碱土金属的弱酸的盐，优选钾、钠、钙或铯的盐。
反应时间取决于所用的条件，一般在几分钟到14天。反应温度为约-30°至140°，通常为-10°至90°，尤其是约0°至70 °。
适宜的惰性溶剂的例子有烃，如己烷、石油醚、苯、甲苯或二甲苯；氯代烃，如三氯乙烷、1，2-二氯乙烷、四氯甲烷、氯仿或二氯甲烷；醇，如甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇或叔丁醇；醚，如乙醚、二异丙基醚、四氢呋喃(THF)或二噁烷；二元醇醚，如乙二醇单甲醚或单乙醚、乙二醇二甲醚；酮，如丙酮或丁酮；酰胺，如乙酰胺、二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺(DMF)；腈，如乙腈；亚砜，如二甲基亚砜(DMSO)；二硫化碳；羧酸，如甲酸或乙酸；硝基化合物，如硝基甲烷或硝基苯；酯，如乙酸乙酯；水；或上述溶剂的混合物。
还可通过将式IV化合物与式V化合物反应制备式I化合物。式IV和V起始化合物一般是已知的。如果它们不是已知的，则可通过已知方法制得。
式V化合物中的残基-CO-L为预活化的羧酸，优选为碳酰卤、对称或混合酐或活性酯。在典型的酰化反应中用于活化羧基的这类残基在文献中已有记载(如在Houben-Weyl，Methoden der organischenChemie，Georg-Thieme-Verlag，Stuttgart)。L优选为Cl、Br或-ON-琥珀酰亚胺。
可在与式II化合物和式III化合物反应相同的反应时间、温度、溶剂等条件下进行式IV与式V化合物的反应。
其中R1为x-Arg-Gly-Asp-Y或A-Cys(-R2)-B的式I线性开链化合物还可通过如下方法制得在固相合成的最后一步，将生物素作为最后的组分按在与正常的N-末端保护的氨基酸同样的循环中偶联，并在正常条件下从树脂上裂解生物素-肽。
可按A.Jonczykt和J.Meienhofer在Peptides，Proc.8th A.mPept.Symp.Eds.V.Hruby and D.H.Rich，Pierce Comp.III，P73-77(1983)中所述的方法或按与在Angew.Chem.104，375-391(1992)中所述类似的技术进行固相合成、裂解和纯化。
而可按合成氨基酸和肽的常规方法，例如在所提到的典型著作和专利中涉及Merrifield的固相合成法(B.F Gysin andR.B.Merrificld，J.Am.Chem.Soc.94，3102 ff.(1972))中所述的方法制备式I与式IV的开链线性化合物。
可按在例如DE 4310 643或Houben-Weyl，l.c.，Volume15/II，Pages/to 806(1974)中所述的方法环化线性方法制备出其中R1为环-(Arg-Gly-Asp-Z)的环状式II和IV化合物。
通过溶剂分解尤其是水解或通过氢解可将式I化合物从其功能性衍生物中释放出来。
用于溶剂分解或氢解的优选起始物是这样一些化合物，它们在其它方面对应于式I，但以相应的保护氨基和/或羟基替代了一个或多个游离氨基和/或羟基，优选以氨基保护基替代了与氮原子键和的H，例如对应于式I但以NHR’基团替代了NH2基团(其中R’为氨基保护基，如BOC或CBZ)的化合物。
也优选的起始物是以羟基保护基替代了羟基中的H原子的化合物，例如对应于式I，但以R”O-苯基(其中R”为羟基保护基)替代了羟苯基的化合物。
在起始物分子中也可能存在多个相同或不同的保护氨基和/或羟基。如果这些存在的保护基彼此不同，则在许多情况下可将它们选择性地裂解掉。
术语“氨基保护基”是普遍熟知的，指适于保护(封阻)氨基免于化学反应但在分子中其它处所需的化学反应进行后又易于除去的基团。典型的这类基团包括未取代或取代酰基、芳基、芳烷氧基甲基或芳烷基。由于氨基保护基在所需反应(或反应序列)后被除去，因此其性质和大小并不重要。但是仍优选具有1-20个，尤其是1-8个碳原子的保护基。与本方法相关联的“酰基”取其最宽含义。它包括得自脂族、芳脂族、芳族或杂环族羧酸或磺酸的酰基，尤其是烷氧羰基、芳氧羰基以及芳烷氧羰基。这类酰基的例子包括烷酰基，如乙酰、丙酰或丁酰；芳烷酰基，如苯乙酰；芳酰基，如苯甲酰或甲苯酰；芳氧基烷酰基，如苯氧乙酰；烷氧羰基，如甲氧羰基、乙氧羰基、2，2，2-三氯乙氧羰基、叔丁氧羰基(BOC)或2-碘代乙氧羰基；或芳烷氧羰基，如苄氧羰基(CBZ)、4-甲氧基苄氧羰基、9-芴基甲基羰基(FMOC)芳基磺酰基，如Mtr。优选的氨基保护基是BOC和Mtr，以及CBZ，Fmoc、苄基和乙酰基。
术语“羟基保护基”也是普遍熟知的，它是指适于保护羟基免于化学反应但在分子中其它处发生的所需化学反应完成后又能易于除去的基团。典型的这类基团是上面所提到的未取代或取代芳基、芳烷基或酰基以及烷基。由于羟基保护基在所需的化学反应或反应序列发生后被除去，因此其性质和大小并不重要；优选具有1-20个，尤其是1-10个碳原子的基团。羟基保护基的例子包括苄基、对-硝基苯甲酰基、对-甲苯磺酰基、叔丁基和乙酰基，尤其优选的是苄基和叔丁基。天冬氨酸和谷氨酸中的COOH基团优选以其叔丁基酯(如Asp(OBut))加以保护。
根据所使用保护基的不同，可用不同的方式使式I化合物从其功能性衍生物中释放出来，例如用强酸，尤其是三氟乙酸或高氯酸处理，但也可使用其它的强无机酸，如盐酸或硫酸；强有机羧酸，如三氯乙酸；或磺酸，如苯磺酸或对-甲苯磺酸。另一种惰性溶剂的存在是可能的，但并不总是必需的。
适宜的惰性溶剂优选为有机溶剂，如乙酸等羧酸，四氢呋喃(THF)或二噁烷等醚，二甲基甲酰胺(DMF)等酰胺，二氯甲烷等卤代烃，以及甲醇、乙醇或异丙醇等醇，和水。上述溶剂的混合物也是可能的。三氟乙酸优选是在不加入其它溶剂的情况下过量使用，高氯酸是以乙酸和70％的高氯酸的9∶1混合物的形式使用。用于去保护反应的温度在约0-50°较为有利，优选在15-30°(室温)。
BOC、OBut和Mtr基团优选在15-30°用三氟乙酸的二氯甲烷溶液或用约3-5NHCl的二噁烷溶液除去。FMOC基团可在15-30°用5-50％的二甲胺、二乙胺或哌啶的DMF溶液除去。
可用三苯甲基保护组氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和半胱氨酸等氨基酸。根据所需终产物的不同该保护基的除去可由不同试剂完成，当用TFA/10％苯硫酚处理时可从所有上述氨基酸上除去三苯甲基，当使用TFA/苯甲醚或TFA/苯硫基甲烷时，三苯甲基只能从His、Asn和Gln上除去，而不能从Cys上除去。
能够被氢解除去的保护基(例如，CBZ或苄基)能够用，例如，氢在催化剂(例如，贵金属催化剂如钯，较有利地是载于活性炭上)存在下进行处理来除去。在这方面，适当的溶剂是那些上面所给定的，特别是醇如甲醇或乙醇，或酰胺如DMF。氢解通常是在大约0-100℃的温度下和大约1-200巴的压力下，优选在20-30℃和1-10巴下实施，例如，CBZ基的氢解较有利地是于20-30℃用5-10％Pd-C在甲醇中或用甲酸铵(代替H2)于Pd-C上在甲醇/DMF中完成。
用酸可将式I的碱转化成相应的酸加成盐，例如可将等量的碱和酸在惰性溶剂如乙醇中反应，然后蒸发。特别适用该反应的酸是那些能产生生理上可接受的盐的酸。例如，可被使用的无机酸的实例是硫酸、硝酸，氢卤酸和盐酸或氢溴酸，磷酸如正磷酸，氨基磺酸，和有机酸，特别是脂族、脂环，芳脂族，芳香族或杂环的单-或多元羧酸、磺酸或硫酸，例如，甲酸、乙酸、丙酸，新戊酸，二乙基乙酸、丙二酸，琥珀酸、庚二酸、富巴酸、马来酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、葡糖酸、抗坏血酸、烟酸、异烟酸、甲磺酸或乙磺酸、乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、萘一磺酸和萘二磺酸和月桂基硫酸。与生理上不能接受的酸形成的盐，例如苦味酸盐，能被用来分离和/或纯化式I化合物。
另外，通过与碱反应式I的酸能被转化成一种它的生理上可接受的金属盐或铵盐。特别适当的盐是钠、钾、镁、钙和铵盐，还有取代的铵盐，例如二甲基铵盐，二乙基铵盐或二异丙基铵盐，单乙醇铵盐、二乙醇铵盐或二异丙基铵盐，环己基胺盐和二环己基铵盐、二苄基亚乙基二铵盐，还有例如，与精氨酸或赖氨酸形成的盐。
式I的化合物及其生理上可接受的盐可用于制备药物制剂，尤其是通过非化学途径。它们可与至少一种固体、液体和/或半液体载体或助剂一起制成合适的剂量形式，如果需要还可加入一种或多种其它活性化合物。
本发明还涉及组合物，尤其是药物制剂，它包含至少一种式I化合物和/或一种其生理上可接受的盐。
这些制剂可作为人用药或兽药使用。可能的载体是适用于肠道(如口腔)、非肠道或局部给药或以吸入喷雾方式给药且不与该新物质反应的无机或有机物质，如水、植物油、苄基醇、聚乙二醇、三乙酸甘油酯、明胶，碳水化合物(如乳糖或淀糖)、硬脂酸镁、滑石和矿脂。片剂、丸剂、包衣片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、糖浆、溶液或滴剂可用于口服，栓剂可用于直肠给药，溶液，尤其是油或水溶液及悬浮液、乳液或植入物可用于非肠道给药，软膏、乳油、或粉剂可用于局部给药。本发明新化合物也可被冻干，所产生的冻干物可用于制备注射制品。
脂质体也可用于局部给药。所述制剂可被灭菌和/或含有助剂，如润滑剂、防腐剂、稳定剂和/或湿润剂、乳化剂、影响渗透压的盐、缓冲物质、着色剂、调味剂和/或芳香物质。根据需要，它们也可含有一种或多种其它活性物质，如一种或多种维生素。对于吸入剂喷雾的服用方式来说，可以使用含有溶解于或悬浮于推进气或推进气混合物(例如，CO2或氟氯烃)的活性物质的喷雾剂。在这种情况下活性物质优选以微粉化的形式被使用，可以存在有一种或多种外加的生理上可接受的溶剂，例如，乙醇。可利用通常的吸入器施用吸入剂溶液。
式I化合物及其生理上可接受的盐可作为整合蛋白抑制剂用于控制疾病，尤其是病源性血管生成疾病、血栓形成、心肌梗塞、冠心病、动脉硬化、肿瘤、骨质疏松病、炎症和感染。
根据本发明的物料通常按与其它已知的商业上可得到的多肽相类似的方法服用，特别是用于与在US-A-4472 305中所述的化合物相似的方法服用，优选的剂量是大约每剂量单位。0.05-500mg，特别是0.05-100mg。每天剂量优选大约0.01-2mg/kg体重。但是，每个特定病人的特定剂量取决于许多因素，例如，所用的特定化合物的效力，年龄、体重、健康的一般状态、性别、饮食、给药的时间和途径、排泄速度、药物的结合和各自病情的严重性。非肠道服用是优选的。
式I新化合物还可用于分析生物学和分子生物学。它利用的是生物素残基与糖蛋白抗生物素蛋白形成复合物的能力。E.A.Bager和M.Wilchek在Mtheods of Biochemical Analysis26，1-45(1980)(文献1)中记载了生物素抗生物素蛋白复合物的应用。
式I新化合物还可作为整合蛋白配位体用于生产亲和层析柱，该柱用于制备纯整合蛋白。按照已知方法如参考文献1中所述的方法可形成由抗生物素蛋白产生的载体与式I新化合物的复合物。因此，在这方面未提供该方法的详细情况，可参考相应的文献，如参考文献1。
适宜的聚合物载体材料是在肽化学中本身是已知的并优选地具有亲水性的固态聚合物相，实例为交联的多糖如纤维素、Sepharose或Sephadex、丙烯酰胺、以聚乙二醇为基体的聚合物或TentacutarR聚合物。
式I新化合物也可作为抗生物素抗体反应的诊断标记物用于ELISA型检测或用于FACS(荧光活化细胞分类器)分析。M.Berger，Biochemistry14，2338-2342(1975)记载了用抗生物素抗体检测生物素。U.Holmkov-Nielsen等人在Journal of Chromalography，297，225-233(1984)中记载了利用被生物素衍生的免疫球蛋白IgG进行酶联免疫检测(ELISA)。
J.Gao和S.J.Shattil在J.Lmmunol.Methods 181，55-64(1995)中记载了一种ELISA试验，它能够检测抑制整合蛋白αIIbβIII活化的物质。其中使用了生物素化的血纤维蛋白原进行检测。
G.Schmitz和G.Rothe在DG Klinische Chemie Mitteilungen24(1993)No.1，Page1-44中记载了流动血细胞计数在临床细胞诊断中的应用。
式I化合物还可用于力场显微镜(原子力显微镜AFM)，以测定配体-受体反应物的强度。配体优选总指抗生物素蛋白和式I新化合物的复合物。受体优选总指整合蛋白受体。E.L.Florin等人在Science264，415-417(1994)中记载了抗生物素功能化的力场显微镜和生物素化的琼脂之间的粘合力。
上下文中所用温度均为℃，在后面的实例中“常规操作”是指如果必需加入水，如果必需根据终产物的组成将pH调节至2-10，用乙酸乙酯或二氯甲烷萃取，相分离，有机相用硫酸钠干燥并蒸发，以及通过硅胶层析和/或结晶化进行纯化。Rf值是在硅胶上；流动相乙酸乙酯/甲醇9∶1。
RT为在下列系统中的保留时间(分钟)。
〔A〕柱Nucleosil 7C18 250×4mm洗脱剂A；0.1％TFA水溶液洗脱剂B0.1％TFA乙腈溶液流速1ml/min梯度20-50％B/30min〔B〕利用0.3％TFA以1ml/min的流速在LichrosorbRRP Select B(7μm)250×4mm柱上在50分钟内形成0-80％2-丙醇水溶液梯度。
〔C〕柱Lcchrospher(5μm)100RP8 125×4mm洗脱剂A0.01M磷酸钠(pH7.0)洗脱剂B0.005M磷酸钠(pH7.0)/60％(体积)2-丙醇流速0.7ml/min梯度1-99％B/50min质谱(MS)EI(电子碰撞电离)M+FAB(快原子轰击)(M＋H)+DMPP-树脂代表4-(2’，4’-二甲氧基苯基羟甲基)苯氧基树脂，它是一种可以合成侧链受保护的肽的超级酸不稳定树脂。
实施例1将0.6g Fmoc-Lys(Boc)-OH溶于100ml二氯甲烷，加入1.2当量DMPP-树脂、1.4当量HOBt和1.4当量DCCI，并将混合物于室温下搅拌12小时。除去溶剂，产生Fmoc-Lys(BOC)-DMPP-树脂。在一肽合成仪中，使用三信过量的被保护脯氨酸将Fmoc-Pro-OH与H-Lys(BOC)-DMPP-树脂〔利用哌啶/DMF(20％)从Fmoc-Lys(BOC)-DMPP-树脂上释放〕缩合。于室温下利用DCCI/OHBt进行偶联，得到Fmoc-Pro-Lys(BOC)-DMPP-树脂。类似地，随后除去Fmoc保护基，并在重复的反应条件下按如下步骤连续地与Fmoc-ser(But)-OH、Fmoc-Asp(OBut)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Mtr)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH和Bit-OH偶联-用哌啶/DMF(20％)释放出α-氨基。
-用二甲基乙酰胺洗涤-与Fmoc-氨基酸或Bit-OH反应从而得到Bit-Gly-Gly-Gly-Arg(Mtr)-Gly-Asp(OBut)-Ser(But)-Pro-Lys(BOC)-DMPP-树脂。
用CF3SO3H/CH2Cl2/H2O洗涤该树脂，产生Bit-Gly-Gly-Gly-Arg(Mtr)-Gly-Asp(OBut)-Ser(But)-Pro-Lys(BOC)-OH。
用2NHCl的二噁烷溶液除去保护基，若除去溶剂，将残余物溶于TFA/CH2Cl2并用Et2O沉淀，通过RP-HPLC进行纯化。得到Bit-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Lys-OHx2 TFA；RT[B]＝12.14FAB1056.
实施例2与实施例1类似，将DMPP-树脂连续与Fmoc-Rro-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OBut)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Thr(But)-OH、Fmoc-Lys(BOC)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH和Bit-OH偶联，得到Bit-Gly-Gly-Gly-Lys(BOC)-Thr(But)-Ala-Asp(OBut)-Cys(Trt)-Pro-DMPP-树脂。
与树脂裂解，除去保护基并纯化，得到Bit-Gly-Gly-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH x2 TFA；RT[B]27.6；FAB 1273.
类似地，通过将DMPP-树脂与下列成分依次缩合，可分别得到相应产物与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Ala-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Arg-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ser(But)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Ser-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH；
与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ser(But)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Gln-Ser-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ser(But)-OH，Fmoc-Glp-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Glp-Ser-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ser(But)-OH，Fmoc-Ile-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Ile-Ser-Ala-Gly-Cys(Trt)-Pro-OH；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ser(But)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Arg-Ser-Ala-Gly-Cys(Trt)-Pro-OH；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，FMOC-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Gly-Gly-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH；与Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-OH；与Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH和Bit-OH反应，
a)当用TFA和10％苯硫酚裂解保护基时，得到Bit-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-OH；b)当用TFA和10％苯硫基甲烷裂解保护基时，得到Bit-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-OH；与Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-Gly-OH和Bit-OH反应，a)当用TFA和10％苯硫酚裂解保护基时，得到Bit-Gly-Lys-Thr-Cys-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-OH；b)当用TFA和10％苯硫基甲烷裂解保护基时，得到Bit-Gly-Lys-Thr-Cys(Trt)-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-OH；与Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，a)当用TFA和10％苯硫酚裂解保护基时，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-OH；b)当用TFA和10％苯硫基甲烷裂解保护基时，得到
Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-OH；与Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，a)当用TFA和10％苯硫酚裂解保护基时，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-OH；b)当用TFA和10％苯硫基甲烷裂解保护基时，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-OH；与Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-Gly-OH和Bit-OH反应，a)当用TFA和10％苯硫酚裂解保护基时，得到Bit-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-OH；b)当用TFA和10％苯硫基甲烷裂解保护基时，得到Bit-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-OH；
与Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Thr-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-OH；与Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-pro-Ala-Thr-OH；与Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-OH；
与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Chs(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-OH；与Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-OH；与Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-OH；与Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-OH；与Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-OH；
与Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-OH；与Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，和Bit-OH反应，得到Bit-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-OH；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH；与Fmoc-NMeAla-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-NMeAla-OH；
实施例3向3.05g环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys)〔通过环化H-Arg(Mtr)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys(BOC)-OH为环-(Arg(Mtr)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys(BOC))；然后裂解掉保护基而获得〕的100ml二氯甲烷溶液中，加入1.7g廉价的(+)-生物素基-N-琥珀酰亚胺基脂和0.5g三乙胺。于室温搅拌该混合物5小时，再经常规操作即得到环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(Nε-Bit))×TFA；RT〔B〕11.32；FAB830。
实施例4与实施例3类似，由3.05g环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys)、2.3g可廉价购得的(+)-生物素基-6-氨基己酸N-琥珀酰亚胺基酯(“A”)和0.5g三乙胺制得环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(Nε-Bit-Aha))×TFA；RT〔C〕23.67；FAB943类似地，由“A”和下列环状化合物反应环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Lys)环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys)环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Lys)环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Cys)环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Dab)环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Cys)环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Cys)环-(Arg-Gly-Asp-Phe-D-Lys)环-(Arg-Gly-Asp-Trp-D-Lys)环-(Arg-Gly-Asp-Tyr-D-Lys)环-(Arg-Gly-Asp-Phe-D-Cys)环-(Arg-Gly-Asp-Phe-Dab)环-(Arg-Gly-Asp-Trp-D-Cys)环-(Arg-Gly-Asp-Tyr-D-Cys)环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Om)
环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Om)环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Om)环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Om)环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Om)环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Om)环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Dab)环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Dab)环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Dap)环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Dap)环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Dap)环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Dap)环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Dap)环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Dap)可得到下列化合物环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Lys(Nε-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys(Nε-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Lys(Nε-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Cys(S-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Dab(Nε-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Cys(S-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Cys(S-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-Phe-D-Lys(Nε-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-Trp-D-Lys(Nε-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-Tyr-D-Lys(Nε-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-Phe-D-Cys(S-Bit-Aha))
环-(Arg-Gly-Asp-Phe-Dab(Nγ-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-Trp-D-Cys(S-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-Tyr-D-Cys(S-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Om(Nδ-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Om(Nδ-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Om(Nδ-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Om(Nδ-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Om(Nδ-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Om(Nδ-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Dab(Nγ-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Dab(Nγ-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Dap(Nβ-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Dap(Nβ-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Dap(Nβ-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Dap(Nβ-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Dap(Nβ-Bit-Aha))环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Dap(Nβ-Bit-Aha))实施例5向3.05g环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys)的40ml5％NaHCO3水溶液和40mlTHF的溶液中加入6gBoc-AhaN-琥珀酰亚胺基酯。搅拌4小时，并经常规操作，得到环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(Boc-Aha))RT〔C〕27.7；FAB817。在HCl/二噁烷中裂解掉BOC基团，并经常规操作，得到环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(Nε-Aha))×2TFA；RT〔C〕14.76；FAB717。与实施例1类似，随后与(+)-生物素基-N-琥珀酰亚胺基酯反应，得到环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(Nε-Bit-Aha))×2TFA；RT〔C〕23.67；FAB943。
实施例6与实施例4类似，由环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-Gly)〔通过环化H-Arg(Mtr)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys(BOC)-Gly-OH为环-(Arg(Mtr)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys(BOC)-Gly)，然后裂解掉保护基而获得〕和(+)-生物素基-6-氨基己酸N-琥珀酰亚胺基酯反应，可得到环-(Agr-Gly-Asp-D-Phe-Lys(Nε-Bit-Aha)-Gly)×TFA；RT〔A〕10.97；FAB1000。
类似地，由环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Lys)〔通过环化H-Arg(Mtr)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Val-Lys(BOC)-OH为环-(Arg(mtr)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Val-Lys(BOC))并随后裂解掉保护基获得〕和(+)-生物素基-6-氨基己酸N-琥珀酰亚胺基酯得到环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Lys(Nε-Bit-Aha))×TFA；RT〔A〕16.11；FAB1042。
类似地，由环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-N-Me-Lys)和(+)-生物素基-6-氨基己酸N-琥珀酰亚胺基酯得到环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-N-Me-Lys(Nε-Bit-Aha))。
实施例7与实施例1类似，通过向MBHA-树脂上加入1.4当量HOBt和1.4当量DCCI及Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OBut)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Thr(But)-OH、FmocLys(BOC)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH进行连续偶联，得到Bit-Gly-Gly-Gly-Lys(BOC)-Thr(But)-Ala-Asp(OBut)-Cys(Trt)-Pro-MBHA-resin.
用TFA使其从树脂上裂解，用哌啶/DMF除去保护基并纯化，得到Bit-Gly-Gly-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-NH2类似地，通过将MBHA-树脂与下列反应物缩合，可得到相应产物与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-NH2；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Ala-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-NH2；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH和Bit-OH反应，得到
Bit-Arg-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-NH2；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ser(But)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Ser-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-NH2；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ser(But)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，和Bit-OH反应，得到Bit-Gln-Ser-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-NH2；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ser(But)-OH，Fmoc-Glp-OH，和Bit-OH反应，得到Bit-Glp-Ser-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-NH2；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ser(But)-OH，Fmoc-Ile-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Ile-Ser-Ala-Gly-Cys(Trt)-Pro-NH2；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ser(But)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH与Bit-OH反应，得到Bit-Arg-Set-Ala-Gly-Cys(Trt)-Pro-NH2；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Gly-Gly-Asp-Cys(Trt)-Pro-NH2；与Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH 和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-NH2；与Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Ash(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH和Bit-OH反应，
a)当用TFA和10％苯硫酚裂解保护基时，得到Bit-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-NH2；b)当用TFA和10％苯硫基甲烷裂解保护基时，得到Bit-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Ash-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-NH2；与Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Ash(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-Gly-OH和Bit-OH反应，a)当用TFA和10％苯硫酚裂解保护基时，得到Bit-Gly-Lys-Thr-Cys-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-NH2；b)当用TFA和10％苯硫基甲烷裂解保护基时，得到Bit-Gly-Lys-Thr-Cys(Trt)-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-NH2；与Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，a)当用TFA和10％苯硫酚裂解保护基时，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Ash-Pro-His-Lys-Gly-NH2；
b)当用TFA和10％苯硫基甲烷裂解保护基时，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Ash-Pro-His-Lys-Gly-NH2；与Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，FMoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，a)当用TFA和10％苯硫酚裂解保护基时，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Ash-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-NH2；b)当用TFA和10％苯硫基甲烷裂解保护基时，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Ash-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-NH2；与Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-Gly-OH和Bit-OH反应，a)当用TFA和10％苯硫酚裂解保护基时，得到Bit-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-NH2；b)当用TFA和10％苯硫基甲烷裂解保护基时，得到Bit-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Ash-Pro-His-Lys-Gly-NH2；
与Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Thr-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-NH2；与Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr-NH2；与Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-NH2；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-NH2；与Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-NH2；与Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到
Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-NH2；与Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-NH2；与Fmoc-Lys(BOC)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Asp-Cyg(Trt)-Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-NH2；与Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-NH2；与Fmoc-Arg(Mtr)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-Arg-NH2；与Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-NH2；与Fmoc-NMeAla-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp(OBut)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Thr(But)-OH，Fmoc-Lys(BOC)-OH和Bit-OH反应，得到Bit-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-NMeAla-NH2；
实施例8适用于纯化整合蛋白的亲和层析材料的生产按文献1第14页中所述活化Sepharose。然后向10g活化Sepharose中加入20mg抗生物素蛋白的20ml 0.1M碳酸氢钠溶液。于4℃搅拌该悬浮液12小时，然后洗涤。将该物质悬浮于少许叠氮化钠晶体的水中。
将1.1当量肽溶于乙酸钠缓冲液，将该溶液加至抗生物素蛋白Sepharose悬液并于4°搅拌10小时，形成抗生物素蛋白与本发明生物素化的化合物如环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(Nε-Bit))×TFA的复合物。过量的肽通过洗涤除去。
以下实施例涉及药物制剂。
实施例A注射小瓶将100g式I的活性化合物和5g磷酸氢二钠在3升双蒸水中的溶液，用2N盐酸调节至pH6.5，无菌过滤，分装到注射小瓶中并冻干，将小瓶无菌密封。每个注射小瓶含有5mg活性化合物。
实施例B栓剂将20g式I的活性化合物与100g大豆卵磷脂和1400g可可脂的混合物熔融，并将该混合物倒入模子中，使其冷却。每粒栓剂含有20mg活性化合物。
实施例C溶液用在940ml双蒸水中的1g式I活性化合物、9.38g NaH2PO4×2H2O、28.48g Na2HPO4×12H2O和0.1g氯苄烷胺制备溶液。调节该溶液的pH至6.8，配制为1升，并通过辐射灭菌。该溶液可以以滴眼剂的形式使用。
实施例D油膏将500mg式I的活性化合物与99.5g凡士林在无菌条件下混合。
实施例E片剂采用常规方法，将1kg式I的活性化合物、4kg乳糖、1.2kg土豆淀粉、0.2kg滑石和0.1kg硬脂酸镁的混合物压成片，如此得到的片剂每片含有10mg活性化合物。
实施例F包衣片剂按照与实施例E类似的方法压片，然后采用常规方法，用蔗糖、土豆淀粉、滑石、黄蓍胶和着色剂包衣层进行包衣。
实施例G胶囊采用常规方法，将2kg式I的活性化合物装入硬明胶胶囊中，如此得到的胶囊每粒含有20mg活性化合物。
实施例H安瓿将1kg式I的活性化合物在60升双蒸水中的溶液过滤除菌，分装到安瓿中，冻干，将安瓿无菌密封。每只安瓿含有10mg活性化合物。
实施例I吸入喷雾剂将14g式I活性化合物溶于10升等渗NaCl溶液，并用该溶液装填带有唧筒装置的市售喷雾容器。该溶液可被喷雾至口腔或鼻。一次喷雾(约0.1ml)对应的剂量约为0.14mg。
权利要求
1.式I的生物素化合物及其盐
其中Q不存在，或为-NH-(CH2)n-CO-或-NH-(CH2)n-NH，R1为x-Arg-Gly-Asp-Y、A-Cys(R2)-B-U或环-(Arg-Gly-Asp-Z)，其中Z在侧链与Q键连或在Q不存在时与生物素键连，x和y各自独立地为氨基酸残基或二-、三-、四-或五肽残基，其中氨基酸各自独立地选自Aln、Asn、Asp、Arg、Cys、Gln、Glu、Gly、4-Hal-Phe、His、homo-Phe、Ile、Leu、Lys、Met、Nle、Phe、Phg、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，且上述氨基酸也可被衍生，A不存在，或为Asp或为选自下列一组的肽Ala-Asp，Thr-Ala-Asp，Lys-Thr-Ala-Asp， Lys-Thr-Ala-Asn，Lys-Thr-Gly-Asp，Lys-Ala-Ala-Asp，Arg-Thr-Ala-Asp，Ser-Ala-Asp， Gln-Ser-Ala-Asp，Glp-Ser-Ala-Asp，Gly-Lys-Thr-Ala-Asp，Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp，Ile-Ser-Ala-Gly，Arg-Ser-Ala-Gly，Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp，Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp，Asp-Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp，Asp-Asp-Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp，Gly-Lys-Thr-Cys(Trt)-Asp，Met-Asp-Asp-Tyr-Cys-Asn-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp，Asp-Met-Asp-Asp-Tyr-Cys-Ash-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp，B不存在，或为OH、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Orn、Phe、4-Hal-Phe、Pro、 Ser、Thr、Trp、Tyr、Val或这些氨基酸残基的N-甲基化衍生物，或为选自下列一组的肽片段Pro-Arg、Pro-Arg-Asn、Pro-Arg-Asn-Pro，Pro-Arg-Asn-Pro-His，Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys，Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly，Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro，Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala，Pro-Arg-Asn-Pro-His-Lys-Gly-Pro-Ala-Thr，其中如果R1为A-Cys(R2)-B-U、则残基A和B中只能有一个不存在，R2为H、C1-6烷基、Trt、Dpm或Bzl，U为OH、OR9、NH2、NHR9或N(R9)2，Z各自独立地为氨基酸残基或二-、三-或四肽残基，其中氨基酸残基也可选自Ala、Asn、Asp、Arg、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、Val或M，上述氨基酸也可被衍生，且氨基酸残基可按肽的方式通过α-氨基和α-羧基基团相连，M始终存在，M为NH(R8)-CH(R3)-COOH，R3为R5-R4、R6-R4或R7-R4，R4为OH、NH2、SH或COOH，R5为C1-6亚烷基，R6为C7-14亚烷基苯基，R7为C8-15亚烷基苯基亚烷基，R8为H、C1-6烷基或C7-12亚烷基苯基，R9为C1-6烷基，Hal为F、Cl、Br或I，且n为1，2，3，4，5，6，7，8，9或10，如果其中存在光学活性的氨基酸或氨基酸衍生物残基，则包括D和L两种构型。
2.根据权利要求1的式I生物素化合物
a)其中Q不存在，且R1为环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys)；b)其中Q不存在，且R1为Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Lys-OH；c)其中Q不存在，且R1为Gly-Gly-Gly-Lys-Thr-Ala-Asp-Cys(Trt)-Pro-OH；d)其中Q为-NH-(CH2)5-CO，且R1为环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys)；e)其中Q为-NH-(CH2)5-CO且R1为环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-Gly)；f)其中Q为-NH-(CH2)5-CO，且R1为环-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Lys)，g)其中Q为-NH-(CH2)5-CO，且R1为环-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Lys)；h)其中Q为-NH-(CH2)5-CO，且R1为环-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys)以及该化合物生理上可接受的盐。
3.制备式I化合物及其盐的方法，其特征在于(a)将式II化合物与式III化合物进行酰化反应H-Q-R1II式II中Q不存在，或为-NH-(CH2)n-CO-或-NH-(CH2)n-NHR1为x-Arg-Gly-Asp-Y、A-Cys(R2)-B-U或环-(Arg-Gly-Asp-Z)，其中Z在侧链与Q键连或在Q不存在时与生物素键连，
式III中L为Cl、Br、I、游离的或活性功能性修饰的OH基团，或(b)将式IV化合物与式V化合物进行酰化反应H-R1(IV)式IV中R1为x-Arg-Gly-Asp-Y、A-Cys(R2)-B-U或环-(Arg-Gly-Asp-Z)，其中Z在侧链与Q键连或在Q不存在时与生物素键连，
式V中Q为不存在，或为-NH-(CH2)n-CO-或-NH-(CH2)n-NH-，L为H、Cl、Br、I、游离的或活性功能性修饰的OH基团，或(c)通过溶剂分解剂或氢解剂将它们从其功能性衍生物中释放出来，和/或通过用酸或碱处理将碱性或酸性的式I化合物转化为其一种盐。
4.制备药物制剂的方法，其特征在于将权利要求1的式I化合物和/或其一种生理上可接受的盐与至少一种固态、液态或半液态载体或辅助物质一起转化为合适的剂量形式。
5.药物制剂，其特征在于含有至少一种权利要求1的式I化合物和/或一种其生理上可接受的盐。
6.权利要求1的式I化合物及其生理上可接受的盐作为整合蛋白抑制剂用于控制病源性血管生成疾病、血栓形成、心肌梗塞、冠心病、动脉硬化、肿瘤、骨质疏松症、炎症和感染。
7.根据权利要求1的式I化合物和/或生理上可接受盐的用于制药。
8.根据权利要求1的式I化合物和/或其生理上可接受的盐用于控制疾病。
9.利用权利要求1的式I化合物通过亲和层析纯化整合蛋白。
10.权利要求1的式I化合物在EUSA型检测和FACS分析中用作抗生物素抗体反应的诊断标记物。
全文摘要
式I的生物素化合物及其盐可用作整合蛋合抑制剂，用于预防或治疗循环系统疾病，如血栓形成、心肌梗塞、冠心病、动脉硬化、血管生成疾病以及用于肿瘤治疗。
文档编号C07K14/78GK1153784SQ96112598
公开日1997年7月9日 申请日期1996年9月12日 优先权日1995年9月14日
发明者A·约茨克, S·高德曼, B·狄芬芭切 申请人:默克专利股份有限公司