一种提高牛樟芝多糖抗氧化活性的方法
【专利摘要】本发明涉及生物【技术领域】，尤其涉及一种提高牛樟芝多糖抗氧化活性的方法，用于解决目前牛樟芝中多糖抗氧化活性低的缺陷。本发明的一种提高牛樟芝多糖抗氧化活性的方法利用水浸法提取牛樟芝菌丝体中的多糖。本发明的有益效果是：通过本方法所制备的牛樟芝多糖具有明显的抗氧化活性，该方法简单方便，适用于进行大规模生产，具有很高的商业价值。
【专利说明】一种提高牛樟芝多糖抗氧化活性的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物【技术领域】，尤其涉及一种提高牛樟芝多糖抗氧化活性的方法。
【背景技术】
[0002]牛樟芝(Antrodia)又名樟芝,是台湾特有的珍贵药用真菌。据报道，牛樟芝含有多种生物活性物质，如樟芝多糖、三萜类等。其中，牛樟芝中最主要的保健功能因子之一是牛樟芝多糖，牛樟芝多糖具有提高免疫力、抑制癌细胞、改善心血管循环系统、防止动脉硬化等功效作用，已引起了广泛关注。虽然牛樟芝多糖具有多种保健功效，但目前因其抗氧化活性低而限制了其应用。而目前采取的各种提高牛樟芝多糖抗氧化活性的方法中，多糖清除OH-自由基的能力最高只能达到17%，清除超氧自由基的清除率也只有50-70%。
【发明内容】
[0003]为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的是提供一种提高牛樟芝多糖抗氧化活性的方法。
[0004]本发明的技术方案是:一种提高牛樟芝多糖抗氧化活性的方法，包括如下步骤:
[0005]I)将牛樟芝发酵液经筛过滤，得牛樟芝菌丝体；
[0006]2)在牛樟芝菌丝体中加1-3倍量蒸馏水，并于多功能机粉碎匀浆，得混合物；
[0007]3)将混合物在120°C水浴浸提处理2小时，离心10-15分钟后，取上清液；
[0008]4)将上清液于60?65°C下旋转蒸发浓缩，加4倍量无水乙醇，然后于0_4°C静置10-12小时，离心得沉淀物；
[0009]5)将沉淀物加蒸馏水溶解后，加氯仿异戊醇剧烈震荡去除蛋白沉淀，得到脱蛋白的提取液；
[0010]6)将脱蛋白的提取液经步骤5)多次处理，直至无蛋白产生，得脱蛋白上清液；
[0011]7)将脱蛋白上清液加3-5倍量无水乙醇后，于0-4°C静置10-12小时，离心所得沉淀物加蒸馏水溶解，于3-4°C透析2天，再加3-5倍量无水乙醇，0-4°C静置10-12小时，离心后将沉淀冷冻干燥，得牛樟芝多糖。
[0012]所述步骤5)中氯仿异戊醇中的氯仿与异戊醇比例为4:1。
[0013]本发明的有益效果是:通过本方法所制备的牛樟芝多糖具有明显的抗氧化活性，该方法简单方便，适用于进行大规模生产，具有很高的商业价值。
【具体实施方式】
[0014]实施例一
[0015]本实施例中的一种提高牛樟芝多糖抗氧化活性的方法包括如下步骤:
[0016]I)将牛樟芝发酵液经40目筛过滤，得牛樟芝菌丝体；
[0017]2)在牛樟芝菌丝体中加等量蒸馏水，并于多功能机粉碎匀浆，得混合物；
[0018]3)将混合物在120°C水浴浸提处理2小时，离心10分钟后，取上清液；
[0019]4)将上清液于60°C下旋转蒸发浓缩，加4倍量无水乙醇，然后于(TC静置10小时，离心得沉淀物；
[0020]5)将沉淀物加等量蒸馏水溶解后，加等量氯仿异戊醇(氯仿:异戊醇=4:1)剧烈震荡去除蛋白沉淀，得到脱蛋白的提取液；
[0021]6)将脱蛋白的提取液经步骤5)多次处理，直至无蛋白产生，得脱蛋白上清液；
[0022]7)将脱蛋白上清液加3倍量无水乙醇后，于0°C静置10小时，离心所得沉淀物加等量蒸馏水溶解，于4°C透析2天，再加3倍量无水乙醇，(TC静置10小时，离心后将沉淀冷冻干燥，得牛樟芝多糖。
[0023]抗氧化实验结果表明，利用本实施例种方法所得牛樟芝菌丝体多糖清除OH-自由基的能力为20.4%。而在超氧自由基的清除能力方面，当牛樟芝菌丝体多糖的浓度达4g/L时，超氧自由基的清除率达到82.1%。
[0024]实施例二
[0025]本实施例中的一种提高牛樟芝多糖抗氧化活性的方法包括如下步骤:
[0026]I)将牛樟芝发酵液经40目筛过滤，得牛樟芝菌丝体；
[0027]2)在牛樟芝菌丝体中加3倍量蒸馏水，并于多功能机粉碎匀浆，得混合物；
[0028]3)将混合物在120°C水浴浸提处理2小时，离心15分钟后，取上清液；
[0029]4)将上清液于65°C下旋转蒸发浓缩，加4倍量无水乙醇，然后于4°C静置12小时，离心得沉淀物；
[0030]5)将沉淀物加等量蒸馏水溶解后，加等量氯仿异戊醇(氯仿:异戊醇=4:1)剧烈震荡去除蛋白沉淀，得到脱蛋白的提取液；
[0031]6)将脱蛋白的提取液经步骤5)多次处理，直至无蛋白产生，得脱蛋白上清液；
[0032]7)将脱蛋白上清液加5倍量无水乙醇后，于4°C静置12小时，离心所得沉淀物加等量蒸馏水溶解，于4°C透析2天，再加5倍量无水乙醇，4°C静置12小时，离心后将沉淀冷冻干燥，得牛樟芝多糖。
[0033]抗氧化实验结果表明，利用本实施例种方法所得牛樟芝菌丝体多糖的清除OH-自由基的能力为30.5%。而在超氧自由基的清除能力方面，当牛樟芝菌丝体多糖的浓度达2g/L时，超氧自由基的清除率达到90.8%。
[0034]实施例三
[0035]本实施例中的一种提高牛樟芝多糖抗氧化活性的方法包括如下步骤:
[0036]I)将牛樟芝发酵液经40目筛过滤，得牛樟芝菌丝体；
[0037]2)在牛樟芝菌丝体中加2倍量蒸馏水，并于多功能机粉碎匀浆，得混合物；
[0038]3)将混合物在120°C水浴浸提处理2小时，离心10分钟后，取上清液；
[0039]4)将上清液于63°C下旋转蒸发浓缩，加4倍量无水乙醇，然后于4°C静置10小时，离心得沉淀物；
[0040]5)将沉淀物加等量蒸馏水溶解后，加等量氯仿异戊醇(氯仿:异戊醇=4:1)剧烈震荡去除蛋白沉淀，得到脱蛋白的提取液；
[0041]6)将脱蛋白的提取液经步骤5)多次处理，直至无蛋白产生，得脱蛋白上清液；
[0042]7)将脱蛋白上清液加4倍量无水乙醇后，于4°C静置10小时，离心所得沉淀物加等量蒸馏水溶解，于4°C透析2天，再加4倍量无水乙醇，4°C静置10小时，离心后将沉淀冷冻干燥，得牛樟芝多糖。
[0043]抗氧化实验结果表明，利用本实施例方法所得牛樟芝菌丝体多糖清除OH-自由基的能力为26.2%。而在超氧自由基的清除能力方面，当牛樟芝菌丝体多糖的浓度达3g/L时，超氧自由基的清除率达到84.8%。
[0044]采用本发明所述的方法，与现有技术相比，能够将牛樟芝多糖清除OH-自由基的能力从17%提高到20%以上，将牛樟芝多糖清除超氧自由基的清除率从50-70%提高到80-95%，极大提高了牛樟芝多糖的抗氧化活性。
[0045]以上对本发明的一个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。
【权利要求】
1.一种提高牛樟芝多糖抗氧化活性的方法，其特征在于包括如下步骤: 1)将牛樟芝发酵液经筛过滤，得牛樟芝菌丝体； 2)在牛樟芝菌丝体中加1-3倍量蒸馏水，并于多功能机粉碎匀浆，得混合物； 3)将混合物在1201水浴浸提处理2小时，离心10-15分钟后，取上清液； 4)将上清液于60?651下旋转蒸发浓缩，加4倍量无水乙醇，然后于0-41静置10-12小时，离心得沉淀物； 5)将沉淀物加蒸馏水溶解后，加氯仿异戊醇剧烈震荡去除蛋白沉淀，得到脱蛋白的提取液； 6)将脱蛋白的提取液经步骤5)多次处理，直至无蛋白产生，得脱蛋白上清液； 7)将脱蛋白上清液加3-5倍量无水乙醇后，于0-41静置10-12小时，离心所得沉淀物加蒸馏水溶解，于3-4【透析2天，再加3-5倍量无水乙醇，0-4【静置10-12小时，离心后将沉淀冷冻干燥，得牛樟芝多糖。
2.根据权利要求1所述的一种提高牛樟芝多糖抗氧化活性的方法，其特征在于:所述步骤5)中氯仿异戊醇中的氯仿与异戊醇比例为4:1。
【文档编号】C08B37/00GK104448026SQ201410850342
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月31日 优先权日:2014年12月31日
【发明者】季延滨, 李涛 申请人:三生源生物科技（天津）有限公司