一种促红细胞生成素模拟肽及其制备方法和应用与流程

技术特征：

1.一种促红细胞生成素模拟肽，其特征在于，所述模拟肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示：

SEQ ID NO:1GGLYAC₆HMGPITX₁VC₁₅QPLRX₂KC

其中，X₁为3-(1-萘基)-L-丙氨酸(Nal)，X₂为肌氨酸(Sar)，6位和15位的半胱氨酸(C)形成分子内二硫键，N末端乙酰化。

2.一种促红细胞生成素模拟肽的二聚体，其特征在于，所述二聚体是由权利要求1所述促红细胞生成素模拟肽的22位半胱氨酸侧链巯基经对二亚甲基苯偶联形成的，所述二聚体的通式如下式I所示，

3.一种促红细胞生成素模拟肽的可药用盐，其特征在于，所述可药用盐为如权利要求1所述的模拟肽或权利要求2所述的二聚体与酸性化合物或碱性化合物反应生成的盐；

优选地，所述酸性化合物选自盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、对溴苯基磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸或乙酸；

优选地，所述碱性化合物选自铵，碱金属或碱土金属的氢氧化物，以及碳酸盐、碳酸氢盐；更优选地，所述碱性化合物选自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、碳酸钠或碳酸钾；

更优选地，所述可药用盐选自硫酸盐、焦硫酸盐、三氟乙酸盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、盐酸盐、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、辛二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-l,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、甘醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-l-磺酸盐、萘-2-磺酸盐或扁桃酸盐，优选地为三氟乙酸盐。

4.如权利要求2所述的二聚体的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

1)根据SEQ ID NO:1选择氨基酸，通过Fmoc固相多肽合成法合成序列如SEQ ID NO:1所示的模拟肽，并形成分子内二硫键；优选地，通过氧化方法使所述模拟肽形成分子内二硫键，更优选地，所述氧化方法为20％DMSO氧化法或碘氧化法；

2)与对二溴苄进行分子间偶联，优选地，在CH₂Cl₂或DMF的溶剂环境下通过DIEA或Et₃N的作用使所述模拟肽与二溴苄反应，完成分子间偶联。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：

将所述促红细胞生成素模拟肽二聚体纯化、脱盐以及冷冻干燥得到二聚体的冻干粉；优选地，所述纯化是通过在HPLC C18半制备柱中，以乙腈为流动相实现的。

6.如权利要求1所述的模拟肽或权利要求2所述的二聚体或权利要求3所述的可药用盐在制备用于治疗以缺乏红细胞生成素或红细胞群缺少或缺陷为特征的疾病的药物中的应用；

优选地，所述以缺乏红细胞生成素或红细胞群缺少或缺陷为特征的疾病选自末期肾功能衰竭或透析；AIDS相关性贫血，自身免疫性疾病，或恶性肿瘤；囊性纤维变性；早期早熟性贫血；与慢性炎性疾病相关的贫血；脊髓损伤；急性失血；衰老和伴有异常红细胞产生的肿瘤疾病。

7.一种含有如权利要求1所述的模拟肽或权利要求2所述的二聚体或如权利要求3所述的可药用盐的药物组合物；

优选地，所述药物组合物包含一种或多种药学上可接受的辅料，所述辅料选自水溶性填充剂、pH调节剂、稳定剂、注射用水和渗透压调节剂中的一种或多种；

优选地，所述水溶性填充剂选自甘露醇、低分子右旋糖苷、山梨醇、聚乙二醇、葡萄糖、乳糖和半乳糖中的一种或多种；

所述pH调节剂选自枸橼酸、磷酸、乳酸、酒石酸、盐酸等非挥 发性的酸，以及氢氧化钾、氢氧化钠或氢氧化铵、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铵盐、碳酸氢钠、碳酸氢钾和碳酸氢铵盐中的一种或多种；

所述稳定剂选自EDTA-Na₂、硫代硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、磷酸氢二钾、碳酸氢钠、碳酸钠、精氨酸、谷氨酸、聚乙二醇6000、聚乙二醇4000、十二烷基硫酸钠和三羟甲基氨基甲烷中的一种或多种；优选地选自焦亚硫酸钠、磷酸氢二钾、精氨酸、聚乙二醇6000和三羟甲基氨基甲烷中的一种或多种；

所述渗透压调节剂为氯化钠和/或氯化钾。

8.如权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为冷冻干燥注射剂或溶液注射剂。

9.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述冷冻干燥注射剂是通过包括下述步骤的方法制备的：

取权利要求1所述的模拟肽或权利要求2所述的二聚体或权利要求3所述的可药用盐的溶液适量，加入水溶性填充剂、稳定剂、渗透压调节剂等，加入注射用水适量，调节pH值至4-8使其溶解，加水稀释至适当浓度，加入0.1-0.5％活性炭，在0-10℃下搅拌10-20分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液进行分装，冷冻干燥，制得白色疏松块状物，封口即得；优选地，每个规格分别含有对二亚甲苯偶联的促红细胞生成素模拟肽5μg，100μg以及1mg。

10.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述溶液注射剂是通过包括下述步骤的方法制备的：

取权利要求1所述的模拟肽或权利要求2所述的二聚体或权利要求3所述的促红细胞生成素模拟肽二聚体的可药用盐的溶液或冻干粉适量，加入水溶性填充剂、稳定剂、渗透压调节剂等，加入注射用水适量，调节pH值至4-8使其溶解，加水稀释至适当浓度，加入0.1-0.5％活性炭，在0-10℃下搅拌10-20分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液进行分装，封口即得；优选地，每个规格分别含有所述促红细胞生成素模拟肽二聚体5μg，100μg以及1mg。