技术总结
本发明公开了一种基于CRISPR技术敲除FUT8基因的方法，步骤包括：1)设计sgRNA序列；2)将sgRNA序列重组至第一载体中，得第二载体；3)将第二载体转染至细胞中，抽提DNA；4)PCR扩增；5)PCR产物变性、退火，形成异源杂交双链；6)切割异源杂交双链并分析产物，得各细胞群发生NHEJ的比例；7)挑选NHEJ比例高的细胞群进行有限稀释法克隆，筛选单克隆细胞扩大培养，获得FUT8基因敲除抗体。本发明还公开了用于上述方法的sgRNA序列。本发明通过编码能识别FUT8基因特定序列的sgRNA，将其与编码核酸内切酶的序列转染进细胞中，实现了让FUT8基因失活的目的，提高了抗体ADCC活性。
技术研发人员：邱沛然;蔡洁行;周伟昌;陈智胜
受保护的技术使用者：上海药明生物技术有限公司;无锡药明康德生物技术股份有限公司
文档号码：201510447211
技术研发日：2015.07.27
技术公布日：2017.02.15