IGF‑1R抗体及其作为定位载体用于治疗癌症的用途的制作方法

文档序号:12284552阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种选择内在化抗体或其内在化IGF-1R结合片段的方法,所述内在化抗体或其内在化IGF-1R结合片段与人胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)结合,并在与IGF-1R结合后内在化,所述方法包括以下选择抗体的步骤:

i)所述抗体与SEQ ID N°52所示的IGF-1R结合,和

ii)所述抗体不结合在SEQ ID N°52的位置494处含有除组氨酸以外的氨基酸或者在位置491处含有除天冬氨酸以外的氨基酸的SEQ ID N°52所示的IGF-1R。

2.根据权利要求1所述的选择内在化抗体或其内在化IGF-1R结合片段的方法,其中所述抗体不结合在SEQ ID N°52的位置494处含有除组氨酸以外的氨基酸并且在位置491处含有除天冬氨酸以外的氨基酸的SEQ ID N°52所示的IGF-1R。

3.根据权利要求1或2所述的方法,还包括选择内在化抗体或其IGF-1R结合片段的步骤,所述内在化抗体或其IGF-1R结合片段在与IGF-1R结合后的内在化百分比为至少40%。

4.一种内在化抗体或其内在化IGF-1R结合片段,其与人胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)结合,比如根据权利要求1至3中任一项所述的方法获得的内在化抗体或其内在化IGF-1R结合片段。

5.一种内在化抗体或其内在化IGF-1R结合片段,所述内在化抗体或其内在化IGF-1R结合片段与SEQ ID N°52所示的人胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)结合,并且在与IGF-1R结合后被内在化,并且不结合SEQ ID N°82和/或SEQ ID N°92所示的IGF-1R。

6.根据权利要求5所述的内在化抗体或其内在化IGF-1R结合片段,其中所述内在化抗体的表位包含SEQ ID N°52位置494处的组氨酸氨基酸和/或在SEQ ID N°52位置491处的天冬氨酸氨基酸。

7.根据权利要求6所述的内在化抗体或其内在化IGF-1R结合片段,其中所述表位包含至少8个氨基酸的氨基酸序列。

8.根据权利要求4至7中任一项所述的内在化抗体或其内在化IGF-1R结合片段,在与IGF-1R结合后的内在化百分比为至少40%。

9.根据权利要求4至8中任一项所述的内在化抗体或其内在化IGF-1R结合片段,其中在SEQ ID N°52的位置494处的除组氨酸以外的所述氨基酸是精氨酸,和/或在SEQ ID N°52的位置491处的除天冬氨酸以外的所述氨基酸是丙氨酸。

10.根据权利要求4至9中任一项所述的内在化抗体或其内在化IGF-1R结合片段,其特征在于包含六个CDR,其中所述CDR中的至少一个选自:SEQ ID N°2所示的CDR-H2、SEQ ID N°3所示的CDR-H3和SEQ ID N°5所示的CDR-L2。

11.根据权利要求10所述的内在化抗体或其内在化IGF-1R结合片段,其特征在于包含六个CDR,其中所述CDR中的三个是SEQ ID N°2所示的CDR-H2、SEQ ID N°3所示的CDR-H3和SEQ ID N°5所示的CDR-L2。

12.根据权利要求4至11中任一项所述的内在化抗体或其内在化IGF-1R结合片段,其特征在于包含序列SEQ ID N°1、2和3所示的三个重链CDR,以及序列SEQ ID N°4、5和6所示的三个轻链CDR。

13.根据权利要求4至12中任一项所述的内在化抗体或其IGF-1R结合片段,其特征在于由单克隆抗体、重组单克隆抗体或其IGF-1R结合片段组成。

14.根据权利要求4至13中任一项所述的内在化抗体,其特征在于选自:

a)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.7、2和3所示的三个重链CDR和序列SEQ ID No.9、5和11所示的三个轻链CDR;

b)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.7、2和3所示的三个重链CDR和序列SEQ ID No.10、5和11所示的三个轻链CDR;

c)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.7、2和3所示的三个重链CDR和序列SEQ ID No.9、5和12所示的三个轻链CDR;和

d)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.8、2和3所示的三个重链CDR和序列SEQ ID No.9、5和11所示的三个轻链CDR。

15.根据权利要求14所述的内在化抗体,其特征在于由嵌合抗体组成。

16.根据权利要求15所述的内在化抗体,其特征在于选自:

a)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.13所示的或表现出与SEQ ID No.13至少80%同一性的任何序列的重链可变结构域,和序列SEQ ID No.9、5和11所示的三个轻链CDR;

b)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.14所示的或表现出与SEQ ID No.14至少80%同一性的任何序列的重链可变结构域,和序列SEQ ID No.10、5和11所示的三个轻链CDR;

c)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.15所示的或表现出与SEQ ID No.15至少80%同一性的任何序列的重链可变结构域,和序列SEQ ID No.9、5和12所示的三个轻链CDR;

d)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.16所示的或表现出与SEQ ID No.16至少80%同一性的任何序列的重链可变结构域,和序列SEQ ID No.9、5和11所示的三个轻链CDR;和

e)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.17所示的或表现出与SEQ ID No.17至少80%同一性的任何序列的重链可变结构域,和序列SEQ ID No.9、5和12所示的三个轻链CDR。

17.根据权利要求15所述的内在化抗体,其特征在于选自:

a)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.18所示的或表现出与SEQ ID No.18至少80%同一性的任何序列的轻链可变结构域,和序列SEQ ID No.7、2和3所示的三个重链CDR;

b)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.19所示的或表现出与SEQ ID No.19至少80%同一性的任何序列的轻链可变结构域,和序列SEQ ID No.7、2和3所示的三个重链CDR;

c)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.20所示的或表现出与SEQ ID No.20至少80%同一性的任何序列的轻链可变结构域,和序列SEQ ID No.7、2和3所示的三个重链CDR;

d)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.21所示的或表现出与SEQ ID No.21至少80%同一性的任何序列的轻链可变结构域,和序列SEQ ID No.8、2和3所示的三个重链CDR;和

e)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.22所示的或表现出与SEQ ID No.22至少80%同一性的任何序列的轻链可变结构域,和序列SEQ ID No.7、2和3所示的三个重链CDR。

18.根据权利要求15所述的内在化抗体,其特征在于选自:

a)一种抗体,其包含或由序列SEQ ID No.23所示的或表现出与SEQ ID No.23至少80%同一性的任何序列的重链,和序列SEQ ID No.28所示的或表现出与SEQ ID No.28至少80%同一性的任何序列的轻链组成;

b)一种抗体,其包含或由序列SEQ ID No.24所示的或表现出与SEQ ID No.24至少80%同一性的任何序列的重链,和序列SEQ ID No.29所示的或表现出与SEQ ID No.29至少80%同一性的任何序列的轻链组成;

c)一种抗体,其包含或由序列SEQ ID No.25所示的或表现出与SEQ ID No.25至少80%同一性的任何序列的重链,和序列SEQ ID No.30所示的或表现出与SEQ ID No.30至少80%同一性的任何序列的轻链组成;

d)一种抗体,其包含或由序列SEQ ID No.26所示的或表现出与SEQ ID No.26至少80%同一性的任何序列的重链,和序列SEQ ID No.31所示的或表现出与SEQ ID No.31至少80%同一性的任何序列的轻链组成;和

e)一种抗体,其包含或由序列SEQ ID No.27所示的或表现出与SEQ ID No.27至少80%同一性的任何序列的重链,和序列SEQ ID No.32所示的或表现出与SEQ ID No.32至少80%的同一性的任何序列的轻链组成。

19.根据权利要求14所述的内在化抗体,其特征在于由人源化抗体组成。

20.根据权利要求19所述的内在化抗体,其特征在于包含:

a)重链,其具有分别由序列SEQ ID No.7、2和3所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3,和衍生自人种系IGHV1-46*01的FR1、FR2和FR3(SEQ ID No.44),以及衍生自人种系IGHJ4*01的FR4(SEQ ID No.46),和

b)轻链,其具有分别由序列SEQ ID No.9、5和11所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3,和衍生自人种系IGKV1-39*01的FR1、FR2和FR3(SEQ ID No.45),以及衍生自人种系IGKJ4*01的FR4(SEQ ID No.47)。

21.根据权利要求20所述的内在化抗体,其特征在于选自:

a)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.33所示的或表现出与SEQ ID No.33至少80%同一性的任何序列的重链可变结构域,和序列SEQ ID No.9、5和11所示的三个轻链CDR;

b)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.34所示的或表现出与SEQ ID No.34至少80%同一性的任何序列的重链可变结构域,和序列SEQ ID No.9、5和11所示的三个轻链CDR;和

c)一种抗体,其包含序列选自SEQ ID No.56、62、64、66、68、70、72、74、76、78和80所示的或与SEQ ID NO.56、62、64、66、68、70、72、74、76、78和80具有至少80%同一性的任何序列的重链可变结构域;和序列SEQ ID No.9、5和11所示的三个轻链CDR。

22.根据权利要求20所述的内在化抗体,其特征在于选自:

a)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.35所示的或表现出与SEQ ID No.35至少80%同一性的任何序列的轻链可变结构域,和序列SEQ ID No.7、2和3所示的三个重链CDR;

b)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.36所示的或表现出与SEQ ID No.36至少80%同一性的任何序列的轻链可变结构域,和序列SEQ ID No.7、2和3所示的三个重链CDR;和

c)一种抗体,其包含序列选自SEQ ID No.57和60所示的或表现出与SEQ ID No.57或60至少80%同一性的任何序列的轻链可变结构域;和序列SEQ ID No.7、2和3所示的三个重链CDR。

23.根据权利要求20所述的内在化抗体,其特征在于其选自:

a)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.37所示的或表现出与SEQ ID No.37至少80%同一性的任何序列的重链,和序列SEQ ID No.39所示的或表现出与SEQ ID No.39至少80%同一性的任何序列的轻链;

b)一种抗体,其包含序列SEQ ID No.38所示的或表现出与SEQ ID No.38至少80%同一性的任何序列的重链,和序列SEQ ID No.40所示的或表现出与SEQ ID No.40至少80%同一性的任何序列的轻链;和

c)一种抗体,其包含序列选自SEQ ID No.56、62、64、66、68、70、72、74、76、78和80所示的或与SEQ ID No.56、62、64、66、68、70、72、74、76、78或80至少80%同一性的任何序列的的重链可变结构域,和序列选自SEQ ID No.57和60所示的或与SEQ ID No.57或60具有至少80%同一性的任何序列的轻链可变结构域。

24.根据权利要求20所述的内在化抗体,其特征在于包含:

a)序列SEQ ID No.33所示的重链可变结构域(VH),其中所述序列SEQ ID No.33包含至少1个选自残基20、34、35、38、48、50、59、61、62、70、72、74、76、77、79、82和95的回复突变;和

b)序列SEQ ID No.35的轻链可变结构域(VL),其中所述序列SEQ ID No.35包含选自残基22、53、55、65、71、72、77和87的至少1个回复突变。

25.根据权利要求4至24中任一项所述的内在化抗体,其特征在于选自:

i)由分别在2013年5月30日、2013年6月26日、2013年6月26日、2013年4月24日和2013年6月26日保藏于法国巴斯德研究所CNCM的杂交瘤I-4757、I-4773、I-4775、I-4736或I-4774生产的抗体;

ii)与i)的抗体竞争结合IGF-1R的抗体;和

iii)与i)的抗体结合相同的IGF-1R表位的抗体。

26.一种鼠杂交瘤,其选自分别在2013年5月30日、2013年6月26日、2013年6月26日、2013年4月24日和2013年6月26日保藏于法国巴斯德研究所CNCM的杂交瘤I-4757、I-4773、I-4775,I-4736和I-4774。

27.根据权利要求4至25中任一项所述的内在化抗体或其内在化抗原结合片段,用作在宿主靶标位点递送细胞毒性剂的定位载体,所述宿主靶标位点由定位在蛋白IGF-1R细胞外结构域的表位组成,优选人蛋白IGF-1R细胞外结构域(SEQ ID No.51),更优选人蛋白IGF-1R细胞外结构域N末端(SEQ ID No.52),或其任何天然的变体序列。

28.一种抗体-药物缀合物,其包含与细胞毒性剂缀合的根据权利要求4至25中任一项所述的内在化抗体或其内在化抗原结合片段。

29.根据权利要求28所述的抗体-药物缀合物,其用作药物。

30.根据权利要求29所述抗体-药物缀合物的用途,用于治疗癌症。

31.根据权利要求29所述抗体-药物缀合物的用途,用于治疗表达IGF-1R的癌症。

32.一种药物组合物,其包含权利要求4至25中任一项所述的内在化抗体或权利要求28所述的抗体-药物缀合物,和至少一种赋形剂和/或一种药学上可接受的载体。

33.根据权利要求32所述的药物组合物,其用于治疗癌症。

34.根据权利要求32所述的药物组合物,其用于治疗表达IGF-1R的癌症。

35.权利要求28所述的抗体-药物缀合物用于治疗表达IGF-1R的癌症的用途。

36.一种用于治疗受试者中表达IGF-1R的癌症的方法,包括向所述受试者施用有效量的至少权利要求28所述的抗体-药物缀合物或权利要求32所述的药物组合物。

37.一种将药物或药品递送至受试者中表达IGF-1R的癌症细胞的方法,包括向所述受试者施用有效量的至少权利要求28所述的抗体-药物缀合物或权利要求32所述的药物组合物。

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