针对CD3ε和BCMA的双特异性抗体的制作方法

本发明涉及针对cd3ε和bcma的新双特异性抗体、它们的制备和用途。
背景技术：
：人b细胞成熟靶标，也被称作bcma;tr17_human,tnfrsf17(uniprotq02223)，是在分化的浆细胞中优先表达的肿瘤坏死受体超家族的成员[laabi等人.1992;madry.1998]。bcma是一种非糖基化的iii型跨膜蛋白，其参与b细胞成熟、生长和存活。bcma是tnf超家族的以下两个配体的受体：april(诱导增殖的配体)，其为bcma的高亲和力配体；和b细胞活化因子baff，其为bcma的低亲和力配体(thank、blys、b淋巴细胞刺激物、tall-1和ztnf4)。april和baff显示结构相似性和重叠但不同的受体结合特异性。负调节物taci也结合baff和april。april和baff与bcma和/或taci的协同结合激活转录因子nf-κb并增加促存活(pro-survival)的bcl-2家族成员(例如bcl-2、bcl-xl、bcl-w、mcl-1、a1)的表达和促细胞凋亡因子(例如bid、bad、bik、bim等)的下调，因此抑制凋亡并促进存活。该组合作用促进b细胞分化、增殖、存活和抗体产生(如在rickertrc等人,immunolrev(2011)244(1):115-133中所综述的)。t淋巴细胞的tcr/cd3复合物由在细胞表面处共表达的tcrα(α)/β(β)或tcrγ(γ)/δ(δ)异源二聚体与cd3标记的γ(γ)、δ(δ)、ε(ε)、ζ(ζ)和η(η)的不变亚基组成。人cd3ε描述于uniprotp07766(cd3e_human)之下。在现有技术中描述的一种抗cd3ε抗体是sp34(yangsj,thejournalofimmunology(1986)137;1097-1100)。sp34与灵长类动物和人cd3反应。sp34可以从pharmingen获得。在现有技术中描述的另一种抗cd3抗体是ucht-1(参见wo2000041474)。在现有技术中描述的另一种抗cd3抗体是bc-3(fredhutchinsoncancerresearchinstitute；用在gvhd的i/ii期试验中,anasetti等人,transplantation54:844(1992))。wo2014056783提及具有相同cdr、vh和vl的本申请的抗cd3ε抗体。在最近过去的几年中，已经开发了多种重组双特异性抗体形式，例如通过融合例如igg抗体形式和单链结构域(参见kontermannre,mabs4:2,(2012)1-16)。其中可变结构域vl和vh或恒定结构域cl和ch1被彼此替换的双特异性抗体描述于wo2009080251和wo2009080252中。规避错配副产物问题的一种方法(被称作“凸起-进入-孔洞(knobs-into-holes)”)目标在于通过向ch3结构域中引入突变以修饰接触界面来迫使两条不同的抗体重链配对。在一条链上，庞大的氨基酸被具有短侧链的氨基酸替换以产生“孔洞”。相反地，将具有大侧链的氨基酸引入其它ch3结构域中，以产生“凸起”。通过共表达这两条重链(和所述用于根据本发明的用途的共同轻链中的两条，其必须适合于两条重链)，观察到异源二聚体形成(“凸起-孔洞”)相对于同源二聚体形成(“孔洞-孔洞”或“凸起-凸起”)的高产量(ridgwayjb,prestalg,carterp；和wo1996027011)。通过使用噬菌体展示方案重塑两个ch3结构域的相互作用表面并引入二硫键以稳定异源二聚体，可以进一步增加异源二聚体的百分比(merchanta.m,等人,naturebiotech16(1998)677-681;aτwells,ridgwayjb,wellsja,carterp.,jmol.biol.270(1997)26-35)。用于凸起-进入-孔洞技术的新方案描述于例如ep1870459a1中。尽管该形式看起来非常有吸引力，但是目前没有描述向临床进展的数据可用。该策略的一个重要约束是，两个亲本抗体的轻链必须相同以防止无活性分子的错配和形成。因此，该技术不适合于从针对第一个和第二个靶标的两个抗体开始容易地开发针对两个靶标的重组双特异性抗体，因为这些抗体的重链和/或所述用于根据本发明的用途的共同轻链必须经过优化。xie,z.,等人,jimmunol.methods286(2005)95-101提及与用于fc部分的凸起-进入-孔洞技术组合的使用scfv的双特异性抗体形式。wo2012116927和wo2010145792提及交换ch1和cl结构域。wo2009080254提及用于产生双特异性抗体的凸起进入孔洞构建体。wo2006093794涉及结合异源二聚体蛋白的组合物。wo199937791描述了多用途抗体衍生物。morrison,s.l.,等人,j.immunol.160(1998)2802-2808提及可变区结构域交换对igg的功能性质的影响。wo201302362涉及异源二聚化的多肽。wo201312733涉及包含异源二聚体fc区的多肽。wo2012131555涉及经工程改造的异源二聚体免疫球蛋白。ep2647707涉及经工程改造的异源二聚体免疫球蛋白。wo2009080251、wo2009080252、wo2009080253、wo2009080254和schaefer,w.等人,pnas,108(2011)11187-1191涉及具有结构域交换的二价双特异性igg抗体。针对bcma的抗体描述于例如grasm-p.等人.intimmunol.7(1995)1093-1106、wo200124811、wo200124812、wo2010104949和wo2012163805中。针对bcma的抗体及其用于治疗淋巴瘤和多发性骨髓瘤的用途叙述于例如wo2002066516和wo2010104949中。wo2013154760涉及包含bcma识别部分和t-细胞活化部分的嵌合抗原受体(car)。ryan,mc等人,mol.cancerther.6(2007)3009-3018涉及bcma对浆细胞恶性肿瘤的靶向。具有配体阻断活性的抗体sg1可以作为裸抗体或作为抗体-药物缀合物(adc)促进多发性骨髓瘤(mm)细胞系的细胞毒性。sg1(一种抑制性的bcma抗体)在体外以剂量依赖性的方式阻断april依赖性的核因子-κb活化。在与和不与增强fcγriiia结合的fc突变嵌合后，评估sg1作为裸抗体的细胞毒性。ryan还提及不显著地抑制april与bcma的结合的抗体sg2。但是，sg2显示比sg1高20倍的ic50值，其测量为针对bcma阳性骨髓瘤细胞系的药物缀合物的细胞毒性活性。ryan得出结论，bcma抗体可以通过多种机制作用于骨髓瘤细胞系，所述机制包括抑制april依赖性的nf-κb活化、通过天然杀伤细胞介导的adcc活性促进肿瘤细胞裂解和通过adc诱导细胞毒性。在wo2007117600、wo2009132058、wo2012066058、wo2012143498和wo2013072415中提及针对cd3和bcma的双特异性抗体。wo2014122143和wo2014122144描述了针对bcma的抗体和针对cd3和bcma的双特异性抗体，其包含也在本发明中公开的某些cdr和可变结构域。在本文中提及seqidno:2的可变轻链vl和包含作为cdr的seqidno:6的cdr1l、seqidno:7的cdr2l的vl作为抗cd3抗体的轻链。kleinch.,等人,mabs4:6,653-663;2012提及与共同轻链组合的凸起-进入-孔洞(kih)技术。merchantam.等人,naturebiotech16,677-681(1998)涉及具有相同轻链和经重塑的重链的双特异性抗体。weidleuh等人涉及通过使用“共同轻链”原理来避免l-链错配，所述“共同轻链”原理组合共享一条轻链、但是仍然具有单独特异性的两种结合剂。wo2007147901、wo2013184761和wo2014124326也涉及共同轻链技术。wo2014140248提及结合bcma和cd3ε的双特异性抗体。所述双特异性抗体对hubcma的kd值是在亚纳摩尔范围内。所述双特异性抗体在肿瘤异种移植物模型中表现出治疗效果。wo2013/072406提及结合bcma和cd3ε的双特异性抗体。所述双特异性抗体对hubcma的kd值是在亚纳摩尔范围内。所述抗体不与人baff-受体和taci交叉反应，且通过将效应t细胞重新导向表达bcma的靶标而表现出细胞毒性活性。所述双特异性抗体在肿瘤异种移植物模型中表现出治疗效果。因此，需要针对cd3ε和bcma的双特异性抗体，其可以在没有轻链错配的情况下以高收率产生，容易地纯化，且表现出对bcma的高亲和力和bcma阳性细胞的杀死。技术实现要素：发明人已经认识到，如在wo2014122143和wo2014122144中描述的在特异性地结合人bcma和人cd3的双特异性抗体中使用的抗-cd3抗体(ch2527)的轻链可以在这样的双特异性抗体中用作共同轻链。本发明涉及一种特异性地结合人bcma(另外还称作“bcma”)的细胞外结构域和人cd3ε(另外还称作“cd3”)的双特异性抗体，其特征在于包含共同抗体轻链，包含seqidno:6的cdr1l、seqidno:7的cdr2l和seqidno:8的cdr3l作为cdr，和cd3结合部分的重链，其包含seqidno:3的cdr1h、seqidno:4的cdr2h和seqidno:5的cdr3h作为cdr。优选地，本发明涉及根据本发明的抗体，其在所述共同抗体轻链内包含共同可变轻链结构域vl，即seqidno:2的vl。优选地，本发明涉及根据本发明的抗体，其包含seqidno:29的共同轻链。本发明涉及一种抗体轻链，其包含seqidno:6的cdr1l、seqidno:7的cdr2l和seqidno:8的cdr3l作为cdr，所述抗体轻链用于在特异性地结合人bcma(另外还称作“bcma”)的细胞外结构域和人cd3(另外还称作“cd3”)的双特异性抗体中用作共同轻链，其中所述cd3结合部分的重链包含seqidno:3的cdr1h、seqidno:4的cdr2h和seqidno:5的cdr3h作为cdr。优选地，本发明涉及一种抗体轻链，其包含seqidno:2的vl作为可变轻链结构域vl，所述抗体轻链用于在特异性地结合人bcma的细胞外结构域和人cd3的双特异性抗体中用作共同轻链，其中所述cd3结合部分的重链包含seqidno:3的cdr1h、seqidno:4的cdr2h和seqidno:5的cdr3h作为cdr。优选地，本发明涉及seqidno:29的抗体轻链，其用于在特异性地结合人bcma的细胞外结构域和人cd3的双特异性抗体中用作共同轻链，其中所述cd3结合部分的重链包含seqidno:3的cdr1h、seqidno:4的cdr2h和seqidno:5的cdr3h作为cdr。本发明涉及包含seqidno:6的cdr1l、seqidno:7的cdr2l和seqidno:8的cdr3l作为cdr的抗体轻链在特异性地结合人bcma(另外还称作“bcma”)的细胞外结构域和人cd3(另外还称作“cd3”)的双特异性抗体中作为共同轻链的用途，其中所述cd3结合部分的重链包含seqidno:3的cdr1h、seqidno:4的cdr2h和seqidno:5的cdr3h作为cdr。优选地，使用的抗体轻链的特征在于包含seqidno:2的vl作为可变轻链结构域vl。优选地，使用的抗体轻链的特征在于包含seqidno:29的轻链作为轻链。本发明涉及一种特异性地结合人bcma的细胞外结构域和人cd3的双特异性抗体，其中所述cd3结合部分的重链包含seqidno:3的cdr1h、seqidno:4的cdr2h和seqidno:5的cdr3h作为cdr，且包含seqidno:6的cdr1l、seqidno:7的cdr2l和seqidno:8的cdr3l作为cdr的抗体轻链是共同轻链。优选地，本发明涉及一种特异性地结合人bcma的细胞外结构域和人cd3的双特异性抗体，其中所述cd3结合部分的重链包含seqidno:3的cdr1h、seqidno:4的cdr2h和seqidno:5的cdr3h作为cdr，且包含seqidno:2的vl作为可变轻链结构域vl的抗体轻链是共同轻链。优选地，本发明涉及一种特异性地结合人bcma的细胞外结构域和人cd3的双特异性抗体，其特征在于，所述cd3结合部分的重链包含seqidno:3的cdr1h、seqidno:4的cdr2h和seqidno:5的cdr3h作为cdr，且seqidno:29的抗体轻链是共同轻链。优选地，所述cd3结合部分的重链包含seqidno:1的vh作为可变重链结构域vh。根据本发明的共同轻链的恒定轻链cl是κ或λ类型，优选地是κ类型。优选地，所述bcma结合部分的重链包含选自以下的cdr集合作为cdr：a)seqidno:18的cdr1h、seqidno:21的cdr2h和seqidno:24的cdr3h(集合pschli333)b)seqidno:19的cdr1h、seqidno:22的cdr2h和seqidno:25的cdr3h(集合pschli372)c)seqidno:20的cdr1h、seqidno:23的cdr2h和seqidno:26的cdr3h(集合pschli373)d)seqidno:35的cdr1h、seqidno:36的cdr2h和seqidno:37的cdr3h(集合83a10)。优选地，所述bcma结合部分的重链包含seqidno:15、16、17或34的vh作为可变重链结构域vh(83a10)。优选地，在亲和力方案(setup)表面等离子体共振测定中，在500nm或更低浓度的人bcmafc融合体存在下，在25nm的抗体浓度测得，所述双特异性抗体对人bcma的亲和力是200nm或更低。优选地，在重新定向的t-细胞杀死性ldh释放测定中，在人pbcm和h929细胞(在10:1的e:t比率)存在下24h，当以100nm和更低的浓度使用时，所述双特异性抗体的杀死bcma-阳性的h929细胞(atcccrl-9068)的效能(ec50)被测量为2nm或更低。优选地，在亲和力方案表面等离子体共振测定中，在500nm或更低浓度的人bcmafc融合体存在下，在25nm的抗体浓度，在人igg1类型(其中轻链是seqidno:29)的抗体中测得的所述bcma结合部分对人bcma的亲和力是200nm或更低。优选地，根据本发明的所述双特异性抗体由特异性地结合cd3的抗体的一个fab片段(另外还称作“cd3-fab”)和特异性地结合bcma的抗体的一个fab片段(另外还称作“bcma-fab”)和一个fc部分组成，其中所述cd3-fab和所述bcma-fab通过它们的c-端连接至所述fc部分的铰链区，且其中所述cd3-fab和所述bcma-fab包含用于根据本发明的用途的所述共同轻链(图1a)。优选地，根据本发明的所述双特异性抗体由两个bcma-fab、一个cd3fab和一个fc部分组成，其中所述第一个bcma-fab和所述cd3-fab通过它们的c-端连接至所述fc部分的铰链区，且所述第二个bcma-fab用它的c-端连接至所述第一个bcma-fab的n-端。所述cd3-fab和bcma-fab包含用于根据本发明的用途的所述共同轻链(图1b)。优选地，根据本发明的所述双特异性抗体由两个bcma-fab和一个fc部分组成，其中所述bcma-fab通过它们的c-端连接至所述fc部分的铰链区，且所述cd3-fab用它的c-端连接至一个bcma-fab的n-端。所述cd3-fab和bcma-fab包含用于根据本发明的用途的所述共同轻链(图1c)。优选地，根据本发明的所述双特异性抗体由一个cd3-fab和一个bcmafab(其经由它的c-端连接至所述fc部分的铰链区)和一个bcma-fab(其用它的c-端连接至所述cd3-fab的n-端)组成。所述cd3-fab和bcma-fab包含用于根据本发明的用途的所述共同轻链(图1d)。优选地，根据本发明的所述双特异性抗体由一个bcma-fab和一个cd3fab组成，其中所述bcmafab经由它的c-端连接至所述fc部分的铰链区，且所述cd3-fab用它的c-端连接至所述bcma-fab的n-端。所述cd3-fab和bcma-fab包含用于根据本发明的用途的所述共同轻链(图1e)。优选地，根据本发明的所述双特异性抗体由两个bcma-fab组成，其中所述第一个bcma-fab经由它的c-端连接至所述第二个bcma-fab的n-端，且其中所述第二个bcma-fab经由它的c-端连接至所述cd3-fab的n-端。所述cd3-fab和两个bcma-fab包含用于根据本发明的用途的所述共同轻链(图1f)。优选地，根据本发明的所述双特异性抗体由一个bcma-fab和一个cd3fab组成，其中所述bcmafab用它的c-端连接至所述cd3-fab的n-端。所述cd3-fab和bcma-fab包含用于根据本发明的用途的所述共同轻链(图1g)。在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的抗体由一个cd3-fab和一个bcma-fab和一个fc部分(其中所述cd3-fab和所述bcma-fab通过它们的c-端连接至所述fc部分的铰链区)和第二个bcma-fab(其用它的c-端连接至所述cd3-fab的n-端)组成。所述cd3-fab和所述bcma-fab包含用于根据本发明的用途的所述共同轻链(图1b和1c)。特别优选的是包含bcma-fab-fc-cd3-fab-bcma-fab的双特异性抗体，其中两个bcma-fab和所述cd3-fab包含用于根据本发明的用途的所述共同轻链(图1b)。特别优选的是，两个bcma-fab包含抗体pschli333的cdrh作为重链cdr或pschli333的vh作为vh。进一步优选的是，两个bcma-fab包含抗体pschli372的cdrh作为重链cdr或pschli372的vh作为vh。进一步优选的是，两个bcma-fab包含抗体pschli373的cdrh作为重链cdr或pschli373的vh作为vh。进一步优选的是，两个bcma-fab包含抗体83a10的cdr作为重链cdr、83a10的vh作为vh。通过根据现有技术使用适当的接头，将fab片段化学连接在一起。优选地，使用(gly4-ser1)3接头(seqidno:38)或ggggsggggs接头(seqidno:39)(desplancqdk等人,proteineng.1994年8月;7(8):1027-33和mackm.等人,pnas,1995年7月18日，第92卷第15期7021-7025)。在重链之间执行两个fab片段之间的连接。因此，将第一个fab片段的ch1的c-端连接至第二个fab片段的vh的n-端。根据本发明执行fab片段和fc部分之间的连接作为ch1和ch2之间的连接。特异性地结合bcma的抗体的第一个和第二个fab片段优选地源自相同抗体，且优选地在cdr序列、可变结构域序列vh和vl以及恒定结构域序列ch1和cl中是相同的。优选地，特异性地结合bcma的抗体的第一个和第二个fab片段的氨基酸序列是相同的。优选地，所述bcma抗体是：包含抗体pschli333、pschli372或pschli373的cdr序列的抗体，包含抗体pschli333、pschli372或pschli373的vh序列的抗体，或包含抗体pschli333、pschli372、pschli373或83a10的vh和ch1序列的抗体。优选地，所述双特异性抗体包含抗-cd3抗体的不超过一个fab片段、抗-bcma抗体的不超过两个fab片段和不超过一个fc部分(优选人fc部分)作为fab片段和fc部分。优选地，抗-bcma抗体的第二个fab片段经由它的c-端连接至抗-cd3抗体的fab片段的n-端或连接至fc部分的铰链区。优选地，在bcma-fab的ch1和cd3-fab的vh之间执行连接。根据本发明的这样的优选抗体是特征在于包含以下多肽的重链和轻链集合的抗体：a)seqidno:15的vh和seqidno:2的vl(集合pschli333)b)seqidno:16的vh和seqidno:2的vl(集合pschli372)c)seqidno:17的vh和seqidno:2的vl(集合pschli373)d)seqidno:34的vh和seqidno:2的vl(集合83a10)。优选地，根据本发明的抗体进一步特征在于，它也特异性地结合食蟹猴bcma。优选地，特异性地结合人cd3的抗体部分(优选fab片段)的特征在于包含：可变结构域vh，其包含seqidno:3、4和5的重链cdr分别作为重链cdr1、cdr2和cdr3；和可变结构域vl，其包含seqidno:6、7和8的轻链cdr分别作为抗-cd3ε抗体的轻链cdr1、cdr2和cdr3(cdrmabcd3ch2527-vl7)。优选地，特异性地结合人cd3的抗体部分的特征在于，所述可变结构域是seqidno:1和2(vhvlmabcd3ch2527-vl7)。优选地，特异性地结合人bcma的抗体部分(优选fab片段)的特征在于包含含有以下重链cdr的可变结构域vh：seqidno:18的cdr1h、seqidno:21的cdr2h、seqidno:24的cdr3h，且包含含有以下轻链cdr的可变结构域vl：seqidno:6的cdr1l、seqidno:7的cdr2l、seqidno:8的cdr3l(cdrmabpschli333)。优选地，特异性地结合人bcma的抗体部分(优选fab片段)的特征在于包含含有以下重链cdr的可变结构域vh：seqidno:19的cdr1h、seqidno:22的cdr2h、seqidno:25的cdr3h，和含有以下轻链的可变结构域vl：seqidno:6的cdr1l、seqidno:7的cdr2l、seqidno:8的cdr3l(cdrmabpschli372)。优选地，特异性地结合人bcma的抗体部分(优选fab片段)的特征在于包含含有以下重链cdr的可变结构域vh：seqidno:20的cdr1h、seqidno:23的cdr2h、seqidno:26的cdr3h，和含有以下轻链的可变结构域vl：seqidno:6的cdr1l、seqidno:7的cdr2l、seqidno:8的cdr3l(cdrmabpschli373)。优选地，特异性地结合人bcma的抗体部分(优选fab片段)的特征在于包含含有以下重链cdr的可变结构域vh：seqidno:35的cdr1h、seqidno:36的cdr2h、seqidno:37的cdr3h，和含有以下轻链的可变结构域vl：seqidno:6的cdr1l、seqidno:7的cdr2l、seqidno:8的cdr3l(cdrmab83a10)。优选地，特异性地结合人bcma的抗体部分(优选fab片段)的特征在于包含seqidno:15的vh。优选地，特异性地结合人bcma的抗体部分(优选fab片段)的特征在于包含seqidno:16的vh。优选地，特异性地结合人bcma的抗体部分(优选fab片段)的特征在于包含seqidno:17的vh。优选地，特异性地结合人bcma的抗体部分(优选fab片段)的特征在于包含seqidno:34的vh。本发明优选地涉及特异性地结合人bcma的细胞外结构域和人cd3ε的双特异性抗体，其特征在于包含选自以下多肽的重链和轻链集合：i)seqidno:27、seqidno:28和seqidno:29(集合1)，ii)seqidno:29、seqidno:30和seqidno:31(集合2)，和iii)seqidno:29、seqidno:32和seqidno:33(集合3)。表1：抗bcma抗体的抗体序列。表2：结构单元的序列结构单元seqidno:bcmapschli333vh_ch1xcd3vh_ch1fc凸起lalapg27bcmapschli333hc孔洞lalapg28cd3(bcma)人igg1lc(共同轻链)29bcmapschli372vh_ch1xcd3vh_ch1fc凸起lalapg30bcmapschli372hc孔洞lalapg31bcmapschli373vh_ch1xcd3vh_ch1fc凸起lalapg32bcmapschli373hc孔洞lalapg33表3：抗-cd3抗体的序列。为了制备下述(2+1)含有fc的抗-bcma/抗-cd3tcbclc，需要在上面表2中提及的各个“结构单元”/序列id：pschli333-tcb:27,28,29x3pschli372-tcb:29x3,30,31pschli373-tcb:29x3,32,33。优选地，根据本发明的抗体显示出对bcma的高亲和力和低聚集。本发明还涉及编码各个重链和轻链集合的核酸集合。优选地，包含igg1亚类的恒定重区域ch2/ch3的根据本发明的双特异性抗体的特征在于包含突变l234a、l235a和p239g(根据kabat编号)以避免fcr和c1q结合和使adcc/cdc最小化。优点是，本发明的这样的抗体纯粹通过t-细胞重新定向/活化的强力机制来介导它的肿瘤细胞杀死效力。避免额外作用机制如对补体系统和对表达fcr的效应细胞的影响，并减小副作用的风险。优选地，根据本发明的抗体的特征在于，在每周2次或每周1次静脉内地(i.v.)或皮下地(s.c.)或腹膜内地(i.p.)施用的1mg/kg体重(bw)的剂量，优选地在每周2次或每周1次静脉内地或腹膜内地或皮下地施用的0.5mg/kgbw，优选地在每周2次或每周1次静脉内地或腹膜内地或皮下地施用的0.1mg/kgbw，优选地在每周2次或每周1次静脉内地或腹膜内地或皮下地施用的0.05mg/kgbw，优选地在每周2次或每周1次静脉内地或腹膜内地或皮下地施用的0.01mg/kgbw，优选地在每周2次或每周1次静脉内地或腹膜内地或皮下地施用的5µg/kgbw，在多发性骨髓瘤异种移植物模型(例如含有nci-h929细胞或rpmi8226细胞或u266b1细胞或l-363细胞的异种移植物)中表现出超过70%、优选地超过85%、优选地接近100%的肿瘤生长抑制。优选地，根据本发明的抗体的特征在于在小鼠、优选食蟹猴中长于24小时、优选3天或更长的消除半衰期，优选地针对在每周2次或1次施用时在异种移植物模型中有效的剂量来测量半衰期。结合肿瘤细胞上的靶标并结合cd3且具有分子形式(scfv)2的双特异性抗体具有1-4小时的非常短的消除半衰期。在使用(scfv)2双特异性的cd19xcd3抗体博纳吐单抗(blinatumomab)的临床试验中，该化合物必须经由患者携带的泵施用数周和数月(topp等人.jclinoncol2011;29(18):2493-8)。与每周2次或每周1次静脉内或皮下施用相比，经由泵施用的治疗对于患者而言不方便得多，并且也有多得多的危险(例如泵的故障，关于导管的问题)。优选地，根据本发明的抗体的特征在于显示出500nm或更低的关于结合nci-h929细胞(atcc®crl-9068™)的ec50值，优选350nm或更低的ec50值，优选100nm和更低的ec50值。优选地，根据本发明的抗体的特征在于它在人t细胞存在下以低于1nm、优选0.5nm、优选0.1nm和更低的ec50诱导nci-h929肿瘤细胞的重新定向杀死的能力。双特异性抗体的稳定性在实际条件和临床应用中会受到影响。尽管有最近的抗体工程进步，在应激条件下一些重组蛋白和分子形式(例如scfv片段)倾向于比其它更容易变性和形成聚集体(worn和pluckthun.jmolbiol2001;305,989-1010)。优选地，根据本发明的抗体的特征在于，与在相同制剂缓冲液中在-80℃贮存相同贮存时间段的所述抗体相比，在标准制剂缓冲液中在37℃、优选地在40℃贮存10天、优选地多达2周、优选地多达4周的所述抗体不导致高分子量(hmw)物质和/或低分子量(lmw)物质和/或单体含量的超过10%变化(δ)，优选地不超过5%变化(δ)。优选地，根据本发明的双特异性抗体的特征在于它在人t细胞存在下诱导多发性骨髓瘤患者原代骨髓瘤细胞的重新定向杀死的能力。优选地，根据本发明的双特异性抗体的特征在于，一个重链的ch3结构域与另一个重链的ch3结构域在包含抗体ch3结构域之间的原始界面的界面处彼此相遇；其中改变所述界面以促进双特异性抗体的形成，其中所述改变的特征在于：a)改变一个重链的ch3结构域，使得在所述双特异性抗体内，在与另一个重链的ch3结构域的原始界面相遇的一个重链的ch3结构域的原始界面内，一个氨基酸残基被具有更大侧链体积的氨基酸残基替换，由此在一个重链的ch3结构域的界面内产生凸起，所述凸起可定位于另一个重链的ch3结构域的界面内的腔中，和b)改变另一个重链的ch3结构域，使得在所述双特异性抗体内，在与第一个ch3结构域的原始界面相遇的该第二个ch3结构域的原始界面内，一个氨基酸残基被具有更小侧链体积的氨基酸残基替换，由此在第二个ch3结构域的界面内产生腔，第一个ch3结构域的界面内的凸起可定位于所述腔中。优选地，根据本发明的抗体的特征在于，所述具有更大侧链体积的氨基酸残基选自精氨酸(r)、苯丙氨酸(f)、酪氨酸(y)、色氨酸(w)。优选地，根据本发明的抗体的特征在于，所述具有更小侧链体积的氨基酸残基选自丙氨酸(a)、丝氨酸(s)、苏氨酸(t)、缬氨酸(v)。优选地，根据本发明的抗体的特征在于，通过引入半胱氨酸(c)作为每个ch3结构域的相应位置的氨基酸，进一步改变两个ch3结构域。优选地，根据本发明的抗体的特征在于，两个重链的恒定重链结构域ch3之一被恒定重链结构域ch1替换；并且另一个恒定重链结构域ch3被恒定轻链结构域cl替换。优选地，根据本发明的抗体进一步特征在于，它也特异性地结合食蟹猴bcma。本发明的另一个实施方案是一种或多种编码根据本发明的抗体(优选地，根据本发明的结构单元)的氨基酸序列的核酸。本发明的其它实施方案是表达载体，其包含能够在宿主细胞中表达所述核酸的根据本发明的核酸。本发明的另一个实施方案是一种用于制备根据本发明的双特异性抗体的方法，所述方法包括下述步骤：a)用载体转化宿主细胞，所述载体包含编码根据本发明的抗体的轻链和重链的核酸分子b)在允许合成所述抗体分子的条件下培养所述宿主细胞，和c)从所述培养物回收所述抗体分子。本发明的另一个实施方案是包含载体的宿主细胞，所述载体包含编码根据本发明的抗体的轻链和重链的核酸分子。本发明的一个进一步优选的实施方案是药物组合物，其包含根据本发明的抗体和药学上可接受的赋形剂。本发明的另一个实施方案是诊断组合物，其包含根据本发明的抗体。本发明的另一个实施方案是一种用于治疗需要治疗的患者的方法，其特征在于给所述患者施用治疗有效量的根据本发明的双特异性抗体。本发明的一个进一步优选的实施方案是包含根据本发明的抗体的药物组合物，其用于用作药物。本发明的一个进一步优选的实施方案是包含根据本发明的抗体的药物组合物，其用于在浆细胞障碍的治疗中用作药物。本发明的一个进一步优选的实施方案是包含根据本发明的抗体的药物组合物，其用于在多发性骨髓瘤的治疗中用作药物。本发明的另一个实施方案是根据本发明的抗体，其用于治疗浆细胞障碍如多发性骨髓瘤或表达bcma的其它b-细胞障碍。多发性骨髓瘤是一种特征在于异常浆细胞在骨髓区室中的单克隆扩增和积累的b-细胞恶性肿瘤。多发性骨髓瘤还涉及具有相同igg基因重排和体细胞高突变的循环克隆b细胞。多发性骨髓瘤起源于无症状的恶化前病症，被称为未见显著性的单克隆丙种球蛋白病(mgus)，其特征在于低水平的骨髓浆细胞和单克隆蛋白。多发性骨髓瘤细胞以低速率增殖。多发性骨髓瘤起因于多种结构性染色体改变(例如不平衡易位)的渐进性发生。多发性骨髓瘤涉及恶性浆细胞和骨髓微环境(例如正常骨髓基质细胞)的相互的互相作用。活跃的多发性骨髓瘤的临床征象包括单克隆抗体簇(spike)、过度围绕骨髓的浆细胞、起因于破骨细胞的过度刺激的溶骨损伤和骨破坏(dimopulos&terpos,annoncol2010;21增刊7:vii143-150)。涉及浆细胞(即表达bcma)的另一种b细胞障碍是系统性红斑狼疮(sle)，也被称作狼疮。sle是一种全身性自身免疫疾病，其可以影响身体的任何部分并且表现为攻击身体的自身细胞和组织的免疫系统，从而导致慢性炎症和组织损伤。它是iii型超敏反应，其中抗体-免疫复合物沉淀并造成其它免疫应答(inaki&lee,natrevrheumatol2010;6:326-337)。本发明的一个进一步优选的实施方案是包含根据本发明的抗体的药物组合物，其用于在系统性红斑狼疮的治疗中用作药物。附图说明图1：如指示的具有或没有fc部分的、仅包含(对cd3和bcma特异性的)fab片段的双特异性的二价和三价抗体：(a)fabbcma-fc-fabcd3；(b)fabbcma-fc-fabcd3-fabbcma；(c)fabbcma-fc-fabbcma-fabcd3；(d)fc-fabcd3-fabbcma；(e)fc-fabbcma-fabcd3；(f)fabcd3-fabbcma-fabbcma；(g)fabcd3-fabbcma。优选地，fabcd3和fabbcma的lc是相同的(共同lc)以避免lc错配和减少副产物。fabcd3和fabbcma用柔性接头彼此连接。图2：如通过表面等离子体共振(spr)检测到的bcmaigg抗体与taci受体的结合的缺乏。曲线1对应于参比通道上的信号，曲线2对应于在其中发生结合的通道(结合通道)，且曲线2-1是减去的信号(结合通道-参比通道)，这意味着，这是由结合事件引起的信号。spr结合测定清楚地证实，pschli372igg不结合人taci受体(参见实施例4)。图3：bcma-tcbclc的产生和纯化。应用于(a)pschli333-tcbclc、(b)pschli372-tcbclc、(c)pschli373-tcbclc的蛋白a(pa)亲和色谱法和尺寸排阻色谱(sec)纯化步骤以后，最终蛋白制品的ce-sds图(非还原的(顶)和还原的(底))。所有三种分子都具有如图1b中所述的分子形式(参见实施例6)。图4：通过流式细胞计量术，bcma高-阳性的h929细胞上的bcma-tcbclc抗体的结合。以抗体浓度(0.12-500nm)的函数绘制bcma-tcbclc抗体的中间荧光强度；(a)在h929细胞(a)和mkn45细胞(b)上的pschli372-tcbclc和pschli373-tcbclc。dp47-tcb是在低于100nm的浓度不结合bcma的阴性对照tcb(参见实施例7)。图5：如通过流式细胞计量术测量的cd3-阳性的jurkatt细胞上的bcma-tcbclc抗体的结合。以抗体浓度的函数绘制结合jurkatt细胞的bcma-tcbclc抗体(pschli372-tcbclc和pschli373-tcbclc)的中间荧光强度。在低于100nm的浓度不结合bcma-阴性的和cd3-阴性的mkn45细胞(参见实施例8)。图6：通过流式细胞计量术检测的在h929细胞存在下由bcma-tcbclc抗体介导的t-细胞活化。温育48小时以后cd4+和cd8+t细胞上的早期活化标志物cd69和晚期活化标志物cd25的表达水平。在bcma-阳性的靶细胞存在下，pschli372-tcbclc和pschli373-tcbclc抗体以浓度依赖性的和特异性的方式诱导cd69和cd25活化标志物的上调。使用的e:t比率为10个pbmc:1个h929细胞；将细胞温育48h，然后测量cd69和cd25上调。dp47-tcb(其为阴性对照tcb)没有诱导t-细胞活化。来自两个独立实验的代表性结果(参见实施例9)。图7：bcma-tcbclc抗体诱导bcma高-阳性的h929骨髓瘤细胞的t-细胞重新定向杀死，如通过比色测量ldh释放测定检测到的。bcma-tcbclc抗体pschli372-tcbclc(a,b)和pschli373-tcbclc(a)诱导bcma高-阳性的h929骨髓瘤细胞的浓度依赖性杀死，如通过ldh释放测量的。不结合bcma但是仅结合cd3的dp47-tcb(其为阴性对照tcb)没有诱导h929细胞杀死。使用的e:t比率为10个pbmc:1个h929细胞；将细胞温育24h，然后测量ldh释放。来自三个独立实验的代表性结果(参见实施例10)。图8：bcma-tcbclc抗体诱导bcma中/低-阳性的u266骨髓瘤细胞的t-细胞重新定向杀死，如通过比色测量ldh释放测定检测到的。bcma-tcbclc抗体pschli372-tcbclc和pschli373-tcbclc诱导bcma中/低-阳性的u266骨髓瘤细胞的浓度依赖性杀死，如通过ldh释放测量的。不结合bcma但是仅结合cd3的dp47-tcb(其为阴性对照tcb)没有诱导h929细胞杀死。使用的e:t比率为10个pbmc:1个u266细胞；将细胞温育24h，然后测量ldh释放。来自两个独立实验的代表性结果(参见实施例11)。图9：在自体骨髓浸润性t细胞(患者的全骨髓抽吸物)存在下，由抗-bcma/抗-cd3t-细胞双特异性抗体诱导的多发性骨髓瘤患者骨髓的骨髓瘤浆细胞的重新定向的t-细胞裂解，如通过流式细胞计量术测量的。确定膜联蛋白-v阴性的骨髓瘤浆细胞的百分比，并相对于tcb浓度绘图。观察到患者骨髓瘤浆细胞的浓度依赖性的和特异性的裂解，而在试验的tcb抗体的最高浓度用对照-tcb没有观察到恶性骨髓浆细胞的裂解。pschli372-tcbclc诱导患者骨髓的骨髓瘤浆细胞的杀死，如存活的(膜联蛋白-v阴性的)骨髓瘤浆细胞的浓度依赖性下降所反映的。在患者001中的代表性实验(参见实施例12)。具体实施方式本文中使用的术语“靶标”是指bcma或cd3。术语“第一靶标和第二靶标”是指cd3作为第一靶标和bcma作为第二靶标，或者是指bcma作为第一靶标和cd3作为第二靶标。本文中使用的术语“bcma”指人b细胞成熟靶标，也被称作bcma；tr17_human,tnfrsf17(uniprotq02223)，其是在分化的浆细胞中优先表达的肿瘤坏死受体超家族的成员。根据uniprot，bcma的细胞外结构域由氨基酸1-54(或5-51)组成。本文中使用的术语“针对bcma的抗体，抗bcma抗体”指特异性地结合bcma的抗体。本文中使用的术语“cd3ε或cd3”指在uniprotp07766(cd3e_human)下描述的人cd3ε。术语“针对cd3的抗体，抗cd3抗体”指结合cd3ε的抗体。优选地，所述抗体包含：可变结构域vh，其包含seqidno:3、4和5的重链cdr分别作为重链cdr1、cdr2和cdr3；和可变结构域vl，其包含seqidno:6、7和8的轻链cdr分别作为轻链cdr1、cdr2和cdr3。优选地，所述抗体包含seqidno:1(vh)和seqidno:2(vl)的可变结构域。本文中使用的术语“针对cd3的抗体，抗cd3抗体”指特异性地结合cd3的抗体。“特异性地结合cd3或bcma”表示能够以足够的亲和力结合cd3或bcma(靶标)的抗体，使得所述抗体在靶向cd3或bcma中用作治疗剂。在某些实施方案中，抗-cd3或bcma抗体与不相关的非cd3或非bcma蛋白的结合程度比所述抗体与cd3或bcma的结合小约10倍，优选>100倍，如例如通过表面等离子体共振(spr)例如biacore®、酶联免疫吸附(elisa)或流式细胞计量术(facs)测量的。优选地，结合cd3或bcma的抗体具有10-8m或更低、优选10-8m至10-13m、优选10-9m至10-13m的解离常数(kd)。优选地，抗-cd3和/或抗-bcma抗体结合在来自不同物种、优选在人和食蟹猴的cd3和/或bcma之间保守的cd3和/或bcma的表位。“特异性地结合cd3和bcma的双特异性抗体”或“根据本发明的抗体”表示关于结合两种靶标的各自定义。特异性地结合bcma(或bcma和cd3)的抗体不结合其它人抗原。因而，在elisa中，这样的不相关靶标的od值将等于或低于特定测定的检测限度的od值，优选>0.3ng/ml，或等于或低于没有平板结合的bcma或具有未转染的hek293细胞的对照样品的od值。本文中使用的术语“cd3ε或cd3结合部分”表示由vh和ch1组成的抗体重链与由vl和cl组成的抗体轻链的组合，如在特异性地结合cd3的抗体的fab片段中包封的。在根据本发明的双特异性抗体中，包含所述共同轻链作为轻链的cd3结合部分(“结合cd3的部分”)优选地掺入一次。本文中使用的术语“bcma结合部分”表示由vh和ch1组成的抗体重链与由vl和cl组成的抗体轻链的组合，如在特异性地结合bcma的抗体的fab片段中包封的。在根据本发明的双特异性抗体中，包含所述共同轻链作为轻链的bcma结合部分(“结合bcma的部分”)优选地掺入一次或两次。优选地，根据本发明的抗体的特征在于，关于与nci-h929细胞(atcc®crl-9068™)的结合，显示出500nm或更低的ec50值，优选350nm和更低的ec50值，优选100nm和更低的ec50值。优选地，根据本发明的抗体的特征在于它的结合u266(atcc®tib-196tm)细胞的能力。在一个优选的实施方案中，根据本发明的抗体的特征在于它的结合人t细胞的能力。优选地，根据本发明的抗体的特征在于它的结合在hek-细胞上瞬时地表达的食蟹猴bcma的能力。在一个优选的实施方案中，根据本发明的抗体的特征在于它的在表达bcma的肿瘤细胞存在下诱导cd4+和cd8+t-细胞活化的能力。优选地，根据本发明的抗体的特征在于它的在人t细胞存在下以低于1nm、优选地0.5nm、优选地0.1nm和更低的ec50诱导nci-h929肿瘤细胞的重新定向杀死的能力。本文中使用的术语“抗体”表示单克隆抗体。抗体由两对“轻链”(lc)和“重链”(hc)组成(这样的轻链(lc)/重链对在本文中缩写为lc/hc)。这样的抗体的轻链和重链是由几个结构域组成的多肽。每个重链包含重链可变区(在本文中缩写为hcvr或vh)和重链恒定区。重链恒定区包含重链恒定结构域ch1、ch2和ch3(抗体种类iga、igd和igg)和任选的重链恒定结构域ch4(抗体种类ige和igm)。每个轻链包含轻链可变结构域vl和轻链恒定结构域cl。可变结构域vh和vl可以进一步细分为被称为互补性决定区(cdr)的高变异性区域，其散布有被称为框架区(fr)的更保守的区域。每个vh和vl由3个cdr和4个fr组成，从氨基端至羧基端以下列顺序排列：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。重链和轻链的“恒定结构域”不直接参与抗体与靶标的结合，但展示多种效应子功能。本文中使用的“抗体的轻链”是在n-端至c-端方向包含轻链可变结构域(vl)和轻链恒定结构域(cl)的多肽，缩写为vl-cl。本文中使用的“抗体的重链”是在n-端至c-端方向包含重链可变结构域(vh)和恒定重链结构域1(ch1)的多肽。关于ch3-修饰以实施异源二聚化存在几个方案，它们充分地描述在例如wo96/27011、wo98/050431、ep1870459、wo2007/110205、wo2007/147901、wo2009/089004、wo2010/129304、wo2011/90754、wo2011/143545、wo2012058768、wo2013157954、wo2013096291中。通常，在所有这样的方案中，以互补方式工程改造第一ch3结构域和第二ch3结构域，使得每个ch3结构域(或包含它的重链)不再可以与它自身同源二聚化，而是被迫与互补的经工程改造的其它ch3结构域异源二聚化(使得所述第一和第二ch3结构域异源二聚化，且在所述两个第一ch3结构域或所述两个第二ch3结构域之间不形成同源二聚体)。在本发明的一个优选实施方案中(在根据本发明的抗体在重链中包含ch3结构域的情况下)，可以通过“凸起-进入-孔洞”技术改变所述根据本发明的多特异性抗体的ch3结构域，所述“凸起-进入-孔洞”技术用几个实施例详细描述在例如wo96/027011,ridgway,j.b.,等人,proteineng.9(1996)617-621；和merchant,a.m.,等人,nat.biotechnol.16(1998)677-681;wo98/050431中。在该方法中，改变两个ch3结构域的相互作用表面以增加含有这两个ch3结构域的两个重链的异源二聚化。两个ch3结构域(两个重链)中的每一个可以是“凸起”，而另一个是“孔洞”。因而，在本发明的一个实施方案中，所述根据本发明的抗体(在每个重链中包含ch3结构域和)进一步特征在于，在a)下的所述抗体的第一个重链的第一个ch3结构域和在b)下的所述抗体的第二个重链的第二个ch3结构域各自在包含抗体ch3结构域之间的原始界面的界面处相遇，其中改变所述界面以促进根据本发明的抗体的形成，其中所述改变的特征在于：i)改变一个重链的ch3结构域，使得在根据本发明的抗体内，在与另一个重链的ch3结构域的原始界面相遇的一个重链的ch3结构域的原始界面内，一个氨基酸残基被具有更大侧链体积的氨基酸残基替换，由此在一个重链的ch3结构域的界面内产生凸起，所述凸起可定位于另一个重链的ch3结构域的界面内的腔中，和ii)改变另一个重链的ch3结构域，使得在根据本发明的抗体内，在与第一个ch3结构域的原始界面相遇的该第二个ch3结构域的原始界面内，一个氨基酸残基被具有更小侧链体积的氨基酸残基替换，由此在第二个ch3结构域的界面内产生腔，第一个ch3结构域的界面内的凸起可定位于所述腔中。优选地，所述具有更大侧链体积的氨基酸残基选自精氨酸(r)、苯丙氨酸(f)、酪氨酸(y)、色氨酸(w)。在本发明的一个方面，通过引入半胱氨酸(c)作为每个ch3结构域的相应位置的氨基酸，使得可以形成两个ch3结构域之间的二硫键，进一步改变两个ch3结构域。预见到关于ch3-修饰以实施异源二聚化的其它技术作为本发明的替代方案，并且描述在例如wo96/27011、wo98/050431、ep1870459、wo2007/110205、wo2007/147901、wo2009/089004、wo2010/129304、wo2011/90754、wo2011/143545、wo2012/058768、wo2013/157954、wo2013/157953、wo2013/096291中。在一个实施方案中，根据本发明的抗体是igg2同种型，并且可以可替换地使用在wo2010/129304中描述的异源二聚化方案。术语“抗体”包括例如小鼠抗体、人抗体、嵌合抗体、人源化抗体和遗传工程改造抗体(变体或突变抗体)，只要它们的特征性能得以保留。特别优选的是人或人源化抗体，尤其是作为重组人或人源化抗体。本文中使用的术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”指单一氨基酸组成的抗体分子制剂。本文中使用的术语“双特异性抗体”和“根据本发明的抗体”表示这样的抗体：其中两对重链和轻链(hc/lc)之一特异性地结合bcma，且另一对特异性地结合cd3，或优选地结合cd3和bcma。在本申请中使用的术语“价”表示指定数目的结合位点在抗体分子中的存在。根据本发明的二价抗体具有两个结合位点，一个针对cd3且另一个针对bcma。这样，术语“三价”表示三个结合位点在根据本发明的抗体中的存在，它们是两个针对bcma的结合位点和一个针对cd3的结合位点。存在五类用希腊字母表示的哺乳动物抗体重链：α、δ、ε、γ和μ(janewayca,jr等人(2001).immunobiology.第5版,garlandpublishing)。所存在的重链类型定义了抗体的种类；这些链分别发现于iga、igd、ige、igg和igm抗体中(rhoadesra,pflanzerrg(2002).humanphysiology,第4版,thomsonlearning)。不同的重链在大小和组成上不同；α和γ含有大约450个氨基酸，而μ和ε具有大约550个氨基酸。每个重链具有两个区域，恒定区和可变区。恒定区在相同同种型的所有抗体中均相同，但是在不同同种型的抗体中不同。重链γ、α和δ具有由三个恒定结构域ch1、ch2和ch3(在一条线上)组成的恒定区，和铰链区用于附加的柔性(woofj,burtondnatrevimmunol4(2004)89-99)；重链μ和ε具有由四个恒定结构域ch1、ch2、ch3和ch4组成的恒定区(janewayca,jr等人(2001).immunobiology.第5版,garlandpublishing)。重链的可变区在由不同b细胞产生的抗体中不同，但是对于由单个b细胞或b细胞克隆产生的所有抗体均相同。每个重链的可变区是大约110个氨基酸长并且由单个抗体结构域组成。本文中使用的“共同轻链”是在根据本发明的双特异性抗体中使用的唯一轻链。在哺乳动物中，存在两种类型的轻链，它们被称为λ(λ)和κ(κ)。轻链具有两个连续的结构域：一个恒定结构域cl和一个可变结构域vl。轻链的近似长度是211-217个氨基酸。优选地，所述轻链是κ(κ)轻链，而恒定结构域cl优选地源自κ(k)轻链(恒定结构域ck)。优选地，根据本发明的抗体的重链和轻链恒定结构域是人结构域。根据本发明的“抗体”可以是任何种类(例如iga、igd、ige、igg和igm、优选地igg或ige)或亚类(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2、优选地igg1)，由此根据本发明的二价双特异性抗体的两种来源抗体具有相同亚类的fc部分(例如igg1、igg4等，优选igg1)，优选相同同种异型的fc部分(例如高加索人(caucasian))。本文中使用的“抗体的fab片段”是结合抗原的抗体上的片段。抗体的fab片段由两对结构域组成。在野生型抗体中，它由重链(ch1和vh)和轻链(cl和vl)各自的一个恒定结构域和一个可变结构域组成。在野生型抗体中和根据本发明，fab片段的重链和轻链结构域对的结构域没有化学连接在一起并因此不是scfv(单链可变片段)。“抗体的fc部分”是本领域技术人员众所周知的并基于抗体的木瓜蛋白酶切割而定义的术语。根据本发明的抗体含有fc部分，优选源自人来源的fc部分和优选人恒定区的所有其它部分。抗体的fc部分直接参与补体激活、c1q结合、c3激活和fc受体结合。尽管抗体对补体系统的影响依赖于某些条件，但与c1q的结合由fc部分中确定的结合位点引起。这样的结合位点是现有技术中已知的，并且例如由以下文献描述：lukas,tj.,等人,j.immunol.127(1981)2555-2560;brunhouse,r.,和cebra,j.j.,moi.immunol.16(1979)907-917;burton,d.r.,等人,nature288(1980)338-344;thommesen,j.e.,等人,moi.immunol.37(2000)995-1004;idusogie,e.e.,等人,j.immunol.164(2000)4178-4184;hezareh,m.,等人,j.virol.75(2001)12161-12168;morgan,a.,等人,immunology86(1995)319-324；和ep0307434。这样的结合位点是例如l234、l235、d270、n297、e318、k320、k322、p331和p329(根据kabat的eu索引进行编号，参见下文)。亚类igg1、igg2和igg3的抗体经常显示补体激活、c1q结合和c3激活，而igg4不激活补体系统，不结合c1q并且不激活c3。优选地，fc部分是人fc部分。优选地，fc部分是人igg1fc部分。优选地，根据本发明的抗体在人igg1fc部分中包含甘氨酸或精氨酸对pro329的氨基酸取代和/或l234a和l235a取代，优选甘氨酸对pro329的取代和l234a和l235a取代。优选地，根据本发明的抗体包含野生型人iggfc区域的fc变体作为fc部分，所述fc变体包含在位置pro329处的一个氨基酸取代和至少一个其它氨基酸取代，其中将残基根据kabat的eu索引编号，并且其中所述抗体表现出与包含野生型iggfc区的抗体相比降低的对人fcγriiia和/或fcγriia和/或fcγri的亲和力，并且其中由所述抗体诱导的adcc降低至包含野生型人iggfc区的抗体诱导的adcc的至少20%。在一个具体实施方案中，根据本发明的抗体中的野生型人fc区的pro329被甘氨酸或精氨酸或足够大以破坏fc/fcγ受体界面内的脯氨酸夹层的氨基酸残基取代，所述受体界面在fc的脯氨酸329与fcγriii的色氨酸残基trp87和tip110之间形成(sondermann等人:nature406,267-273(2000年7月20日))。在本发明的另一个方面，fc变体中的至少一个其它氨基酸取代是s228p、e233p、l234a、l235a、l235e、n297a、n297d或p331s，并且在另一个实施方案中，所述至少一个其它氨基酸取代是人igglfc区的l234a(表示亮氨酸234被丙氨酸取代)和l235a，或人igg4fc区的s228p和l235e。在wo2012130831中详细描述了这样的fc变体。术语“嵌合抗体”指这样的抗体，其包含来自一种来源或物种的可变区(即结合区)和来自不同来源或物种的恒定区的至少一部分，所述抗体经常通过重组dna技术来制备。包含鼠可变区和人恒定区的嵌合抗体是优选的。本发明涵盖的“嵌合抗体”的其它优选形式是这样的抗体，其中恒定区已经被从初始抗体的恒定区开始进行修饰或改变以产生根据本发明的特性，特别是关于c1q结合和/或fc受体(fcr)结合。这样的嵌合抗体也被称作“类别转换抗体”。嵌合抗体是包含编码免疫球蛋白可变区的dna区段和编码免疫球蛋白恒定区的dna区段的表达的免疫球蛋白基因的产物。制备嵌合抗体的方法包括目前在本领域众所周知的常规重组dna和基因转染技术。参见，例如，morrison,s.l.,等人,proc.natl.acad.sci.usa81(1984)6851-6855；美国专利号5,202,238和5,204,244。术语“人源化抗体”指这样的抗体，其中框架或“互补性决定区”(cdr)已经被修饰为包括与母体免疫球蛋白相比特异性不同的免疫球蛋白的cdr。在一个优选实施方案中，将鼠cdr移植到人抗体的框架区以制备“人源化抗体”。和neuberger,m.s.,等人,nature314(1985)268-270。特别优选的cdr对应于代表识别上文为嵌合抗体指出的靶标的序列的那些序列。本发明涵盖的“人源化抗体”的其它形式是这样的抗体，其中恒定区已经另外被从初始抗体的恒定区开始进行修饰或改变以产生根据本发明的特性，特别是关于c1q结合和/或fc受体(fcr)结合。本文中使用的术语“人抗体”意欲包括具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。人抗体是现有技术中公知的(vandijk,m.a.,和vandewinkel,j.g.,curr.opin.chem.biol.5(2001)368-374)。人抗体还可以在转基因动物(例如小鼠)中产生，所述转基因动物在免疫时能够在缺乏内源免疫球蛋白生成的条件下产生人抗体的全部所有组成成分或选择部分(selection)。在这样的种系突变体小鼠中转移人种系免疫球蛋白基因阵列将导致靶标攻击后人抗体的产生(参见，例如，jakobovits,a.,等人,proc.natl.acad.sci.usa90(1993)2551-2555;jakobovits,a.,等人,nature362(1993)255-258;bruggemann,m.,等人,yearimmunol.7(1993)33-40)。还可以在噬菌体展示文库中产生人抗体(hoogenboom,h.r.,和winter,g.,j.moi.biol.227(1992)381-388;marks,j.d.,等人,j.moi.biol.222(1991)581-597)。cole等人和boerner等人的技术也可以用于制备人单克隆抗体(cole等人,monoclonalantibodiesandcancertherapy,alanr.liss,第77页(1985)；和boerner,p.,等人,j.immunol.147(1991)86-95)。如关于根据本发明的嵌合抗体和人源化抗体已经提及的，本文中使用的术语“人抗体”还包含这样的抗体，其在恒定区内被修饰以产生根据本发明的性质，尤其是关于c1q结合和/或fcr结合，例如通过“类别转换”即fc部分的改变或突变(例如从igg1到igg4和/或igg1/igg4突变)。本文中使用的术语“重组人抗体”意图包括通过重组方式制备、表达、建立或分离的所有人抗体，诸如从宿主细胞(诸如nso或cho细胞)或从人免疫球蛋白基因的转基因动物(例如小鼠)分离的抗体，或使用转染进宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体。这样的重组人抗体具有处于重排形式的可变区和恒定区。根据本发明的重组人抗体已经经历体内体细胞高突变。因此，重组抗体的vh和vl区的氨基酸序列是这样的序列：其尽管源自人种系vh和vl序列且与人种系vh和vl序列相关，但是不可能天然地存在于体内人抗体种系组库内。本文中使用的“可变结构域”(轻链可变结构域(vl)，重链的可变区(vh))表示直接参与抗体与靶标的结合的每个轻链和重链对。可变人轻链和重链的结构域具有相同的一般结构，并且每个结构域包含四个框架(fr)区，其序列很大程度上保守，由三个“高变区”(或互补性决定区，cdr)连接。框架区采用β-折叠构象并且cdr可以形成连接β-折叠结构的环。每个链中的cdr通过框架区保持其三维结构并与来自另一个链的cdr一起形成靶标结合位点。抗体重链和轻链cdr3区在根据本发明的抗体的结合特异性/亲和力方面发挥特别重要的作用，并因此提供本发明的另一个目的。当用于本文中时，术语“高变区”或“抗体的靶标结合区域”表示负责靶标结合的抗体的氨基酸残基。高变区包括来自“互补性决定区”或“cdr”的氨基酸残基。“框架”或“fr”区是除本文中定义的高变区残基之外的那些可变结构域区域。因此，抗体的轻链和重链从n端到c端包括结构域fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3和fr4。各条链上的cdr通过所述框架氨基酸分开。尤其是，重链的cdr3是最有助于靶标结合的区域。根据kabat等人,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,第5版,公共卫生署(publichealthservice),国立卫生研究院(nationalinstitutesofhealth),bethesda,md(1991)的标准定义确定cdr和fr区域。术语“表位”包括能够特异性地结合抗体的任何多肽决定簇。在某些实施方案中，表位决定簇包括分子的化学活性表面分组(groupings)，诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基，且，在某些实施方案中，可以具有特定的三维结构特征，和或特定的带电特性。表位是被抗体结合的靶标区域。为了制备根据本发明的双特异性抗体，可以使用编码每个轻链和重链的单独载体或另一种适当量的载体。这样的载体可以用于转化宿主细胞。本文中使用的术语“核酸或核酸分子”意图包括dna分子和rna分子。核酸分子可以是单链的或双链的，但优选为双链dna。本文中使用的表述“细胞”、“细胞系”和“细胞培养物”可互换使用，且所有这些名称都包括子代。因此，词语“转化体”和“转化的细胞”包括原代受试细胞和由其衍生出的培养物，而不考虑转移的次数。还应当理解，由于故意的或非故意的突变，所有后代可以在dna含量上不是精确地相同的。包括在最初转化的细胞中筛选的具有相同功能或生物学活性的变异后代。在意指不同名称时，它将从上下文中显而易见。本文中使用的术语“转化”表示将载体/核酸转移到宿主细胞中的过程。如果将没有强大细胞壁屏障的细胞用作宿主细胞，那么例如通过graham和vandereh,virology52(1978)546ff描述的磷酸钙沉淀方法进行转染。但是，还可以使用其它将dna引入细胞的方法，诸如通过核注射或通过原生质体融合。如果使用原核细胞或包含实质细胞壁结构的细胞，例如一种转染方法是如cohensn,等人,pnas1972,69(8):2110-2114所述的利用氯化钙的钙处理。使用转化来重组生产抗体为现有技术所熟知并且描述于例如makrides,s.c,proteinexpr.purif.17(1999)183-202;geisse,s.,等人,proteinexpr.purif.8(1996)271-282;kaufman,rj.,moi.biotechnol.16(2000)151-161;werner,r.g.,等人,arzneimittelforschung48(1998)870-880的综述文章以及us6331415和us4816567中。本文中使用的“表达”指将核酸转录为mrna的过程和/或将转录的mrna(也被称作转录物)随后翻译为肽、多肽或蛋白质的过程。转录物和被编码的多肽共同称为基因产物。如果多核苷酸源自基因组dna，则在真核细胞中的表达可以包括mrna的剪接。“载体”是核酸分子，特别是自体复制的，其将插入的核酸分子转移到宿主细胞之中和/或之间。该术语包括主要功能为将dna或rna插入细胞(例如，染色体整合)的载体，主要功能是复制dna或rna的复制载体，和功能是转录和/或翻译dna或rna的表达载体。还包括提供多于一种上述功能的载体。“表达载体”是多核苷酸，其在引入到合适的宿主细胞中时能够被转录和翻译为多肽。“表达系统”通常指包括表达载体的适当宿主细胞，所述表达载体可以起作用产生所需的表达产物。优选地通过重组方式产生根据本发明的双特异性抗体。这样的方法为现有技术所广泛熟知并且包括在原核和真核细胞中表达蛋白，随后分离抗体多肽并且经常纯化至药学上可接受的纯度。为了表达蛋白，通过标准方法将编码轻链和重链或其片段的核酸插入表达载体中。在适当的原核或真核宿主细胞(如cho细胞、nso细胞、sp2/0细胞、hek293细胞、cos细胞、酵母或大肠杆菌细胞)中进行表达，并且将所述抗体从细胞(上清液或裂解后的细胞)中回收。双特异性抗体可以存在于完整细胞中、细胞裂解物中，或呈部分纯化的或基本上纯的形式。通过标准技术(包括碱/sds处理、柱色谱法和本领域所熟知的其它技术)进行纯化，以消除其它细胞组分或其它污染物，例如其它细胞核酸或蛋白。参见ausubel,f.,等人,编,currentprotocolsinmolecularbiology,greenepublishingandwileyinterscience,newyork(1987)。由例如barnes,l.m.,等人,cytotechnology32(2000)109-123；和barnes,l.m.,等人,biotech.bioeng.73(2001)261-270描述了在ns0细胞中的表达。由例如durocher,y.,等人,nucl.acids.res.30(2002)e9描述了瞬时表达。由orlandi,r.,等人,proc.natl.acad.sci.usa86(1989)3833-3837;carter,p.,等人,proc.natl.acad.sci.usa89(1992)4285-4289；和norderhaug,l.,等人,j.immunol.methods204(1997)77-87描述了可变结构域的克隆。由schlaeger,e.-j.,和christensen,k.,在cytotechnology30(1999)71-83中以及schlaeger,e.-j.在j.immunol.methods194(1996)191-199中描述了一种优选的瞬时表达系统(hek293)。适合用于原核生物的控制序列例如包括启动子、任选的操纵子序列和核糖体结合位点。已知真核细胞利用启动子、增强子和多腺苷酸化信号。当将核酸置于与另一个核酸序列的功能关联中时，所述核酸是“可操作地连接的”。例如，前序列或分泌型前导序列的dna与多肽的dna可操作地连接，条件是其表达为参与所述多肽的分泌的前蛋白；启动子或增强子与编码序列可操作地连接，条件是其影响所述序列的转录；或核糖体结合位点与编码序列可操作地连接，条件是其被定位为促进翻译。通常，“可操作地连接的”是指，所连接的dna序列是连续的，并且在分泌前导序列的情况下，是连续的并且在读码框中。但是，增强子不必须是连续的。连接通过在方便的限制性位点处的连接来实现。如果不存在这样的位点，则根据常规实践使用合成的寡核苷酸适体或接头。双特异性抗体适当地从培养基中通过常规免疫球蛋白纯化方法分离，所述纯化方法如，例如蛋白a-琼脂糖、羟基磷灰石色谱法、凝胶电泳、透析或亲和色谱法。使用常规操作容易地分离编码单克隆抗体的dna或rna并进行测序。杂交瘤细胞可以充当这样的dna和rna的来源。一旦被分离，可以将所述dna插入表达载体中，然后将所述表达载体转染进否则不产生免疫球蛋白的宿主细胞诸如hek293细胞、cho细胞或骨髓瘤细胞中，从而在宿主细胞中获得重组单克隆抗体的合成。t细胞双特异性的(tcb)结合剂在细胞杀死中具有非常高的浓度/肿瘤-细胞-受体-占据依赖性效能(例如在体外细胞杀死测定中在亚皮摩尔或低皮摩尔范围的ec50；dreier等人.intjcancer2002)，以比常规单特异性抗体低得多的剂量施用t-细胞双特异性的结合剂(tcb)。例如，以5-15μg/m2/天(即仅0.035-0.105mg/m²/周)的连续静脉内剂量施用博纳吐单抗(cd19xcd3)用于治疗急性淋巴细胞白血病，或以60μg/m2/天施用用于治疗非霍奇金淋巴瘤，并且在这些剂量的血清浓度是在0.5-4ng/ml的范围内(klinger等人,blood2012;topp等人,jclinoncol2011;goebeler等人.annoncol2011)。因为低剂量的tcb可以在患者中发挥高效力，预见到，对于根据本发明的抗体，皮下施用在临床场合中是可能的并优选的(优选0.25-2.5mg/m2/周的剂量范围)。甚至在这些低浓度/剂量/受体占据，tcb可以引起大量不利事件(klinger等人,blood2012)。因而，控制肿瘤细胞占据/覆盖是至关重要的。根据本发明的抗体的另一个优点是基于fc部分的包含，其与没有fc部分的tcb(例如博纳吐单抗，其需要利用患者携带的泵静脉内地和连续地给予)相比，使消除半衰期增加多达约12天或甚至更多，并提供每周一次或两次施用的机会。利用cd19xcd3t-细胞双特异性的(tcb)抗体，已经在具有复发的/难治的急性淋巴细胞白血病all的患者中证实了多达80%的博纳吐单抗应答率。关于all，对于多发性骨髓瘤和其它浆细胞疾病，仍然存在高医学需要。尽管有所有目前可得到的治疗，在第一次诊断以后5年，约60%的多发性骨髓瘤患者已经死亡。对于多发性骨髓瘤患者而言，仍然需要有效的治疗。与例如博纳吐单抗相比和与公开的bcmaxcd3tcb抗体相比，根据本发明的抗体具有独特的特征和优点：-长消除半衰期(数天而不是数小时)-方便的每周2次或1次施用(而不是通过泵施用，所述泵由患者携带数周/数月)-提供bcmaxcd3tcb抗体的高稳定性和低聚集的分子形式和结构-优化分子结构以实现高质量生产和促进纯化，通过使用根据本发明的共同轻链和优选的凸起-进入-孔洞技术来改善正确的重链配对，例如优选fc的ch3中的pro329和l234a和l235a氨基酸取代，以避免来自与补体系统和/或与携带fcr的效应细胞的相互作用的潜在副作用。在下面列出了本发明的具体实施方案：1.一种特异性地结合人bcma(另外还称作“bcma”)的细胞外结构域和人cd3ε(另外还称作“cd3”)的双特异性抗体，其特征在于包含共同抗体轻链，其包含seqidno:6的cdr1l、seqidno:7的cdr2l和seqidno:8的cdr3l作为cdr，和cd3结合部分的重链，其包含seqidno:3的cdr1h、seqidno:4的cdr2h和seqidno:5的cdr3h作为cdr。2.根据实施方案1所述的抗体，所述抗体包含共同可变轻链结构域vl：seqidno:2的vl。3.根据实施方案1或2所述的抗体，所述抗体包含seqidno:29的共同轻链。4.根据实施方案1-3中的任一个所述的抗体，其特征在于，所述cd3结合部分的重链包含seqidno:3的cdr1h、seqidno:4的cdr2h和seqidno:5的cdr3h作为cdr，且包含seqidno:2的vl作为可变轻链结构域vl的抗体轻链是共同轻链。5.根据实施方案1-4中的任一个所述的抗体，其特征在于，所述cd3结合部分的重链包含seqidno:3的cdr1h、seqidno:4的cdr2h和seqidno:5的cdr3h作为cdr，且seqidno:29的抗体轻链是共同轻链。6.根据实施方案1-5中的任一个所述的抗体，其特征在于包含seqidno:1的vh作为cd3结合部分的可变重链结构域vh。7.一种特异性地结合人bcma的细胞外结构域和人cd3的双特异性抗体，其特征在于包含选自以下的cdr集合作为bcma结合部分的cdr：a)seqidno:18的cdr1h、seqidno:21的cdr2h和seqidno:24的cdr3hb)seqidno:19的cdr1h、seqidno:22的cdr2h和seqidno:25的cdr3hc)seqidno:20的cdr1h、seqidno:23的cdr2h和seqidno:26的cdr3hd)seqidno:35的cdr1h、seqidno:36的cdr2h和seqidno:37的cdr3h。8.根据实施方案1-6中的任一个所述的抗体，其特征在于包含选自以下的cdr集合作为bcma结合部分的cdr：a)seqidno:18的cdr1h、seqidno:21的cdr2h和seqidno:24的cdr3h(集合pschli333)b)seqidno:19的cdr1h、seqidno:22的cdr2h和seqidno:25的cdr3h(集合pschli372)c)seqidno:20的cdr1h、seqidno:23的cdr2h和seqidno:26的cdr3h(集合pschli373)d)seqidno:35的cdr1h、seqidno:36的cdr2h和seqidno:37的cdr3h(集合83a10)。9.根据实施方案1-8中的任一个所述的抗体，其特征在于包含seqidno:15、16、17或34的vh作为bcma结合部分的可变重链结构域vh(83a10)。10.根据实施方案1-9中的任一个所述的抗体，其特征在于，在亲和力方案表面等离子体共振测定中，在500nm或更低浓度的人bcmafc融合体存在下，在25nm的抗体浓度测得，所述双特异性抗体对人bcma的亲和力是200nm或更低。11.根据实施方案1-10中的任一个所述的抗体，其特征在于，在重新定向的t-细胞杀死性ldh释放测定中，在人pbcm和h929细胞(在10:1的e:t比率)存在下24h，当以100nm或更低的浓度使用时，所述双特异性抗体的杀死bcma-阳性的h929细胞(atcccrl-9068)的效能(ec50)被测量为2nm或更低。12.根据实施方案1-11中的任一个所述的抗体，其特征在于，在亲和力方案表面等离子体共振测定中，在500nm或更低浓度的人bcmafc融合体存在下，在25nm的抗体浓度，在人igg1类型(其中轻链是seqidno:29)的抗体中测得的所述bcma结合部分对人bcma的亲和力是200nm或更低。13.根据实施方案1-12中的任一个所述的双特异性抗体，其特征在于由特异性地结合cd3的抗体的一个fab片段、和特异性地结合bcma的抗体的一个fab片段，和fc部分组成，其中所述cd3-fab和所述bcma-fab通过它们的c-端连接至所述fc部分的铰链区，且其中所述cd3-fab和所述bcma-fab包含所述共同轻链(图1a)。14.根据实施方案1-12中的任一个所述的抗体，其特征在于由两个bcma-fab、一个cd3fab，和fc部分组成，其中所述第一个bcma-fab和所述cd3-fab通过它们的c-端连接至所述fc部分的铰链区，且所述第二个bcma-fab用它的c-端连接至所述第一个bcma-fab的n-端。所述cd3-fab和bcma-fab包含所述共同轻链(图1b)。15.根据实施方案1-12中的任一个所述的抗体，其特征在于由两个bcma-fab，和fc部分组成，其中所述bcma-fab通过它们的c-端连接至所述fc部分的铰链区，且所述cd3-fab用它的c-端连接至一个bcma-fab的n-端。所述cd3-fab和bcma-fab包含所述共同轻链(图1c)。16.根据实施方案1-12中的任一个所述的抗体，其特征在于由一个cd3-fab和一个bcmafab(其经由它的c-端连接至所述fc部分的铰链区)和一个bcma-fab(其用它的c-端连接至所述cd3-fab的n-端)组成。所述cd3-fab和bcma-fab包含所述共同轻链(图1d)。17.根据实施方案1-12中的任一个所述的抗体，其特征在于由一个bcma-fab和一个cd3fab组成，其中所述bcmafab经由它的c-端连接至所述fc部分的铰链区，且所述cd3-fab用它的c-端连接至所述bcma-fab的n-端。所述cd3-fab和bcma-fab包含所述共同轻链(图1e)。18.根据实施方案1-12中的任一个所述的抗体，其特征在于由两个bcma-fab组成，其中所述第一个bcma-fab经由它的c-端连接至所述第二个bcma-fab的n-端，且其中所述第二个bcma-fab经由它的c-端连接至所述cd3-fab的n-端。所述cd3-fab和两个bcma-fab包含所述共同轻链(图1f)。19.根据实施方案1-12中的任一个所述的抗体，其特征在于由一个bcma-fab和一个cd3fab组成，其中所述bcmafab用它的c-端连接至所述cd3-fab的n-端。所述cd3-fab和bcma-fab包含所述共同轻链(图1g)。20.根据实施方案1-19中的任一个所述的抗体，其特征在于，一个重链的ch3结构域与另一个重链的ch3结构域各自在包含抗体ch3结构域之间的原始界面的界面处相遇；其中改变所述界面以促进双特异性抗体的形成，其中所述改变的特征在于：a)改变一个重链的ch3结构域，使得在所述双特异性抗体内，在与另一个重链的ch3结构域的原始界面相遇的一个重链的ch3结构域的原始界面内，一个氨基酸残基被具有更大侧链体积的氨基酸残基替换，由此在一个重链的ch3结构域的界面内产生凸起，所述凸起可定位于另一个重链的ch3结构域的界面内的腔中，和b)改变另一个重链的ch3结构域，使得在所述双特异性抗体内，在与第一个ch3结构域的原始界面相遇的该第二个ch3结构域的原始界面内，一个氨基酸残基被具有更小侧链体积的氨基酸残基替换，由此在第二个ch3结构域的界面内产生腔，第一个ch3结构域的界面内的凸起可定位于所述腔中。21.一种用于制备根据实施方案1-20中的任一个所述的双特异性抗体的方法，所述方法包括下述步骤：a)用载体转化宿主细胞，所述载体包含编码根据实施方案1-20中的任一个所述的抗体的轻链和重链的核酸分子，b)在允许合成所述抗体分子的条件下培养所述宿主细胞；和c)从所述培养物回收所述抗体分子。22.一种包含载体的宿主细胞，所述载体包含编码根据实施方案1-20中的任一个所述的抗体的轻链和重链的核酸分子。23.一种药物组合物，其包含根据实施方案1-20中的任一个所述的抗体和药学上可接受的赋形剂。24.根据实施方案1-20中的任一个所述的抗体或根据实施方案23所述的药物组合物，其用于作为药物使用。25.根据实施方案1-20中的任一个所述的抗体或根据实施方案23所述的药物组合物，其用于在浆细胞障碍如多发性骨髓瘤的治疗中作为药物使用。26.根据实施方案1-20中的任一个所述的抗体或根据实施方案28所述的药物组合物，其用于在多发性骨髓瘤的治疗中作为药物使用。27.根据实施方案1-20中的任一个所述的抗体或根据实施方案28所述的药物组合物，其用于治疗浆细胞障碍如多发性骨髓瘤或表达bcma的其它b-细胞障碍。28.根据实施方案1-20中的任一个所述的抗体，其特征在于包含在人igg1fc部分中的甘氨酸或精氨酸对pro329的氨基酸取代和/或l234a和l235a取代。29.在根据实施方案1所述的双特异性抗体中用作共同轻链的抗体轻链，其中所述双特异性抗体是根据实施方案1-20所述的抗体。30.包含seqidno:6的cdr1l、seqidno:7的cdr2l和seqidno:8的cdr3l作为cdr的抗体轻链用于作为特异性地结合人bcma(另外还称作“bcma”)的细胞外结构域和人cd3(另外还称作“cd3”)的双特异性抗体中的共同轻链的用途，其中所述cd3结合部分的重链包含seqidno:3的cdr1h、seqidno:4的cdr2h和seqidno:5的cdr3h作为cdr。31.根据实施方案30所述的用途，其特征在于，所述轻链包含seqidno:2的vl作为可变轻链结构域vl。32.根据实施方案30或31所述的用途，其特征在于，所述轻链包含seqidno:29的轻链作为轻链。33.包含seqidno:6的cdr1l、seqidno:7的cdr2l和seqidno:8的cdr3l作为cdr的抗体轻链，其用于在特异性地结合人bcma(另外还称作“bcma”)的细胞外结构域和人cd3(另外还称作“cd3”)的双特异性抗体中用作共同轻链，其中所述cd3结合部分的重链包含seqidno:3的cdr1h、seqidno:4的cdr2h和seqidno:5的cdr3h作为cdr。34.根据实施方案33所述的抗体轻链，所述抗体轻链包含seqidno:2的vl作为可变轻链结构域vl。35.根据实施方案33或34所述的抗体轻链，所述抗体轻链包含seqidno:29的可变轻链用于在特异性地结合人bcma的细胞外结构域和人cd3的双特异性抗体中用作共同轻链，其中所述cd3结合部分的重链包含seqidno:3的cdr1h、seqidno:4的cdr2h和seqidno:5的cdr3h作为cdr。36.根据实施方案33-35中的任一个所述的抗体轻链，所述抗体轻链用于在根据实施方案1-20中的任一个所述的抗体中用作共同轻链。提供以下实施例、序列表和附图来辅助理解本发明，本发明的真正范围在所附权利要求中阐述.应当理解，可以在不脱离本发明的精神的情况下对所述操作进行修改。材料和一般方法重组dna技术如在sambrook,j.等人,molecularcloning:alaboratorymanual;coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,newyork,1989中所述，使用标准方法操作dna。根据生产商的说明书使用分子生物学试剂。在kabat,e.a.等人,(1991)sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,第5版,nih公开号91-3242中给出了关于人免疫球蛋白轻链和重链的核苷酸序列的一般信息。根据kabat,e.a.,等人,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,第5版,公共卫生署,国立卫生研究院,bethesda,md,(1991)，将抗体链的氨基酸编号并提及。基因合成a)从通过化学合成制成的寡核苷酸制备期望的基因区段。通过寡核苷酸的退火和连接(包括pcr扩增)，装配600-1800bp长的基因区段(其侧接单一限制性内切核酸酶切割位点)，并随后经由指示的限制位点(例如kpnl/sad或ascl/pacl)克隆进基于ppcrscript®(stratagene)的pga4克隆载体中。通过dna测序证实亚克隆的基因片段的dna序列。根据geneart/lifetechnologies(regensburg,德国)的指定规格定购基因合成片段。b)在需要时，使用适当的模板通过pcr制备期望的基因区段，或者通过自动化的基因合成由geneartag(regensburg,德国)从合成的寡核苷酸和pcr产物合成期望的基因区段。将侧接单一限制性内切核酸酶切割位点的基因区段克隆进标准表达载体中或克隆进测序载体中用于进一步分析。使用商购可得的质粒纯化试剂盒，从转化的细菌纯化质粒dna。通过紫外光谱法确定质粒浓度。通过dna测序证实亚克隆的基因片段的dna序列。将基因区段设计成具有合适的限制位点以允许亚克隆进各个表达载体中。如果需要的话，将蛋白编码基因设计成具有编码前导肽的5'-末端dna序列，所述前导肽使蛋白靶向用于在真核细胞中的分泌。dna序列确定通过双链测序确定dna序列。dna和蛋白序列分析和序列数据管理将clonemanager(scientific&educationalsoftware)软件包9.2版用于序列绘图、分析、注解和举例说明。表达载体a)为了制备抗-bcma抗体表达载体，将重链和轻链dna序列的可变区与预先插入到各通用接受者表达载体(针对在哺乳动物细胞系中的表达进行了优化)中的人igg1恒定重链或人igg1恒定轻链一起在框架内亚克隆。通过包含cmv增强子和mpsv启动子，后接5'utr、内含子和igκmar元件的嵌合mpsv启动子驱动抗体表达。通过cds的3'末端处的合成聚腺苷酸信号序列终止转录。所有载体携带编码前导肽的5'-末端dna序列，所述前导肽使蛋白靶向用于在真核细胞中的分泌。此外，每个载体含有ebvorip序列用于在ebvebna表达细胞中的染色体外的质粒复制。b)为了制备bcmaxcd3双特异性抗体载体，igg1衍生的双特异性分子由至少两个抗原结合部分组成，所述抗原结合部分能够特异性地结合两种不同的抗原决定簇cd3和bcma。所述抗原结合部分是由重链和轻链组成的fab片段，每个链包含可变区和恒定区。fabcd3和fabbcma的轻链是相同的，以避免lc错配。双特异性分子设计是对cd3单价的和对bcma二价的，其中一个fab片段与内部fab的n-端融合(2+1)。所述双特异性分子含有fc部分以便使分子具有长半衰期。在图1中给出了所述构建体的一个示意图；所述构建体的优选序列显示在seqidno29-31中。通过用哺乳动物表达载体对悬浮培养的hek293ebna细胞的基于聚合物的共转染来产生分子。为了制备2+1fab-igg构建体，以1:1:2:1比率(重链:经修饰的重链:轻链:经修饰的轻链=1:1:2:1；标准抗体比率:重链:轻链=1:1)用对应的表达载体转染细胞。细胞培养技术如在currentprotocolsincellbiology(2000),bonifacino,j.s.,dasso,m.,harford,j.b.,lippincott-schwartz,j.和yamada,k.m.(编),johnwiley&sons,inc.中所述，使用标准的细胞培养技术。在hek293细胞(hek293-ebna系统)中的瞬时表达通过各个哺乳动物表达载体在悬浮培养的hek293-ebna细胞中的瞬时的基于聚合物的共转染，表达双特异性抗体。在转染之前一天，将hek293-ebna细胞以1.5mio活细胞/ml接种在补充了6mml-谷氨酰胺的ex-cell培养基中。对于每ml最终生产体积，将2.0mio活细胞离心(在210xg5分钟)。将上清液抽吸并将细胞再悬浮于100µlcdcho培养基中。通过在100µlcdcho培养基中混合1µgdna(双特异性抗体生产比率:重链:经修饰的重链:轻链:经修饰的轻链=1:1:2:1；标准抗体比率:重链:轻链=1:1)，制备每ml最终生产体积的dna。加入0.27µlpei溶液(1mg/ml)以后，将混合物涡旋15秒并在室温放置10分钟。10分钟以后，将再悬浮的细胞和dna/pei混合物放在一起并然后转移进放在摇动装置(37℃,5%co2)中适当容器中。3小时温育时间以后，为每ml最终生产体积加入800µl补充了6mml-谷氨酰胺、1.25mm丙戊酸和12.5%pepsoy(50g/l)的ex-cell培养基。24小时以后，为每ml最终生产体积，加入70µl补料溶液。7天以后或当细胞生存率等于或低于70%时，通过离心和无菌过滤从上清液分离细胞。蛋白确定使用所述抗体的0.1%溶液的吸光度的理论值，通过测量在280nm的吸光度，完成抗体浓度的测定。该值是基于氨基酸序列并通过gpmaw软件(lighthouse数据)计算。sds-page根据生产商的说明书，使用nupage®pre-cast凝胶系统(invitrogen)。具体而言，使用10%或4-12%nupage®novex®bis-trispre-cast凝胶(ph6.4)和nupage®mes(还原的凝胶，含有nupage®抗氧化剂运行缓冲液添加剂)或mops(非还原的凝胶)运行缓冲液。蛋白纯化通过亲和步骤和一个精制步骤(为尺寸排阻色谱法)纯化抗体。通过蛋白a亲和色谱法对于亲和步骤，将上清液加载到用6柱体积的20mm磷酸钠、20mm柠檬酸钠(ph7.5)平衡过的蛋白a柱(hitrap®蛋白aff,5ml,gehealthcare)上。使用相同缓冲液的洗涤步骤以后，通过使用20mm磷酸钠、100mm氯化钠、100mm甘氨酸(ph3.0)的分步洗脱从柱洗脱抗体。将含有期望抗体的级分立即用0.5m磷酸钠ph8.0中和(1:10)，合并和通过离心浓缩。将浓缩物无菌过滤并通过尺寸排阻色谱法进一步处理。通过尺寸排阻色谱法对于尺寸排阻步骤，将浓缩的蛋白注射到xk16/60hiload®superdex®200柱(gehealthcare)上，并用含有或不含tween®20的20mm组氨酸、140mm氯化钠(ph6.0)作为制剂缓冲液。将含有单体的级分合并，通过离心浓缩并无菌过滤进无菌瓶中。纯度和单体含量的测量在25mm磷酸钾、125mm氯化钠、200mml-精氨酸单盐酸盐、0.02%(w/v)叠氮化钠ph6.7缓冲液中，通过ce-sds(caliperlabchip®gxii系统(caliperlifesciences))resp.hplc(tskgel®g3000swxl分析尺寸排阻柱(tosoh))确定最终蛋白制品的纯度和单体含量。从pbmc分离原代人pant细胞通过得自当地血库的富集的淋巴细胞制品(血沉棕黄层)或来自健康人供体的新鲜血液的histopaque密度离心，制备外周血单核细胞(pbmc)。简而言之，将血液用无菌pbs稀释，并小心地在histopaque®梯度(sigma,h8889)上面铺层。在450xg在室温离心30分钟(关闭制动器)以后，抛弃在含有pbmc的界间物上面的血浆部分。将pbmc转移进新50mlfalcon试管，并给试管填充pbs至50ml的总体积。将混合物在400xg在室温离心10分钟(开启制动器)。抛弃上清液，并将pbmc沉淀物用无菌pbs洗涤2次(在350xg在4℃离心10分钟的离心步骤)。将得到的pbmc群体自动地计数(vicell®)并在37℃、5%co2在培养箱中储存在含有10%fcs和1%l-丙氨酰基-l-谷氨酰胺(biochrom,k0302)的rpmi1640培养基中直到测定开始。根据生产商的说明书，使用pant细胞分离试剂盒ii(miltenyibiotec#130-091-156)进行来自pbmc的t细胞富集。简而言之，将细胞沉淀物以每1000万个细胞在40μl冷缓冲液(含有0.5%bsa、2mmedta的pbs，经无菌过滤)中稀释，并与每1000万个细胞10μl生物素-抗体混合物一起在4℃温育10min。每1000万个细胞加入30μl冷缓冲液和20μl抗-生物素磁珠，并将混合物在4℃温育另外15min。通过如下洗涤细胞：加入10-20倍当前体积，并随后为在300xg进行10min的离心步骤。将多达1亿个细胞再悬浮于500μl缓冲液中。根据生产商的说明书，使用ls柱(miltenyibiotec#130-042-401)执行未标记的人pant细胞的磁性分离。将得到的t细胞群体自动地计数(vicell®)并在37℃、5%co2在培养箱中储存在aim-v培养基中直到测定开始(不长于24h)。从pbmc分离原代人原初t细胞通过得自当地血库的富集的淋巴细胞制品(血沉棕黄层)或来自健康人供体的新鲜血液的histopaque®密度离心，制备外周血单核细胞(pbmc)。根据生产商的说明书，但是跳过最后的cd8+t细胞分离步骤(也参见关于分离原代人pant细胞的描述)，使用来自miltenyibiotec的原初cd8+t细胞分离试剂盒(#130-093-244)进行来自pbmc的t-细胞富集。实施例实施例1:抗-bcma抗体的制备实施例1.1:抗原和工具试剂的生产实施例1.1.1:重组的、可溶性的、人bcma细胞外结构域将用作抗原用于噬菌体展示选择的人、食蟹猴和鼠bcma的细胞外结构域在hekebna细胞中瞬时表达为n-端单体fc-融合体，并且通过在定位于携带受体链(fc凸起链)的fc部分的c-端上的avi-标签识别序列处共表达bira生物素连接酶，而在体内被位点特异性地生物素化。人、食蟹猴和鼠bcma的细胞外结构域分别包含甲硫氨酸4至天冬酰胺53、甲硫氨酸4至天冬酰胺52、和丙氨酸2至苏氨酸49。这些在n末端与人igg1的铰链融合，从而能够通过凸起-进入-孔洞技术与未融合的人igg1fc部分(孔洞链)异源二聚化。为了回收bcma的细胞外结构域，使用以下引物：aagcttggatccatgttgcagatggctgggcagtgctcc-3(seqidno:9)，其包含bamh1位点(粗体，带有下划线)，和反向引物5-gaattcgcggccgctcatcctttcactgaattggtcacacttgcattac-3(seqidno:10)引物5-acgttagatctccactcagtcctgcatcttgttccagttaac-3(seqidno:11)和反向引物5-aacgttgcggccgctagtttcacaaaccccagg-3(seqidno:12)gaattcaagcttgccaccatgttgcagatggctgggcagtgctcc-3(seqidno:13)，其包括hindiii限制位点(粗体，带有下划线)和kozak共有序列，和反向引物5-gaattctctagattacctagcagaaattgatttctctatctccgtagc-3(seqidno:14)。还可以使用基因合成来得到bcma的细胞外结构域。实施例1.2:表达bcma的细胞作为工具实施例1.2.1:在它们的表面上表达bcma的人骨髓瘤细胞系通过流式细胞计量术在四种人骨髓瘤细胞系(nci-h929、rpmi-8226、u266b1和l-363)上评估bcma表达。将nci-h929细胞((h929)atcc®crl-9068tm)培养在含有10-20%热灭活的fcs的80-90%rpmi1640中，且可含有2mml-谷氨酰胺、1mm丙酮酸钠和50µm巯基乙醇。将rpmi-8226细胞((rpmi)atcc®ccl-155tm)培养在含有90%rpmi1640和10%热灭活的fcs的培养基中。将u266b1((u266)atcc®tib-196tm)细胞培养在被修改成含有2mml-谷氨酰胺、10mmhepes、1mm丙酮酸钠、4500mg/l葡萄糖和1500mg/l碳酸氢钠和15%热灭活的fcs的rpmi-1640培养基中。将l-363细胞系(leibnizinstitutedsmz-德国微生物和细胞培养物保藏中心;dsmzno.acc49)培养在85%rpmi1640和15%热灭活的fcs中。简而言之，将细胞收获，洗涤，计数存活力，以每个96-孔圆底平板的孔50,000个细胞再悬浮，并与10µg/ml的抗-人bcma抗体(abcam,#ab54834,小鼠igg1)一起在4℃温育30min(以防止内化)。小鼠igg1用作同种型对照(bdbiosciences,#554121)。然后将细胞离心(在350xg离心5min)，洗涤两次并与fitc缀合的抗小鼠第二抗体一起在4℃温育30min。在温育时间结束时，将细胞离心(在350xg离心5min)，用facs缓冲液洗涤两次，再悬浮在100ulfacs缓冲液中并在运行facsdiva软件的canto®ii装置上进行分析。通过qifikit®分析(dako,#k0078,按照生产商的说明书)，评估h929、u266b1、rpmi-8226和l-363骨髓瘤细胞系的表面膜上的bcma受体数目的相对定量。h929细胞以最高密度表达人bcma，多达比其它骨髓瘤细胞系高3.8-27倍。与u266(它是表达bcma中/低的骨髓瘤细胞)以及rpmi-8226和l363(它们是表达bcma低的骨髓瘤细胞)相比，将h929视作表达bcma高的骨髓瘤细胞系。表3总结了在人多发性骨髓瘤细胞系的细胞表面上的相对bcma受体数目。表3:在nci-h929、u266b1、rpmi-8226和l-363人骨髓瘤细胞系的细胞表面上的bcma受体数目的定量骨髓瘤细胞系每个细胞的相对结合位点h92950000u26613000rpmi-82262000l3631800实施例1.3:从体外重组文库中得到bcma结合剂实施例1.3.1:共同轻链fab-文库的构建在制备人源化的抗-cd3抗体轻链(seqidno:29)的基础上，构建fab-格式的抗体文库。仅将多样性引入重链中。使用六种不同的重链框架：vh1-46、vh1-69、vh3-15、vh3-23、vh4-59和vh5-1。将cdr1、2和3随机化，并将每个重链文库与非随机化的轻链组合。如nissim等人emboj.1994年2月1日;13(3):692-8,和silacci等人.proteomics.2005年6月;5(9):2340-50所述，制备文库。实施例1.3.2:抗-bcmafab克隆的选择通过噬菌体展示从合成的fab文库建立抗-bcmafab，所述fab文库由一个恒定vl序列和六个不同人vh序列组成。表4:抗-bcma克隆和各自的vl/vh配对。根据以下方式在溶液中进行选择轮次(生物淘选)：1)在10ug/ml不相关人igg包被的免疫试管中预清洁每个文库集合约1012噬粒颗粒，以排除识别抗原的fc部分的抗体文库；2)在100nm不相关的非生物素化的fc凸起-进入-孔洞构建体存在下，将不结合fc的噬粒颗粒与100nm生物素化的bcma一起温育0.5h，用于在2ml的总体积中进一步排除fc结合剂；3)通过将淘选反应物分开并转移到中和亲和素或抗生蛋白链菌素预包被的微孔滴定板上的16个孔中于振荡器上20min，捕获生物素化的bcma和特异性地结合噬菌体；4)使用平板洗涤器利用pbs/tween20洗涤各孔10-30次，并用pbs洗涤10-30次；5)通过加入230nm鼠april进行任选竞争洗涤步骤，以替换识别天然配体的结合位点的fab克隆，因此选择april-非竞争性噬菌体抗体；6)通过每孔加入125ul100mmtea(三乙胺)保持5-10min来洗脱噬菌体颗粒，并通过加入等体积的1mtris/hclph7.4进行中和；7)用洗脱的噬菌体颗粒重新感染对数期大肠杆菌tg1细胞，用辅助噬菌体vcsm13感染，在振荡器上在30℃温育过夜，并且随后用peg/nacl沉淀要用于下一个选择轮次的噬粒颗粒。使用100nm的恒定抗原浓度，经3-5轮进行选择。除了在其中仅将人bcma用作抗原的选择活动外，进行额外的选择活动，其中食蟹猴或鼠bcma也与人bcma以交替方式使用，以便选择交叉反应性抗体。此外，作为基于抗生蛋白链菌素平板的捕获的备选方案，通过向淘选反应物中加入5.4×107个抗生蛋白链菌素包被的磁珠进行抗原:噬菌体复合物的捕获，随后使用各磁体在上述条件下进行洗涤步骤。通过表面等离子体共振筛选含有fab的细菌培养物上清液，使用biorad的proteonxpr36生物传感器，鉴别特异性结合剂。简而言之，用洗脱的噬菌体颗粒感染对数期的大肠杆菌tg1细胞后，将单个菌落形成单位(cfu)铺板，并挑取用于接种在96深孔平板中的1ml表达培养物。在用8.000-10.000ru的山羊抗-人igg,f(ab')2片段特异性的多克隆抗体(jacksonimmunoresearch,#109-005-006)衍生化的proteon®glm芯片上，以垂直方向从上清液中捕获fab。随后，将人、食蟹猴和鼠bcma以及不相关的fc凸起-进入-孔洞构建体在水平方向作为分析物注射。在0.5升培养体积中用细菌表达克隆，所述克隆表现出显著的与bcma的结合应答并且不结合抗原的fc部分，对其进行亲和纯化，并通过spr分析使用一次注射动力学方案在biorad的proteon®xpr36生物传感器上对其进行动力学表征。实施例2：bcma结合测定：表面等离子体共振如下通过表面等离子体共振(spr)评估抗-bcma抗体与重组bcma的结合。在biacore®t200上在25℃用hbs-ep作为运行缓冲液(0.01mhepesph7.4,0.15mnacl,3mmedta,0.005%表面活性剂p20,biacore,freiburg/德国)，进行所有spr实验。确定抗-bcma抗体和重组bcmafc(kih)(人、食蟹猴和鼠)之间相互作用的亲和力(表5-7)。根据说明书(biacore®,freiburg/德国)，将生物素化的重组人、食蟹猴和鼠bcmafc(kih)直接偶联到sa芯片上。固定化水平范围为80-120ru。使在4倍浓度范围(1.95-500nm)的抗-bcma抗体以30μl/分钟的流速在120秒内穿过流动池。监测解离180秒。通过减去在参考流动池上获得的应答，校正批量折射率差异。在这里，使抗-bcma抗体流过以前如标准的胺偶联试剂盒中所述活化和失活的空表面。使用biacore®t200评价软件(v1.0,biacoreab,uppsala/瑞典)衍生出表观动力学常数，以通过数值积分对1:1langmuir结合拟合速率方程，而不管用于对比目的的相互作用的二价性。表5.仅用于对比目的的亲合力值(实验1)分析物配体kon[1/ms]koff[1/s]kd[nm]pschli333抗-bcmaigghubcmafc(kih)4.55e+061.13e-022.5pschli333抗-bcmaiggcybcmafc(kih)9.39e+061.24e-021.3pschli333抗-bcmaiggmubcmafc(kih)8.26e+061.62e-0119.6表6.仅用于对比目的的亲合力值(实验2)分析物配体kon[1/ms]koff[1/s]kd[nm]pschli372抗-bcmaigghubcmafc(kih)3.13e+052.66e-038.5pschli372抗-bcmaiggcybcmafc(kih)7.85e+053.50e-034.5pschli372抗-bcmaiggmubcmafc(kih)1.30e+055.53e-0142.7pschli373抗-bcmaigghubcmafc(kih)1.40e+053.23e-0323.0pschli373抗-bcmaiggcybcmafc(kih)9.36e+049.28-049.9表7.仅用于对比目的的亲合力值(实验3)分析物配体kon[1/ms]koff[1/s]kd[nm]pschli372抗-bcmaigghubcmafc(kih)8.03e+052.84e-033.6pschli372抗-bcmaiggcybcmafc(kih)1.63e+064.69e-032.9pschli372抗-bcmaiggmubcmafc(kih)4.69e+051.21e-0225.7pschli373抗-bcmaigghubcmafc(kih)9.78e+041.18e-0312.1pschli373抗-bcmaiggcybcmafc(kih)9.39e+047.98e-048.5还确定了抗-bcma抗体或bcma-tcbclc抗体和重组人bcmafc(kih)之间相互作用的亲和力。使用标准的胺偶联试剂盒(biacore®,freiburg/德国)将抗-人fab抗体(gehealthcare)在ph5.0直接偶联在cm5芯片上。固定化水平是约6500ru。在25nm捕获抗-bcma抗体或bcma-tcbclc抗体90秒。使在4倍浓度范围(1.95-500nm)的重组人bcmafc(kih)以30μl/分钟的流速在120或180秒内通过流动池。监测解离120或400秒。通过减去在参考流动池上获得的应答，校正批量折射率差异。在这里，重组bcma流过具有固定化的抗-人fab抗体的表面，但是在所述表面上已经注射了hbs-ep，而不是抗-bcma抗体或bcma-tcbclc抗体。使用biacore®t200评价软件(v1.0,biacoreab,uppsala/瑞典)衍生动力学常数，以通过数值积分对1:1langmuir结合拟合速率方程(表8)。表8.通过对1:1langmuir结合拟合速率方程而确定的亲和常数配体分析物kon[1/ms]koff[1/s]kd[nm]pschli372抗-bcmaigghubcmafc(kih)4.59e+045.23e-03114pschli372抗-bcmaiggcybcmafc(kih)2.68e+047.52e-03281pschli372抗-bcmaiggmubcmafc(kih)9.92e+041.30e-011310pschli373抗-bcmaigghubcmafc(kih)4.22e+045.70e-03135pschli373抗-bcmaiggcybcmafc(kih)2.10e+041.12e-02535pschli373抗-bcmaiggmubcmafc(kih)1.27e+059.19e-02724pschli333bcmaxcd3tcbhubcmafc(kih)9.10e+031.49e-03164pschli333bcmaxcd3tcbcybcmafc(kih)1.44e+042.63e-03183pschli333bcmaxcd3tcbmubcmafc(kih)4.83e+023.47e-037190pschli372bcmaxcd3tcbhubcmafc(kih)5.59e+043.52e-0363pschli372bcmaxcd3tcbcybcmafc(kih)4.58e+047.57e-03165pschli372bcmaxcd3tcbmubcmafc(kih)1.42e+044.87e-03344实施例3:制备具有共同轻链的二价抗-bcmaigg抗体为了验证共同轻链的应用可以适用于任何bcma抗体的假设，通过用seqidno:29的共同轻链置换二价bcma抗体83a10的天然轻链(以前在wo/2014/122143中描述)，制备83a10-clc二价bcma抗体。使用在材料和一般方法部分中描述的用于制备二价igg抗体的一般技术，生产包含83a10的两个重链和两个共同轻链的抗-bcma抗体。用与在实施例2中描述的方法类似的方法，通过spr测量83a10-clcigg抗体对人bcma的亲和力。表9描绘了重组人bcmafc(kih)与83a10-clcbcmaigg抗体的结合。表9.通过对1:1langmuir结合拟合速率方程而确定的亲和常数：重组bcmafc(kih)与83a10-clc抗-bcma抗体的结合配体分析物kon[1/ms]koff[1/s]kd[nm]83a10clc抗-bcmaigghubcmafc(kih)8.78e+042.13e-324.3实施例4：抗-bcmaigg抗体对hutaci-r和hubaff-r的特异性试验作为tnf-tnf-r超家族的成员，taci和baff受体与bcma受体相关，在细胞外结构域中分别具有22%和18.5%同源性。因此，进行表面等离子体共振(spr)结合实验来检查抗-bcmaigg抗体的特异性。在biacore®t200(gehealthcare)上在25℃用hbs-ep作为运行缓冲液(0.01mhepesph7.4,0.15mnacl,3mmedta,0.005%表面活性剂p20)执行所有spr实验。使用标准的胺偶联试剂盒(gehealthcare)将fc融合的hubcma、hubaff-r和hutaci-r以高固定化水平(约5000ru)在ph5.0化学地固定化在biacorecm5传感器芯片的不同流动通道上。最初，注射抗-bcmaiggpschli372以及a-hutaci-rigg或a-hubaff-rigg(作为阳性对照)的高浓度溶液(3µm，溶解在hbs-ep中)(结合时间:80s,解离时间:600s,流速:30µl/min)以检查是否发生结合。a-hutaci-rigg对hutaci-r以及a-hubaff-rigg对hubaff-r和抗-bcmaigg抗体对hubcma的阳性结合事件指示，在固定化以后仍然识别所有受体。对于抗-bcmaigg抗体以快速动力学速率常数与hubaff-r和/或hutaci-r的结合，在新的cm5传感器芯片上执行具有低固定化水平(300ru)的动力学参数的仔细检查。注射在3000-93.75nm浓度(在hbs-ep中2倍稀释)的抗-bcmaigg抗体稀释物(结合时间:80s,解离时间:300s,流速:30µl/min)，并一式两份地试验样品。当适用时(即没有快速的和完全的解离)，还执行再生。通过数据与1:1相互作用模型(其包括关于质量运输的术语)(biacoret200评价1.0版)的总拟合，执行抗-bcmaigg抗体和hubaff-r或hutaci-r之间的相互作用的动力学评价。还执行稳态分析。如在图2中所示，曲线1对应于参比通道上的信号，曲线2对应于在其中发生结合的通道(结合通道)，且曲线2-1是减去的信号(结合通道-参比通道)，这意味着，这是由结合事件引起的信号。如在图2中所示，spr结合测定清楚地证实，pschli372igg不结合人taci受体。作为关于结合的阳性对照，使用另一种bcmaigg，其已知轻微地结合taci受体，但是具有非常快的结合和解离速率(数据未显示)。实施例5:抗-bcma/抗-cd3t细胞双特异性抗体的制备实施例5.1:抗-cd3抗体本文中使用的术语“cd3ε或cd3”表示在uniprotp07766(cd3e_human)下描述的人cd3ε。术语“针对cd3的抗体,抗cd3抗体”指结合cd3ε的抗体。优选地，所述抗体包含：可变结构域vh，其包含seqidno:3、4和5的重链cdr分别作为重链cdr1、cdr2和cdr3；和可变结构域vl，其包含seqidno:6、7和8的轻链cdr分别作为轻链cdr1、cdr2和cdr3。优选地，所述抗体包含seqidno:1(vh)和seqidno:2(vl)的可变结构域。使用如上所述的抗-cd3抗体制备在下述实施例中使用的t细胞双特异性抗体。实施例6:含有bcma-tcbclcfc的(2+1)抗体的产生和纯化为了生产双特异性抗体，通过各种哺乳动物表达载体在悬浮培养的hek293-ebna细胞中的瞬时的基于聚合物的共转染，表达双特异性抗体。在转染之前一天，将hek293-ebna细胞以150万活细胞/ml接种在补充了6mml-谷氨酰胺的ex-cell®培养基中。对于每ml最终生产体积，将2百万活细胞离心(在210xg5分钟)。将上清液抽吸并将细胞再悬浮于100µlcdcho培养基中。通过在100µlcdcho培养基中混合1µgdna(比率双特异性抗体生产：重链:经修饰的重链:轻链:经修饰的轻链=1:1:2:1；比率标准抗体:重链:轻链=1:1)，制备每ml最终生产体积的dna。加入0.27µlpei溶液(1mg/ml)以后，将混合物涡旋15秒并在室温放置10分钟。10分钟以后，将再悬浮的细胞和dna/pei混合物放在一起并然后转移进放在摇动装置(37℃,5%co2)中适当容器中。3小时温育时间以后，为每ml最终生产体积加入800µl补充了6mml-谷氨酰胺、1.25mm丙戊酸和12.5%pepsoy(50g/l)的ex-cell培养基。24小时以后，为每ml最终生产体积加入70µl补料溶液。7天以后或当细胞生存率等于或低于70%时，通过离心和无菌过滤从上清液分离细胞。通过亲和步骤和一个精制步骤(尺寸排阻色谱法)纯化抗体。对于亲和步骤，将上清液加载到用6柱体积的20mm磷酸钠、20mm柠檬酸钠(ph7.5)平衡过的蛋白a柱(hitrap®蛋白aff,5ml,gehealthcare)上。使用相同缓冲液的洗涤步骤以后，通过使用20mm磷酸钠、100mm氯化钠、100mm甘氨酸(ph3.0)的不连续洗脱从柱洗脱抗体。将含有期望抗体的级分立即用0.5m磷酸钠ph8.0中和(1:10)，合并和通过离心浓缩。将浓缩物无菌过滤并通过尺寸排阻色谱法进一步处理。对于尺寸排阻步骤，将浓缩的蛋白注射到xk16/60hiloadsuperdex®200柱(gehealthcare)上，并用含有或不含tween20的20mm组氨酸、140mm氯化钠(ph6.0)作为制剂缓冲液。将含有单体的级分合并，通过离心浓缩并无菌过滤进无菌瓶中。使用所述抗体的0.1%溶液的吸光度的理论值，通过测量在280nm的吸光度，完成抗体浓度的测定。该值是基于氨基酸序列并通过gpmaw软件(lighthouse数据)计算。在25mm磷酸钾、125mm氯化钠、200mml-精氨酸单盐酸盐、0.02%(w/v)叠氮化钠ph6.7缓冲液中，通过ce-sds(caliperlabchip®gxii系统(caliperlifesciences))resp.hplc(tskgel®g3000swxl分析尺寸排阻柱(tosoh))确定最终蛋白制品的纯度和单体含量。图3描绘了蛋白a(pa)亲和色谱法和尺寸排阻色谱(sec)纯化步骤以后最终蛋白制品的ce-sds图(非还原的(顶)和还原的(底))：(a)pschli333-tcbclc，(b)pschli372-tcbclc，(c)pschli373-tcbclc。应用于pschli333-tcbclc抗体的pa亲和色谱法和sec纯化步骤导致89.2%的纯度和100%的单体含量(a)，pschli372-tcbclc抗体的88.5%的纯度和100%的单体含量(b)，和pschli372-tcbclc抗体的91.8%的纯度和100%的单体含量(c)。表10总结了pa亲和色谱法和sec纯化步骤以后pschli333-tcbclc、pschli372-tcbclc和pschli373-tcbclc抗体的性能。在所有的bcma-tcbclc抗体中，一致地达到>88%纯度和100%单体含量。总结果清楚地证实，使用tcb抗体的共同轻链(clc)可以实现在生产/纯化特征中的优点，并且仅需要两个纯化步骤(即pa亲和色谱法和sec)即可达到已经高质量的蛋白制品，其具有非常好的开发性能。表10:在蛋白a亲和色谱法和尺寸排阻色谱法纯化步骤以后，bcma-tcbclc抗体的生产/纯化特性pschli333-tcbclcpschli372-tcbclcpschli373-tcbclc纯度(%)89.288.591.8收率(mg/l)4.24.12.73滴度(mg/l)26.921.237.1单体(%)100100100实施例7：bcma-tcbclc抗体与bcma-阳性的多发性骨髓瘤细胞系的结合(流式细胞计量术)通过流式细胞计量术分析bcma-tcbclc抗体(pschli333、pschli372、pschli373)与在表达bcma高的h929细胞上的人bcma的结合。将mkn45(不表达bcma的人胃腺癌细胞系)用作阴性对照。简而言之，将培养的细胞收获、计数并使用vicell评价细胞生存力。然后将活细胞在含有bsa的facs染色缓冲液(bdbiosciences)中调至2x106细胞/ml。将100µl该细胞悬浮液进一步每孔等分到圆底96孔板中，并与30µlbcma-tcbclc抗体或相应的tcb对照在4℃温育30min。以0.12-500nm的终浓度范围滴定并分析所有bcma-tcbclc抗体(和tcb对照)。然后将细胞离心(5min,350xg)，用120µl/孔facs染色缓冲液(bdbiosciences)洗涤，再悬浮并与荧光染料-缀合的pe-缀合的affinipure®f(ab’)2fragment山羊抗-人iggfcfragmentspecific(jacksonimmunoresearchlab;109-116-170)一起在4℃温育额外的30min。然后将细胞用染色缓冲液(bdbiosciences)洗涤两次，使用100ulbd固定缓冲液/孔(#bdbiosciences,554655)在4℃固定20min，再悬浮于120µlfacs缓冲液中并使用bdfacscantoii®进行分析。如在图4中所示，以抗体浓度的函数绘制bcma-tcbclc抗体的平均荧光强度；(a)在h929细胞上的pschli372-tcbclc和pschli373-tcbclc；(b)在mkn45细胞上的pschli372-tcbclc和pschli373-tcbclc。在低于100nm的浓度，bcma-tcbclc抗体(pschli333、pschli372、pschli373)抗体不结合bcma-阴性的和cd3-阴性的mkn45细胞。当适用时，使用prismgraphpad®(lajolla,ca,usa)计算ec50，并在表11中总结了ec50值，其表示达到抗-bcma/抗-cd3tcb抗体与h929细胞的结合的最大结合的50%所需的抗体浓度。表11:bcma-tcbclc抗体与h929细胞的结合的ec50值抗-bcma/抗-cd3tcb分子ec50(nm)ec50(µg/ml)pschli372-tcbclc344.865.9pschli373-tcbclc无ec50值无ec50值实施例8：bcma-tcbclc抗体与cd3-阳性的jurkatt细胞系的结合(流式细胞计量术)还通过流式细胞计量术分析了bcma-tcbclc抗体(pschli333、pschli372、pschli373)与在人白血病t细胞jurkat(atcc®tib-152)上表达的人cd3的结合性能。在补充了10%热灭活的fcs的rpmi中培养jurkatt细胞。简而言之，将培养的细胞收获、计数并使用vicell®评价细胞生存力。然后将活细胞在含有0.1%bsa的facs染色缓冲液(bdbiosciences)中调至2x106细胞/ml。将100µl该细胞悬浮液进一步每孔等分到圆底96孔板中。将30µlbcma-tcbclc抗体或对应的tcb对照加入含细胞的孔中以得到0.12nm至500nm的终浓度。在相同摩尔浓度使用bcma-tcbclc抗体和对照igg。在4℃温育30min以后，将细胞离心(5min,350xg)，用150µl/孔含有bsa的facs染色缓冲液(bdbiosciences)洗涤2次，然后将细胞使用100ulbd固定缓冲液/孔(#bdbiosciences,554655)在4℃固定20min，再悬浮于120µlfacs缓冲液中并使用bdfacscantoii®进行分析。评价bcma-tcbclc抗体与t细胞的结合，并在表达cd3的jurkatt细胞上门控确定中间荧光强度，并绘制在直方图或点图中。图5显示了结合jurkatt细胞(a)或mkn45细胞(b)的bcma-tcbclc抗体(pschli333、pschli372、pschli373)的中间荧光强度，并以抗体浓度的函数绘图。没有达到抗-bcma/抗-cd3tcb抗体与cd3-阳性的jurkatt细胞的ec50值和最大结合。在低于100nm的浓度，同种型对照抗体不结合jurkatt细胞，且bcma-tcbclc抗体(pschli333、pschli372、pschli373)抗体不结合bcma-阴性的和cd3-阴性的mkn45细胞。实施例9：在bcma-tcbclc抗体与cd3-阳性的t细胞和bcma-阳性的多发性骨髓瘤细胞系结合后活化人t细胞(流式细胞计量术)如下通过流式细胞计量术分析bcma-tcbclc抗体(pschli372、pschli373)的诱导t细胞活化的能力：通过评价在有或没有表达人bcma的mm细胞存在下，早期活化标志物cd69或晚期活化标志物cd25在cd4+和cd8+t细胞上的表面表达。简而言之，将bcma-阳性的h929细胞用细胞解离缓冲液收获、计数并检查生存力。将细胞在经改进的rpmi-1640培养基中调至0.3x106(存活的)细胞/ml，将100μl该细胞悬浮液每孔移入圆底96-孔板中(如指示的)。将50μl(稀释的)bcma-tcbclc抗体加入含细胞的孔中以得到0.012pm-100nm的终浓度。将人pbmc效应细胞从健康供体的新鲜血液分离，并在经改进的rpmi-1640培养基中调至6x106(存活的)细胞/ml。将50μl该细胞悬浮液加入测定板的每孔中，以得到10:1的pbmc相对于骨髓瘤肿瘤细胞的最终e:t比率。为了分析在表达人bcma的靶细胞存在下bcma-tcbclc抗体是否能够特异性地活化t细胞，包括这样的孔：其含有3-10nm各种bcma-tcbclc抗体分子、以及pbmc，但是不含有靶细胞。在37℃、5%co2温育48h以后，将细胞离心(5min,350xg)，并用150μl/孔的含有0.1%bsa的pbs洗涤2次。根据供应商的提议，在4℃进行针对cd4(小鼠iggl,k；克隆rpa-t4)、cd8(小鼠iggl,k；克隆hit8a；bd#555635)、cd69(小鼠iggl；克隆l78；bd#340560)和cd25(小鼠iggl,k；克隆m-a251；bd#555434)的表面染色30min。将细胞用150μl/孔的含有0.1%bsa的pbs洗涤2次，并使用100μl/孔的固定缓冲液(bd#554655)在4℃固定15min。离心以后，将样品再悬浮于200μl/孔的含有0.1%bsa的pbs中，并使用facscantoii机器(softwarefacsdiva®)进行分析。图6描绘了温育48小时以后早期活化标志物cd69和晚期活化标志物cd25在cd4+和cd8+t细胞上的表达水平(来自两个独立实验的代表性结果)。在bcma-阳性的靶细胞存在下，pschli372-tcbclc和pschli373-tcbclc抗体以浓度依赖性的和特异性的方式诱导cd69和cd25活化标志物的上调。当用dp47-tcb对照抗体处理人pbmc时，没有观察到cd4+和cd8+t细胞的活化，从而提示，尽管结合t细胞上的cd3，但是当tcb抗体不结合bcma-阳性的靶细胞时，t-细胞活化不发生。实施例10：由抗-bcma/抗-cd3t细胞双特异性抗体诱导的表达bcma高的h929骨髓瘤细胞的重新定向的t-细胞细胞毒性(比色测量ldh释放测定)还分析了bcma-tcbclc抗体(pschli372、pschli373)通过抗原结合部分与细胞上的bcma的结合而交联构建体后，在高表达bcma的mm细胞中诱导t细胞介导的细胞凋亡的潜力。简而言之，将表达人bcma的h929多发性骨髓瘤靶细胞用细胞解离缓冲液收获，洗涤，并再悬浮于补充了10%胎牛血清(invitrogen)的rpmi中。将大约30,000个细胞/孔铺板在圆底96-孔板中，并加入构建体的各种稀释物以得到期望的终浓度(一式三份)；终浓度范围为0.12pm至100nm。为了适当的对比，将所有tcb构建体和对照调至相同摩尔浓度。将人总t细胞(效应物)加入孔中以得到5:1的最终e:t比率。当将人pbmc用作效应细胞时，使用10:1的最终e:t比率。阴性对照组由单独效应细胞或靶细胞代表。作为人pant细胞的活化的阳性对照，使用1μg/mlpha-m(sigma#l8902)。为了归一化，如下确定h929mm靶细胞的最大裂解(=100%)：以1%tritonx-100的终浓度温育靶细胞，从而诱导细胞死亡。最小裂解(=0%)由与单独效应细胞(即没有任何t细胞双特异性抗体)一起共温育的靶细胞代表。在37℃、5%co2温育20-24h或48h以后，然后按照生产商的说明书用ldh检测试剂盒(rocheappliedscience)测量从细胞凋亡的/坏死的mm靶细胞向上清液中的ldh释放。在浓度-响应曲线中相对于bcma-tcbclc抗体的浓度绘制ldh释放的百分比。使用prism软件(graphpad®)测量ec50值并确定为导致最大ldh释放的50%的tcb抗体浓度。如在图7中所示，bcma-tcbclc抗体、pschli372-tcbclc(a,b)和pschli373-tcbclc(b)诱导bcma-阳性的h929骨髓瘤细胞的浓度依赖性杀死，如通过ldh释放测量的。h929细胞的杀死是特异性的，因为不结合bcma-阳性的靶细胞的dp47-tcb对照抗体没有诱导ldh释放，即使在100nm的最高试验浓度。表12总结了由bcma-tcbclc抗体诱导的bcma-阳性的h929细胞的重新定向的t-细胞杀死的ec50值。表12：由bcma-tcbclc抗体诱导的h929细胞的重新定向的t-细胞杀死的ec50值抗-bcma/抗-cd3tcb分子ec50(pm)ec50(µg/ml)pschli333-tcbclc9800.19pschli372-tcbclc(实验1)4500.08pschli373-tcbclc15900.31pschli372-tcbclc(实验2)9000.17实施例11：由bcma-tcbclc抗体诱导的表达bcma中/低的u266骨髓瘤细胞的重新定向的t-细胞细胞毒性(ldh释放测定)还分析了bcma-tcbclc抗体(pschli372、pschli373)通过抗原结合部分与细胞上的bcma的结合而交联构建体后，在表达bcma中/低的mm细胞中诱导t细胞介导的细胞凋亡的能力。简而言之，将表达人bcma中/低的u266多发性骨髓瘤靶细胞用细胞解离缓冲液收获，洗涤，并再悬浮于补充了10%胎牛血清(invitrogen)的rpmi中。将大约30,000个细胞/孔铺板在圆底96-孔板中，并加入构建体的各种稀释物以得到期望的终浓度(一式三份)；终浓度范围为0.12pm至100nm。为了适当的对比，将所有tcb构建体和对照调至相同摩尔浓度。将人总t细胞(效应物)加入孔中以得到5:1的最终e:t比率。当将人pbmc用作效应细胞时，使用10:1的最终e:t比率。阴性对照组由单独效应细胞或靶细胞代表。作为人t细胞的活化的阳性对照，使用1μg/mlpha-m(sigma#l8902)。为了归一化，如下确定mm靶细胞的最大裂解(=100%)：以1%tritonx-100的终浓度温育靶细胞，从而诱导细胞死亡。最小裂解(=0%)由与单独效应细胞(即没有任何t细胞双特异性抗体)一起共温育的靶细胞代表。在37℃、5%co2温育20-24h以后，然后按照生产商的说明书用ldh检测试剂盒(rocheappliedscience)测量从细胞凋亡的/坏死的mm靶细胞向上清液中的ldh释放。在浓度-响应曲线中相对于bcma-tcbclc抗体的浓度绘制ldh释放的百分比。使用prism软件(graphpad®)测量ec50值并确定为导致最大ldh释放的50%的tcb抗体浓度。表13总结了由bcma-tcbclc抗体诱导的bcma-阳性的u266细胞的重新定向的t-细胞杀死的ec50值。表13:由bcma-tcbclc抗体诱导的u266细胞的重新定向的t-细胞杀死的ec50值抗-bcma/抗-cd3tcb分子ec50(pm)ec50(µg/ml)pschli372-tcbclc57001.1实施例12：在抗-bcma/抗-cd3t细胞双特异性抗体诱导的自体骨髓浸润性t细胞存在下，患者骨髓的骨髓瘤浆细胞的重新定向的t-细胞细胞毒性(多参数流式细胞计量术)在多发性骨髓瘤的tcb抗体候选物的临床前评价过程中，最有意义的和关键性的体外表征之一是，tcb分子是否可以活化患者的t细胞和诱导来自患者的骨髓的原代骨髓瘤浆细胞的重新定向的t-细胞杀死。为了评价抗-bcma/抗-cd3tcb抗体的诱导骨髓瘤浆细胞的重新定向的t-细胞杀死的作用，在edta包被的试管中从多发性骨髓瘤患者收集全骨髓抽吸物，并立即使用或进行细胞培养测定。通过流式细胞计量术确定和测量存在于全骨髓样品中的效应细胞与肿瘤细胞的比率(e:t比率)。简而言之，将200µl骨髓样品转移进96深孔平板中​。在无菌培养基中制备抗-bcma/抗-cd3tcb抗体和对照抗体稀释物，并将10µl制品加入各个孔中，终浓度范围为0.01pm至30nm。将骨髓-抗体悬浮液通过轻轻摇动进行混合，并然后在37℃、5%co2温育24-72h，用石蜡膜密封。温育时段以后，将​20µl对应的facs抗体溶液(基于包括cd138/cd38/cd5或cd2或cd3/cd56/cd45/膜联蛋白-v/bcma的抗体集合制备)加入96-u-底平板中。荧光染料标记的抗体购自bdbiosciences(sanjose,ca)和caltaglaboratories(sanfranciscoca)，并使用自制的apc-缀合的抗-人bcma抗体。然后将样品在暗处在室温温育15分钟，并使用多色流式细胞计获取和分析。通过评价在骨髓瘤细胞群体cd138+cd38+cd45+cd56+/中上门控的膜联蛋白-v阴性表达，确定活骨髓瘤细胞。然后确定骨髓瘤活细胞的百分比。还如下确定由特定浓度的抗-bcma/抗-cd3t细胞双特异性抗体诱导的患者骨髓瘤浆细胞的裂解百分比：测量在给定的tcb浓度时膜联蛋白-v-阴性的骨髓瘤浆细胞的绝对数，并从没有tcb时膜联蛋白-v-阴性的骨髓瘤浆细胞的绝对数减去它；除以没有tcb时膜联蛋白-v-阴性的骨髓瘤浆细胞的绝对数。为了验证抗-bcma/抗-cd3t细胞双特异性抗体的特异性，还在其它骨髓细胞类型(诸如t细胞、b细胞和nk细胞)中测量膜联蛋白-v表达。如在图9中所示，pschli372-tcbclc诱导患者骨髓瘤浆细胞的杀死，如通过存活的(膜联蛋白-v阴性的)骨髓瘤浆细胞的浓度依赖性下降所反映的。在24h和72h用低nm浓度范围观察到骨髓瘤细胞的重新定向的裂解。存在患者骨髓瘤浆细胞的浓度依赖性的和特异性的裂解，因为用对照-tcb没有观察到恶性浆细胞的裂解，所述对照-tcb仅结合cd3，但是不结合bcma，且在试验的tcb抗体的最高浓度没有诱导骨髓瘤浆细胞的细胞死亡。序列表<110>engmabag<120>针对cd3ε和bcma的双特异性抗体<130>tcbclc-pct<150>ep14194151.8<151>2014-11-20<160>39<170>bissap1.3<210>1<211>125<212>prt<213>小家鼠<220><223>ch2527-vl7vh<400>1gluvalglnleuleugluserglyglyglyleuvalglnproglygly151015serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheserthrtyr202530alametasntrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval354045serargileargserlystyrasnasntyralathrtyrtyralaasp505560servallysglyargphethrileserargaspaspserlysasnthr65707580leutyrleuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyr859095tyrcysvalarghisglyasnpheglyasnsertyrvalsertrpphe100105110alatyrtrpglyglnglythrleuvalthrvalserser115120125<210>2<211>109<212>prt<213>小家鼠<220><223>ch2527-vl7vl<400>2glnalavalvalthrglngluproserleuthrvalserproglygly151015thrvalthrleuthrcysglyserserthrglyalavalthrthrser202530asntyralaasntrpvalglnglulysproglyglnalaphearggly354045leuileglyglythrasnlysargalaproglythrproalaargphe505560serglyserleuleuglyglylysalaalaleuthrleuserglyala65707580glnprogluaspglualaglutyrtyrcysalaleutrptyrserasn859095leutrpvalpheglyglyglythrlysleuthrvalleu100105<210>3<211>5<212>prt<213>小家鼠<220><223>ch2527-vl7cdr1h<400>3thrtyralametasn15<210>4<211>19<212>prt<213>小家鼠<220><223>ch2527-vl7cdr2h<400>4argileargserlystyrasnasntyralathrtyrtyralaaspser151015vallysgly<210>5<211>14<212>prt<213>小家鼠<220><223>ch2527-vl7cdr3h<400>5hisglyasnpheglyasnsertyrvalsertrpphealatyr1510<210>6<211>14<212>prt<213>小家鼠<220><223>ch2527-vl7cdrl1<400>6glyserserthrglyalavalthrthrserasntyralaasn1510<210>7<211>7<212>prt<213>小家鼠<220><223>ch2527-vl7cdr2l<400>7glythrasnlysargalapro15<210>8<211>9<212>prt<213>小家鼠<220><223>ch2527-vl7cdr3l<400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