本发明涉及化合物制备技术领域，特别涉及含聚乙二醇脂质体制备技术领域，具体涉及一种合成培化二酰甘油的方法及中间体。
背景技术：
培化二酰甘油是一种典型的peg-脂质，多年来已有多种peg类药物用于不同疾病的治疗。例如基于sirna设计的药物在很多疾病方面拥有潜在的治疗效果，但是，它们由于其自身的高分子量和聚阴离子中心而不能通过被动运输进入细胞质内发挥疗效，因此，它们在体内需要经过一个复杂的输送系统。而培化二酰甘油被证明可以用作传统小分子药物的输送系统，培化二酰甘油可以通过与聚阴离子核酸的静电作用自组装成大分子的纳米颗粒以封装sirna。这个系统被证明在治疗高胆固醇血症等方面有广阔的前景。
国内市场上未见有关培化二酰甘油产品销售，而且国外定制价格极其昂贵，这也是目前国内纳米制剂发展的瓶颈。有关培化二酰甘油的合成方法鲜见报道，目前仅有一篇有关mpeg(2000)-dmg合成的专利(ep2119738a1)和一些peg-脂质体衍生物合成的文献，但是这些路线重现性差，我们尝试重复文献中报道的方法，但多次实验均未得到目标产物。
技术实现要素：
本发明目的在于，针对以上存在的问题与不足，提供一种合成培化二酰甘油的方法，该方法具有合成路线简短、操作简便、成本低、收率高、易于工业化生产等优点。
为了实现上述目的，本发明提出了一种合成培化二酰甘油的新方法，所述方法包括下列步骤：
a.选择合适的活化剂活化化合物式(i)中的羟基，在溶剂、有机碱条件下反应，形成活性中间体即化合物式(ii)备用；
b.选择合适的溶剂及有机碱使化合物式(ii)和mpeg-nh2形成氨基甲酸酯结构，即合成目标化合物式(iii)。
所述方法的反应路线为：
其中，n＝12～15；m＝22～45。
较佳地，m＝22、45；n＝12、13、14、15。
较佳地，所述方法的具体反应为：
较佳地，化合物式(i)包括：化合物式(ia)、化合物式(ib)、化合物式(ic)、化合物式(id)、等。
较佳地，化合物式(ii)包括：化合物式(iia)即十四碳二酰-对硝基苯氧甲酰基-甘油、化合物式(iib)即十五碳二酰-对硝基苯氧甲酰基-甘油、化合物式(iic)即十六碳二酰-对硝基苯氧甲酰基-甘油、化合物式(iid)即十七碳二酰-对硝基苯氧甲酰基-甘油、等。
较佳地，化合物式(iii)包括：化合物式(iiia)即mpeg(1000)-十四碳二酰甘油、化合物式(iiib)即mpeg(1000)-十五碳二酰甘油、化合物式(iiic)即mpeg(1000)-十六碳二酰甘油、化合物式(iiid)即mpeg(1000)-十七碳二酰甘油、化合物式(iiie)即mpeg(2000)-十四碳二酰甘油、化合物式(iiif)即mpeg(2000)-十五碳二酰甘油、化合物式(iiig)即mpeg(2000)-十六碳二酰甘油、化合物式(iiih)即mpeg(2000)-十七碳二酰甘油、等。
所述步骤a中，较佳地，所述活化剂为对硝基氯甲酸苯酯。
所述步骤a中，所述溶剂为非质子溶剂，其包括二氯甲烷、氯仿、甲苯、四氢呋喃、二氯乙烷、或dmf。较佳地，溶剂为二氯甲烷。
所述步骤a中，所述有机碱为吡啶、三乙胺、或二异丙基乙胺。所述反应温度为0～25℃，所述反应时间为0.5～1.5h。
其中，所述化合物式(i)、所述活化剂、所述碱的摩尔量之比为1～1.2:1.5～3:2～3。较佳地，所述化合物式(i)、对硝基氯甲酸苯酯、吡啶的摩尔量之比为1:1.5:2。
较佳地，步骤a中，所述活化反应完成后，还进一步包括步骤：用冷的饱和氯化铵洗去反应液中的吡啶，再用二氯甲烷萃取，水洗、干燥、蒸干、柱层析。柱层析过程中的洗脱剂包括乙酸乙酯、石油醚或上述溶剂的混合物。
较佳地，所述步骤b中，所述化合物式(ii)溶解在溶剂二氯甲烷中，所述碱为4-二甲氨基吡啶(dmap)，所述反应温度为0～25℃，所述反应时间为5～6小时。
较佳地，所述步骤b中，所述化合物式(ii)、所述mpeg-nh2、所述有机碱的摩尔量之比为1.5～2:1:1。
所述步骤b中，所述溶剂为非质子溶剂，其包括二氯甲烷、氯仿、甲苯、四氢呋喃、二氯乙烷、n,n-二甲基甲酰胺；所述有机碱包括吡啶、三乙胺、二异丙基乙胺、或4-二甲氨基吡啶(dmap)。
较佳地，所述步骤b中，在所述反应结束之后，还进一步包括步骤：用稀盐酸洗去反应液中的有机碱，再用二氯甲烷萃取，水洗、干燥、蒸干、打浆。
本发明中，原料二酰甘油(以下用化合物式(i)表示)可以根据已有文献(organicletters2007vol.9,no.2323-326)简便地合成。
本发明有益效果包括如下：本发明采用碳链长度不同的二酰甘油(化合物i)为原料，使用了未报道过的活化剂对硝基氯甲酸苯酯来活化羟基、再用聚乙二醇胺形成氨基甲酸酯结构，合成碳链长度不同的化合物培化二酰甘油。本发明合成路线简短，反应时间短，收率高，总收率可达75％～85％。现有技术中(ep2119738a1)，反应时间为12～24h，收率仅为30％左右。本发明不涉及昂贵试剂的使用，降低了成本；本发明合成方法操作简便、条件易控、易于规模化生产。
本发明中还公开了一个未曾报道过的中间体化合物，即化合物式(ii)，其中，n＝12～15。
较佳地，化合物式(ii)包括：化合物式(iia)即十四碳二酰-对硝基苯氧甲酰基-甘油、化合物式(iib)即十五碳二酰-对硝基苯氧甲酰基-甘油、化合物式(iic)即十六碳二酰-对硝 基苯氧甲酰基-甘油、化合物式(iid)即十七碳二酰-对硝基苯氧甲酰基-甘油、等。
具体实施方式
结合以下具体实施例，对本发明作进一步的详细说明，本发明的保护内容不局限于以下实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。实施本发明的过程、条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。为了能够更清楚地理解本发明的技术内容，现结合实施例进一步说明如下：
实施例1
化合物iia即十四碳二酰-对硝基苯氧甲酰基-甘油的制备
冰水浴下将1024mg化合物ia(1eq)和602mg对硝基氯甲酸苯酯(1.5eq)溶解在15ml的溶剂二氯甲烷中，慢慢滴加0.46ml(3eq)的吡啶，恢复至室温。半小时后，tlc检测反应完全。先用饱和氯化铵溶液洗去反应液中的吡啶，用dcm(20ml×3)萃取有机相，合并有机相，用na2so4干燥后，用旋转蒸发仪旋蒸干，得到黄色粗产物，再用石油醚和乙酸乙酯梯度过柱，得到纯净的白色固体即化合物iia，1192mg。收率98％。
1hnmr(400mhz,cdcl3):δ8.29(d,j＝9.2hz,2h),7.39(d,j＝9.2hz,2h),5.46-5.32(m,1h),4.37(d,j＝11.6hz,4h),2.35(dt,j＝9.6,7.6hz,4h),1.63(d,j＝6.7hz,4h),1.38-1.18(m,40h),0.88(t,j＝6.8hz,6h).
ms(esi):m/z＝678.45[m+h]+。
实施例2化合物iib即十五碳二酰-对硝基苯氧甲酰基-甘油的制备
冰水浴条件将540mg化合物ib(1eq)和401mg对硝基氯甲酸苯酯(2eq)溶解在15ml的溶剂氯仿中，冰水浴条件下搅拌10min，再慢慢滴加0.415ml(3eq)的三乙胺，慢慢恢复至室温。半小时后，tlc检测反应完全。先用饱和氯化铵溶液洗去反应液中的吡啶，用dcm(20ml×3)萃取有机相，合并有机相，用na2so4干燥后，用旋转蒸发仪旋蒸干，得到黄色粗产物，再用石油醚和乙酸乙酯梯度过柱，得到纯净的白色固体即化合物iib，635mg。收率90％。
1hnmr(400mhz,cdcl3):δ8.29(d,j＝9.2hz,2h),7.39(d,j＝9.2hz,2h),5.46-5.32(m,1h),4.25-4.5(d,j＝11.6hz,4h),2.35(d,j＝9.6,7.6hz,4h),1.66(d,j＝6.7hz,4h),1.38-1.26(m,44h),0.88(t,j＝6.8hz,6h).
ms(esi):m/z＝706.48[m+h]+。
实施例3化合物iic即十六碳二酰-对硝基苯氧甲酰基-甘油的制备
冰水浴条件下将1136mg化合物ic(1eq)和600mg对硝基氯甲酸苯酯(1.5eq)溶解在15ml的溶剂二氯甲烷中，滴加0.46ml(3eq)的吡啶，恢复至室温。半小时后，tlc检 测反应完全。先用饱和氯化铵溶液洗去反应液中的吡啶，用dcm(20ml×3)萃取有机相，合并有机相，用na2so4干燥后，用旋转蒸发仪旋蒸干，得到黄色粗产物，再用石油醚和乙酸乙酯梯度过柱，得到纯净的白色固体即化合物iic，1350mg。收率92％。
1hnmr(400mhz,cdcl3):δ8.29(d,j＝9.2hz,2h),7.39(d,j＝9.2hz,2h),5.46-5.32(m,1h),4.37(d,j＝11.6hz,4h),2.35(dt,j＝9.6,7.6hz,4h),1.63(d,j＝6.7hz,4h),1.38-1.18(m,48h),0.88(t,j＝6.8hz,6h).
ms(esi):m/z＝734.51[m+h]+。
实施例4化合物iid即十七碳二酰-对硝基苯氧甲酰基-甘油的制备
冰水浴条件下将596mg化合物id(1eq)和301mg对硝基氯甲酸苯酯(1.5eq)溶解在15ml的溶剂二氯甲烷中，再慢慢滴加0.23ml(3eq)的吡啶，恢复至室温。半小时后，tlc检测反应完全。先用饱和氯化铵溶液洗去反应液中的吡啶，用dcm(20ml×3)萃取有机相，合并有机相，用na2so4干燥后，用旋转蒸发仪旋蒸干，得到黄色粗产物，再用石油醚和乙酸乙酯梯度过柱，得到纯净的白色固体即化合物iid，663mg。收率87％。
1hnmr(400mhz,cdcl3):δ8.29(d,j＝9.2hz,2h),7.39(d,j＝9.2hz,2h),5.46-5.32(m,1h),4.37-4.15(d,j＝11.6hz,4h),2.32(dt,j＝9.6,7.6hz,4h),1.63(d,j＝6.7hz,4h),1.38-1.18(m,52h),0.88(t,j＝6.8hz,6h).
ms(esi):m/z＝762.54[m+h]+。
实施例5
5.1化合物iiia即mpeg(1000)-十四碳二酰甘油的制备
室温下取化合物iia(100mg，1.5eq)和mpeg(1000)-nh2(100mg，1eq)溶解在分子筛干燥过的溶剂20mldcm中，再加入12mg的dmap(1eq)。反应6h后，tlc检测反应完全后，反应液用2mol/l稀盐酸洗涤，再用dcm萃取(20ml×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后，用真空旋转蒸发仪旋蒸至干，得到粗产物。粗产物采用乙醚打浆(3ml×3)，离心，最终得到纯度为97％的白色固体产物，即化合物iiia112mg，收率70％。
1hnmr(400mhz,cdcl3):δ5.85(m,1h),4.42-4.19(m,4h),3.68(d,j＝107.7hz,88h),3.38(s,3h),3.29(s,2h),2.35-2.32(s,4h),1.73(s,2h),1.66(s,4h),1.26(m,44h),0.87(d,j＝6.5hz,6h).
ms(esi):m/z＝1597.08[m+h]+。
5.2化合物iiia即mpeg(1000)-十四碳二酰甘油的制备
室温下取化合物iia(133mg，2eq)和mpeg(1000)-nh2(100mg，1eq)溶解在分子筛干燥过的溶剂20mldcm中，再加入12mg的dmap(1eq)。反应6h后，tlc检测反应完全后，反应液用2mol/l稀盐酸洗涤，再用dcm萃取(20ml×3)，合并有机相，用无水硫酸 钠干燥后，用真空旋转蒸发仪旋蒸至干，得到粗产物。粗产物采用乙醚打浆(3ml×3)，离心，最终得到纯度为96％的白色固体产物，即化合物iiia125mg，收率85％。
实施例6化合物iiib即mpeg(1000)-十五碳二酰甘油的制备
室温下取化合物iib(140mg，2eq)和mpeg(1000)-nh2(100mg，1eq)溶解在分子筛干燥过的溶剂20mldcm中，再加入12mg的dmap(1eq)。反应6h后，tlc检测反应完全后，反应液用2mol/l稀盐酸洗涤，再用dcm萃取(20ml×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后，用真空旋转蒸发仪旋蒸至干，得到粗产物。粗产物采用乙醚打浆(3ml×3)，离心，最终得到纯度为97％的白色固体产物，即化合物iiib138mg，收率85％。
1hnmr(400mhz,cdcl3):δ5.85-5.65(m,1h),4.42-4.19(m,4h),3.68(d,j＝107.7hz,88h),3.38(s,3h),3.29(s,2h),2.35-2.32(s,4h),1.73(s,2h),1.66(s,4h),1.26(m,48h),0.87(d,j＝6.5hz,6h).
ms(esi):m/z＝1625.12[m+h]+。
实施例7化合物iiic即mpeg(1000)-十六碳二酰甘油的制备
室温下取化合物iic(147mg，2eq)和mpeg(1000)-nh2(100mg，1eq)溶解在分子筛干燥过的溶剂20mldcm中，再加入12mg的dmap(1eq)。反应6h后，tlc检测反应完全后，反应液用2mol/l稀盐酸洗涤，再用dcm萃取(20ml×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后，用真空旋转蒸发仪旋蒸至干，得到粗产物。粗产物采用乙醚打浆(3ml×3)，离心，最终得到纯度为96％的白色固体产物，即化合物iiic140mg，收率85％。
1hnmr(400mhz,cdcl3):δ5.85-5.8(m,1h),4.42-4.20(m,4h),3.68(d,j＝107.7hz,88h),3.38(s,3h),3.29(s,2h),2.35-2.32(s,4h),1.73(s,2h),1.661(s,4h),1.26(m,52h),0.87(d,j＝6.5hz,6h).
ms(esi):m/z＝1653.15[m+h]+。
实施例8化合物iiid即mpeg(1000)-十七碳二酰甘油的制备
室温下取化合物iid(147mg，2eq)和mpeg(1000)-nh2(100mg，1eq)溶解在分子筛干燥过的溶剂20mldcm中，再加入12mg的dmap(1eq)。反应6h后，tlc检测反应完全后，反应液用2mol/l稀盐酸洗涤，再用dcm萃取(20ml×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后，用真空旋转蒸发仪旋蒸至干，得到粗产物。粗产物采用乙醚打浆(3ml×3)，离心，最终得到纯度为96％的白色固体产物，即化合物iiid137mg，收率85％。
1hnmr(400mhz,cdcl3):δ5.85-5.8(m,1h),4.42-4.29(m,4h),3.68(d,j＝107.7hz,180h),3.38(s,3h),3.29(s,2h),2.35-2.32(s,4h),1.77(s,2h),1.61(s,4h),1.26(m,56h),0.87(d,j＝6.5hz,6h).
ms(esi):m/z＝1681.18[m+h]+。
实施例9化合物iiie即mpeg(2000)-十四碳二酰甘油的制备
室温下取化合物iia(133mg，2eq)和mpeg(2000)-nh2(197mg，1eq)溶解在分子筛干燥过的溶剂20mldcm中，再加入12mg的dmap(1eq)。反应6h后，tlc检测反应完全后，反应液用2mol/l稀盐酸洗涤，再用dcm萃取(20ml×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后，用真空旋转蒸发仪旋蒸至干，得到粗产物。粗产物采用乙醚打浆(3ml×3)，离心，最终得到纯度为97％的白色固体产物，即化合物iiie218mg，收率85％。
1hnmr(400mhz,cdcl3):δ5.45-5.09(m,1h),4.42-4.09(m,4h),3.68(d,j＝107.7hz,180h),3.38(s,3h),3.29(s,2h),2.31(s,4h),1.77(s,2h),1.61(s,4h),1.26(m,44h),0.87(d,j＝6.5hz,6h).
ms(esi):m/z＝2609.69[m+h]+。
实施例10化合物iiif即mpeg(2000)-十五碳二酰甘油的制备
室温下将化合物iib(280mg，2eq)和mpeg(2000)-nh2(394mg，1eq)溶解在分子筛干燥过的溶剂20mldcm中，再加入24mg的dmap(1eq)。反应6h后，tlc检测反应完全后，反应液用2mol/l的稀盐酸洗涤，再用dcm萃取(30ml×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后，用真空旋转蒸发仪旋蒸至干，得到粗产物。粗产物采用乙醚打浆(3ml×3)，离心，得纯度为97％的白色固体产物，即化合物iiif415mg，收率80％。
1hnmr(400mhz,cdcl3):δ5.45-5.09(m,1h),4.42-4.09(m,4h),3.68(d,j＝107.7hz,180h),3.38(s,3h),3.29(s,2h),2.31(s,4h),1.77(s,2h),1.61(s,4h),1.26(m,48h),0.87(d,j＝6.5hz,6h).
ms(esi):m/z＝2637.72[m+h]+。
实施例11化合物iiig即mpeg(2000)-十六碳二酰甘油的制备
室温下取化合物iic(147mg，2eq)和mpeg(2000)-nh2(197mg，1eq)溶解在分子筛干燥过的溶剂20mldcm中，再加入12mg的dmap(1eq)。反应6h后，tlc检测反应完全后，反应液用2mol/l稀盐酸洗涤，再用dcm萃取(20ml×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后，用真空旋转蒸发仪旋蒸至干，得到粗产物。粗产物采用乙醚打浆(3ml×3)，离心，最终得到纯度为96％的白色固体产物，即化合物iiig223mg，收率85％。
1hnmr(400mhz,cdcl3):δ5.45-5.09(m,1h),4.42-4.09(m,4h),3.68(d,j＝107.7hz,180h),3.38(s,3h),3.29(s,2h),2.31(s,4h),1.77(s,2h),1.61(s,4h),1.26(m,52h),0.87(d,j＝6.5hz,6h).
ms(esi):m/z＝2665.75[m+h]+。
实施例12化合物iiih即mpeg(2000)-十七碳二酰甘油的制备
室温下取化合物iid(147mg，2eq)和mpeg(2000)-nh2(197mg，1eq)溶解在分子筛 干燥过的溶剂20mldcm中，再加入12mg的dmap(1eq)。反应6h后，tlc检测反应完全后，反应液用2mol/l稀盐酸洗涤，再用dcm萃取(20ml×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后，用真空旋转蒸发仪旋蒸至干，得到粗产物。粗产物采用乙醚打浆(3ml×3)，离心，最终得到纯度为96％的白色固体产物，即化合物iiih225mg，收率85％。
1hnmr(400mhz,cdcl3):δ5.45-5.09(m,1h),4.42-4.09(m,4h),3.68(d,j＝107.7hz,180h),3.38(s,3h),3.29(s,2h),2.31(s,4h),1.77(s,2h),1.61(s,4h),1.26(m,56h),0.87(d,j＝6.5hz,6h).
ms(esi):m/z＝2693.78[m+h]+。
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。