硼替佐米晶型及其制备方法和用途与流程

本发明涉及一种化合物的结晶型，尤其涉及一种硼替佐米结晶型，以及其制取该结晶型的方法和在制备26s蛋白酶体的类胰凝乳蛋白酶抑制剂药物中的应用。

背景技术：

硼替佐米，曾名为ps-341(velcade，millenniumpharmaceuticals，inc，cambridge，ma)是一种二肽基硼酸化合物，为高度选择性、强效、可逆的蛋白酶体抑制剂。于2003年5月19日获得fda的批准上市销售，为注射用冻干粉针。用于先前至少已经接受过两种疗法的治疗并在最后一次治疗后，疾病出现进展的多发性骨髓瘤。该药为一种蛋白酶体抑制剂，能够特异性抑制哺乳动物细胞内26s蛋白酶体的类胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin-like)活性，对细胞内一连串的信号发送产生影响，最终导致癌细胞死亡。已有研究发现蛋白酶体抑制剂具有以下效应：1)对恶性肿瘤细胞具有选择性杀伤作用；2)与其它抗癌药物联合应用具有协同作用；3)具有放疗增敏作用；4)可诱导bcl-2过表达细胞凋亡。

wo2009/036281公开了一种硼替佐米两种晶型的合成方法：晶型a是通过混合甲醇与水两种溶剂重结晶，其水分含量大约为5％；晶型b是通过混合甲苯与二氯甲烷两种溶剂来重结晶制备，其水分含量大约为3％。

2011/107912公开了两种硼替佐米a1与a2晶型，晶型a1的xrpd2θ处的特征吸收峰为：7.1，8.5，10.1，12.2，13.2，14.6，15.9，16.7，18.4，18.9，19.5，21.3，25.3±0.2°；晶型a2的xrpd2θ处的特征吸收峰为：6.9，7.2，8.5，10.1，10.7，12.2，13.3，14.6，16.0，16.6，18.4，19.1，19.5，21.4，25.4，26.4±0.2°。

wo2012/131707公开了一种硼替佐米al晶型，其xrpd2θ处的特征吸收峰为：6.0，8.5，12.2，13.3，14.1，17.3，18.8，19.0，19.6，20.0，21.6，22.4，23.2，24.2，24.6，26.0，26.8，27.3±0.2°，且其含水量在7％至9％之间。

以上文献公开的制取硼替佐米晶型均需要涉及到毒性较大的二类溶剂，从工业生产的角度出发，制备稳定的硼替佐米晶型有一定的技术难度，所以获得一个稳定的硼替佐米晶型的工艺是非常迫切且必要的。

技术实现要素：

本发明的一个目的在于提供一种硼替佐米晶型。

本发明的另一个目的在于提供一种制备硼替佐米晶型的方法。

本发明的再一个目的在于提供一种硼替佐米晶型在制备26s蛋白酶体的类胰凝乳蛋白酶抑制剂药物中的应用。

本发明所称的“预防”是指在未被临床标准认定的疾病前，各种用于防止疾病发生或发展的手段或措施，包括医学、物理或化学的方法，以阻止和降低疾病各种症状的发生或发展。

本发明所称的“治疗”是指为了阻止和降低疾病的发生或发展，使疾病病程的发展或加重得以抑制、遏制、减轻、改善、减缓、停止、延迟或反转，所描述的保持或用药时的疾病的、紊乱的或病理学状态的各种指标包括减轻或减少症状或并发症，或治愈或消除疾病、紊乱或状况。

本发明所称的“制剂”是指含有本发明提供的各种植物及其提取物和活性部位有利于给药的剂型，如：但不仅限于，水溶液注射剂、粉针剂、丸剂、散剂、片剂、贴剂、栓剂、乳剂、霜剂、凝胶剂、颗粒剂、胶囊剂、气雾剂、喷雾剂、粉雾剂、缓释剂和控释剂等。这些药用辅料既可以是各种制剂中常规使用的，如：但不仅限于，等渗剂、缓冲液、矫味剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂等；也可以是为了与所述物质相适应而选择使用的，如：乳化剂、增溶剂、抑菌剂、止痛剂和抗氧剂等，这类辅料能有效提高组合物所含化合物的稳定性和溶解性或改变化合物的释放速率和吸收速率等，从而改善本发明化合物在生物体内的代谢，进而增强给药效果。此外，还可以为实现特定的给药目的或方式，如：缓释给药、控释给药和脉冲给药等，而使用的辅料，如：但不仅限于，明胶、白蛋白、壳聚糖、聚醚和聚酯类高分子材料，如：但不仅限于，聚乙二醇、聚氨酯、聚碳酸酯及其共聚物等。所称的“有利于给药”的主要表现有：但不仅限于提高治疗效果、提高生物利用度、降低毒副作用和提高患者顺应性等。

本发明提供的一种硼替佐米晶型，其在x射线粉末衍射图谱中具有以下2θ测定的特征峰：5.7°±0.2°、7.5°±0.2°、9.8°±0.2°、11.3°±0.2°、12.9°±0.2°、15.0°±0.2°、15.3°±0.2°、17.0°±0.2°、18.1°±0.2°、20.3°±0.2°、20.5°±0.2°、21.4°±0.2°和22.0°±0.2°。

本发明提供的各种硼替佐米晶型，其红外光谱在450.07cm^-1、702.51cm^-1、747.27cm^-1、775.07cm^-1、870.02cm^-1、930.30cm^-1、1021.19cm^-1、1046.30cm^-1、1081.43cm^-1、1115.48cm^-1、1152.10cm^-1、1201.22cm^-1、1270.09cm^-1、1327.24cm^-1、1385.13cm^-1、1455.92cm^-1、1466.16cm^-1、1581.18cm^-1、1626.96cm^-1、1681.92cm^-1、2868.29cm^-1、2925.67cm^-1、2952.46cm^-1、3029.01cm^-1、3064.36cm^-1、3308.39cm^-1和3387.54cm^-1处附近有吸收峰。

本发明提供的各种硼替佐米晶型，其差示扫描量热(dsc)分析在加热至106.6℃±0.5℃和170.3℃±0.5℃出现吸热峰。

本发明提供的各种硼替佐米晶型，其热重分析(tga)在加热到100℃～150℃时，具有4.60％±1.0％的重量损失梯度。

经卡尔菲舍水份滴定仪检测，本发明提供的各种硼替佐米晶型含水量为4％～6％。

本发明提供的一种制备各种硼替佐米晶型的方法，包括如下步骤：

将硼替佐米粗品溶于乙酸乙酯中，加入二乙醇胺，氮气保护下搅拌，抽滤，得到白色固体。所得固体转至乙酸乙酯中，氮气保护下滴加盐酸，搅拌，分液，洗涤，干燥，抽滤，所得滤液浓缩干后得到无定形的硼替佐米产品，接着先后加入良性溶剂和非良性溶剂重结晶得到硼替佐米晶体。

本发明提供的另一种制备各种硼替佐米晶型的方法，包括如下步骤：

先将硼替佐米粗品溶于10～30倍的乙酸乙酯中，加入二乙醇胺(二乙醇胺与硼替佐米粗品摩尔比为1∶1～2∶1)，氮气保护，0℃～30℃下搅拌10小时以上，大量固体析出；

然后抽滤，所得固体转至10～30倍的乙酸乙酯中，氮气保护，0℃～5℃下滴加盐酸(盐酸与硼替佐米粗品的摩尔比为1∶1～3∶1)，完毕，0℃～30℃搅拌4小时以上；

接着分出水相，将有机相分别用饱和碳酸氢钠和食盐水洗，所得溶液用无水硫酸钠干燥3小时～5小时；

之后浓缩并干燥，得到无定形的硼替佐米产品；

最后，在0℃～35℃下向无定形的硼替佐米先后加入良性溶剂和非良性溶剂重结晶得到硼替佐米晶体。

本发明提供的制备方法，硼替佐米粗品，或固体与乙酸乙酯的倍数关系应理解为仅限于数值倍数，硼替佐米粗品的计量单位为“克(g)”，乙酸乙酯的计量单位为“毫升(ml)”。如：硼替佐米粗品3g，10倍乙酸乙酯即为30ml，20倍乙酸乙酯即为60ml。

本发明提供的制备方法，良性溶剂与无定形硼替佐米的用量在3ml∶1g至10ml∶1g之间，优选5ml∶1g。所称的良性溶剂是化合物重结晶常用术语，具体如：该溶剂可以溶化或溶解硼替佐米，或使硼替佐米快速溶解于该溶剂中，或使用少量的溶剂即可使硼替佐米溶解，或达到较高的溶解度，如：但不限于c1～c6低级单元醇(如：乙醇、正丙醇和异丙醇等)、酮类(如：丙酮和甲基乙基酮等)、乙酸与c1～c6低级单元醇形成的酯类(如：乙酸乙酯和乙酸异丙酯等)。这些溶剂单独和组合应用于本发明，优先选择乙酯乙酯。

本发明提供的制备方法，非良性溶剂与无定形硼替佐米的用量在15ml∶1g至50ml∶1g之间，优选20ml∶1g。所称的非良性溶剂是化合物重结晶常用术语，具体如：该溶剂难以溶化或溶解硼替佐米，或使硼替佐米缓慢溶解于该溶剂中，或使用大量的溶剂才使小量或微量的硼替佐米溶解，或使用机械力才使小量或微量硼替佐米溶解，如：正庚烷、甲基叔丁基醚、异丙醚和甲苯。这些溶剂单独和组合应用于本发明，优先选择甲基叔丁基醚。

本发明提供的制备方法，重结晶温度为25℃。

本发明提供的制备方法，重结晶还包括加入少量晶种。

本发明提供的各种硼替佐米晶型在制备26s蛋白酶体的类胰凝乳蛋白酶抑制剂药物(如：治疗多发性骨髓瘤的药物)中的应用，如：以本发明提供的各种硼替佐米晶型或其药学上可接受的盐为活性成分制成组合物。

本发明技术方案实现的有益效果：

本发明提供的各种硼替佐米，具有较好的稳定性和较低的吸湿性。

本发明提供的各种硼替佐米制备方法，过程简单、成本低、收率高、产品纯度高(hplc，99％以上)。

附图说明

图1为本发明硼替佐米晶型的x射线粉末衍射图；

图2为本发明硼替佐米晶型的差示扫描量热图；

图3为本发明硼替佐米晶型的热重分析图；

图4为本发明硼替佐米晶型的红外光谱图；

图5为本发明硼替佐米晶型的核磁共振氢谱图；

图6为本发明硼替佐米晶型的高效液相色谱图。

具体实施方式

以下详细描述本发明的技术方案。本发明实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。

实施例1硼替佐米晶体的制取

3g硼替佐米粗品加至60ml乙酸乙酯中，加入0.9g二乙醇胺，氮气保护，20℃～30℃下搅拌20小时。过滤，得白色固体。将白色固体加至40ml乙酸乙酯中。氮气保护，0℃～5℃下滴加20ml1m盐酸。完毕，20℃～30℃下搅拌4小时。停止搅拌后，分出水相，有机相用20ml饱和碳酸氢钠洗一次，20ml饱和盐水洗一次，无水硫酸钠干燥4小时。滤掉干燥剂后，浓缩得白色固体。将该固体溶于15ml乙酸乙酯中(如有少量不溶物则过滤弃之)。75ml甲基叔丁基醚缓慢滴加至该溶液中。室温搅拌10小时，抽滤，使用30ml甲基叔丁基醚洗两次，得到白色固体，即为硼替佐米晶型。hplc纯度由粗品的96％提高至99％，固体在45℃下真空干燥24小时，使用卡尔菲舍水份滴定仪检测硼替佐米晶型的水份含量为4.5％。所得硼替佐米晶型的xrpd、dsc、tga谱图和红外光谱与符合图1、图2、图3和图4所示的特征。

实施例2硼替佐米晶体的制取

3g硼替佐米粗品加至60ml乙酸乙酯中，加入0.9g二乙醇胺，氮气保护，20℃～30℃下搅拌20小时。过滤，得白色固体。将白色固体加至40ml乙酸乙酯中。氮气保护，0℃～5℃下滴加20ml1m盐酸。完毕，20℃～30℃下搅拌4小时。停止搅拌后，分出水相，有机相用20ml饱和碳酸氢钠洗一次，20ml饱和盐水洗一次，无水硫酸钠干燥4小时。滤掉干燥剂后，浓缩得白色固体。将固体加至20ml丙酮中，搅拌使充分溶解(如有少量不溶物则过滤弃之)。100ml甲基叔丁基醚缓慢滴加至该溶液中。室温搅拌10小时，抽滤，使用20ml甲基叔丁基醚洗两次，得到白色固体，即为硼替佐米晶型。固体在45℃下真空干燥24小时，使用卡尔菲舍水份滴定仪检测硼替佐米晶型的水份含量为4.5％。所得硼替佐米晶型的xrpd、dsc、tga谱图和红外光谱与符合图1、图2、图3和图4所示的特征。

实施例3硼替佐米晶体的制取

300g硼替佐米粗品加至6l乙酸乙酯中，加入90g二乙醇胺，氮气保护，20℃～30℃下搅拌20小时。过滤，得白色固体。将白色固体加至4l乙酸乙酯中。氮气保护，0℃～5℃下滴加2l1m盐酸。完毕，20℃～30℃下搅拌4小时。停止搅拌后，分出水相，有机相用2l饱和碳酸氢钠洗一次，2l饱和盐水洗一次，无水硫酸钠干燥4小时。滤掉干燥剂后，浓缩得白色固体。将固体溶于1.5l乙酸乙酯中(如有少量不溶物则过滤弃之)。7.5l甲基叔丁基醚缓慢滴加至该溶液中。室温搅拌10小时，抽滤，使用500ml甲基叔丁基醚洗两次，得到白色固体，即为硼替佐米晶型。固体在45℃下真空干燥24小时，使用卡尔菲舍水份滴定仪检测硼替佐米晶型的水份含量为4.5％。所得硼替佐米晶型的xrpd、dsc、tga谱图和红外光谱与符合图1、图2、图3和图4所示的特征。

实施例4硼替佐米晶型的x射线粉末衍射

本实施例所称的x射线粉末衍射图谱是在apd2000θ/θ粉末和液体自动衍射计上采集，本实施例所称的x射线粉末衍射的方法参数如下：

cuka靶，管电压40kv，管电流40ma，扫描角度范围为3°～40°，扫描角度速率为每秒0.02°。

硼替佐米晶型的x射线粉末衍射如图1所示，其具体数据如表1所示：

表1

由表1可见，硼替佐米晶型在x射线粉末衍射图谱中具有以下2θ测定的特征峰：5.7°±0.2°、7.5°±0.2°、9.8°±0.2°、11.3°±0.2°、12.9°±0.2°、15.0°±0.2°、15.3°±0.2°、17.0°±0.2°、18.1°±0.2°、20.3°±0.2°、20.5°±0.2°、21.4°±0.2°和22.0°±0.2°处具有特征峰。

实施例5硼替佐米晶型的差示扫描量热分析

本实施例所称的差示扫描量热(dsc)分析图使用t-zero瓶，加热范围为30℃～350℃，加热速度为每分钟10℃，氮气流速度为每分钟80毫升。

差示扫描量热在加热至至106.6℃附近和170.3℃附近出现吸热峰，记为至106.6℃±0.5℃和170.3℃±0.5℃，参加图2。

实施例6硼替佐米晶型的热重分析

本实施例所称的热重分析(tga)pt瓶，加热范围为30℃～350℃，加热速度为每分钟5℃。

硼替佐米晶型加热到到100℃～150℃时，具有4.60％±1.0％的重量损失梯度，参见图3。

实施例7硼替佐米晶型的红外光谱分析

硼替佐米晶型红外光谱数据如下：

其在450.07cm^-1、702.51cm^-1、747.27cm^-1、775.07cm^-1、870.02cm^-1、930.30cm^-1、1021.19cm^-1、1046.30cm^-1、1081.43cm^-1、1115.48cm^-1、1152.10cm^-1、1201.22cm^-1、1270.09cm^-1、1327.24cm^-1、1385.13cm^-1、1455.92cm^-1、1466.16cm^-1、1581.18cm^-1、1626.96cm^-1、1681.92cm^-1、2868.29cm^-1、2925.67cm^-1、2952.46cm^-1、3029.01cm^-1、3064.36cm^-1、3308.39cm^-1、3387.54cm^-1处附近有吸收峰。

实施例8硼替佐米晶型的核磁共振氢谱分析

硼替佐米晶型的核磁共振氢谱数据如下：

¹hnmr(dmso-d6，ppm)：0.73～0.75(6h，m，2*-ch3)，1.15～1.29(2h，m，-ch2-i-pr)，1.48～1.53(1h，m，-chme2)，2.61(1h，d，-ch-b)，3.05～3.16(2h，-ch2ph)4.85～4.91(1h，-ch(bn)co-)7.09～7.21(5h，ph)，8.69(1h，d，pyrazine)，8.82(1h，d，pyrazine)，8.87～8.89(2h，m，nh)，9.06(1h，d，pyrazine)。