伏康树中化合物的制备方法和用途与流程

技术特征：

1.一种制备化合物的方法，其特征在于：所述化合物如为下述化合物中的任一种或多种：

其中，Me表示甲基；

包括以下步骤：

取伏康树树皮，乙酸乙酯渗漉提取，减压干燥渗漉液得浸膏，柱层析，用石油醚-乙酸乙酯洗脱，收集各段液体，继续分离纯化即得。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述化合物为12、13、14、15，制备方法的步骤如下：

A、取伏康树树皮，干燥，打粉，用14倍量乙酸乙酯渗漉提取，减压干燥渗漉液得浸膏；

B、运用硅胶柱层析石油醚：乙酸乙酯＝5:1,4:1,3:1,2:1,1:1,1:2,0:1，甲醇洗脱，并运用TLC点板合并为8段，分别为Fr.1-8；

C1：化合物12的制备：第1段Fr.1采用0.3mol/L HCl溶解和NaOH沉淀，再通过甲醇重结晶得到化合物12；

C2：化合物13的制备：第2段Fr.2运用硅胶柱层析石油醚：丙酮＝6:1,5:1,4:1,3:1,2:1,1:1洗脱，划分为6段，即Fr.2-1到Fr.2-6，Fr.2-6重结晶得到化合物13；

C3：化合物14和化合物15的制备：第3段Fr.3运用凝胶Sephadex LH-20,柱直径1cm，柱高160cm，流动相为氯仿：甲醇体积比为1:1，4个柱体积；等度洗脱，流速为7S/滴，每5mL收集一个流份，结合点板合并第35-50个流份为化合物14，合并第60-75个流份为化合物15，氯仿：甲醇＝1:1纯化得到化合物14和化合物15。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述化合物为化合物1-11，制备方法的步骤如下：

(1)伏康树树皮干燥得药材，粉碎，14倍药材量乙酸乙酯渗滤提取，提取液浓缩得浸膏；

(2)分离：采用硅胶柱层析，流动相为：石油醚-乙酸乙酯＝5:1，4:1，3:1，2:1，1:1，1:2，0:1，甲醇，梯度洗脱，按流动相合并为几个部位；运用TLC根据斑点显色情况将剩余样品合并为Ⅰ、Ⅱ和甲醇部位；

(3-1)

Ⅰ部位经MCI柱洗脱，柱体积314mL，流动相为甲醇：水体积比为40:60，3倍柱体积；50:50，3倍柱体积；60：40，3倍柱体积；80:20，3倍柱体积；100:0，3倍柱体积；梯度洗脱，每50mL收集一个流份，结合TLC点板划段；

(3-1-1)

化合物1的制备：合并第1-10个流份经Rp-8反相硅胶柱，柱体积56mL，流动相为甲醇：水体积比为15:85，3倍柱体积；20:80，3倍柱体积；25:75，3倍柱体积；30:70， 3倍柱体积；35:65，3倍柱体积；梯度洗脱，每10mL收集一个流份，结合TLC点板划段；合并第50-67个流份经Sephadex LH-20柱洗脱，柱体积125mL，流动相为甲醇：水体积比为100:0，8个柱体积；等度洗脱，流速为7S/滴，每5mL收集一个流份，结合点板合并第150-154个流份硫酸乙醇显紫色单一斑点，油状物化合物为化合物1；

(3-1-2)

化合物10的制备：合并第24-26个流份经Sephadex LH-20柱洗脱，柱体积125mL，流动相为甲醇：水体积比为90:10，4个柱体积；等度洗脱，流速为7S/滴，每5mL收集一个流份，结合点板合并第51-56个流份硫酸乙醇显紫色单一斑点，白色粉末状物为化合物10；

(3-2)

Ⅱ部位用甲醇溶解，抽滤，滤液直接上MCI柱，经90％甲醇等度洗脱液作为样品；

90％甲醇洗脱的样品运用硅胶柱层析，柱直径4cm，柱高20cm，流动相为石油醚：乙酸乙酯体积比为10:1，4倍柱体积；8:1，4倍柱体积；5:1，4倍柱体积；3:1，4倍柱体积；1:1，4倍柱体积；1:2，4倍柱体积；乙酸乙酯，4倍柱体积；甲醇，4倍柱体积；梯度洗脱；运用TLC点板分别合并每个梯度划分为8段FrⅡ.1-8；

(3-2-1)

化合物2和化合物3的制备：FrⅡ.1在50℃水浴温度下滴加甲醇，边滴加边振荡直至不再溶解，趁热过滤，滤液放置常温下有白色沉淀物析出，析出沉淀经凝胶Sephadex LH-20柱，柱体积125mL，流动相为氯仿：甲醇体积比为3:2，5个柱体积；等度洗脱，流速为7S/滴，每5mL收集一个流份，结合点板合并第84-107个流份，再经Rp-8反相硅胶柱，柱直径2cm，柱高18cm，流动相为甲醇：水体积比为40:60，8倍柱体积；50:50，8倍柱体积；55:45，8倍柱体积；100:0，8倍柱体积；梯度洗脱，每10mL收集一个流份，结合TLC点板划段；合并第35-43个流份为化合物2；合并第49-161个流份为化合物3；

(3-2-2)

化合物4的制备：FrⅡ.5运用半制备HPLC，YMC-Pack ODS-A半制备高效液相色谱柱，250mm×10mm,S-5μm,12nm；流动相：65％甲醇/氨水；流速：4ml/min；检测波长：205nm；tR＝15min；纯化得化合物4；

(3-2-3)

化合物11的制备：FrⅡ.3-4经Rp-8反相硅胶柱，柱直径1cm，柱高15cm，流动相为甲醇：水体积比为50:50，3倍柱体积；60:40，3倍柱体积；70:30，3倍柱体积；80:20， 3倍柱体积；90:10，3倍柱体积；梯度洗脱，每5mL收集一个流份，结合TLC点板合并第4-23个流份，再经Rp-8反相硅胶柱，柱直径1cm，柱高15cm，流动相为甲醇：水体积比为40:60，3倍柱体积；45:55，3倍柱体积；50:50，3倍柱体积；55:45，3倍柱体积；100:0，3倍柱体积；梯度洗脱，每5mL收集一个流份，结合TLC点板合并55％，100％甲醇洗脱液，再经Sephadex LH-20，柱直径1cm，柱高160cm，流动相为甲醇：水体积比为100:0，4个柱体积；等度洗脱，流速为7S/滴，每5mL收集一个流份，结合点板合并第57-80个流份得到化合物11；

(3-3)

甲醇部位样品，采用硅胶柱层析，柱直径6cm，柱高20cm，流动相为氯仿：甲醇体积比为30:1，6倍柱体积；25:1，6倍柱体积；20:1，6倍柱体积；15:1，6倍柱体积；梯度洗脱，结合点板合并得到4个与流动相相应部位，30:1部位经Rp-8反相硅胶柱，柱直径3cm，柱高18cm，流动相为甲醇：水体积比为30:70，5倍柱体积；60:40，6倍柱体积；90:10，5倍柱体积；梯度洗脱，分别合并各梯度项下洗脱液，得到30％部位，60％部位，90％部位；

60％部位运用制备HPLC[LC-10ATVP系统，紫外-可见检测器，流动相甲醇/水：0-8min 60％，8-20min 60-100％，20-25min 100％，25-28min 100-60％，28-30min 60％；流速：10ml/min；检测波长：205nm；划分为3段Fr.1-Fr.3；

(3-3-1)

化合物5和化合物6的制备：Fr.1运用半制备HPLC，YMC-Pack ODS-A半制备高效液相色谱柱，250mm×10mm,S-5μm,12nm；流动相：65％甲醇/水等度；流速：1ml/min；检测波长：205nm；纯化，得到化合物5和化合物6；

(3-3-2)

化合物7：Fr.2运用半制备HPLC，YMC-Pack ODS-A半制备高效液相色谱柱，250mm×10mm,S-5μm,12nm，流动相：40％甲醇/水等度；流速：1ml/min；检测波长：205nm；纯化，得到化合物7；

(3-3-3)

化合物8和化合物9的制备：Fr.3运用Sephadex LH-20凝胶柱，柱直径1cm，柱高160cm，流动相为甲醇：水体积比为100:0，4个柱体积；等度洗脱，流速为7S/滴，每5mL收集一个流份，结合TLC点板合并第45-50个流份得到化合物8；合并第60-70个流份得到化合物9。

4.权利要求1所述化合物及其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述化合物为化合物2、4、12、13和14中的任一种。

6.根据权利要求4或5所述的用途，其特征在于：所述肿瘤为肝癌、皮肤黑色素瘤、乳腺癌、神经母细胞瘤和结肠癌中任一种或多种。

7.一种药物组合物，其特征在于：它是以权利要求1所述化合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述化合物为化合物2、4、12、13或14中的任一种。