本发明涉及药物合成领域，具体涉及一种胆酸类肝病治疗药物及其制备方法。
背景技术：
：：非酒精性脂肪性肝病是指除酒精和其他明确的损肝因素所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征，与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤.包括单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎及其相关肝硬化。在世界范围内，有15～32％的人口患有非酒精性脂肪肝病，已成为一种流行疾病。奥贝胆酸，又称6-乙基鹅去氧胆酸，是人初级胆汁酸中鹅去氧胆酸的一种新型衍生物。体外研究发现，奥贝胆酸使人类胰岛细胞胰岛素分泌增加，同时增加脂肪细胞中脂肪的储存，并促进脂联素和瘦素的分泌。在动物模型中，还发现奥贝胆酸可使明确的纤维化/硬化病变发生逆转。化合物专利WO2013/192097报道了一种3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷酸的合成方法。化合物专利WO02/072598专利报道了一种3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷酸的合成方法。该路线步骤较长，收率较低。因此，发现治疗非酒精性脂肪肝和原发性胆汁性肝硬化的胆烷酸类化合物是目前研究的热点。技术方案本发明涉及如下化合物：3α，7α-二羟基-6β-(3，3，3-三氟丙基)-5β-胆甾烷-24-酸本发明涉及式1化合物的盐：包括钠盐、钾盐和钙盐。本发明涉及式1化合物制备：药物、保健品、或功能性食品，赋形剂或载体为制药或食品领域中常用的赋形剂或载体，如稀释剂，崩解剂，润滑剂等。本发明公开了式1化合物用于制备治疗或预防非酒精性脂肪肝的组合物。本发明公开了式1化合物用于制备治疗或预防非酒精性脂肪肝的组合物，式1化合物的用量是0.5-200mg/kg。本发明公开了式1化合物用于制备治疗或预防非酒精性脂肪肝的组合物，式1化合物的用量是5mg/kg。本发明公开了式1化合物用于制备治疗或预防非酒精性脂肪肝的组合物，式1化合物的用量是10mg/kg。本发明公开了式1化合物用于制备治疗或预防原发性胆汁性肝硬化的组合物。本发明公开了式1化合物用于制备治疗或预防原发性胆汁性肝硬化的组合物，式1化合物的用量是0.5-200mg/kg。本发明公开了式1化合物用于制备治疗或预防原发性胆汁性肝硬化的组合物，式1化合物的用量是5mg/kg。本发明公开了式1化合物用于制备治疗或预防原发性胆汁性肝硬化的组合物，式1化合物的用量是10mg/kg。本发明公开了式1化合物用于制备：药物、保健品、或功能性食品，赋形剂或载体为制药或食品领域中常用的赋形剂或载体，如稀释剂，崩解剂，润滑剂等。本发明公开了式1化合物的合成工艺如下：化合物b(3α-羟基-7-二三甲基硅氧基-5β-胆甾烷-6-烯-24-酸甲酯)的合成：将化合物a100g(0.25mol)置于干燥反应瓶中，加入600mlTHF搅拌溶解，并冷却至-20～-25℃，氮气氛围下控温-20～-25℃滴加120g三甲基氯硅烷(1.1mol)；滴毕，控温加入预先冷却至-20～-25℃的二异丙基氨基锂(28％LDA溶液)，继续控温-20～-25℃反应3h；后处理中加入预先冷却至10℃以下的600ml10％的柠檬酸水溶液，搅拌，分离水相，有机相控温50℃以下减压蒸干溶剂，得到棕黄色油状物为化合物b，该化合物稳定性稍差，直接用于下步反应。化合物a：三甲基氯硅烷物料比：1∶1.0～1.5，优选1∶1.1反应溶剂：THF、二氧六环、优选THF反应温度：-10～-40℃，优选-20～-25℃。湮灭反应：柠檬酸、枸橼酸、丙酸、乙酸等，优先柠檬酸化合物c(3α-羟基-6-(3，3，3-三氟烯丙基)-7-氧代-5β-胆甾烷-24-酸)的合成：将上步反应中化合物b(相当于0.25mol)用300ml二氯甲烷溶解，并冷却至-60～-65℃，并控温加入56g三氟丙醛(0.5mol)；氮气氛围下将上述反应液加入至预先冷却至-60～-65℃的380g16％的三氟化硼乙腈络合溶液中(约0.9mol)，继续控温-60～-65℃反应2h，再加热至20-30℃反应3h；反应毕，冷却至0-10℃，加入850ml3％的NaOH水溶液，搅拌10min，分离水相，有机相控温50℃以下减压蒸干溶剂，残余物中用150ml甲醇溶解，加入50ml25％的NaOH溶液，加热至50-55℃搅拌反应4h，加入400ml水稀释反应液，并冷却至20～30℃静置30min，分离水层，加入乙酸乙酯500ml和200g50％的柠檬酸水溶液，室温搅拌10min，分离有机层，再用300ml乙酸乙酯萃取水相，合并有机相，无水硫酸钠干燥，控温50℃以下减压浓缩干溶剂，残余物用400ml甲醇重结晶，得到92g化合物c，收率76％，HPLC(CAD检测器)纯度：98.7％。化合物b：三氟丙醛物料比：1∶1.2～3，优选1∶2反应溶剂：非质子溶剂二氯甲烷、三氯甲烷、二溴乙烷，优选THF反应温度：-40～-65℃，优选-60～-65℃。水解温度：40～65℃，优选50～55℃。ESI-MS(m/z)：485.6(M+1)1H-NMR(CDCl3，500MHz)，δ6.315-6.333(d，1H，25)，δ4.237～4.303(m，1H，H-3)，δ3.836～3.914(m，2H，H-26)，δ2.759～2.787(t，1H，H-8)，δ2.547～2.576(m，1H，H-5)，δ2.452～2.509(m，2H，H-23)，δ2.272～2.355(m，2H，H-22)，δ2.136～2.195(m，1H，H-14)，δ1.969～2.024(m，2H，H-4)，δ1.779～1.834(m，2H，H-2)，δ1.588～1.696(m，4H，H-16，H-6)，δ1.477～1.573(m，6H，H-12，H-11，H-14，H-9)，δ1.386～1.453(m，2H，，H-15)，δ0.901～0.929(t，1H，H-17)，δ0.855～0.881(t，9H，H-18，H-19，H-21)化合物d(3α-羟基-6α-(3，3，3-三氟丙基)-7-氧代-5β-胆甾烷-24-酸)的合成：化合物c90g(0.185mol)用900mlTHF溶解，加入Pd/C(10％)18g，置换H2三次后，室温反应36h，过滤，滤液控温50℃以下减压蒸干溶剂，残余物加入150ml10％氢氧化钠溶液，加热至回流搅拌24h，冷却至室温加入600ml乙酸乙酯，搅拌滴加6NHCl调PH至2左右，分液，水洗有机相，无水硫酸钠干燥，控温50℃以下减压浓缩干溶剂，残余物用300ml乙酸乙酯-乙醇(8∶1)重结晶，得到62g化合物d，收率68.5％，HPLC(CAD检测器)化学纯度：99.2％，6β异构体含量0.11％。化合物c：Pd/C(10％)物料比：1∶0.1～0.3，优选1∶0.2(w/w)反应溶剂：非醇类溶剂THF、二氧六环、二氯甲烷、三氯甲烷、二溴乙烷，优选THF反应温度：20～50℃，优选20～30℃，室温。氢化反应时间：18～30h，优选24h重结晶乙酸乙酯-乙醇比例：5～10∶1，优选8∶1。ESI-MS(m/z)：487.3(M+1)1H-NMR(CDCl3，500MHz)，δ3.667-3.733(m，1H，H-3)，δ2.196～2.224(m，2H，H-23)，δ1.934～2.041(m，3H，H-6，H-12)，δ1.259～1.832(m，21H，H-1，H-2，H-4，H-5，H-11，H-12，H-14，H-15，H-16，H-20，H-22，H-26)，δ1.089～1.130(m，1H，H-17)，δ0.979～1.027(m，1H，H-9)，δ0.893～0.907(d，3H，H-21)，δ0.860(s，6H，H-19，H-25)。化合物KL-103(3α，7α-二羟基-6α-(3，3，3-三氟丙基)-5β-胆甾烷-24-酸)的合成：化合物d60g(0.125mol)加入200ml10％氢氧化钠溶液中，搅拌溶解，加热至回流搅拌30min，滴加45ml20％的NaBH4的水溶液，滴毕继续回流反应7～8h，冷却至室温，加入200ml乙酸乙酯萃取，搅拌滴加6NHCl调PH至2左右，分液，水洗有机相，无水硫酸钠干燥，控温50℃以下减压浓缩干溶剂，残余物用250ml二氯甲烷重结晶，得到40g化合物KL-103(式1化合物)，收率66.6％，HPLC(CAD检测器)化学纯度：99.8％，异构体(6β，7α)、(6α，7β)、(6β，7β)含量均小于0.05％。化合物d：NaBH4物料比：1∶1.2～2，优选1∶1.5化合物d：NaOH物料比：1∶4～6，优选1∶5还原反应时间：5～10h，优选7～8h重结晶溶剂：烷烃类溶剂二氯甲烷、三氯甲烷、二溴乙烷，甲苯；优选二氯甲烷ESI-MS(m/z)：489.3(M+1)1H-NMR(CDCl3，500MHz)，δ3.667-3.733(m，1H，H-3)，δ3.321～3.359(m，1H，H-7)，δ2.196～2.224(t，2H，H-7，H-23)，δ1.915～1.975(m，2H，H-12，)，δ1.634～1.831(m，8H，H-2，H-4，H-15，H-26)，δ1.422～1.610(m，8H，H-1，H-11，H-16，H-22)，δ1.168～1.339(m，4H，H-6，H-20，H-25)，δ1.1089～1.130(m，1H，H-17)，δ1.019～1.060(m，1H，H-5)，δ0.893～0.907(d，3H，H-21)，δ0.830～0.871(m，7H，H-8，H-18，H-19，)，δ0.709～0.750(m，1H，H-14)。实验例1、化合物b(3α-羟基-7-二三甲基硅氧基-5β-胆甾烷-6-烯-24-酸甲酯)的合成：将化合物a100g(0.25mol)置于干燥反应瓶中，加入600mlTHF搅拌溶解，并冷却至-20℃，氮气氛围下控温-20℃滴加120g三甲基氯硅烷(1.1mol)；滴毕，控温加入预先冷却至-20℃的二异丙基氨基锂(28％LDA溶液)，继续控温-20℃反应3h；后处理中加入预先冷却至10℃以下的600ml10％的柠檬酸水溶液，搅拌，分离水相，有机相控温50℃以下减压蒸干溶剂，得到棕黄色油状物为化合物b，该化合物稳定性稍差，直接用于下步反应。实验例2、化合物c(3α-羟基-6-(3，3，3-三氟烯丙基)-7-氧代-5β-胆甾烷-24-酸)的合成：将上步反应中化合物b(相当于0.25mol)用300ml二氯甲烷溶解，并冷却至-60～-65℃，并控温加入56g三氟丙醛(0.5mol)；氮气氛围下将上述反应液加入至预先冷却至-60℃的380g16％的三氟化硼乙腈络合溶液中(约0.9mol)，继续控温-60℃反应2h，再加热至20℃反应3h；反应毕，冷却至0℃，加入850ml3％的NaOH水溶液，搅拌10min，分离水相，有机相控温50℃以下减压蒸干溶剂，残余物中用150ml甲醇溶解，加入50ml25％的NaOH溶液，加热至50℃搅拌反应4h，加入400ml水稀释反应液，并冷却至20～30℃静置30min，分离水层，加入乙酸乙酯500ml和200g50％的柠檬酸水溶液，室温搅拌10min，分离有机层，再用300ml乙酸乙酯萃取水相，合并有机相，无水硫酸钠干燥，控温50℃以下减压浓缩干溶剂，残余物用400ml甲醇重结晶，得到92g化合物c，收率76％，HPLC(CAD检测器)纯度：98.7％。实验例3、化合物d(3α-羟基-6α-(3，3，3-三氟丙基)-7-氧代-5β-胆甾烷-24-酸)的合成：化合物c90g(0.185mol)用900mlTHF溶解，加入Pd/C(10％)18g，置换H2三次后，室温反应36h，过滤，滤液控温50℃以下减压蒸干溶剂，残余物加入150ml10％氢氧化钠溶液，加热至回流搅拌24h，冷却至室温加入600ml乙酸乙酯，搅拌滴加6NHCl调PH至2左右，分液，水洗有机相，无水硫酸钠干燥，控温50℃以下减压浓缩干溶剂，残余物用300ml乙酸乙酯-乙醇(8∶1)重结晶，得到62g化合物d，收率68.5％，HPLC(CAD检测器)化学纯度：99.2％，6β异构体含量0.11％。实验例4、化合物KL-103(3α，7α-二羟基-6α-(3，3，3-三氟丙基)-5β-胆甾烷-24-酸)的合成：化合物d60g(0.125mol)加入200ml10％氢氧化钠溶液中，搅拌溶解，加热至回流搅拌30min，滴加45ml20％的NaBH4的水溶液，滴毕继续回流反应7～8h，冷却至室温，加入200ml乙酸乙酯萃取，搅拌滴加6NHCl调PH至2左右，分液，水洗有机相，无水硫酸钠干燥，控温50℃以下减压浓缩干溶剂，残余物用250ml二氯甲烷重结晶，得到40g化合物KL-103(式1化合物)，收率66.6％，HPLC(CAD检测器)化学纯度：99.8％，异构体(6β，7α)、(6α，7β)、(6β，7β)含量均小于0.05％。实施例5：样品纯度的HPLC的条件是：高效液相色谱仪配备蒸发光检测器色谱柱：普通C18柱DC：80℃SC：70℃N2压力：35Bar柱温：35℃进样量：20μl流动相：以0.05mol/L三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，按下表进行洗脱。流速为每分钟1.0ml化合物C的梯度洗脱条件：时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)07030156040205050258020306040化合物C用(流动相A70％+流动相B30％)溶解，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，化合物C峰保留时间为19.2分钟。化合物d的梯度洗脱条件：时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)07030156040201585255050307030化合物d用(流动相A70％+流动相B30％)溶解，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，化合物C峰保留时间为15.7分钟。化合物KL-103的梯度洗脱条件：时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)07525152080201585255050307030化合物KL-103用(流动相A75％+流动相B25％)溶解，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，化合物C峰保留时间为16.2分钟。实施例6化合物KL-103片由以下组份配制而成，按1000片用量：其制备方法包括如下步骤：1)将化合物KL-103和药用辅料分别粉碎过筛，备用，2)取处方量重量份数的原料及药用辅料物理混合均匀，3)湿法制粒，4)干燥，整粒，5)折算外加辅料，混合均匀，压制成片剂6)将欧巴代采用一定的溶剂进行溶解，作为包衣液进行包衣。试验结果药物含量：合格崩解时限：符合规定实施例7化合物KL-103片由以下组份配制而成，按1000片用量：其制备方法包括如下步骤：1)将化合物KL-103和药用辅料分别粉碎过筛，备用，2)取处方量重量份数的原料及药用辅料物理混合均匀，3)湿法制粒，4)干燥，整粒，5)折算外加辅料，混合均匀，压制成片剂6)将欧巴代采用一定的溶剂进行溶解，作为包衣液进行包衣。试验结果药物含量：合格崩解时限：符合规定实施例8实施例3式1化合物对非酒精性脂肪肝的治疗作用实验动物及方法：C57BL小鼠，SPF级，雄性，体重(20±2)g，50只，随机平均分成五组，第一组，为正常组，给与正常饲料，第二组：高脂组，第三组：高脂+奥贝胆酸组(5mg/kg)、第四组：高脂+式1化合物低浓度组(2mg/kg)、第五组：高脂+式1化合物高浓度组(20mg/kg)。第二、三、四、五组分别给予给与高脂饲料(基础饲料加入20％猪油，1.25％胆固醇，0.5％的胆酸钠)自由摄食、饮水。给药6周观察指标：a动物的一般情况实验动物，光照12h黑夜12h，自由饮食饮水，实验期间动物状态正常。b血脂相关指标：TC、TG、HDL、LDLC肝脏脂类蓄积相关指标：肝脏重量、肝脏中TG、肝脏中TC给药结束后测定小鼠、血脂水平。使用t检验进行统计分析。2.结果分析造模后小鼠的血液中TC，TG，HDL-C，LDL-C均显著升高，且具有显著的统计学差异，表明造模成功，给药TC，TG，LDL-C均显著性浓度依赖性的降低，具有显著的统计学差异，说明治疗效果显著。肝脏重量，单位：g肝脏中总胆固醇含量，单位：mg胆固醇/g新鲜肝脏组织肝脏中甘油三酯含量，单位：mg胆固醇/g新鲜肝脏组织当前第1页1 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