引起耳聋的猪KIT突变基因及其应用的制作方法

文档序号:11936768阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种引起耳聋的猪KIT突变基因,其特征在于,与野生型猪KIT基因相比,具有c.2418T>A突变。

2.一种构建体,其特征在于,包含权利要求1所述的猪KIT突变基因。

3.一种重组细胞,其特征在于,是由权利要求2所述的构建体转化受体细胞而得。

4.一种制备耳聋动物模型的方法,其特征在于,改变正常猪的KIT基因,使KIT基因的第2418位碱基由T变为A。

5.一种筛选KIT基因突变耳聋猪的方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)提取待测生物样品的核酸;

(2)确定所述核酸的序列;

(3)所述核酸的序列或其互补序列,与野生型KIT基因相比具有c.2418T>A突变,是猪耳聋的指示;

所述生物样品选自血液、皮肤、毛发和肌肉中的至少一种。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述核酸为mRNA,确定所述核酸的序列包括如下步骤:

(1)对mRNA进行反转录反应,获得cDNA;

(2)以cDNA为模板,采用猪KIT基因的特异性引物进行PCR,得到扩增产物;

(3)对扩增产物进行测序;

所述特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述PCR的反应体系为:模板DNA 1μl,正向引物Fi 1μl,反向引物Ri 1μl,10mM dNTP 1μl,5U/μl Taq聚合酶0.5μl,Taq聚合酶缓冲液5μl,25mM MgCl2 5μl,ddH2O 35.5μl。

8.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述PCR的反应程序为:95℃预变性3min;94℃变性30s,55℃退火35s,72℃延伸40s,35个循环;72℃修复延伸8min。

9.用于筛选KIT基因突变耳聋猪的引物,其特征在于,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

10.一种筛选KIT基因突变耳聋猪的试剂盒,其特征在于,包含液态的或粉末状的猪KIT基因的特异性引物,所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

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