1.一种引起耳聋的猪KIT突变基因,其特征在于,与野生型猪KIT基因相比,具有c.2418T>A突变。
2.一种构建体,其特征在于,包含权利要求1所述的猪KIT突变基因。
3.一种重组细胞,其特征在于,是由权利要求2所述的构建体转化受体细胞而得。
4.一种制备耳聋动物模型的方法,其特征在于,改变正常猪的KIT基因,使KIT基因的第2418位碱基由T变为A。
5.一种筛选KIT基因突变耳聋猪的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)提取待测生物样品的核酸;
(2)确定所述核酸的序列;
(3)所述核酸的序列或其互补序列,与野生型KIT基因相比具有c.2418T>A突变,是猪耳聋的指示;
所述生物样品选自血液、皮肤、毛发和肌肉中的至少一种。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述核酸为mRNA,确定所述核酸的序列包括如下步骤:
(1)对mRNA进行反转录反应,获得cDNA;
(2)以cDNA为模板,采用猪KIT基因的特异性引物进行PCR,得到扩增产物;
(3)对扩增产物进行测序;
所述特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述PCR的反应体系为:模板DNA 1μl,正向引物Fi 1μl,反向引物Ri 1μl,10mM dNTP 1μl,5U/μl Taq聚合酶0.5μl,Taq聚合酶缓冲液5μl,25mM MgCl2 5μl,ddH2O 35.5μl。
8.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述PCR的反应程序为:95℃预变性3min;94℃变性30s,55℃退火35s,72℃延伸40s,35个循环;72℃修复延伸8min。
9.用于筛选KIT基因突变耳聋猪的引物,其特征在于,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。
10.一种筛选KIT基因突变耳聋猪的试剂盒,其特征在于,包含液态的或粉末状的猪KIT基因的特异性引物,所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。