1.一种卤醇脱卤酶催化合成(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的制备方法,包括如下步骤:
1)配制卤醇脱卤酶溶液,将吸附树脂加入到卤醇脱卤酶溶液中,并在15-30℃下搅拌3-5h,使得卤醇脱卤酶吸附到吸附树脂上;
2)将戊二醛水溶液滴入到步骤1)的卤醇脱卤酶溶液中,在温度为20-35℃下,搅拌反应3-5h,得固定液,将吸附树脂从酶溶液中分离出来,洗涤得到固定化卤醇脱卤酶;
3)称取210g蒸馏水、1.5-2.5g氰化钠,逐一加入到不锈钢反应釜中,并调节pH至7.5-8.5;
4)加入40-50g底物(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯(ATS-4),并升温,待温度为45-55℃时加入吸附树脂固定卤醇脱卤酶,调节pH至6.90-7.05,用气相色谱实时检测反应转化率;
5)待步骤4)的转化率达到50%时,将混合液与固定化卤醇脱卤酶过滤分离,固定化卤醇脱卤酶再加入反应釜,混合液进入分层装置,上层进入精馏装置中,精馏装置下部得到(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯,未反应的原料从上部流回入反应釜中继续反应,如此循环反应,得到高转化率的(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯(ATS-5)。
2.如权利要求1所述的一种卤醇脱卤酶催化合成(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的制备方法,其特征在于:步骤1)所述的卤醇脱卤酶溶液的浓度为10-30mg/mL。
3.如权利要求1所述的一种卤醇脱卤酶催化合成(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的制备方法,其特征在于:步骤1)所述的吸附树脂为弱酸阳离子树脂、弱碱阳离子树脂或大孔吸附树脂。
4.如权利要求1所述的一种卤醇脱卤酶催化合成(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的制备方法,其特征在于:步骤1)所述的吸附树脂与卤醇脱卤酶的质量比为10:1-40:1。
5.如权利要求1所述的一种卤醇脱卤酶催化合成(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的制备方法,其特征在于:步骤2)所述的戊二醛水溶液的体积分数为0.5-1.5%,戊二醛水溶液与酶溶液的体积比为1:25。
6.如权利要求1所述的一种卤醇脱卤酶催化合成(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的制备方法,其特征在于:步骤4)中加入的卤醇脱卤酶的量为(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯质量的1/3-1/2。
7.如权利要求1所述的一种卤醇脱卤酶催化合成(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的制备方法,其特征在于:步骤5)所述的循环反应时间为1h,转化率为98.8%-99.4%。