用于单细胞全基因组重亚硫酸氢盐测序的文库构建方法与流程

文档序号:12347821阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种单细胞全基因组重亚硫酸氢盐测序用文库的构建方法,该方法包括:

步骤A:将单细胞进行裂解,得到裂解后的单细胞样本;

步骤B:将所述裂解后的单细胞样本进行重亚硫酸氢盐处理,加入tRNA进行纯化,得到纯化后的重亚硫酸氢盐处理产物;

步骤C:以步骤B所述重亚硫酸氢盐处理产物为模板,使用含生物素标记的SEQ ID NO:1合成第一条链;

步骤D:使用链霉亲和素磁珠调取所述步骤C合成的生物素标记的第一条链;

步骤E:以步骤D所述调取的第一条链为模板,使用SEQ ID NO:2引物合成第二条链,获得合成第二条链的产物;以及

步骤F:以所述合成第二条链的产物为模板进行PCR扩增,从而构建二代测序用DNA文库。

2.根据权利要求1所述的文库构建方法,其中步骤B中tRNA的使用量为10ng。

3.根据权利要求1所述的文库构建方法,其中所述单细胞来源于哺乳动物、植物和/或微生物。

4.根据权利要求1所述的文库构建方法,其中步骤C所述SEQ ID NO:1序列:5'-(Biotin)TACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTNNNNNNNNN-3'。

5.根据权利要求1所述的文库构建方法,其中在步骤D之前包括步骤E-1:消化单链DNA。

6.根据权利要求1所述的文库构建方法,其中步骤E使用所述SEQ ID NO:2序列:5'-GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTNNNNNNNNN-3'。

7.根据权利要求1所述的文库构建方法,其中,

在所述步骤C中对消化处理后的体系进行磁珠纯化,得到纯化的生物素标记的第一条链;和/或

在所述步骤D中,对所述PCR扩增的产物进行磁珠纯化。

8.根据权利要求7所述的文库构建方法,其中磁珠纯化使用量为0.8倍以上。

9.根据权利要求7所述的文库构建方法,其中磁珠纯化使用0.9倍Ampure XP磁珠进行。

10.一种用于单细胞全基因组重亚硫酸氢盐测序的文库构建的试剂盒,其包括选自下组中的至少一种或全部:

用于对所述单细胞进行裂解的试剂;

用于对所述单细胞裂解样本进行重亚硫酸氢盐处理试剂;

用于对所述重亚硫酸氢盐处理后产物第一条链合成的试剂;

用于对所述合成第一条链进行调取的试剂;

用于对所述第一条链为模板合成第二条链的试剂;

用于对所述第二条链为模板进行PCR扩增的试剂。

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