1.一种单细胞全基因组重亚硫酸氢盐测序用文库的构建方法,该方法包括:
步骤A:将单细胞进行裂解,得到裂解后的单细胞样本;
步骤B:将所述裂解后的单细胞样本进行重亚硫酸氢盐处理,加入tRNA进行纯化,得到纯化后的重亚硫酸氢盐处理产物;
步骤C:以步骤B所述重亚硫酸氢盐处理产物为模板,使用含生物素标记的SEQ ID NO:1合成第一条链;
步骤D:使用链霉亲和素磁珠调取所述步骤C合成的生物素标记的第一条链;
步骤E:以步骤D所述调取的第一条链为模板,使用SEQ ID NO:2引物合成第二条链,获得合成第二条链的产物;以及
步骤F:以所述合成第二条链的产物为模板进行PCR扩增,从而构建二代测序用DNA文库。
2.根据权利要求1所述的文库构建方法,其中步骤B中tRNA的使用量为10ng。
3.根据权利要求1所述的文库构建方法,其中所述单细胞来源于哺乳动物、植物和/或微生物。
4.根据权利要求1所述的文库构建方法,其中步骤C所述SEQ ID NO:1序列:5'-(Biotin)TACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTNNNNNNNNN-3'。
5.根据权利要求1所述的文库构建方法,其中在步骤D之前包括步骤E-1:消化单链DNA。
6.根据权利要求1所述的文库构建方法,其中步骤E使用所述SEQ ID NO:2序列:5'-GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTNNNNNNNNN-3'。
7.根据权利要求1所述的文库构建方法,其中,
在所述步骤C中对消化处理后的体系进行磁珠纯化,得到纯化的生物素标记的第一条链;和/或
在所述步骤D中,对所述PCR扩增的产物进行磁珠纯化。
8.根据权利要求7所述的文库构建方法,其中磁珠纯化使用量为0.8倍以上。
9.根据权利要求7所述的文库构建方法,其中磁珠纯化使用0.9倍Ampure XP磁珠进行。
10.一种用于单细胞全基因组重亚硫酸氢盐测序的文库构建的试剂盒,其包括选自下组中的至少一种或全部:
用于对所述单细胞进行裂解的试剂;
用于对所述单细胞裂解样本进行重亚硫酸氢盐处理试剂;
用于对所述重亚硫酸氢盐处理后产物第一条链合成的试剂;
用于对所述合成第一条链进行调取的试剂;
用于对所述第一条链为模板合成第二条链的试剂;
用于对所述第二条链为模板进行PCR扩增的试剂。